一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及微生物培养技术领域，尤其设及一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的 制备方法。
【背景技术】
[0002] 阿兹海默症(Alzheimer'S disease,简称AD)又称老人痴呆症，是一种持续性神经 功能障碍。最显著的早期症状为健忘，通常表现为逐渐增加的短期记忆缺失，随着病情的加 重，病人的语言能力，空间辨别能力，认知能力会逐步衰退。由于阿兹海默症对老年人之生 活会造成非常多的不便，且会使子女在精神上与经济上造成很大的负担，对于研究开发用 于抗阿兹海默症药物具有重要的意义。
[0003] 目前，已有一些核准上市用于预防和治疗阿兹海默症的药物：乙酷胆碱酶抑制剂 (Ach-I)如 Co 即 ex(Tac;rine)(1993)、Ar icept( Donepezil)爱忆欣（1996);Exelon (Rivastigmine)忆思能（2000)及ReminyI (Galantamine)利忆灵（2001)。教胺酸受体枯抗剂 则有Memantine化Mxa忆必佳，Witgen威智）。运些药物可W延缓记忆的丧失，并且有助于患 者执行日常起居所需的动作。但很重要的一点是运些药物并不能治愈阿兹海默症，它们只 能减轻阿兹海默症的症状。此外，运些药物大多是化学合成的，会对患者造成一些副作用， 如恶屯、、头疼、腹泻、失眠、疼痛、幻觉或晕眩等，因此它们并非实用的阿兹海默症治疗药物。
[0004] 最新研究表明，红曲中含有许多生理活性物质，目前研究较完整的成分包括降胆 固醇合成功效的Monacolins、降血压功效的丫-氨基下酸（丫-aminobutyric acid，GABA)， 加上它含有抗氧化物质，多元效能生理活性物质的协同作用可做预防和治疗阿兹海默症之 用。
[0005] 申请号为200710306125.7的中国发明专利公开了一种治疗与预防阿兹海默症的 组合物及其制备方法，其为一包含莫纳可林、抗发炎物质与抗氧化物质的组合物。利用包含 此=类物质的组合物来治疗与预防阿兹海默症，并通过本发明的制备方法加 W实施，可达 到确实治疗与预防W及不会产生明显毒副作用的功效。
[0006] 该组合物中的莫纳可林、抗发炎物质与抗氧化物质可W为红曲发酵物，但是该红 曲发酵物的制备方法采用普通的红曲制备工艺，并不是专用于治疗阿兹海默症而培养的， 因此该红曲发酵物中的用于治疗阿兹海默症的有效成分含量较低。
【发明内容】
[0007] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备 方法。本发明采用特殊的工艺，制备的红曲有效成分含量高，适用于预防和治疗阿兹海默 症。
[000引本发明的具体技术方案为：一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法，按W 下步骤进行： A)、培养基制备:将大米进行粉碎制得米粉，然后将所述米粉先与山药粉、葛根粉、慧米 粉混合后再与蒸馈水混合制得固体培养基，最后对所述固体培养基先后进行灭菌、松散。
[0009] 本发明选用优质大米，经粉碎处理后，加入适量水和辅料进行配制，与直接采用大 米浸泡的常规工艺有很大的改进。运有利于米粉快速吸收水分，营养物的均匀调配W及米 粉充分吸收营养物质，更有助于红曲霉菌的生长繁殖和代谢产物的合成。
[0010] B)、接种:将红曲霉菌种接种至所述固体培养基。
[0011] C)、培养:培养过程依次分为第一阶段、第二阶段和第=阶段;第一阶段:将培养基 先在30-35°C下培养3-5天;第二阶段:在25-30°C下培养5-10天，第S阶段:在20-25°C下培 养10-20天。
[0012] 溫度对发酵的影响及其调节控制是影响微生物生长繁殖最重要的因素之一，因为 任何生物化学的酶促反应与溫度变化有关的。根据酶促反应的动力学来看，溫度升高，反应 速度加快，呼吸强度增加，最终导致细胞生长繁殖加快。但随着溫度的上升，酶失活的速度 也越大，使衰老提前，发酵周期缩短，运对发酵生产是极为不利的。最适溫度是一种相对概 念，是指在该溫度下最适于菌的生长或发酵产物的生成。选择最适溫度应该考虑微生物生 长的最适溫度和产物合成的最适溫度。最适发酵溫度与菌种，培养基成分，培养条件和菌体 生长阶段有关。在红曲固态发酵中，细胞生长和代谢产物积累的最适溫度往往不同。至于何 时应该选择何种溫度，则要看当时生长与代谢产物合成哪一个是主要方面，需要在不同的 发酵阶段选择不同的最适溫度。在红曲霉生长初期，菌丝体浓度很低时，W促进菌丝体迅速 生长繁殖为目的时，应该选择最适于菌丝体生长的溫度，在本发酵工艺中选择高溫区（30~ 35°C)。当菌丝体浓度达到一定程度，到了代谢产物分泌期时，此时生物合成成为主要方面， 就应该满足生物合成的最适溫度，在本发酵工艺中选择中溫区（25~3(TC)，运样才能促进 目标产物的大量合成。为了减少红曲霉细胞的老化，延长发酵时间，获得更多的活性产物， 进一步降低培养溫度，在本发酵工艺中选择低溫区（20~25°C)。
[0013] D)、烘干:将步骤C)后的固体培养基在45-65°C下进行烘干5-化，烘干后制得用于 抗阿兹海默症功能性红曲。干燥溫度控制在45°C~65°C，有利于生理活性物质不受破坏。
[0014] 作为优选，所述固体培养基中米粉、山药粉、葛根粉、慧米粉和蒸馈水的质量比为 (85-88):(5-10):(3-5):(1-3):40。
[0015] 本发明在大米粉的基础上添加了山药粉、葛根粉W及慧米粉，丰富了固态发酵基 质的营养。山药除含蛋白质、碳水化合物、巧、憐、铁、胡萝h素及维生素等多种营养成分外， 尚含淀粉酶、胆碱、粘液汁酶及馨葫皂巧等。葛根内含黄酬类化合物，如葛根素、大豆黄酬 巧、花生素等营养成分，还有蛋白质、氨基酸、糖、和人体必需的铁、巧、铜、砸等矿物质。慧米 中不仅含有丰富的蛋白质、B族维生素，矿物质，膳食纤维等，还含有慧米醋、亚油酸等物质。 而正是运些物质的存在，能够使红曲霉菌特定地增加目标活性物质的产量。
[0016] 作为优选，步骤A)中的灭菌溫度为120-122°C，压力为0.11-0.12M化，时间为30-45min。
[0017] 作为优选，步骤B)中所述红曲霉菌种为固含量为8-12wt%的液体种，且每100g固 体培养基的红曲霉菌种接种量为10-20mL。菌种采用液体种，有利于提高接种量，缩短固态 发酵时间。
[0018] 作为优选，所述红曲霉菌种经过驯化： 选取红曲霉菌，在30°C下培养于PDA斜面上3天。
[0019] 紫外线照射驯化:取5mL上述培养的浓度为106spores/mL的红曲霉菌液均匀涂布 于平板上，并利用1抓的紫外灯W20-40cm距离对所述红曲霉菌液进行照射直至红曲霉菌的 致死率达到90%，照射后将红曲霉菌液于暗室内静置30min，然后将红曲霉菌液进行离屯、并 用无菌生理盐水洗涂S次后涂布于PDA培养基上，在30°C下培养3-4天，待单菌落形成后转 接至斜面培养基上保存，筛选后W进行代谢活性物质Monacolin K的产量分析，选取一株 Monacolin K产量最高的红曲霉菌株并标记为Monas州S shsw-123。
[0020] 硫酸二乙脂化学诱变处理:取2.5mL浓度为30化/mL的硫酸二乙脂并加入2.5mL浓 度为IO 6Spores/mL的Monascus shsw-123菌液，摇匀后置于30 °C下反应直至Monascus shsw-123的致死率达到90%，然后立即加入1000血无菌水W终止反应，之后经过离屯、，并用 无菌水洗涂=次后涂布于PDA培养基上，于3(TC培养3-4天，待单菌落形成后转接至斜面培 养基上保存，筛选后W进行代谢活性物质Monacolin K的产量分析，选取一株Monacolin K 产量最高的红曲霉菌株并标记为Monas州S shsw-267。
[0021] 亚硝基脈化学诱变处理:取2.5血浓度为10化g/mL的亚硝基脈并加入2.5mL浓度为 10 639〇'日3/11止的齡]1日3。113 8113￥-67菌液，摇匀后置于30°[下反应直至齡]1日3州3 3113￥-267 的致死率达到90%，然后立即加入1000 mL无菌水W终止反应，之后经过离屯、，并用无菌水洗 涂S次后涂布于PDA培养基上，于3(TC培养3-4天，待单菌落形成后转接至斜面培养基上保 存，筛选后W进行代谢活性物质Monacolin K的产量分析，选取一株Monacolin K产量最高 的红曲霉菌株并标记为Monas州S shsw-308。
[0022] WMonacolin K为主体的有效活性物质是红曲霉在代谢过程中所产生的次级代谢 产