分光光度测量。该分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此已经将对TNF-α特异的单 克隆抗体预先涂覆在微孔板上。可以将标准品和样品移液到孔中，存在的所有TNF-a由固 定化的抗体结合。冲走所有未结合的物质后，可以将对TNF-α特异的酶联多克隆抗体添加 到孔。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶反应物之后，可以将底物溶液添加到孔，显色与最 初步骤中结合的TNF-α的量成比例，使用酶标仪在450nm处检测。可以停止显色，并测量颜 色的强度。可以将在37°C下5%的C02中在EpiLife标准生长培养基（CascadeBiologies) 中培养的亚融合的正常人类成熟角质细胞（CascadeBiologies)用佛波醇-12-豆蔻酸 酯-13-乙酸酯（PMA，10ng/ml，SigmaChemical，#P1585_1MG)和本说明书中所公开的活性 成分、成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种处理处理6小时。已经表明PMA导致 TNF-α分泌明显的增加，所述TNF-α分泌在处理6小时后达到峰值。培育之后，可以收集 细胞培养基，并使用来自R&DSystems(#DTA00C)的三明治酶联免疫吸附分析（ELISA)定量 TNF-α分泌的量。
[0133] 抗氧化（A0)分析：体外生物分析测量本说明中所公开的成分、成分的组合或具 有所述组合的组合物中的任一种的总抗氧化能力。该分析依赖样品中抗氧化剂的抑制 ABTS? (2, 2'-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成ABTS， +的能力。生物体的抗氧化系统包含酶，例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过 氧化物酶；高分子，例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白；和大量小分子，包括抗坏血酸、 a_生育酚、β_胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。内源的和源自食物的抗氧化剂 的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化 合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此，总的抗氧化能力与测量单独组分 获得的相比可以给出更相关的生物信息，因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂 的累积效应。样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与Trolox，一种水溶性生育酚类似物的 进行比较，并以Trolox的摩尔当量进行定量。可以使用来自CaymanChemical(密歇根州 安阿伯，USA)的抗氧化能力试剂盒#709001作为测量本说明中所公开的成分、成分的组合 或具有所述组合的组合物中的任一种的总抗氧化能力的体外生物分析。方案可以根据制造 商的建议进行。所述分析依赖样品中的抗氧化剂抑制ABTS? (2, 2' -联氮-双-[3-乙 基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成ABTS? +。可以将样品中抗氧化剂预防 ABTS氧化的能力与Trolox，一种水溶性生育酸类似物的进行比较，并以Trolox的摩尔当量 进行定量。
[0134] 蘑菇酪氨酸酶活性分析：在哺乳动物细胞中，酪氨酸酶在来自酪氨酸（和来自多 巴色素聚合）的黑色素生物合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中，并产生给予 皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素（芳香醌化合物）。可以将蘑菇络氨酸酶（Sigma)在本说明 书所公开的活性成分的每一个、成分的组合或具有所述组合的组合中的任一种存在下或不 存在下与其底物L-Dopa(Fisher)培养。可以在490nm处通过比色板读数来评估色素形成。 蘑菇络氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照相比较来计算，以确定测试成分 或其组合抑制纯化酶的活性的能力。可以将测试成分抑制与曲酸（Sigma)的进行比较。
[0135] 环氧合酶（C0X)分析：体外环氧合酶-1和-2 (C0X-1、-2)抑制分析。C0X是一种 展现环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转换为过氧 化氢内过氧化物（前列腺素G2 ;PGG2)，过氧化物酶组分将内过氧化物（前列腺素H2 ;PGH2) 还原为相应的醇，前列腺素、凝血噁烷和环前列腺素的前体。该C0X抑制筛选分析测量环氧 合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-对苯二胺 (TMPD)的出现进行比色分析。该抑制筛选分析包括C0X-1和C0X-2酶两者，以筛选同工酶 特异性抑制剂。可以使用比色COX(绵羊）抑制剂筛选分析（#760111，CaymanChemical) 来分析本说明书中所公开的活性成分的每一种、成分的组合、或具有所述组合的组合物对 纯化的环氧合酶（COX-1或COX-2)的影响。根据制造商的指示，可以将纯化酶、血红素和 测试成分在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动培育15分钟。培育之后，可以加入花生四 烯酸和比色底物以启动反应。可以在590nm下通过比色板读数来评估颜色进展。COX-1或 COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照相比较来计算，以确定测试成分抑制纯 化酶的活性的能力。
[0136] 脂肪氧合酶（L0)分析：体外的脂肪氧合酶抑制分析。L0是非血红素的含铁的加双 氧酶，其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物中和动物中L0 的主要底物。然后，花生四烯酸可以转换为羟基二十三烯（HETE)酸衍生物，其随后转换为 白三烯，有效的炎症介质。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂肪氧合酶（5_、12-或 15-L0)产生的氢过氧化物提供一种精确的和方便的用于筛选脂肪氧合酶抑制剂的方法。可 以使用比色L0抑制剂筛选试剂盒（#760700,CaymanChemical)来确定本说明书中所公开 的活性成分的每一种、成分的组合、或具有所述组合的组合物的任一种抑制酶活性的能力。 可以将经纯化的15-脂肪氧合酶和测试成分在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动培育10 分钟。培育之后，可以加入花生四烯酸开始反应，混合物在室温下再培育另外10分钟。可 以添加比色底物以终止催化，并在490nm下通过荧光板读数来评估颜色进展。可以与未处 理的对照相比较来计算脂肪氧合酶活性的抑制百分比，以确定本说明书中所公开的活性成 分的每一种、成分的组合、或具有所述组合的组合物的任一种抑制纯化酶的活性的能力。
[0137] 弹性蛋白酶分析：可以使用MolecularProbes(俄勒冈州尤金，USA)的 EnzChek?弹性蛋白酶分析（试剂盒#E-l2056)作为用于测量本说明书中所公开的活性 成分的每一种、成分的组合或具有所述组合的组合物的任一种的弹性蛋白酶活性抑制的体 外酶抑制分析。EnzChek试剂盒含有可溶的牛颈韧带弹性蛋白，其可以用染料标记以使共 辄荧光能够被淬灭。非荧光的底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高荧光的片 段。产生的荧光增强可以用荧光微孔板测定仪进行监测。来自弹性蛋白底物的消化产物在 约505nm处具有吸收最大值，在约515nm处具有荧光发射最大值。当使用EnzChek弹性蛋 白酶分析试剂盒以筛选弹性蛋白酶抑制剂时，可以将肽、氯甲基酮用作选择性的、共同的弹 性蛋白酶抑制剂。
[0138] 油控制分析：用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少 的分析可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在具体的例子中，可 以使用前额。可以将本说明书中所公开的活性成分的每一种、成分的组合或具有所述组合 的组合物的任一种每天一次或两次地施用到前额的一部分一段固定的日子（例如1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天），而前额的其他部分不用所述组合物处理。在一 段固定的日子期满后，皮脂分泌可以通过将细吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额皮肤 上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从处理过的和未处理的区域去除所有皮脂完成 的。然后吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额区域，可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地 将吸墨纸压到皮肤上。2小时后，吸墨纸可以移去，使其干燥，然后进行透照。越深的吸墨纸 对应于越多的皮脂分泌（或较浅的吸墨纸对应于减少的皮脂分泌。
[0139] 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺
[0140] 本说明书中所公开和要求保护的所有皮肤活性成分、组合物或方法根据本公开不 需要过度的实验即可实现和执行。尽管已经以具体实施方案的方式描述了本发明的皮肤活 性成分、组合物或方法，但是对于本领域技术人员明显的是，在不脱离本发明的概念、精神 和范围情况下，可以对所述皮肤活性成分、组合物或方法以及在本文所描述方法的步骤或 步骤的顺序中实施变化。
[0141] 参考文献
[0142] 以下参考文献在一定程度上提供示例性程序或对本文所陈述细节的其他补充细 节，它们通过引用明确地并入本文。
[0143]Cao等人 1993.
[0144]InternationalCosmeticIngredientDictionaryandHandbook，第 12 版， 2008( "CTFA"），第 2 卷，第 2399 页。
[0145]InternationalCosmeticIngredientDictionaryandHandbook，第 12 版， 2008( "CTFA"），第 1 卷，第 198 页，地 655 页。
[0146]InternationalCosmeticIngredientDictionaryandHandbook，第 4 版， 1991( "CTFA"），第 12 页和第 80 页。
【主权项】
1. 一种组合物，其包含 氧化锌； 二氧化钛； 水杨酸丁基辛酯； 环戊硅氧烷； 新戊二醇二庚酸酯； 丁二醇； 辛基聚甲基硅氧烷； PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷； 甘油； 聚甘油-6聚蓖麻醇酸酯； 月桂酸； 氢氧化铝； 山梨酸钾；和 柠檬酸。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含能够对抗UVA和/或UVB线、吸 收光和/或反射光的有效量的氧化锌和二氧化钛。3. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含能够使防晒成分增溶、改善制 剂外观和/或给予皮肤优良的润湿感的有效量的水杨酸丁基辛酯。4. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含能够保护皮肤免受紫外线的影 响和/或具有至少20的SPF的有效量的氧化锌、二氧化钛和水杨酸丁基辛酯。5. 根据权利要求1所述的组合物，其包含： 1重量％至10重量％的氧化锌； 1重量％至10重量％的二氧化钛； 1重量％至10重量％的水杨酸丁基辛酯； 5重量％至15重量％的环戊硅氧烷； 1重量％至10重量％的新戊二醇二庚酸酯； 1重量％至10重量％的丁二醇； 1重量％至10重量％的辛基聚甲基硅氧烷； 1重量％至5重量％的PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷； 〇. 5重量％至5重量％的甘油； 0. 1重量％至3重量％的聚甘油-6聚蓖麻醇酸酯； 0. 1重量％至3重量％的月桂酸； 0. 1重量％至1重量％的氢氧化铝； 0. 1重量％至1重量％的山梨酸钾； 和〇. 1重量％至1重量％的柠檬酸。6. 根据权利要求1所述的组合物，其还包含水。7. 根据权利要求6所述的组合物，其包含35重量％至60重量％的水。8. 根据权利要求1所述的组合物，其还包含： PEG-9聚二甲基硅氧烷； 聚二甲基硅氧烷/PEG10/15交联聚合物； 苯甲醇； 环己硅氧烷； 聚二甲基硅氧烷； 季铵盐-90膨润土； 氯化钠； 己二醇； PEG/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷； 聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物； 水杨酸；和 聚甲基硅氧烷。9. 根据权利要求8所述的组合物，其包含： 0. 1重量％至3重量％的PEG-9聚二甲基硅氧烷； 0. 1重量％至3重量％的聚二甲基硅氧烷/PEG10/15交联聚合物； 0. 1重量％至3重量％的苯甲醇； 0. 1重量％至3重量％的环己硅氧烷； 0. 1重量％至3重量％的聚二甲基硅氧烷； 0. 1重量％至1. 5重量％的季铵盐-90膨润土； 0. 1重量％至1. 5重量％的氯化钠； 0. 01重量％至1重量％的己二醇； 0. 01重量％至1重量％的PEG/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷； 0. 01重量％至1重量％的聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物； 0. 01重量％至1重量％的水杨酸；和 0. 01重量％至1重量％的聚二甲基硅氧烷。10. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物为乳液、润肤露、凝胶或软膏。11. 根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物为乳液。12. -种用于保护皮肤免受紫外辐射的方法，其包括将根据权利要求1所述的组合物 施用至有此需要的皮肤。13. 根据权利要求12所述的方法，其中将所述组合物施用至面部皮肤。14. 根据权利要求12所述的方法，其中将所述组合物施用至使用者的手臂或手上的皮 肤。
【专利摘要】本文描述的是可用于保护皮肤免受日晒的组合物。该组合物包含化妆品成分如氧化锌、二氧化钛、水杨酸丁基辛酯和皮肤病学上可接受的载剂。组合物还可以包含另外的成分如环戊硅氧烷、新戊二醇二庚酸酯、丁二醇、辛基聚甲基硅氧烷、PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷、甘油、聚甘油-6聚蓖麻醇酸酯、月桂酸、氢氧化铝、山梨酸钾和柠檬酸。
【IPC分类】A61Q17/04, A61K8/37, A61K8/29, A61K8/27, A61K8/891
【公开号】CN105250148
【申请号】CN201510407882
【发明人】格雷格·诺曼
【申请人】玫琳凯有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年7月13日
【公告号】US20160008246