Strigone在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物Strigone的新用途，尤其涉及Strigone在制备抑制肝脏成纤 维细胞增殖药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，过去的20年间，肝纤维化的研 究取得了长足进展，证实肝纤维化与一定程度的肝硬化都是可逆的。近年来陆续出现了一 些抗肝纤维化治疗方法，包括化学药、生物制剂、中药与基因疗法等，但是理想的临床治疗 手段仍然缺乏，目前防治肝纤维的关键是针对与肝星状细胞激活相关的环节，主要是：减轻 肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因子紊乱，促进活化肝星状细 胞凋亡。
[0003] 本发明涉及的化合物Strigone是一个2013年发表（TakayaKisugi，et al. ,Strigone,isolationandidentificationasanaturalstrigolactonefrom Houttuyniacordata.Phytochemistry，87 (2013) 60 - 64.)的新化合物，该化合物拥有全新 的骨架类型，目前的用途仅仅促进种子发芽，（TakayaKisugi，etal.，Strigone,isolation andidentificationasanaturalstrigolactonefromHouttuyniacordata. Phytochemistry，87 (2013) 60 - 64.)，本发明涉及的Strigone在制备抑制肝脏成纤维细胞 增殖药物中的用途属于首次公开。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于根据现有Strigone研究中未发现其具有抑制肝脏成纤维细胞 增殖活性的报道的现状，提供了Strigone在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用。
[0005] 所述化合物Strigone结构如式（I)所示：
[0006]
[0008] 本发明对Strigone抑制肝脏成纤维细胞增殖作用进行了药理试验。活化的肝星 状细胞（HSC)具有成纤维细胞特征，NIH/3T3细胞是研究药物抗肝纤维化活性常用的细胞 模型。本研究以NIH/3T3成纤维细胞为靶细胞，观察发明药物对其增殖的影响。用MTT法 检测的抑制细胞增殖的试验结果表明，本发明药物对NIH/3T3的细胞增殖有显著的抑制活 性。结果证明Strigone具有抗肝纤维化作用。
【具体实施方式】
[0009]本发明所涉及化合物Strigone的制备方法参见文献（TakayaKisugi，et al.,Strigone,isolationandidentificationasanaturalstrigolactonefrom Houttuyniacordata.Phytochemistry?87(2013)60 - 64.)
[0010] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0011] 实施例1 :本发明所涉及化合物Strigone片剂的制备：
[0012] 取5克化合物Strigone，加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
[0013] 实施例2:本发明所涉及化合物Strigone胶囊剂的制备：
[0014] 取5克化合物Strigone，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0015] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0016] 实验例一：采用MTT法评价化合物Strigone对肝纤维化的抑制作用
[0017] 1、方法：NIH/3T3 细胞株购自引自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)的 中科院上海细胞所细胞库。将对数生长期的亚融合的NIH/3T3细胞用0. 25%胰酶消化，洗 涤，离心后，用DMEM培养液（含10%FCS)制成lX104cell/ml的细胞悬液，台盼蓝染色鉴 定存活率大于95%，按每孔100ul加入96孔板中，在37°C、5%C02培养24h同步处理后， 弃上清，加入含有不同稀释浓度药物的DMEM培养液（含10%FCS) 200ul，培养48h，每孔加 入MTT溶液孵育4h。弃去培养液，加入150ulDMS0,振荡10分钟，使结晶溶解，酶标仪490nm 处读取0D值，结果以0D49。表示。
[0018] 2.结果：
[0019] 2. 1形态学观察
[0020] NIH/3T3在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性，呈放射状，细胞增殖的速度 快；而加药物24h后，成纤维细胞数目减少，形状变得不规则，突起变短，细胞排列混乱，细 胞内代谢产物增多。
[0021] 表1 :MTT法检测本发明药物对NIH/3T3增殖的抑制作用
[0022]
[0023] 注：与细胞阴性对照比较*P〈0. 05 ;#P〈0. 01
[0024] 结果：本发明药物在10ug/ml-40ug/ml的浓度范围内对成纤维细胞NIH/3T3在 10 %小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞的 增殖有显著抑制作用。
[0025] 实验例2:本发明药物对转化生长因子-βi(TGF-β》诱导的成纤维细胞增殖的抑 制作用
[0026]TGF-βi是促进细胞增殖和胶原生成的强活性因子，在细胞中加入TGF-βJOng/ ml刺激细胞增殖，在检测药物对TGF-β1诱导的细胞增殖的抑制作用，以分析判断本发明 药物的作用机理。
[0027] 表2:MTT法检测本发明药物对TGF诱导NIH/3T3增殖的抑制作用
[0028]
[0029] 注：*，与细胞+TGF对照Ρ〈0· 05;#，与细胞+TGF对照Ρ〈0· 01
[0030] 结果：本发明药物在10_40ug/ml两个浓度区间内对成纤维细胞ΝΙΗ/3Τ3在 TGF-β1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞增殖的 抑制作用可能是通过干预TGF信号通路实现的。
[0031] 由上述实施例表明，本发明对成纤维细胞NIH/3T3在10%小牛血清的刺激下的细 胞增殖有显著的抑制作用；Strigone对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β1的诱导下的细胞增 殖有显著的抑制作用。由此证明，Strigone可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于 制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。
【主权项】
1.Strigone在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用，所述化合物Strigone结构如 式（I)所示： 式（I》 1.Strigone在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用，所述化合物Strigone结构如式（I)所示：
【专利摘要】本发明公开了Strigone在制备治疗肝纤维化药物的用途。药理试验证明，Strigone可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物，Strigone属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61P1/16, A61K31/365
【公开号】CN105250262
【申请号】CN201510762567
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月11日