专利名称：食物中鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法
技术领域：
本发明涉及食物中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测方法。
背景技术：
近年来，痛风病已经变成危害人类健康的普遍疾病之一。痛风病又名高尿血酸症。主要原因是由于 人体内嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸引起的。长期摄入高嘌呤食物如海鲜、肉类等食品，极易使人体内产生过多嘌呤，引发嘌呤代谢的紊乱，从而导致高尿血酸症。对于痛风病患者应严格控制嘌呤类食物的摄入量。由于我国对于食物中嘌呤含量的统计比较模糊，并且还没有制定相应的国家标准能够对嘌呤进行检测。国内对嘌呤的检测发表的文章较少，且根据文章所提供的方法不能够对检测方法进行重现。由于鸟嘌呤和腺嘌呤具有较大的极性和一定的碱性化合物特征，运用液相色谱仪和常用的C18色谱柱有很大的困难。
发明内容
本发明的目的是弥补现有技术中的不足，提供一种操作简单、灵敏快速、成本低廉的食物中鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为:鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法，包括以下步骤:(I)对鸟嘌呤和腺嘌呤标准品进行液相色谱配紫外检测器检测；(2)根据步骤⑴的检测结果绘制鸟嘌呤和腺嘌呤标准曲线；(3)待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测前预处理；(4)对待测样品的鸟嘌呤和腺嘌呤进行液相色谱配紫外检测器检测，根据检测结果和标准曲线，计算出待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的含量。步骤⑵所述的检测前预处理步骤为:准确称取0.200g待测样品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液,放置在90°C水浴中I小时水解；水解完毕后，将溶液全部转入IOOml旋蒸瓶中40°C旋转蒸发至近干；然后用流动相定容到5mL ;过0.22 μ m水相滤
膜上备用。本发明的鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法，通过鸟嘌呤和腺嘌呤标准品标准曲线绘制、酸性试剂对鸟嘌呤和腺嘌呤水解，借助高效液相色谱仪配紫外检测器对食物中鸟嘌呤和腺嘌呤进行检测；根据检测结果和标准曲线计算出待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的含量。本发明的发明克服了鸟嘌呤和腺嘌呤在液相中保留不稳定的缺点，操作简单、灵敏快速、成本低廉，重复性好。
图1 图5不同浓度的鸟嘌呤和腺嘌呤标准品液相色谱配紫外检测器响应值谱图6 图7分别为鸟嘌呤和腺嘌呤的标准曲线；图8为实施例1中待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的液相色谱配紫外检测器响应值谱图；图9 图11分别为样品加标量20 μ g、50 μ g、100 μ g的鸟嘌呤和腺嘌呤的液相色
谱配紫外检测器响应值谱图。
具体实施例方式实施例1本实施例食物中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测方法，包括以下步骤:一、仪器和溶液配制:1、仪器:液相色谱仪(配紫外检测器):Agilentl260LC ;水浴锅:90°C ;旋转蒸发仪；pH计；十万分之一天平 2、溶液的配制(I)氢氧化钠溶液(0.1moI/L):准确称量0.4g氢氧化钠用水定容到100mL。(2)鸟嘌呤标准储备液:称取一定质量的标准品，加入5mL氢氧化钠溶液溶解，用水定容到lOOmL，配成500mg/L的标准储备液。(3)线嘌呤标准储备液:称取一定质量的标准品，加入5mL氢氧化钠溶液溶解，用水定容到lOOmL，配成500mg/L的标准储备液。(4)鸟嘌呤和腺嘌呤混合标准溶液:吸取一定体积的鸟嘌呤和腺嘌呤标准储备液，配制成100mg/L的混合标准溶液。(5)乙酸铵溶液(流动相):准确称取1.54g乙酸铵，用水定容到1L，用磷酸将pH调至3.0。(6)三氟乙酸-甲酸溶液:以体积比1:1配制三氟乙酸、甲酸的混酸溶液。二、对鸟嘌呤和腺嘌呤标准品进行液相色谱配紫外检测器检测:1、分别配制 1.00mg/L、5.00mg/LU0.00mg/L、20.00mg/LU00.0Omg/L 的鸟嘌呤和腺嘌呤混合标准液，用高效液相色谱仪紫外检测器进行测定。液相色谱配紫外检测器检测条件为:安捷伦1260液相色谱配VWD检测器；色谱柱:ASB-C18250mmX4.6mm，5.Ομπι ;流速:1.0mL/min ;柱温:30 °C ;进样量 10 μ L ;检测波长:254nm流动相:0.02mol/L的乙酸铵溶液(pH = 3.0)；浓度为1.00mg/L,5.00mg/L、10.00mg/L,20.00mg/L、100.0Omg/L 的鸟嘌呤和腺嘌呤混合标准液的检测谱图分别对应于图1、图2、图3、图4、图5 ;2、以鸟嘌呤和腺嘌呤标准品的浓度为纵坐标，检测器响应值为横坐标分别绘制鸟嘌呤和腺嘌呤的标准曲线，分别见图6、图7 ;3、待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测前预处理:准确称取0.200g(精确到小数点后三位)待测样品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液，放置在90°C水浴中I小时水解；水解完毕后，将溶液全部转入IOOml旋蒸瓶中40°C旋转蒸发至近干；然后用流动相定容到5mL ;过0.22 μ m水相滤膜；备用；4、对步骤3处理后的待测样品进行液相色谱配紫外检测器检测；检测条件同步骤2的检测条件；检测谱图如图8所示。根据待测样品的检测器响应值、鸟嘌呤和腺嘌呤的标准曲线，分别计算出待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的含量。实施例2本实施例采用样品加标回收率试验，对本发明方法的重复性进行评估，样品加标回收率的检测步骤如下:分别在样品中加入浓度为100mg/L的鸟嘌呤和腺嘌呤混合标准溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml，分别对应加标量20 μ g、50 μ g、100 μ g ;以不加标准溶液的样品为空白对照；检测方法同实施例1，响应值谱图分别见图9、图10、图11 ;根据分析结果计算本发明的方法鸟嘌呤和腺嘌呤的加标回收率，结果分别见表1、表2所示:表1样品中鸟嘌呤含量和加标回收率统计表
权利要求
1.食物中鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)对鸟嘌呤和腺嘌呤标准品进行液相色谱配紫外检测器检测； (2)根据步骤(I)的检测结果绘制鸟嘌呤和腺嘌呤标准曲线； (3)待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测前预处理； (4)对待测样品的鸟嘌呤和腺嘌呤进行液相色谱配紫外检测器检测，根据检测结果和标准曲线，计算出待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的含量。
2.根据权利要求1所述的食物中鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法，其特征在于:所述检测前预处理步骤为:准确称取0.200g待测样品于IOml比色管中，加入IOmL三氟乙酸-甲酸溶液，放置在90°C水浴中I小时水解；水解完毕后，将溶液全部转入IOOml旋蒸瓶中40V旋转蒸发至近干；然后用流动相定容到5mL ;过0.22 μ m水相滤膜上备用。
3.根据权利要求1或2所述的食物中鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法，其特征在于:所述步骤I和步骤4的液相色谱配紫外检测器检测条件为:安捷伦1260液相色谱配VWD检测器；色谱柱:ASB-C18250mmX4.6mm，5.Ομπι ;流速:1.0mL/min ;柱温:30°C ;进样量 10 μ L ;检测波长:254nm流动相:0.02mol/L的乙酸 铵溶液(pH = 3.0)。
全文摘要
本发明涉及食物中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测方法。鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法，包括以下步骤(1)对鸟嘌呤和腺嘌呤标准品进行液相色谱配紫外检测器检测；(2)根据步骤(1)的检测结果绘制鸟嘌呤和腺嘌呤标准曲线；(3)待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的检测前预处理；(4)对待测样品的鸟嘌呤和腺嘌呤进行液相色谱配紫外检测器检测，根据检测结果和标准曲线，计算出待测样品中鸟嘌呤和腺嘌呤的含量。本发明的鸟嘌呤和腺嘌呤检测方法步骤简单，操作简便，重复性好，省时省力，灵敏快速、成本低廉。
文档编号G01N30/02GK103235056SQ20131013804
公开日2013年8月7日 申请日期2013年4月12日 优先权日2013年4月12日
发明者傅鹏, 刘青, 刘刚, 纪伟 申请人:润德(山东)检测技术有限公司