一种桦纤孔菌总三萜提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种富集矿质元素的食用菌提取方法，具体设及一种枠纤孔菌总=祗 提取方法。
【背景技术】
[0002] 枠纤孔菌（Inonotus obliquus(Ach.ex化rs. )Pil自t)也称枠褐孔菌、白枠茸，属 于担子菌亚口、层菌纲、非權菌目、诱革孔菌科，在外文资料中，其常W学名Inonotus Obliquus出现。枠纤孔菌菌核呈瘤状，无柄，表面黑灰色，内部黄褐，老后表面深裂，坚硬，干 时较脆。具有增强免疫，预防糖病尿等疗效。作为枠纤孔菌的一种主要活性成分，=祗可用 于糖尿病、恶性肿瘤、屯、血管疾病、肝病W及艾滋病的预防和治疗。在=祗类化合物中，白枠 脂醇及其衍生物有防治白血病，抗艾滋病病毒活性和抗黑色素细胞瘤活性等特殊功效。因 此，枠纤孔菌具有重大的药学价值。矿质元素是人和动物机体的重要组成部分，具有重要的 生理功能。食用菌中富集的矿质元素大部分W有机态存在，且稳定性好，其中大部分有机态 的矿质元素均与蛋白质、多糖等生物大分子结合，且促进了矿质元素的吸收与利用。目前对 枠纤孔菌=祗化合物提取工艺及富集矿质元素后营养含量测定尚少报道，传统的=祗类成 分提取方法:萃取法，半仿生提取法，化学衍生法，超声循环技术等易导致=祗降解，近年来 超临界流体萃取法成为一种新的提取分离技术，具有保持有效成分活性和无溶剂残留等优 点。但是设备复杂，运行成本高，提取范围狭窄，因而没有被广泛应用。
【发明内容】
[0003] 本发明针对上述技术中存在的不足，提供一种枠纤孔菌总=祗提取方法，解决了 现有技术中提取时能耗大，生产成本高，提取率低的问题。
[0004] 本发明采用的技术方案如下：
[0005] -种枠纤孔菌总=祗的提取方法，其具体操作步骤如下：
[0006] 步骤1、预处理:枠纤孔菌菌丝在60-80°C条件下，干燥10-16小时；
[0007] 步骤2、破壁:将上述预处理后的枠纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95 %乙 醇，95 %乙醇与菌丝的质量比为30-50:1，配制成混悬液，浸泡24h;
[000引步骤3、超声波处理:将上述枠纤孔菌混悬液超声波处理，60-80°C，功率400W，时间 10-20min；
[0009] 步骤4、减压浓缩:将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL,即得A血浓缩液； 于13000-160001'/111；[]1，0-5°(1：条件下离屯、8-15111；[]1，取上清液，向上清液中加入95%乙醇定容 至 AmL;
[0010] 步骤5、总S祗吸附与纯化:将上述定容后的液体W2BVA的流速过大孔吸附树脂 柱层析，W80 %乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。
[0011] 本发明的优点在于:本发明采取破壁粉碎与超声波辅助提取交替进行的一种破壁 方法，促使细胞完全破裂的同时避免了高溫对原料说造成的营养损失、有效成分破坏严重 的不良影响。超声波辅助提取枠纤孔菌总=祗，机械作用也加速细胞壁的破碎，促进胞内总 =祗活性物质的快速溶出。与传统多糖提取相比，破壁粉碎和和超声波辅助提取有效结合， 具有能耗低、总=祗提取率高，生产成本低的特点。通过本发明破壁联合超声波提取方法， 枠纤孔菌总=祗提取率是传统提取方法的1.15~1.72倍。
【附图说明】
[0012]图1为本发明提取枠纤孔菌总=祗的工艺流程图。
【具体实施方式】 [OOU]实施例1
[0014] 步骤1、预处理:枠纤孔菌菌丝在70°C条件下，干燥12小时；
[0015] 步骤2、破壁:将上述预处理后的枠纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，称取100g枠 纤孔菌粉溶于IOOmL 95%乙醇中配制成浓度为2%混悬液，浸泡2地；
[0016] 步骤3、超声波处理：将上述枠纤孔菌混悬液超声波处理，70°C，功率400W，时间 15min；
[0017] 步骤4、减压浓缩:将上述超声波处理后的混悬液，常压80°C条件下，减压浓缩至 20血，即得浓缩液;于1400化/min，(TC条件下离屯、IOmin，取上清液，向上清液中加入95 %乙 醇定容至20ni;
[0018] 步骤5、总S祗吸附与纯化:对直径为1.5cm，柱长为50cm的大孔吸附树脂柱进行预 处理，用95%乙醇浸泡2地，再用95%乙醇洗至流出液与水的体积比为1:5时不浑浊，之后用 水洗至无醇味，最后水洗至中性，将上述步骤4定容后的液体W2BVA的流速过上述预处理 后的大孔吸附树脂柱层析，W80%乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为 提取物质。
[0019] 枠纤孔菌总=祗不同提取方法提取率测定试验如下：
[0020] 1、材料与方法
[0021] 枠纤孔菌粉:沈阳工学院生命工程学院食用菌实验室
[0022] 2、枠纤孔菌总=祗提取方法
[0023] 取2g、200目枠纤孔菌粉，WlOOmL 95%乙醇浸泡2地，分别采用如下：
[0024] 1)、连续加热回流提取(索式提取器）：提取4h;
[0025] 2)、超声波提取:超声15min;
[0026] 3)、旋转蒸馈提取:旋转蒸馈解吸1次，后提取15min，加入100°C蒸馈水20mL，减压 内部沸腾5min。
[0027] 3.1总S祗的提取率测定
[0028] 采用香草醒一冰醋酸法测定，W齐墳果酸为标准物，在550nm波长处测定标准物质 量浓度与吸光度的对应关系，制备标准曲线。
[00巧]3.1.1总S祗提取率％ =(总S祗质量/枠纤孔菌质量）X 100%
[0030] 4、测定结果
[0031] 4.1齐墳果酸标准曲线获得回归方程为:y = 0.5726X+0.0229 ,R2 = O. 9805，根据回 归方程测得各种方法提取枠纤孔菌总=祗提取率如表1。
[003^ 5.结论
[0033] 由表1可知，超声波提取法与其他两种方法相差明显，因此可确定破壁联合超声波 提取法最适合提取枠纤孔菌总=祗。由于枠纤孔菌细胞壁的主要成分是果胶与纤维素，单 纯物理破碎方法，难W将所有的细胞壁进行破碎。破壁粉碎是一种快捷的破壁方式，可使细 胞破壁较为彻底，，辅助超声波处理，利用超声弄产生的空化作用、机械作用加速细胞壁的 破碎，促使胞内物质的溶出从而提高总=祗提取率且所得枠纤孔菌总=祗较其他提取方法 纯净度高。
[0034] 实施例2
[0035] 一种枠纤孔菌总=祗的提取方法，其具体操作步骤如下：
[0036] 步骤1、预处理:枠纤孔菌菌丝在60°C条件下，干燥16小时；
[0037] 步骤2、破壁:将上述预处理后的枠纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95 %乙 醇，95 %乙醇与菌丝的质量比为30:1，配制成混悬液，浸泡24h;
[003引步骤3、超声波处理：将上述枠纤孔菌混悬液超声波处理，60°C，功率400W，时间 20min;
[0039] 步骤4、减压浓缩:将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL,即得A血浓缩液； 于1300化/min，0°C条件下离屯、15min，取上清液，向上清液中加入95%乙醇定容至Ani;
[0040] 步骤5、总S祗吸附与纯化:将上述定容后的液体W2BVA的流速过大孔吸附树脂 柱层析，W80 %乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。
[0041 ] 实施例3
[0042] -种枠纤孔菌总=祗的提取方法，其具体操作步骤如下：
[0043] 步骤1、预处理:枠纤孔菌菌丝在80°C条件下，干燥10小时；
[0044] 步骤2、破壁:将上述预处理后的枠纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95 %乙 醇，95 %乙醇与菌丝的质量比为50:1，配制成混悬液，浸泡24h;
[0045] 步骤3、超声波处理：将上述枠纤孔菌混悬液超声波处理，80°C，功率400W，时间 IOmin;
[0046] 步骤4、减压浓缩:将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL,即得A血浓缩液； 于1600化/min，5 °C条件下离屯、Smin，，取上清液，向上清液中加入95 %乙醇定容至Ani;
[0047] 步骤5、总S祗吸附与纯化:将上述定容后的液体W2BVA的流速过大孔吸附树脂 柱层析，W80 %乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。
[0048] 表1不同提取方法对枠纤孔菌总=祗提取率的影响
【主权项】
1. 一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于包括如下步骤： 步骤1、预处理:桦纤孔菌菌丝在60-80°C条件下，干燥10-16小时； 步骤2、破壁:将上述预处理后的桦纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95%乙醇，95% 乙醇与菌丝的质量比为30-50:1，配制成混悬液，浸泡24h; 步骤3、超声波处理：将上述桦纤孔菌混悬液超声波处理，60-80 °C，功率400 W，时间 10-20 min； 步骤4、减压浓缩:将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL，即得AmL浓缩液；于 13000- 160001'/111；[11，0-5<€条件下离心8-15 111；[11，取上清液，向上清液中加入95%乙醇定容 至 AmL; 步骤5、总三萜吸附与纯化:将上述定容后的液体以2 BV/h的流速过大孔吸附树脂柱层 析，以80%乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。2. 根据权利要求1所述的一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于所述的步骤1中， 70°C条件下，干燥12小时。3. 根据权利要求1所述的一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于所述的步骤2中， 95%乙醇与菌丝的质量比为40:1。4. 根据权利要求1所述的一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于所述的步骤3中， 70 °C，功率400 W，时间 15min。5. 根据权利要求1所述的一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于所述的步骤4中， 于 14000 r/min，0°C条件下离心 10 min。6. 据权利要求1所述的一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于所述的步骤5中，大 孔吸附树脂柱的柱床直径为1.5 cm，柱长为50 cm;大孔吸附树脂柱进行预处理，用95%乙醇 浸泡24h，再用95%乙醇洗至流出液与水的体积比为1:5时不浑浊，之后用水洗至无醇味，最 后水洗至中性。
【专利摘要】本发明公开了一种桦纤孔菌总三萜提取方法，包括预处理、破壁、超声波处理、减压浓缩及总三萜吸附与纯化步骤，通过破壁粉碎使细胞壁完全破碎，同时联合超声波辅助提取方法，避免了高温对原材料所造成的营养流失、有效成分破坏严重的不良影响。而且促使桦纤孔菌细胞内总三萜物质快速溶出。与传统总三萜提取相比，本发明方法具有能耗低、总三萜提取率高，生产成本低的特点。通过本发明破壁联合超声波提取方法，桦纤孔菌总三萜提取率是传统提取方法的1.15~1.72倍。
【IPC分类】A61K36/07
【公开号】CN105663178
【申请号】CN201610179537
【发明人】郭晓帆, 于妍, 王守明, 王亮, 王威, 刘冰雁, 王玉峰, 翟玉莹, 张婷, 韩琳
【申请人】沈阳工学院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月25日