接种量均为1.0%(体积/体积）。37± TC发 酵约22小时，再将溫度降至32 ± rC继续培养72小时，经检测还原糖耗尽，结束发酵，将发酵 液离屯、，收集离屯、液，得到所说的益生菌发酵培养物C。
[0019] (2)本发明生态妇科外用药物组合物洗剂C的制备 发酵完成后加入苯扎漠锭，使苯扎漠锭的浓度为0.1 SmlAOOml，揽拌均匀，即得到本发 明的药物组合物洗剂C。
[0020] (3)本发明生态妇科外用药物组合物凝胶剂C的制备 将益生菌发酵培养物800ml，加热至90 ± 2°C，在揽拌下状态下，加入径丙甲纤维素40g， 继续揽拌并加热至微沸，保持微沸30min，不断揽拌，溫度降至55±2°C时，加入苯扎漠锭溶 液，使终浓度为0.18%，取薄荷脑3. Og，研细，加入甘油200ml，研匀溶解，并加入到益生菌发 酵培养物中，不断揽拌，溫度降至30°C W下时，结束揽拌，即得生态妇科外用药物组合物凝 胶剂C。
[0021 ]实验例1:本发明生态妇科外用药物组合物洗剂、凝胶剂抑菌环试验 实验样品为实施例所述的方法制备的药物组合物洗剂、凝胶剂。按照卫生部2002年版 《消毒技术规范》第2.1.8项，试验菌株:金黄色葡萄球菌、（ATCC6538)、大肠杆菌(8099)、白 色念珠菌(ATCC10231)。检验方法:分别取无菌的直径5mm定性滤纸，薩取药物组合物洗剂、 药物组合物凝胶剂，干燥后，平贴于染菌的平板内，置37°C溫箱培养16~18小时观察结果，用 游标卡尺测量抑菌环的直径。实验重复=次，取平均值。具体实验结果见表1、表2、表3。
[0022] 注:试验用菌悬液平均菌落及范围：2.01 X 1〇6 C化/ml。
注:试验用菌悬液平均菌落及范围：2.75 X 1〇6 C化/ml。
[0023] 注:试验用菌悬液平均菌落及范围：1.60X10? C化/ml。
[0024] 在37°C条件下，试验重复=次，生态妇科外用药物组合物洗剂对金黄色葡萄球菌 平均抑菌环直径为31.06mm，对大肠杆菌平均抑菌环直径为13.64mm，对白色念珠菌平均抑 菌环直径为12.62mm;生态妇科外用药物组合物凝胶剂对金黄色葡萄球菌平均抑菌环直径 为31.37mm，对大肠杆菌平均抑菌环直径为14.54mm，对白色念珠菌平均抑菌环直径为 12.88mm，W上实验结果表明，生态妇科外用药物组合物洗剂与凝胶剂对金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌、白色念珠菌均具有抑制作用。
[0025] 实验例2:生态妇科外用药物组合物凝胶剂多次完整皮肤刺激试验 试验方法依据《消毒技术规范》，实验动物为普通级新西兰种成年健康雌性实验用家兔 3只，体重范围在2.化g~3.3kg，由鲁抗医药集团提供。试验样品为S个实施例制备的凝胶 剂，试验前日，将家兔背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围左、右各约3cmX3cm。正式试验时， 采用自身对照法。取0.5ml样品涂在右侧所暴露的皮肤上，在涂抹后4小时，用蒸馈水除去残 留物。每只实验动物每天涂抹一次，连续14天，在每次涂抹后24小时观察结果，左侧暴露皮 肤作为对照。在观察期内，动物均未出现红斑及水肿。积分情况见表4,未见其他异常及中毒 现象。
[00%]表4生态妇科外用药物组合物凝胶剂家兔多次完整皮肤刺激反应评分
实验例3:生态妇科外用药物组合物凝胶剂阴道黏膜刺激试验 试验方法依据《消毒技术规范》，实验动物为普通级新西兰种成年健康雌性实验用大白 兔6只，体重范围在3.化g~4.Okg,由鲁抗医药集团提供。试验样品为S个实施例制备的凝胶 剂，分别取受试样品2ml，注入3只动物阴道中，24小时后，处死动物取出阴道器官，纵向切 开，肉眼观察有无出血、水肿等表现。然后将阴道置于10%福尔马林溶液中固定24小时，选取 阴道的两端和中央3各部位的组织制片，皿染色后，进行组织病理学检查，对照组动物采用 生理盐水作同样处理。按《消毒技术规范》阴道黏膜刺激实验评分标准进行反应积分和刺激 强度评价。
[0027] 受试样品组肉眼检查可见，3只阴道中段及远端（W子宫为参照）极少充血，无水 月中。病理检查结果见表5。
[0028] 表5生态妇科外用药物组合物凝胶剂家兔阴道黏膜刺激反应评分
注:在评分栏中，刺激反应评分为每只动物阴道=个部位刺激反应评分之和。
[0029] 本次试验，动物阴道黏膜刺激反应刺激指数为0.89。根据阴道黏膜刺激反应评分 和刺激强度分级标准，生态妇科外用药物组合物凝胶剂家兔阴道黏膜刺激试验属无刺激 性。
[0030] 实验例4:生态妇科外用药物组合物凝胶剂皮肤变态反应试验 试验动物:普通级白色豚鼠，雌性各半，体重范围267g~305g，由无锡市惠山江南实验动 物场提供。试验分5组，实验样品为=个实施例制备的生态妇科外用药物组合物凝胶剂，实 验组3组、阴性对照组和2,4-二硝基氯代苯阳性对照组各一组，每组16只。试验依据《消毒技 术规范》皮肤变态反应试验。试验前24小时，将每只豚鼠背部脊柱右侧被毛剪刀，去毛范围 3cmX3畑1。诱导接触:吸取0.5ml样品，滴于2cmX2cm的两层纱布上，敷贴在右侧所暴露的皮 肤上，再W-层油纸覆盖，无刺激性胶布和細带固定6小时，去除受试物、胶布和細带。第7天 和第14天W同样方法重复一次，。试验期间间隔去毛。阳性对照组用2.5%2,4-二硝基氯代苯 溶液0.5ml滴于2cm X 2cm的两层纱布上同样处理。激发接触:末次诱导后14天，吸取0.5ml样 品，滴于2cmX2cm的两层纱布上敷贴在右侧所暴露的皮肤上，再W-层油纸覆盖，无刺激性 胶布和細带固定6小时，去除受试物、胶布和細带。分别在24小时和48小时观察记录敷贴部 位皮肤反应。按皮肤反应评分标准进行积分和致敏强度分级标准进行评价。阳性对照组用 1.0%的2，4-二硝基氯代苯溶液0.5ml，阴性对照组取样品同诱导接触方法给与一次激发接 触。
[0031] 在观察期间，受试动物组染毒部位皮肤红斑、水肿等症状见表6。
[0032] 表6生态妇科外用药物组合物凝胶剂豚鼠皮肤变态反应试验结果
注：1、皮肤红斑反应强度和水肿反应强度，即为在皮肤反应积分为〇、1、2、3、4的条件下 的动物数比例，如1 /16，4/16. 结论:在皮肤变态反应试验中，该样品对豚鼠皮肤变态反应致敏率为〇%，属未见皮肤变 态反应。
【主权项】
1. 一种生态妇科外用药物组合物，其特征在于，所述组合物由含有以下原料药的乳酸 菌发酵培养物制成： 葡萄糖:2 · 0~4 · 0g/100ml 吐温 80:0 · 06~0 · 15ml/100ml 磷酸氢二钾:〇 · 15~0 · 30g/100ml 乙酸钠:0.3~0.8g/100ml 7分子结晶水硫酸镁:0.01~0.05g/100ml 硫酸锰:0 · 003~0 · 008g/100ml 柠檬酸三铵:〇 · 1~〇 · 4g/100ml 可溶性淀粉:〇 · 3~0 · 5g/100ml 酵母膏:〇 · 36~1 · 0g/100ml 上述原料灭菌，接种益生菌菌液，经发酵后，得到乳酸菌发酵培养物，在培养物中加入 一种或多种医药上可接受的添加剂或/和辅料，即得到所述的生态妇科外用药物组合物。2. 根据权利要求1所述的生态妇科外用药物组合物，其特征在于，所述的益生菌是指嗜 酸乳杆菌、植物乳杆菌，干酪乳杆菌干酪亚种、德氏乳杆菌保加利亚亚种，在常规培养基中 进行常规预培养。3. 根据权利要求1或2所述的生态妇科外用药物组合物，其特征在于，所述的添加剂为 苯扎溴铵、洗必泰、薄荷脑，以及常规赋形剂、防腐剂的其他常规添加剂;所述辅料为:羟丙 甲纤维素、卡波姆、泊洛沙姆、甲壳素、甘油。4. 权利要求1-3任一项所述的生态妇科外用药物组合物的制备方法，其特征在于，制备 步骤如下： 将原料药调整pH值7.0并115 °C灭菌40分钟，温度降至39°C时，接种预培养的体积比各 为1.0%的两种或两种以上益生菌菌液，37土 1°C发酵22-26小时，pH降至4.0时，将发酵温度 降至32 ± 1°C，继续发酵70-74小时，还原糖耗尽，结束发酵;将发酵液离心，收集离心液，得 到乳酸菌发酵培养物;加入一种或多种医药上可接受的添加剂或/和辅料，即得到所述的生 态妇科外用药物组合物。5. 根据权利要求4所述的生态妇科外用药物组合物的制备方法，其特征在于，在所述的 乳酸菌发酵培养物中按照0.05~0.18ml/100ml的浓度加入苯扎溴铵，混合均匀，即得到所述 的生态妇科外用药物组合物的洗剂。6. 根据权利要求4所述的生态妇科外用药物组合物的制备方法，其特征在于，将离心液 加热至90±2°C，在搅拌下，加入羟丙甲纤维素1.6~4.0ml/100ml，继续搅拌并加热至微沸， 保持微沸30分钟，不断搅拌冷却至55±2°C，再加入苯扎溴铵溶液0.05~0.18ml/100ml，薄 荷脑0.1~0.3ml/100ml、甘油溶液10~20ml/100ml，继续搅拌冷却至30°C以下，即得到所述的 生态妇科外用药物组合物的凝胶剂。7. 权利要求1-3所述的生态妇科外用药物组合物在制备调节妇女外生殖道生态平衡、 预防和治疗妇女阴道炎的外用药物中的应用。8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的外用药物为按照制药工业中已知的 方法制成的洗剂、栓剂或凝胶剂。
【专利摘要】本发明公开了一种生态妇科外用药物组合物及其制备方法，该组合物由葡萄糖、吐温80、磷酸氢二钾、乙酸钠、7分子结晶水硫酸镁、硫酸锰、柠檬酸三铵、可溶性淀粉、酵母膏经灭菌，接种益生菌菌液，经发酵后，得乳酸菌发酵培养物；在培养物中加入一种或多种医药上可接受的添加剂，即得到所述的生态妇科外用药物组合物。所述的生态妇科外用药物组合物可用于调节妇女外生殖道生态平衡、预防和治疗妇女阴道炎。经实验，本发明的药物组合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌均具有抑杀作用，对皮肤无刺激性，未见皮肤变态反应。
【IPC分类】A61K31/14, A61P31/10, A61P15/02, A61K35/747, A61K9/06, A61K31/045, A61K35/744, A61K31/155, A61P31/04
【公开号】CN105663172
【申请号】CN201610092981
【发明人】吴炳新, 孙筱林
【申请人】三株福尔制药有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月20日