专利名称：一株温度耐受性酿酒酵母及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株温度耐受性酿酒酵母及其应用。
背景技术：
酵母属于简单的单细胞真核生物，易于培养，且生长迅速，被广泛用于生产和现代生物学研究。酵母是世界上研究最多的微生物之一，是当今生物技术产品研发的热点和现代生物技术发展以及基因组研究的模式系统。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是发酵工业中最常用的种类，其温度耐受性在-35°C。在发酵的过程中，由于各种生化反应的不断进行，导致整个发酵体系的温度不断升高，从而严重影响酵母细胞的正常生长与代谢，甚至引起酵母的大量死亡。所以在实际生产过程中不得不采取各种方法对发酵体系进行降温，以保证发酵过程的正常进行； 这是一种较大的物力和财力耗费。同时，耐高温酵母在饲料、酒精和面包的生产中也有广泛的需求。因此，获得耐高温酵母已成为当前国内外工业发酵行业研究的热点，备受广泛的重视。
发明内容
本发明的目的是提供一株温度耐受性酿酒酵母及其应用。本发明提供的酿酒酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) SBT1373，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No . 4378。本发明所提供的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) SBT1373为诱变得到，已于2010年11月四日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC， 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为 CGMCC Na . 4378。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) SBT1373在生产饲料、酒精或面包中的应用也属于本发明的保护范围。本发明还提供的获得耐47°C高温酿酒酵母的方法，包括如下步骤用酵母膏胨葡萄糖(Yeast extract Peptone Dextrose，YPD)液体培养基在活化酵母至对数生长期前期，再以(体积比)的比例转接至YPD液体培养基中，在培养至OD56tl值为 0.6-1.5。吸取5mL的菌液于90mm培养皿中，置于紫外灯下进行诱变。条件为紫外灯功率 15W，距离30cm，时间10-50s。诱变后在4000rpm离心IOmin富集菌液，涂布于YPD固体培养基上，于45°C -50°C高温下筛选。紫外诱变后的菌株在可见光下会有光复活现象，因此所有操作必需在红光下进行。上述酵母可以是购自中国工业微生物菌种保藏中心，编号为1373的酿酒酵母。上述获得耐高温酿酒酵母的方法中，效果最佳的一种方法如下所述的培养基为 YPD液体培养基，活化转接后的菌液OD56tl为1. 2，紫外诱变时间为18s。该方法选取合适浓度的菌液，即处于对数生长期前期的菌液，此时菌液浓度适中，能保证在所述条件下获得较高的突变频率，同时菌株生命力旺盛，新陈代谢比较活跃，对紫外线敏感，最易于发生基因突变而得到所需的突变株。基础耐温性能的测定是为了对比所得到的突变株在温度的耐受性上得到真正的提高。本专利的耐高温酵母克服了普通酿酒酵母不能在高温下正常发酵的难点，具有 47°C耐受性。因此，本专利所获得的耐高温酵母具有重要的经济和应用推广价值，在发酵工业中如饲料、酒精或面包的生产中具有很重要的应用价值。在生产上的优势主要表现为① 具有较高的发酵能力，即能快速并完全将糖分转化成乙醇，能够解决糖化温度和发酵温度不协调的矛盾，实现真正意义上的糖化发酵同步进行；从而减少葡萄糖对纤维素酶的抑制作用，提高纤维素酶的糖化率，进而提高纤维素发酵生产燃料乙醇的得率；②繁殖速度快， 即具有高的生长速率。高温发酵还能够提高发酵效率，降低发酵时的冷却成本；③具有高的耐酒精能力，即对本身代谢产物的稳定性高，因而可以进行浓醪发酵；④抗杂菌能力强， 即对杂菌代谢产物的稳定性高；⑤对培养基的适应性强，耐温、耐盐和耐干物质浓度的性能强。因此，使用耐高温酵母不仅有利于降低生产成本，充分利用现有设备，缩短生产周期，提高生产率，而且保证了夏季的正常生产。
图1为1373的生长曲线；图2为1373在紫外照射下的致死曲线。
具体实施例方式实施例1、本发明酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) SBT1373的获得及鉴定一、酿酒酵母生长曲线的测定1、实验材料购自中国工业微生物菌种保藏中心，编号为1373的酿酒酵母；是目前温度耐受性较高的菌株。YPD液体培养基(质量百分含量)酵母提取物，2% (质量百分含量)蛋白胨， 2% (质量百分含量)葡萄糖，自然pH值。2、实验步骤(1)活化挑取单个斜面1373活化菌落接种于IOmL的YPD液体培养基中，28°C， 180rpm 培养 8_12h。(2)转接取2. 5mL活化的菌液转接入250mL的YPD液体培养基中。(3)培养将转接后的菌液分装到25个三角瓶中，每瓶川！^，在观！，"。!!)!!!振荡
培养Mh。(4)测定从Oh开始，每小时取出一瓶菌液测定其OD56tl值，每一瓶菌液重复测定三次，结果取平均值。(5)绘制生长曲线以时间(h)为横坐标，OD56tl值为纵坐标，绘制24h生长曲线。3、实验结果结果如图1所示，1373菌株在0_4h为延迟期，4-1 为对数生长期，以后逐步进入稳定期。因为处于对数生长期的菌体生长旺盛，易感性强，处于诱变的最佳时期，故选取此时期的菌液用于诱变实验。所以，对于1373菌株，选取培养IOh后的菌液(OD56tl为1. 2)，用于诱变实验。二、酿酒酵母的温度耐受性测定1、实验材料购自中国工业微生物菌种保藏中心，编号为1373的酿酒酵母；是目前温度耐受性较高的菌株。2、实验方法(1)活化挑取单个斜面1373活化菌落接种于IOmL的YPD液体培养基中，28°C， 180rpm 培养 8_12h。(2)转接取2. 5mL活化的菌液转接入IOmL的YPD液体培养基中，培养适合的时间。(3)温度耐受性的测定吸取转接后的菌液100μ L，稀释适当的倍数后，取100μ L 稀释后的菌液分别涂布于YPD固体培养基中，分别放置于39，40，41，42，43，44，451培养， 3 后观察酵母菌的生长情况。每个温度涂三个平板。3、实验结果结果如表1所示，实验结果表明，1373酿酒酵母菌株能耐受的最高温度为40°C。表11373酿酒酵母的温度耐受性
权利要求
1.酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae) SBT1373，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC Na . 4378。
2.酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae) SBT1373 CGMCC Ns · 4378 生产饲料、酒精或面包中的应用。
全文摘要
本发明公开了一株温度耐受性酿酒酵母及其应用。该酿酒酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SBT 1373，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.4378。该突变酵母菌株克服了普通酵母菌不能耐受高温(47℃及以上)的难题，具有在47℃高温下仍然能正常发酵的优点。因此，本发明的耐高温酿酒酵母菌具有重要的经济和应用推广价值。
文档编号C12N1/18GK102154137SQ20111000164
公开日2011年8月17日 申请日期2011年1月6日 优先权日2011年1月6日
发明者刘树君, 孙叙卓, 宋松泉, 李玲, 林忠平 申请人:中国科学院植物研究所