粒体融合的情形如图7A至图7C所示。
[0070] 请参图7A及图7B中，各该图中箭头所指处为黄色荧光，表示外源性线粒体与内生 性线粒体在细胞内重叠，并且，由图7C可知红色荧光信号与绿色荧光信号彼此重叠。因此， 由图7的结果可知，无论有无处理补体，被细胞摄入的该外源性线粒体与细胞内原本的线 粒体位于细胞内同一位置，显示外源性线粒体与内源性线粒体彼此间有融合的现象，并且 能够逃脱吞嗤溶解小体（phagolysosome)而进入细胞质当中。
[0071] 再者，通过流式细胞仪分析的结果可知，在未经C3补体处理的第一组中，平均约 有26. 16±4. 75 %的细胞被侦测到具有红色荧光；第二组中为平均约有43. 43±3. 5 %的 细胞被侦测到具有红色荧光；在第三组的细胞中，平均约有65. 13±7. 5 %的细胞被侦测到 具有红色荧光；在第四组的细胞中，平均约有78. 97±13. 35 %的细胞被侦测到具有红色荧 光；在第五组的细胞中，则约有80 %的细胞被侦测到具有红色荧光；并且，第二至五组为分 别与第一组间具有显著差异（P〈〇. 05)。
[0072] 由上述结果证实，通过给予补体至外源性线粒体，可显著提升该外源性线粒体进 入细胞的比例，并且，被摄入的外源性线粒体得与内源性线粒体融合，此外，随着给予补体 的浓度增加，也使进入细胞内的外源性线粒体数量增加。
[0073] 实施例六：血清或补体不会破坏分离出的线粒体
[0074] 将分离出的外源性线粒体分为四组，各组5 μ g。其中，第一组为空白组，第二组为 以100倍稀释的胎牛血清处理该外源性线粒体，第三组为以浓度10 μ g/mL的C3补体处理 该外源性线粒体，第四组为以IOOnM的穿膜胜肽（cell penetrating peptide)Pep-l处理 该外源性线粒体。将各组在37°C下培养4小时，以穿透式电子显微镜分别观察各组外源性 线粒体的外观,结果如图8A至图8D所示。
[0075] 由图8A至图8D的结果可知，第二组及第三组的线粒体的外观分别类似于未经任 何处理的第一组线粒体的外观。而相较于第一组，第四组中经穿膜胜肽处理的外源性线粒 体则明显肿大，并且具有破裂的情形。因此，相较于穿膜胜肽，血清或是补体的毒性较低，并 且不会破坏线粒体的外观，而能维持线粒体进入细胞后的完整性。
[0076] 实施例七：培养人类脐带内皮细胞
[0077] 人类 U齐带内皮细胞（human umbilical vascular endothelial cells，下称 HUVEC细胞）购自新竹食品工业发展研究所。HUVEC细胞培养在M199培养基，并加入10% 的胎牛血清、0.1%的肝素以及0.03%的内皮细胞生长因子（endothelial cell growth supplement)。HUVEC细胞可在0.1重量百分比的明胶被覆（gelatin-coated)的培养皿上 生长。
[0078] 实施例八：线粒体可延缓细胞老化
[0079] 先自人类纤维母细胞HS68抽出线粒体，用以作为外源性线粒体的来源。各组 5 μ g。再将该线粒体以补体处理后，以红色突光的线粒体追踪染剂（Mitotracker)将该线 粒体染色。
[0080] 另，以过氧化氢处理初代培养的HUVEC细胞，使其老化。培养到第8代的该HUVEC 细胞（8父10%11/^11)以10(^1过氧化氢在371：处理2小时，以磷酸盐缓冲液清洗， 除去过氧化氢，并以正常细胞培养液培养一天后，分为三组，其中，第一组为未加入线粒 体的空白组，第二组为加入未经补体处理的该线粒体，第三组为加入经补体处理的该线 粒体。而各该组细胞分别培养4小时后，分别进行SAP -gal (Senescence-associated β -galatosidase)染色，以及Ki67及BrdU的染色分析。
[0081] 而Ki67及BrdU的染色流程为本发明所属技术领域且具通常知识者的一般周知技 术，故在此不加以赘述。
[0082] SAi3_gal染色的流程如下：细胞先以磷酸盐缓冲液清洗，以2%的多聚甲醛 (paraformaldehyde)、0. 2 % 的戊二酸（glutaraldehyde)固定 5 分钟，再以染色液在 37°C 下作用12小时，其中，该染色液包含有lmg/mL的5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -D-吡喃半 乳糖昔（5-brom〇-4-chlor〇-3-indolyl-i3 -D-galactoside，BCIG 或 X-gal)、40mM 的朽1 樣 酸憐酸盐缓冲液（citric acid/phosphate buffer) (pH 6.0)、5mM 的铁氰化钾（potassium ferricyanide)、5mM 的铁氰化钠（sodiumferricyanide)、150mM 的氯化钠及 2mM 的二氯化 镁。而后，以〇. 5 %的伊红（Eosin)将细胞染色，在显微镜下进行观察。
[0083] 以SAP -gal染色后的结果如图9A至图9D所示。由图9A可知外源性线粒体能进 入HUVEC细胞。由图9B至图9D可知，第一组的HUVEC细胞有明显染上SA β-gal。第二组 的HUVEC细胞虽然有被SA β -gal染色，但是相较于第一组，第二组中被染色的HUVEC细胞 数量明显下降。而相较于第一组或第二组，第三组中的HUVEC细胞则几乎未染上SA β -gal。 更进一步地将染色结果进行统计分析，得知第一组细胞中约有85± 12. 3 %的细胞被染色， 第二组细胞中约有60. 1±6. 8%的细胞被染色，而第三组细胞中有25±6. 2%的细胞被染 色。
[0084] 再者，将Ki67及BrdU的染色结果进行计数后可知，第一组的HUVEC细胞中染上 Ki67及BrdU的比例为13. 3%及13%。相较于第一组，第二组的HUVEC细胞中染上Ki67及 BrdU的比例增加，分别为35 %及33 %。而第三组中的HUVEC细胞染上Ki67及BrdU的比例 为最高，分别为71%及59. 6%。并且，当所投予的线粒体以胎牛血清处理时，也能达到与以 补体处理时的一样功效。
[0085] 由上述结果可知，外源性线粒体进入细胞能有效降低细胞老化的程度、增加细胞 生长以及提高细胞复制的效率，并且，随着外源性线粒体进入细胞的数量增加而能更显著 地降低细胞老化的程度，使处于分裂状态的细胞增加，以增加细胞复制与生长。据此，通过 投予本发明所揭含有外源性线粒体的医药组合物至一个体，能有效改善或延缓其细胞老化 的程度，并且当该医药组合物中具有促进线粒体进入细胞的成份时，如血清、血浆或补体， 更能显著提升其功效。
[0086] 实施例九：动物实验（一）
[0087] 自RedM-BHK细胞抽取带有红色荧光的线粒体，并且以100倍稀释的胎牛血清或 lOyg/mL C3补体加以处理。取48周龄的自然老化裸鼠，将该线粒体注射至该裸鼠的皮下 组织，待一小时后，取该裸鼠的全皮，以4%多聚甲醛固定5分钟后，静置于0.1 M的磷酸盐缓 冲液至该样品沉下，再以冷冻包埋剂（0.C.T)浸润及包埋样品，进行冷冻切片，而切片的厚 度约为12 μ m。封片后以共轭焦显微镜观察，结果如图10所示。
[0088] 图10为线粒体移植后，在裸鼠的真皮层区域。蓝色荧光为经DAPI染色的纤维母 细胞细胞核，红色荧光为自RedM-BHK细胞所分离出的线粒体，由图10的结果显示，移植后 该线粒体能进入真皮内的纤维母细胞中。
[0089] 实施例十：自肝脏细胞分离线粒体
[0090] 首先，将小鼠深度麻醉后牺牲，以生理食盐灌流该小鼠全身，待其肝脏中的血液去 除干净。取出约1立方公分的肝组织，加入约6毫升的SHl缓冲液，经过组织研磨机研磨后， 离心lOOOxg，离心15分钟，再取其上清液。并且，同时在离心管中依次加入浓度为55%、 40%、30%的蔗糖液，获得一 30~55%蔗糖梯度离心管。将经离心步骤所获得的该上清 液加到该梯度离心管的上层，经过35000rpm离心30分钟，在40%与55%的分层间形成一 透白层。吸取该透白层出来约有1毫升而收集在15毫升的离心管中，再加入5毫升的SEH 缓冲液，离心13000xg，离心3分钟后，去除上清液，并且，重复上述离心步骤三次，最后，以 200 μ L的SHl缓冲液回溶线粒体沉淀物，再加入蛋白质分解酵素的抑制剂，在4°C保存。
[0091] 实施例十一 ：动物实验（二）
[0092] 取32只48周龄的自然老化裸鼠，分为4组，每组8只，分别以不同条件处理12周， 其中，第一组为无治疗组，第二组为每周注射1000 μ g的肝脏线粒体至各该小鼠，第三组为 每周注射1000 μ g经补体处理的肝脏线粒体至各该小鼠，第四组为每周注射1000 μ g经血 清处理的肝脏线粒体至各该小鼠。而第二组至第四组小鼠的皮下注射方式为将约5000 μ g/ mL的肝脏线粒体平均注射在各该裸鼠背部上的20个点，在每个点注射0. 01毫升，