入口腔，浸润悬雍垂及软腭周围组织； C、D、E组（SPF级Wistar大鼠数量n= 30)为甘草喷雾剂低、中、高剂量组：以甘草饮 片计，自制甘草喷雾剂质量浓度为：〇. 2g/mL。按大鼠体重计，低、中、高剂量组诱导前分别喷 入甘草喷雾剂0. 25mL/100g、0. 5mL/100g、l.OmL/lOOg，浸润悬雍垂及软腭周围组织。
[0035] (3)动物模型制作 ①麻醉前处理 将实验动物在实验前适应饲养一周，术前12小时禁食水。
[0036] ②麻醉诱导 大鼠吸入5%~6%异氟醚维持麻醉，30秒后，可见大鼠意识消失，全身肌肉松弛。
[0037] ③气管插管 将麻醉后的大鼠仰卧固定于手术板上，把固定的大鼠同手术台一起倾斜约45度(大鼠 头朝上)，用手术钳小心将大鼠舌头拉出口腔，这时用一手电筒或者头灯紧贴在大鼠下颂部 (用力不要过大，以免影响大鼠呼吸)。手电筒或者头灯的光线可透过大鼠下颂部皮肤和肌 肉照亮大鼠喉部，能清楚地看到大鼠的声门随着呼吸如鱼嘴般开启与闭合，这时趁声门打 开瞬间迅速将气管插管插入气道，然后调节好呼吸机的呼吸频率和潮气量，即呼吸机参数： 频率80次/min，潮气量3~4mL，吸呼比为1 :1. 5,以维持大鼠较好的呼吸状态。
[0038] ④麻醉维持 持续吸入1. 3%异氟醚维持麻醉。
[0039] ⑤麻醉苏醒 60min后，脱机停止异氟醚的吸入，待大鼠完全清醒后拔除气管插管，将其放回笼子， 观察至能自主饮食。
[0040] ⑥病理组织学检查 待大鼠恢复自主饮食，立即处死，取咽喉部及其下组织，立即投入10%福尔马林液固 定。取材后经常规脱水，石蜡包埋、切片、HE染色后，在光学显微镜下作10X10倍观察。
[0041] ⑦血清TNF-a，IL-1及IL-10含量的测定 切断大鼠股动脉采血，用干净试管收集血液，室温凝固2小时，离心10分钟（1500r/min)，收集血清封装，-20°C冷冻保存。按试剂盒说明书检测TNF-a，IL-1及IL-10含量。
[0042] ⑧统计学分析 采用SPSS17. 0软件，计数资料采用x2检验，计量资料以均值土标准差(无土s)表示， 采用t检验，P< 0. 05差异有统计学意义。
[0043] (4)结果 ①甘草喷雾剂对实验大鼠气管插管后呼吸道粘膜组织病理学变化的影响，具体参见图 1〇
[0044] 如图1 (A)，生理盐水组上呼吸道粘膜病理改变为：黏膜上皮表面炎性渗出明显， 上皮内可见大量灶性或弥漫性炎细胞浸润，炎症灶内的上皮细胞水肿，部分细胞坏死，固 有膜内见大量炎细胞浸润，血管扩张、充血。
[0045] 如图1(B)，利多卡因组黏膜上皮表面炎性渗出不明显，上皮内可见散在炎细胞浸 润，炎症灶内的上皮细胞轻度水肿，细胞坏死不明显，固有膜内见少量炎细胞浸润，血管明 显扩张、充血。
[0046] 甘草各剂量组黏膜上皮表面炎性渗出均较生理盐水组减轻，固有膜内炎细胞浸润 均较生理盐水组减轻。低剂量组如图1 (C)黏膜上皮表面炎性渗出，上皮内可见灶性或弥 漫性炎细胞浸润，炎症灶内的上皮细胞轻度水肿，少量细胞坏死。固有膜内炎细胞浸润，血 管扩张、充血，呼吸道粘膜组织各层结构清晰。中剂量组如图1 (D)黏膜上皮表面炎性渗出 不明显，上皮内可见散在炎细胞浸润，炎症灶内的上皮细胞轻度水肿，无明显细胞坏死。固 有膜内散在小灶性炎细胞浸润，血管无明显扩张、充血，呼吸道粘膜组织各层结构清晰。高 剂量组如图1 (E)上皮表面炎性渗出不明显，上皮内可见散在炎细胞浸润，炎症灶内的上 皮细胞轻度水肿，细胞坏死不明显。固有膜内散在小灶性炎细胞浸润，血管无明显扩张、充 血，呼吸道粘膜组织各层结构清晰。
[0047] 咽部粘膜及其下组织炎细胞浸润程度病理评分：无炎症细胞（0分）；少许炎症细 胞（1分）；较多分布不均的炎症细胞（2分）；大量炎症细胞，分布较均匀，少见聚集成团（3 分）；大量炎症细胞聚集成团（4分)。
[0048] 各组大鼠咽部粘膜及其下组织炎细胞浸润程度的比较结果显示：甘草喷雾剂各 剂量组较生理盐水组减轻有显著性差异（P〈0.05)。甘草中、高剂量组与利多卡因组间差 异无显著性（P>0.05)。甘草中、高剂量组与低剂量组间差异有显著性（P〈0.05)。具体参 见表8和图2。
[0049] 表8各组炎细胞浸润程度评分（n=10,S± 3
注：与生理盐水组比较▼尸< 0. 05，与甘草低剂量组比较*尸< 0. 05 ②甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清TNF-a、IL-1及IL-10含量的影响 A、 甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清TNF-a含量的影响 检测结果显示：甘草喷雾剂各剂量组对大鼠血清TNF-a的含量均有降低作用。其中 甘草中剂量组比较生理盐水组有显著性差异（P<〇.〇5)。甘草各剂量组与利多卡因组间 差异无显著性（P> 0. 05);具体参见表9和图3。
[0050] 表9甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清TNF-a含量的影响（n=l〇,S± 3
注：与生理盐水组比较，<0.05 *尸<0.01 B、 甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清IL-1含量的影响 检测结果显示：甘草喷雾剂各剂量组对大鼠血清IL-1的含量均有降低作用。其中甘 草中、高剂量组生理盐水组比较有显著性差异（P〈〇. 05或P< 0. 01)。甘草中、高剂量组 与利多卡因组间差异无显著性（P>0.05);具体参见表10和图4。
[0051] 表10甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清IL-1含量的影响（n=10，3 土s)
C、甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清IL-10含量的影响 检测结果显示：甘草喷雾剂各剂量组对大鼠血清IL-10的含量均有升高作用。其中甘 草中、高剂量组生理盐水组比较有显著性差异（P〈0.05)。甘草各剂量组与利多卡因组间 差异无显著性（P>0. 05);具体参见表11和图5。
[0052] 表11甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清IL-10含量的影响（n=10, 5 ±3
注：与生理盐水组比较，▼尸< 0. 05 从本实验中观察到甘草喷雾剂能够明显减轻呼吸道黏膜炎细胞浸润，减少炎性渗出， 改善细胞水肿及血管扩张充血。表明该药物能够增强机体对外界有害刺激的抵抗力，减少 机体的损伤。本实验研究结果表明甘草喷雾剂对大鼠全麻气管插管后血清TNF-a及IL-1 表达有明显降低作用，对血清IL-10含量有明显升高作用，从而控制致病因素环节，通过调 控机体中细胞因子含量，调控促炎介质的水平，能够有效控制炎症，减轻呼吸道病理损伤 程度，对呼吸道黏膜具有一定保护作用。实验中观察到，因甘草喷雾剂剂量大小不同，实验 结果较之有一定差异性，存在剂量依赖，即剂量越大效果更加显著。甘草喷雾剂组与西药利 多卡因组对比，无显著差异性。
[0053] 最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明， 尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可 以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。 凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。
【主权项】
1. 一种用于预防气管插管术后呼吸道并发症的药物，其特征在于：所述药物的有效成 分为甘草提取物，所述甘草提取物中甘草酸的浓度为5. 96-11. 91mg/mL ;优选地，还包括医 学上可接受的辅料。2. 根据权利要求1所述的药物，其特征在于：所述甘草提取物是将甘草饮片先水提后 醇提得到的。3. 根据权利要求1或2所述的药物，其特征在于：所述药物的剂型为喷雾剂。4. 一种用于预防气管插管术后呼吸道并发症的甘草提取物的制备方法，其特征在于： 是将甘草饮片先水提后醇提得到的。5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述水提中，加水量为甘草饮片质量 的8-15倍，提取时间为0. 5-1. 5小时，提取次数为1-3次。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述水提中，加水量为甘草饮片质量 的8倍，提取时间为1小时，提取次数为3次。7. 根据权利要求4-6任一所述的制备方法，其特征在于：所述醇提中，溶液中乙醇体积 浓度达到45-55%，醇沉时间为8-15小时，醇提温度为30-50°C。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述醇提中，溶液中乙醇体积浓度达 到45%，醇沉时间为12小时，醇提温度为40°C。9. 权利要求1-3任一所述的药物在制备预防气管插管术后呼吸道并发症的药物中的 应用。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：以甘草饮片计，所述药物的质量浓度为 0. 2-〇. 4g/ml〇
【专利摘要】本发明提供一种用于预防气管插管术后呼吸道并发症的药物，其特征在于：所述药物的有效成分为甘草提取物，所述甘草提取物中甘草酸的浓度为5.96-11.91mg/mL；优选地，还包括医学上可接受的辅料。经实验，本发明的甘草喷雾剂能够有效预防气管插管术后呼吸道并发症。
【IPC分类】A61K9/12, A61P11/00, A61K36/484
【公开号】CN105055498
【申请号】CN201510521249
【发明人】薛建军, 郭敏, 梁曦
【申请人】甘肃省中医院
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月24日