和目的性，有的动物根据记忆直接游向逃避平台。在组内计算结果显示， 时间因素有显著统计学意义（尸< 0. 05)。组间统计结果显示，吐曼酸治疗组和载体假治疗 组间有显著统计学意义(表1)。
[0035] 在空间探索试验，分析60s内小鼠穿越平台的次数(表2)。结果显示：吐曼酸治疗 组小鼠围绕原平台象限以及平台位置进行，而载体假治疗组小鼠仍沿水池壁游动；对穿越 平台次数进行统计，结果显示：吐曼酸治疗组比假治疗组明显增多，差异有显著统计学意义 {P<0. 05)〇
[0036] 表1各组小鼠Morris水迷宫逃避潜伏期(清土s，n=5,秒）
注：0VX组与假手术组比较，*尸< 0. 05; 0VX+吐曼酸治疗组与0VX+载体假治疗组比较， #尸< 0? 05〇
[0037] 表2各组小鼠Morris水迷宫穿越平台次数(獲土s，n=5,次）
注：0VX组与假手术组比较，*尸< 0. 05; 0VX+吐曼酸治疗组与0VX+载体假治疗组比较， #尸< 0? 05〇
[0038] 2. 2吐曼酸对卵巢切除痴呆模型小鼠海马A0 40水平的影响 ELISA结果显示，卵巢切除痴呆模型组海马的A0 40表达水平与假手术组比较明显升 高，差异有显著性统计学意义尸< 0.05,表明0VX可引起海马A0 40蛋白表达水平升高； 而经吐曼酸治疗后，吐曼酸治疗组小鼠海马的AP40表达水平与载体假治疗组比较明显降 低，尸< 0. 05,差异有统计学意义，表明吐曼酸可减少海马A0 40的蛋白表达水平(表3)。
[0039] 表3各组小鼠海马A40的表达水平(交±s，n=5, ％)
注：0VX组与假手术组比较，*尸< 0. 05; 0VX+吐曼酸治疗组与0VX+载体假治疗组比较， #尸< 0? 05〇
[0040] 2. 3吐曼酸对卵巢切除痴呆模型小鼠Meynert核ChAT神经元数目的影响 与假手术组相比，卵巢切除组小鼠脑内内侧隔核的ChAT阳性神经元数目明显减少，差 异有统计学意义。吐曼酸治疗组与载体假治疗组比较，吐曼酸治疗组小鼠的ChAT阳性神经 元数目显著增加。提示吐曼酸治疗能逆转去卵巢引起的ChAT神经元数目减少（图1，表4)。
[0041] 表4各组小鼠海马Meynert核ChAT
神经元数目（: 土s，n=5,个）
注：OVX组与假手术组比较，*尸< 0. 05; OVX+吐曼酸治疗组与OVX+载体假治疗组比较， #尸< 0? 05〇
[0042] 2. 4吐曼酸对卵巢切除痴呆模型小鼠海马S0D活性的影响 我们实验结果显示：〇VX组小鼠海马S0D活性明显降低，与假手术组比较，差异有统计 学意义，尸< 0.05,说明切除卵巢引起的雌激素缺乏会导致小鼠海马S0D活性降低；0VX+ 吐曼酸治疗组小鼠海马的S0D活性与载体假治疗组比较明显升高，差异有统计学意义，尸 < 0. 05,说明吐曼酸能使去卵巢小鼠海马S0D活性升高(表5)。
[0043] 表 5 各组小鼠海马 S0D 活性(:f: 土s，n=5,U/mgprotein)
注：0VX组与假手术组比较，*尸< 0. 05; 0VX+吐曼酸治疗组与0VX+载体假治疗组比较， #尸< 0? 05〇
[0044] 2. 5吐曼酸对卵巢切除痴呆模型小鼠海马ERa和ERP蛋白表达的影响 各组小鼠海马ERa western blot结果显示，卵巢切除组海马的ERa表达水平与假 手术组比较明显降低，尸<0.05,差异有显著性统计学意义，表明0VX可引起ERa蛋白表 达下降。但卵巢切除组海马的ERP表达水平与假手术组比较无明显改变，差异无显著性统 计学意义0.05;吐曼酸组：小鼠海马ERa表达水平与载体假治疗组比较明显提高，尸 <0.05,差异有统计学意义，表明吐曼酸可上调海马ERa蛋白表达水平。但吐曼酸组与载 体假治疗组的ERP表达水平无明显改变，差异无统计学意义，/> 0.05 (图2,表6)。
[0045] 表6各组小鼠海马ERa的蛋白衷达水平（:發±s，n=5,相对倌）
注：0VX组与假手术组比较，*尸< 0. 05,0VX+吐曼酸治疗组与0VX+载体假治疗组比较， #尸< 0? 05〇
[0046] 在临床上，65岁以后的女性发生AD疾病的几率明显高于男性。小鼠切除卵巢后， 其雌激素水平的变化与绝经妇女雌激素变化相类似，卵巢切除是一种较好的雌激素缺乏动 物模型。研究显示，卵巢切除8周后动物的学习记忆能力下降。本实验用Morris水迷宫检 测动物的行为学改变以及吐曼酸对其影响。我们结果显示：卵巢切除8周后，0VX组小鼠的 逃避潜伏期明显延长，穿越平台次数显著减少，与假手术对照组比较有显著性差异，说明卵 巢切除痴呆模型造模成功，卵巢切除导致的雌激素缺乏能引起学习记忆能力降低；而0VX+ 吐曼酸组小鼠的逃避潜伏期与载体假治疗组相比明显缩短，穿越次数增多，差异有统计学 意义，说明去卵巢小鼠采用吐曼酸治疗后，学习记忆能力得到明显改善。
[0047] AD的典型病理特征表现为细胞外间隙A0沉积。A0聚集后对神经元产生毒性， 通过引起细胞的氧化应激反应诱导神经元死亡。动物研究提示长期雌激素缺乏会增加海 马内AP阳性神经元数量。而长期口服小剂量雌激素有助于防止0VX大鼠海马结构内A0 沉积增加。本研究通过切除卵巢制备雌激素缺乏痴呆大鼠模型，结果发现，ovx组与假手术 组比较，0VX组小鼠海马的AP40表达水平明显升高，差异有显著统计学意义，说明雌激素 缺乏能引起海马内Af3生成增加，AD症状加剧。而用吐曼酸治疗后，0VX+吐曼酸治疗组与 0VX+载体假治疗组比较，0VX+吐曼酸治疗组小鼠海马的A0 40表达减少，说明吐曼酸能减 少雌激素缺乏痴呆模型脑内的A0沉积，从而实现保护脑组织作用。
[0048] Meynert基底核胆碱能神经元发出纤维投射至海马和大脑皮质，释放的ACh对认 知活动起着重要作用。ChAT在胆碱能神经元胞体内合成，是胆碱能神经元的特殊标志。本 实验利用ChAT抗体标记胆碱能神经元，观察卵巢切除后Meynert基底核胆碱能神经元变化 及吐曼酸治疗对其影响。结果显示：〇VX组Meynert基底核胆碱能神经元与假手术组比较， ChAT阳性神经元数量明显减少，说明切除卵巢后导致雌激素缺乏会引起基底前脑胆碱能神 经元减少；而0VX+吐曼酸组小鼠Meynert基底核胆碱能神经元与载体假治疗组比较，ChAT 阳性神经元数量明显增多，表明去卵巢后应用吐曼酸治疗能逆转基底前脑胆碱能神经元的 丢失。
[0049] S0D是体内非常重要的抗氧化酶，能清除超氧阴离子，能保护细胞免受氧化损伤， 对机体内氧化与抗氧化过程起平衡作用，是反映机体清除自由基能力的重要指标。本实验 结果显示：〇VX组海马S0D活性明显降低，与假手术组比较有显著性差异，说明切除卵巢导 致雌激素缺乏能引起机体清除自由基能力降低；0VX+吐曼酸治疗组与载体假治疗组比较 海马的S0D活性明显升高，差异有统计学意义，说明应用吐曼酸治疗后可以减少去卵巢后 海马内的氧自由基产生，由此减少神经细胞死亡或丢失。
[0050] 雌激素主要在卵巢及睾丸中合成，一小部分通过雄激素芳香化作用在末梢组织合 成，除了调控生殖系统外，还对心脑血管、和中枢神经系统起着保护作用。雌激素与ER结 合形成激素-受体复合物而激活ER，被激活的ER与DNA上的特异性雌激素反应元件作用， 从而调节目的基因表达。ER有两种构型：ERa主要分布在子宫、胎盘、乳腺、心血管系统、 中枢神经系统和骨组织中，这些组织可以诱导雌二醇反应元件表达；ERP主要分布在前列 腺、睾丸、甲状腺、松果体、甲状旁腺、皮肤、尿道和红细胞中，这些组织中ERP表达很少。在 AD危险因素中雌激素水平及雌激素受体的减少是少数可干扰因素之一，明确雌激素受体与 AD的关系具有重要的临床意义。本实验结果显示，0VX导致大鼠痴呆及雌激素受体ERa水 平降低，海马ERP表达无统计学差异，提示ERa比ERP更易受内源性雌激素水平的调节， ERa表达降低可导致神经元接受雌激素的保护作用减弱，从而导致神经元变性或死亡。给 予吐曼酸治疗后，小鼠的海马区域ERa表达明显提高，而ERP表达无显著性改变，这些结 果提示吐曼酸主要通过ERa发挥作用。吐曼酸可能成为改善妇女绝经期后认知功能障碍 的理想药物。
[0051] 总之，吐曼酸可改善AD患者的认知功能障碍，提高脑内胆碱能神经元的数量，对 CNS具有神经保护作用，该保护作用可能通过ERa实现，该结果为吐曼酸作为治疗绝经期 妇女合并AD的药物选择提供了实验依据。
[0052] 以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该 了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原 理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入 本发明保护的范围内。
【主权项】
1. 吐曼酸在制备治疗或预防雌激素缺乏引起的阿尔茨海默病药物中的应用，其中吐曼 酸的分子式为C3()H4S05，结构式为：2. 根据权利要求1所述的吐曼酸在制备治疗或预防雌激素缺乏引起的阿尔茨海默病 药物中的应用，其特征在于：所述的药物是由吐曼酸和药学上可接受的载体或赋形剂制成 的。3. 吐曼酸在制备治疗或预防绝经期妇女合并阿尔茨海默病药物中的应用，其中吐曼酸 的分子式为结构式为：4. 根据权利要求3所述的吐曼酸在制备治疗或预防绝经期妇女合并阿尔茨海默病药 物中的应用，其特征在于：所述的药物是由吐曼酸和药学上可接受的载体或赋形剂制成的。
【专利摘要】本发明公开了一种吐曼酸在制备治疗或预防雌激素缺乏引起的阿尔茨海默病药物中的应用，属于吐曼酸的医药新用途技术领域。本发明的技术方案要点为；吐曼酸在制备治疗或预防雌激素缺乏引起的阿尔茨海默病药物中的应用，其中吐曼酸的分子式为C30H48O5，结构式为：。本发明的吐曼酸可改善AD患者的认知功能障碍，提高脑内胆碱能神经元的数量，对CNS具有神经保护作用，该保护作用可能通过ERα实现，该结果为吐曼酸作为治疗绝经期妇女合并AD的药物选择提供了实验依据。
【IPC分类】A61P25/28, A61P5/30, A61K31/56, A61P15/00
【公开号】CN105106222
【申请号】CN201510581200
【发明人】崔卫刚, 张应花, 王松涛, 孙春莉, 连辉
【申请人】新乡医学院
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月14日