瑞普特罗及其衍生物在制备预防和/或治疗脂肪肝产品中的应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，涉及瑞普特罗及其衍生物的新用途，具体涉及瑞普特罗及其衍生物在制备预防和/或治疗脂肪肝产品中的应用。

背景技术：

瑞普特罗为选择性激动支气管平滑肌β2受体激动剂，目前临床用于支气管哮喘，喘息型支气管炎的治疗。其扩张支气管作用强于间羟异丙肾上腺素，耐受性佳，口服后30min起效，维持时间4-6h，对心率、心排血量和血压影响较小，而瑞普特罗在脂肪肝疾病中的治疗作用目前尚无任何报道。

脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。当脂肪含量超过肝湿重5％时(正常为1～2％)，或组织学上脂肪变性超过30％肝实质时称为脂肪肝。脂肪肝的主要病理生理学特征为肝细胞内脂滴聚集，肝细胞气球样变以及肿胀的线粒体。胰岛素抵抗、内脏脂质沉积、炎症和线粒体功能障碍为脂肪肝发展过程中重要的病理过程。我国目前脂肪肝的发病率已超过18％，脂肪肝已经成为各种慢性肝脏疾病的主要病因，也是隐源性肝硬化的首因，而其发病趋年轻化趋势。

目前临床并无有效的治疗脂肪肝的药物。在临床治疗中，仍以去除病因、积极治疗原发病和坚持合理饮食制度为主，而药物仅起辅助作用。常用药物主要针对降血脂、肝细胞保护等方面，缺乏直接作用于肝脏脂质沉积的有效治疗手段。

技术实现要素：

本发明的目的之一是提供一种瑞普特罗及其衍生物的新用途。

本发明所提供的瑞普特罗及其衍生物的新用途是其在制备预防和/或治疗脂肪肝产品中的应用。

本发明所述的瑞普特罗及其衍生物的结构如通式i所示:

通式i中，q1和q2各自独立地选自氢、羟基、卤素、直链或支链烷基、环烷基、三卤烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、-(co)r1和-s(o2)r2；其中r1和r2各自独立地选自c1-c4直链或支链烷基、氨基；

具体地，当q1和q2均为羟基时，通式i所示化合物为瑞普特罗(reproterol)。

进一步，所述瑞普特罗及其衍生物在制备如下任一产品中的应用也属于本发明的保护范围：

(i)降低患病机体肝脏组织中甘油三脂含量的产品；

(ii)减轻患病机体肝脏组织中脂肪变性的产品；

(iii)缓解患病机体肝脏组织中肝脏脂滴蓄积的产品；

(iv)降低患病机体肝脏组织中胆固醇含量的产品。

以上所述患病机体可为具有脂肪肝临床症状的机体，如确诊为脂肪肝的患者。

以上所述产品具体可为药物或保健品。

本发明的再一个目的是提供一种预防和/或治疗脂肪肝，降低患病机体肝脏组织中甘油三脂含量、减轻患病机体肝脏组织中脂肪变性、缓解患病机体肝脏组织中肝脏脂滴蓄积或降低患病机体肝脏组织中胆固醇含量的产品。

所述产品包含瑞普特罗或其衍生物。

以上所述患病机体可为具有脂肪肝临床症状的机体，如确诊为脂肪肝的患者。

以上所述产品具体可为药物或保健品。

实验证明，使用瑞普特罗处理脂肪肝模型大鼠，可以显著减轻肝脏脂肪变性、减轻肝脏脂滴蓄积以及减轻肝脏甘油三酯含量。因此，瑞普特罗及其衍生物对于预防和/或治疗脂肪肝具有重要意义。

附图说明

图1为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的体重变化对比图。

图2为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肪变性外观对比图。

图3为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肪变性对比图。cd+vehicle:普通饮食组，hfd+vehicle：高脂饮食给予安慰剂组，hfd+aims-r：高脂饮食给予瑞普特罗药物组。

图4为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂滴蓄积对比图。cd+vehicle:普通饮食组，hfd+vehicle：高脂饮食给予安慰剂组，hfd+aims-r：高脂饮食给予瑞普特罗药物组。

图5为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肝脏甘油三酯含量对比图。

图6为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肝脏胆固醇含量对比图。

图7为以不同浓度的瑞普特罗处理hepg2细胞对油酸诱导的脂滴蓄积的作用图。图7柱状图中依次为给予dmso，给予100umoa(油酸),100umoa+12.5um瑞普特罗,100umoa+25um瑞普特罗,100umoa+50um瑞普特罗,100umoa+100um瑞普特罗。

图8为以不同浓度的瑞普特罗处理hepg2细胞对油酸诱导的细胞内甘油三酯蓄积的作用图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所采用的瑞普特罗购自美国torontoresearchchemicalsinc公司，货号为r144650，商品名为reproterol(瑞普特罗)。(文中涉及到的药物或者图上标记r均指瑞普特罗)

实施例瑞普特罗的药效实验

22只雄性sd大鼠(6周龄)购自spf试验动物中心，适应性喂养1周后，开始试验，将大鼠按体重进行蛇形分组，分为3组。其中，正常饮食对照组给予10％脂肪含量饲料，高脂饮食组及用药组均给予45％脂肪含量饲料。8周时，高脂饮食组已经出现显著的体重增加(图1)，正常饮食对照组及高脂饮食组均开始应用dmso灌胃处理，用药组开始应用瑞普特罗3.6mg/kg/day。(大鼠饲料购自江苏美迪森生物医药有限公司，瑞普特罗购自torontoresearchchemicalsinc)。12周时称重，其结果如图1所示。

图1为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的体重变化对比图。

由图1可知：较高脂饮食组相比，给药组体重有减轻趋势。

大鼠称重后，应用1％戊巴比妥钠，腹腔注射麻醉大鼠，打开腹腔，给大鼠肝脏照相。

图2为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肪变性外观对比图。

由图2可知：较高脂饮食组，给药组肝脏脂肪变性显著减轻。

打开腹腔后，应用预冷的pbs，全身灌流，之后取一小块肝脏组织，投入4％多聚甲醛中固定48h后，蔗糖脱水，石蜡包埋，切片，常规he染色。

图3为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肪变性对比图。

由图3可知：较高脂饮食组，给药组肝脏脏脂肪变性显著减轻。

经过固定及脱水的肝脏组织，应用oct包埋，液氮速冻，-80℃保存。染色时，切片先平衡至室温，4％多聚甲醛室温固定10min，蒸馏水3min洗3次，60％的异丙醇同化3-5min，将切片浸到油红o工作液中，37℃，避光染色30min-2h。之后切片迅速依次经过60％的异丙醇和70％的酒精，蒸馏水洗1次，苏木素复染(染细胞核30s-30min)，自来水洗去浮色，封片。

图4为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂滴蓄积对比图。

由图4可知：较高脂饮食组，给药组肝脏脂滴蓄积有所缓解。

取约50mg左右肝脏组织，按照北京普利莱基因有限公司组织细胞甘油三酯酶法测定试剂盒e1013操作说明书进行操作。

图5为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肝脏甘油三酯含量对比图。

由图5可知：较高脂饮食组，给药组肝脏内甘油三酯含量明显减少。

取约50mg左右肝脏组织，按照北京普利莱基因有限公司组织细胞总胆固醇酶法测定试剂盒e1015操作说明书进行操作。

图6为正常饮食对照组、高脂饮食组、高脂饮食及瑞普特罗给药组sd大鼠的肝脏脂肝脏胆固醇含量对比图。

由图6可知：较高脂饮食组，给药组肝脏内胆固醇含量明显减少。

细胞实验：hepg2细胞用含10％胎牛血清的dmem培养液，于37℃，5％co2条件下培养，细胞长至90％融合时，以1：3传代，以相同密度种植到六孔板中，融合度达50％时进行无血清培养12h，应用油酸100um诱导脂滴生成，同时再分别给予dmso或瑞普特罗处理48h。

图7为以不同浓度的瑞普特罗处理hepg2细胞对油酸诱导的脂滴蓄积的作用图。

由图7可知：在hepg2上给予瑞普特罗处理细胞48h，能显著缓解油酸诱导的脂滴蓄积。

图8为瑞普特罗10um处理hepg2细胞对油酸诱导的细胞内甘油三酯蓄积的作用图。

由图8可知：在hepg2上给予瑞普特罗10um处理细胞48h，能显著逆转油酸诱导的细胞内甘油三酯蓄积。