一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，属于医药技术领 域。
【背景技术】
[0002] 禽流感(Avian influenza，AI)是禽流行性感冒的简称，由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV)引起的多种禽类感染的急性呼吸道传染病，也能感染人类，被国际 兽医局(OIE)和我国《家畜家禽防疫条例》列为A类烈性传染病。
[0003] 流感病毒属于正黏病毒科流感病毒属，含有囊膜、为多形态的负链RNA病毒。根据 流感病毒内部核蛋白（Nucleoprotein，NP)和基质蛋白（Matrix protein，MP)抗原及其基因 特性的不同，可将流感病毒分为甲（A)、乙（B)、丙(C)三种类型，其中，能够引起大流行的流 感病毒主要是甲型。禽流感病毒即为甲型流感病毒，其基因组共由8个单独的负链RNA片段 组成，由片段1至片段8依次为PB1、PB2、PA、HA、NP、NA、M、NS。
[0004] 根据位于禽流感病毒囊膜上的血凝素 HA(HemagglutininS，由禽流感基因组的第4 个片段编码)和神经氨酸酶NA(NeUraminida Se，由禽流感基因组的第6个片段编码)抗原性 的不同，禽流感病毒可分为若干个亚型，目前已知的HA有16个亚型(H1-H16)、NA有9个亚型 (N1-N9)，这两种不同的亚型之间可以进行自由组配，从而形成一个庞大而复杂的禽流感病 毒家族。正是由于流感病毒基因组自身的特点决定了其不断发生抗原漂移和抗原转换，从 而使得新的流行毒株不断出现。目前，世界上的许多国家和地区都对该病进行过相关报道， 常见的且能感染人的高致病性禽流感病毒以H5N1、H7N7、H9N2为代表，以快速爆发和高死亡 率为主要临床特征，常常导致饲养的鸡群全部死亡;这一事件也表明家禽是人畜传播潜在 的中间宿主。
[0005] 现有的禽流感疫苗，多为采用弱毒性禽流感病毒制成，现有的禽流感疫苗，存在使 用不当易感染禽流感病毒，疫苗使用不完，存放时易散毒等缺陷。
【发明内容】
[0006] 本发明为解决现有技术中存在的不足，提供一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道 感染的疫苗，以实现以下发明目的： (1) 本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，产生Al V-H5禽流感病毒抗体； (2) 本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，能够有效抵抗AIV-H5禽流感病毒，保护率达80-93.3%； (3 )本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，产生NDV鸡城疫抗体； (4)本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，能够有效抵抗NDV鸡城疫病毒，保护率达76.7-96.7%〇
[0007] 为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案： 一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗，所述疫苗为糖蛋白，或多糖和蛋白 质的混合物或多妝或蛋白，所述糖蛋白包括糖1_99%，蛋白质1-99%;所述多糖和蛋白质的混 合物，以重量含量计，包括多糖1 -99%，蛋白质1 -99%;所述糖蛋白，分子量为0.2-3000 kDa; 以下是对上述技术方案的进一步改进： 所述药物为海洋藻类糖蛋白。
[0008] 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖1-99%，蛋白质1-99%;所述海洋藻类 多糖和蛋白质的混合物，以重量含量计，包括多糖1-99%，蛋白质1-99%。
[0009] 所述海洋藻类糖蛋白，分子量为0.2-3000 kDa; 所述多糖和蛋白质的混合物，多糖的分子量为〇.2-3000 kDa，蛋白质的分子量为0.2-3000 kDa〇
[0010] 所述疫苗，以重量含量计，包括糖蛋白1-100份、葡萄糖醛酸1-25份。
[0011] 所述疫苗，以重量含量计，包括海洋藻类糖蛋白1-100份、葡萄糖醛酸1-20份。
[0012 ]所述藻类为蓝藻、绿藻、红藻中的一种。
[0013] 所述疫苗，以重量含量计，包括糖1-99%，蛋白质1-99%。
[0014]所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖1-99%，蛋白质1-99%。
[0015] 相对现有技术，本发明的有益效果为： (1)本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，产生AIV-H5禽流感病毒抗体，免疫后21天，AIV-H5抗体为(6 · 5-8 · 3) log2，免疫后20周，AIV-抱抗体为(6 · 3-8 · 0) log2，免疫后60周，AIV-抱抗 体为（6.0-7.3)log2。
[0016] (2)本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，能够有效抵抗Aiv-H5禽流感病毒，保护率达 80-93.3%，保护的数量为（24-28V30，发病的数量为(0-2)/30，死亡数量为0/30，病毒分离 为阳性的数量为(2-4)/30。
[0017] (3 )本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，产生NDV鸡城疫抗体，免疫后，21天，NDV抗体 为（6.9-8.3)log2,免疫后20周，NDV抗体为（6.5-8.0) log2,免疫后60周，NDV抗体为（6.3-7.5)log2〇
[0018] (4)本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，能够有效抵抗NDV鸡城疫病毒，保护率达 76.7-96.7%，保护的数量为（23-29)/30，发病的数量为(0-3)/30，死亡数量为0/30，病毒分 离为阳性的数量为（1_4)/30。
【具体实施方式】
[0019] 以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用 于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0020] 实施例1 一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗包括海洋藻类糖蛋白； 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖1%，蛋白质99%。
[0021 ]分子量为0.2 kDa ； 所述海洋藻类为:蓝藻； 所述糖为多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白质，包括:丝氨酸、苏氨酸、羟基赖氨酸、天冬氨酸； 实施例2-种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗包括海洋藻类糖蛋白； 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖5%，蛋白质82%， 分子量为3 kDa; 所述海洋藻类为:蓝藻； 所述糖为多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白质，包括:丝氨酸、苏氨酸、羟基赖氨酸、天冬氨酸； 实施例3-种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗包括海洋藻类糖蛋白； 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖17%，蛋白质75%， 分子量为32 kDa; 所述海洋藻类为:绿藻； 所述糖为多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白质，包括:丝氨酸、苏氨酸、羟基赖氨酸、天冬氨酸； 实施例4 一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗包括海洋藻类糖蛋白； 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖32%，蛋白质60%， 分子量为76 kDa; 所述海洋藻类为:红藻； 所述糖为多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白质，包括:丝氨酸、苏氨酸、羟基赖氨酸、天冬氨酸； 实施例5-种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗包括海洋藻类糖蛋白； 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖61%，蛋白质32%， 分子量为300kDa; 所述海洋藻类为:褐藻； 所述糖为多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白质，包括:丝氨酸、苏氨酸、羟基赖氨酸、天冬氨酸； 实施例6-种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗包括海洋藻类糖蛋白； 所述海洋藻类糖蛋白，以重量含量计，包括糖99%，蛋白质1%， 分子量为3000kDa; 所述海洋藻类为:金藻； 所述糖为多糖； 所述多糖，包括:葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖； 所述蛋白质，包括:丝氨酸、苏氨酸、羟基赖氨酸、天冬氨酸； 上述实施例1-6所述的糖蛋白，还包括色素;所述色素为藻类物质中含有的天然色素； 对上述实施例1-6进行概括为： 一种用于防治流感、禽流感、上呼吸道感染的疫苗 所述疫苗为糖蛋白； 所述糖蛋白，以重量含量计，包括糖1-99%，蛋白质1-99%; 分子量为 〇 · 2-30000kDa; 所述糖为多糖； 所述药物，为合成糖蛋白及合成多糖和蛋白质。
[0022] 所述蛋白包括20种氨基酸和8种人工合成氨基酸； 所述药物的制备方法:糖蛋白按照常规工艺制成胶囊、片剂等;多糖和蛋白的混合物按 照常规工艺制成胶囊、片剂等。
[0023] 实施例7上述实施例1-6所述禽流感疫苗的制备方法 将海洋藻类糖蛋白和纯水按照质量体积比为1:3( g: ml )，混合，完全溶解后，高速离心 15分钟，转速为15000r/min，取上清液，得本发明所述疫苗，-10°C保存。
[0024] 实施例8上述实施例所述疫苗对禽流感病毒的免疫实验 (1) 疫苗免疫 免疫组:本发明组实施例1、本发明组实施例2、本发明组实施例3、本发明组实施例4、本 发明组实施例5、本发明组实施例6;采用本发明实施例1-6所述药物分别免疫3-4周龄SPF 鸡，6ml/只，免疫方式为颈部皮下注射或者口服。
[0025] 对照组:不免疫作对照，隔离器内饲养。
[0026] 每组30只； (2) LD5q 检测 Al V-H5标准株，滴鼻接种6-7周龄的SPF鸡后，感染鸡均在36小时内死亡，未感染鸡观察 14天，均健活，AlV-H5标准株LD5Q为 108· 3/0.1 ml， (3) 检测抗体 免疫后21天、20个周、60个周分别翅静脉采血用对应毒株的抗原检测抗体。
[0027] (4)采取AIV-H5标准株攻毒 对各免疫组及对照组SPF鸡，采用滴鼻、点眼方式每只分别攻击IO5LD5q的AIV-H 5标准株 (鼻腔0.1 ml、角膜0.1 ml)。攻毒后每日观察记录发病和死亡情况，以确定疫苗的免疫保护作 用。
[0028]表1本发明制备的疫苗接种后的抗体检测结果
本发明制备的疫苗，免疫SPF鸡后，21天，AIV-抱抗体为(6.5-8.3) log2， 20 周，AIV-HdJt体为（6 · 3-8 · 0) log2，60 周，AIV-HdJt体为（6 · 0-7 · 3) log2。
[0029] 表2本发明制备的疫苗接种后的免疫保护效果
保护是指攻毒后不发病、不死亡、病毒