Cx4945作为制备胃癌顺铂耐药放射耐受逆转作用药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明提供了 CX4945作为制备胃癌顺销耐药放射耐受逆转作用药物的用途，用于 制备胃癌顺销耐药放射耐受逆转的药物，属于医学制药技术领域。
【背景技术】
[0002] 胃癌是我国发病率和死亡率均居第=位的恶性肿瘤。据世界卫生组织统计，2012 年我国胃癌发病人数40万，死亡人数32万，胃癌患者的五年生存率不足20%。手术、化疗、放 疗是治疗胃癌的主要手段。早期胃癌可通过手术方式切除局部肿瘤病灶，晚期胃癌由于发 生广泛浸润和转移，失去手术机会，则W放化疗联合治疗方案为主。而肿瘤细胞对各种放化 疗措施的耐受性往往导致放化疗失败，患者死亡。顺销是胃癌化疗一线用药，主要通过诱导 DNA交联-双链断裂损伤杀伤肿瘤细胞。肿瘤细胞可W通过发展多种耐药机制抵抗顺销诱导 的细胞调亡，其中DNA损伤修复能力增强是最主要的机制。放疗主要祀向DNA，通过诱导DNA 断裂损伤抑制细胞增殖，引发细胞调亡。显而易见，对顺销耐受的肿瘤细胞同时也会对放疗 产生交叉耐受性。因此，研发针对放化疗交叉耐受关键分子的干预措施可有效逆转放化疗 交叉耐受，从而提高胃癌治疗效果。
[0003] 酪蛋白激酶2(Casein Kinase 2，CK2)，是一个多效的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶， CK2在细胞生理活动的调节中处于中屯、地位，广泛参与细胞增殖、分化、死亡等过程，设及了 DNA修复、NF-KB、Wnt、PI3K/Akt和JAK-STAT等信号通路，其精细调节失衡，就有可能导致肿 瘤发生发展。CK2在肿瘤细胞中往往呈高表达。针对CK2活性的小分子抑制剂已经成为抗肿 瘤分子祀向药物研发的热点。CX-4945是近年来研发的特异性针对CK2的抑制剂，体外研究 发现CX-4945能有效抑制CK2活性，逆转肿瘤耐药性，发挥抗肿瘤活性。目前，CX-4945的抗肿 瘤研究已经进入I期临床试验，CX-4945有望成为针对CK2的第一个口服生物相容性小分子 抑制剂，具有广阔的临床应用前景。但CX-4945是否具有放疗增敏作用尚无文献报道。研究 CX-4945在放疗过程中的作用将为逆转放疗耐受性，提高放疗效果，拓展CX-4945临床应用 范围提供科学依据。
[0004] 本人所在实验室前期研究通过浓度梯度法诱导建立了胃癌顺销耐药细胞模型，发 现DNA修复蛋白XRCCl升高异常介导顺销所致DNA损伤修复过程是导致胃癌细胞产生顺销耐 受性的主要机制。进一步研究发现，顺销耐药中CK2表达升高是导致XRCCl高表达的主要机 审IJ，顺销耐药细胞对CX-4945的敏感性要高于顺销敏感细胞，采用CX-4945能有效杀伤耐药 细胞，提高其对顺销敏感性，运提示CK2可W作为逆转顺销耐药的有效祀点。
[0005] 晚期胃癌的放疗采用直线加速器发出高能X射线福射为主。X射线对细胞的损伤W 直接DNA单链及双链断裂为主，触发损伤感受器:组蛋白H2AX的憐酸化;有S个相关的激酶 MRN-ATM(MREl 1、RAD50、NBS1、ATM)、Ku-DNA-PKcS(Ku70、KuSO、DNA-PKcS)和ATRIP-ATR，能憐 酸化H2AX为巧2AX;形成焦点，多分子聚集(MDCl、53BP1、BRCA1，2、RAD51、P53、P21、BAX、 化kl/2、CDC25A/C)，运些蛋白将信号传递给其他一些蛋白，可W激活S条重要的效应器途 径(细胞周期关卡点、DNA修复、细胞调亡）。其中，DNA修复途径与肿瘤放射敏感及耐受有关。 DNA修复包括：同源重组修复皿(MRN复合物、RAD51、XRCC2、XRCC3、服CAl，2、化nconi贫血家 族）、非同源末端连接修复NHEJ化u70、Ku80、DNA-PKcs)、碱基切除修复邸R和单链断裂修复 SSBR(PARP、XRCC1)、错配修复MMR、核巧酸切除修复肥R等。
[0006]因此，我们W胃癌细胞、胃癌顺销耐药细胞和直线加速器发出的高能X射线来研究 验证该机制。
[0007] CX4945，为一种小分子抑制剂，分子式为：C19H12CIN3O2，结构式为
【发明内容】
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[000引本发明提供了 CX4945作为制备胃癌顺销耐药放射耐受逆转作用药物的用途，目的 是可克服胃癌顺销耐药细胞放射耐受，增强放射敏感性，减少放疗杀灭剂量，减轻放疗反 应，提高胃癌放疗疗效。
[0009] 本发明通过W下技术方案来实现：
[0010] 提供巧4945在制备肿瘤顺销耐药放射耐受逆转药物中的用途。
[OOW 进一步，所述肿瘤为胃癌。
[0012]提供一种肿瘤顺销耐药放射耐受逆转药物，其活性成分为CX4945，加入药学可接 受的辅料按照常规方法制成各种剂型。
[oou]进一步，所述肿瘤为胃癌。
[0014] 进一步，CX4945加入药学可接受的辅料按常规方法制成各种剂型，如各种规格的 液体注射液，粉针注射剂，注射用乳剂，片剂，丸剂，胶囊剂，膏剂，霜剂，贴剂，擦剂，粉剂，喷 雾剂，植入剂，滴剂，栓剂，软膏剂，糖果剂等。
[0015] 进一步，CX4945的给药途径包括各种给药途径：口服给药，注射给药，植入给药，腔 内给药，舌下给药，肛口给药，透皮给药，内外敷等。
[0016] 本发明设及的CX4945是近年来研发的特异性针对CK2的抑制剂，体外研究发现CX-4945能有效抑制CK2活性，逆转肿瘤耐药性，发挥抗肿瘤活性。其分子式为:Cl讯12C1化化，分 子量349.77。
[0017] 将CX-4945用于胃癌及胃癌耐药细胞放射治疗过程中，使其克服胃癌顺销耐药细 胞的放射耐受，增强放射敏感性，减少放疗杀灭剂量，减轻放疗反应，提高胃癌放疗疗效，是 本发明要实现的任务。
[0018] 通过CX-4945对胃癌顺销耐药细胞放射耐受逆转作用的大量实验，证明在胃癌顺 销耐药细胞中，当放疗联合低剂量CX4945后便可W显著抑制耐药细胞增殖，促进其调亡，从 而有效降低亚致死性放疗剂量;进一步研究发现CX-4945通过抑制XRCCl憐酸化促进其降 解，使细胞不能修复放疗诱导的DM损伤，从而促进其损伤加重及调亡。
[0019] 所述肿瘤放射耐受逆转剂剂型可为口服药剂或注射药剂，所述口服药剂可为滴 丸、软胶囊或冻干粉针等，所述注射药剂可为注射用水剂等，注射用水剂可为静脉注射用水 剂、肌肉注射用水剂、胸腹腔注射用水剂或皮下注射用水剂。
[0020] 本发明的积极效果在于：阐述了CX4945作为制备胃癌顺销耐药放射耐受逆转作用 药物的用途，提供了 CX4945作为胃癌顺销耐药放射耐受逆转剂应用于临床，可克服胃癌顺 销耐药细胞放射耐受，增强放射敏感性，减少放疗杀灭剂量，减轻放疗反应，提高胃癌放疗 疗效，为胃癌治疗提供更好的方法。
【附图说明】
[0021] 图1中A为福射后胃癌细胞SGC7901、耐药细胞SGC7901/DDP的时间-存活曲线;B为 福射后Western blot检测胃癌细胞SGC7901、耐药细胞SGC7901/DDP中随时间各DNA损伤修 复及调亡分子的变化，图中UV照射剂量为100J/M 2;
[0022] 图2为放疗后胃癌细胞SG 口 901、耐药细胞SG 口 901/DDP的剂量-存活曲线，放疗剂 量范围O-SGy;
[0023] 图3为放疗后胃癌细胞BGC823、耐药细胞BGC823/DDP的剂量-存活曲线，放疗剂量 范围O-SGy;
[0024] 图4为放疗后Western blot检测胃癌细胞SGC7901、耐药细胞SGC7901/DDP中随时 间各DNA损伤修复分子的变化，图中放疗剂量为4Gy;
[00巧]图5为放疗后Western blot分别检测胃癌耐药细胞SGC7901/DDP中转染低表达 XRCCl、普通细胞SGC7901中转染高表达XRCCl后细胞损伤变化，图中放疗剂量为4Gy;
[0026] 图6为UVC福射、CX-4945及联合处理过程示意图，图中UV照射剂量为100J/M2,图中 CX-494巧日药浓度为化g/ml;
[0027] 图7为胃癌耐药细胞SG 口901/DDP分别经UVC福射、CX-4945及联合处理后2地时间-存活曲线，图中UV照射剂量为100J/M2，图中CX-494巧日药浓度为化g/ml;
[0028] 图8中C为胃癌耐药细胞SG口 901/孤P分别经UNC福射、CX-4945及联合处理后化nel 实验检测细胞调亡，W及D为调亡计数统计；图中UV照射剂量为100J/M2，图中CX-4945加药 浓度为化g/ml;
[0029] 图9为UVC福射、CX-4945及联合处理过程示意图；图中UV照射剂量为100J/M2,图中 CX-494巧日药浓度为化g/ml;
[0030] 图10为胃癌耐药细胞SGC7901/DDP分别经UVC福射、CX-4945及联合处理后化免疫 巧光实验检测损伤分子rH2ax;图中UV照射剂量为100J/M2，图中CX-494巧日药浓度为化g/ ml;
[0031] 图11为胃癌耐药细胞SGC7901/DDP分别经UVC嬌射、CX-4945及联合处理后9h对应 的Western blot检测各DNA损伤修复及调亡分子变化；图中UV照射剂量为100J/M2，图中CX-4945加药浓度为化g/ml;
[0032] 图12为CX4945处理胃癌细胞SGC7901、耐药细胞SGC7901/DDP的剂量-存活曲线， CX4945浓度范围为0-8ug/ml，处理时间为4她；
[0033] 图13为CX4945处理胃癌细胞BGC823、耐药细胞BGC823/抓P的剂量-存活曲线， CX4945浓度范围为0-8ug/ml，处理时间为4她；
[0034] 图14中A为放疗后胃癌细胞SGC7901、耐药细胞SG 口 901/DDP及加 CX4945处理后克 隆形成情况;B为剂量-存活曲线；C为放疗后BGC823、耐药细胞BGC823/DDP及加 CX4945处理 后克隆形成情况;D为剂量-存活曲线;放疗剂量范围O-SGy; CX-4945加药浓度为化g/ml;
[0035] 图15为胃癌耐药细胞SGC7901/DDP分别经放疗、CX-4945及联合处理后免疫巧光实 验检测损伤分子r肥ax;图中放疗剂量为4Gy，图中CX-494巧日药浓度为化g/ml;
[0036] 图16为胃癌耐药细胞SGC7901/DDP、BGC823/DDP分别经放疗、CX-4945及联合处理 后Western blot检测DNA损