青娥丸抗抑郁抗焦虑的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及青娥丸的新用途，特别是涉及青娥丸用于治疗或缓解抑郁症和焦虑症 的新用途。 技术背景
[0002] 抑郁症是以持续情绪低落和认知功能障碍为主要临床特征，包括焦躁情绪、快感 缺失、睡眠障碍、负罪感和反复自杀念头等。全球的抑郁症患者已达3. 4亿人。目前抑郁 症在中国发病率大约为4%。据世界卫生组织统计，抑郁症已成为世界第四大疾患，预计到 2020年，可能成为仅次于冠心病的第二大疾病。抑郁症不仅给患者带来精神上的损失，也给 患者造成沉重的经济负担。抑郁症在中国造成的总经济负担达到622亿元人民币，美国每 年因抑郁症造成的经济损失达到437亿美元。世界卫生组织、世界银行和哈佛大学的一项 联合研究表明，抑郁症已经成为中国疾病负担的第二大疾病。
[0003] 抑郁症伴随单胺类神经递质、下丘脑-垂体-肾上腺（HPA)轴功能失调、神经营养 因子和炎症反应等生物学机制相关，很难以用单一的病因和发病机制来解释。临床上常用 抗抑郁药物主要是：三环类抗抑郁药（TCA)、单胺氧化酶抑制剂（MAOI)、选择性5-羟色胺再 摄取抑制剂（SSRS)，普遍存在耐药性、副作用大等弊端，因此寻找安全、高效、副作用小的抗 抑郁药物尤其是天然抗抑郁药物成为了该领域的研究热点。
[0004] 《中国药典》所载的青娥丸是以《太平惠民和剂局方》配方为基础，药材细粉，配以 炼蜜制成的大蜜丸或水蜜丸。具有补肾强腰，用于肾虚腰痛，起坐不利，膝软乏力等症。
[0005] 本发明涉及青娥丸在抗抑郁及抗焦虑方面的作用和功效，尚未见相关报道。
【发明内容】
[0006] 本发明涉及青娥丸在制备抗抑郁抗焦虑的组合物中的用途。
[0007] 青娥丸在制备抗抑郁抗焦虑的组合物中的用途，其特征在于：青娥方由杜仲（盐 炒）480克，补骨脂（盐炒）240克，核桃仁（炒）150克，大蒜120克组成。
[0008] 以上四味，将大蒜蒸熟，干燥，与盐炒杜仲、盐炒补骨脂粉碎成细粉，过筛，再将炒 核桃仁捣烂，与上述粉末掺研，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜20~30g加适量的水泛丸， 干燥，制成水蜜丸；或加炼蜜50~70g制成大蜜丸，即得。
[0009] 本发明提供了青娥丸抗抑郁及抗焦虑的技术方案，为开拓青娥丸抗抑郁及抗焦虑 的新用途提供了依据。
[0010] 本发明中青娥丸可使嗅球切除抑郁模型小鼠行为学得到改善，并能增加脑中 5-HT，NE，Glu的含量，降低γ -GABA的含量，从而起到治疗和改善抑郁及焦虑疾病的作用。
[0011] 有益效果
[0012] 本发明的优点和积极效果在于，通过生物学研究表明，青娥丸对实验性抑郁小鼠 具有一定的保护作用，主要体现在对行为学评价的改善作用。青娥丸一方面能显著增加嗅 球切除小鼠海马去甲肾上腺素 ΝΕ，5-ΗΤ/5-ΗΙΑΑ的比值，提示青娥丸可通过抑制单胺氧化 酶的活性发挥抗抑郁及抗焦虑作用。另一方面青娥丸通过增加脑内Glu含量，减少γ-GABA 的含量，发挥调节中枢神经系统神经递质Glu和γ -GABA代谢的作用，从而调控受体对儿茶 酚胺的反应性，发挥抗抑郁及抗焦虑作用。因此青娥丸具有对抑郁的治疗和缓解作用。提 示其具有开发新的抗抑郁及抗焦虑药物的前景。
【附图说明】
[0013] 附图1青娥丸对嗅球切除模型小鼠抗抑郁作用操作流程图
【具体实施方式】
[0014] 以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的 目的，决不限制本发明的保护范围。
[0015] 实验例1本发明青娥丸致大鼠嗅球损毁模型的改善作用
[0016] ( -）实验药物和仪器
[0017] 药物：青娥丸，批号20120509,上海雷允上制药有限公司生产。盐酸氟西汀（又称 百忧解），批号2076Α，法国Fatheon France生产。文拉法辛，批号1308025，Pfizer Iretand Pharmaceuticals 生产。异氟烧，r-氨基丁酸（GABA)，谷氨酸（Glu)，5-轻色胺（5-HT)5_HT， 肾上腺素（Epi)，多巴胺（DA) DA，去甲肾上腺素（NE) NE，5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA)，3,4-二 羟基苄胺（内标）以上几种均为Sigma公司产品。仪器："鼠博士"动物行为学分析：高架十 字迷宫（RD1108-EPM-M)，强迫游泳实验分析系统型号（RD1119-FST-M)，悬尾实验分析系统 型号（RD1118-TST-M)，旷场实验分析系统（RD1112-0FT-M)。麻醉机：（SN MSSN 5374. UK)， 电动骨钻（BJ1102SA0)，"鼠博士"动物行为学视频分析系统（R.D)
[0018] (二）实验方法与结果
[0019] 动物分组及给药
[0020] 1双侧嗅球切除模型（OB)的抑郁模型的建立
[0021] C57BL/6J雄性小鼠，SPF级，四周周龄，由上海中医药大学实验动物中心提供。所 有的动物年龄和体重相当的，实验动物的初始体重为25 - 30g，实验动物饲养在一个装有垫 料塑料盒内（45cmX 25cmX 20cm)，保持室温20 ± 2 °C，湿度40 - 60 %，保持12小时光照和 12小时熄灯循环，光照时间从7:00-19:00。水和食物可以自由获得。实验操作程序完全按 照上海中医药大学实验动物中心动物福利委员会的相关指导方案进行。
[0022] 双侧嗅球切除手术
[0023] C57BL/6J 小鼠用 7. 5 % (w/v)水合氯醛腹腔注射（375mg/kg i. P. :Merck， Germany)或用异氟烧吸入麻醉（0.5% in lml/min 02)，操作过程遵照文献报道.简单的 说，用剃毛刀剔去头部毛发后，沿径向中线切口，从前囱前Icm至后Icm正中线处，暴露颅 骨。用钻头在距离前囱前8mm，正中线两侧各Imm分别开一骨窗，直径约1.5mm。将电热探 头垂直插入颅内约2s，损伤双侧嗅球。并用5mm吸头插入骨窗内，用水栗温和吸出损毁的嗅 球，保证不损伤前额叶皮质，钻孔中塞入止血海绵以免出血。于创面撒上灭菌磺胺结晶以防 止感染，缝合皮肤。假手术组合嗅球切除手术过程完全相同，只是不损毁和吸出嗅球。所有 的动物每天都给予监护，并通过随后的实验证实OB模型是成功的，如果OB动物被证实嗅球 切除不完全或前额叶皮质受到损伤的应剔除。假手术动物如果嗅球或前额叶皮质受损的也 应剔除。随后实验程序附图1所示。术后恢复14天，第十五天进行旷场实验（OFT)，然后连 续给药28d。实验末次给药后依次进行旷场实验，强迫游泳，悬尾，高架十字迷宫。两实验之 间间隔〈2d ;每只动物实验结束后清除粪便，用70%乙醇喷洒箱底并用洁净纱布抹干，以免 前1只动物的残留气味造成对本次实验的影响；全部实验结束后由不熟悉实验设计人员进 行数据提取录入。
[0024] 2动物分组和给药
[0025] 造模成功的C57BL/6mice，60只，随机分为6组：模型组（0B组，给予等体积蒸馏 水）；阳性药I组（Fluoxetine);阳性药I组（venlafaxine)，青娥丸I组（3. 6g/kg)、高剂 量组（5. 4g/kg)。假手术组10只（sham，给予等体积蒸馏水）；
[0026] 灌胃药物的配制：C57BL小鼠剂量是人剂量的10倍。给药时平均体重25g，按每公 斤体重20ml/kg/d，每天灌胃两次，相当于25g小鼠每次灌胃0. 25ml.青娥丸正常人剂量为 中剂量：9g*2 = 18g，高剂量9g*3 = 27g，人体重按50公斤体计算，中剂量相当于：0. 36g/ kg/d，高剂量相当于0· 54g/kg/d，
[0027] 通过折算，c57BL小鼠中剂量为3. 6g/kg/d，高剂量为5. 4g/kg/d
[0028] 中剂量配药浓度应为3. 6g/20ml :即浓度为0· 18g/ml.
[0029] 高剂量配药浓度应为5. 4g/20ml，称取青娥丸粉末54g，定容至200ml，即浓度为 0.27g/ml〇
[0030] 灌胃方案：实验c57BL小鼠分组：
[0031] 假手术组，每日两次，每次灌胃0. 25ml生理盐水或0. 5% CMC-Na ;模型组，每日两 次，每次灌胃〇. 25ml生理盐水或0. 5% CMC-Na ;
[0032] 氟西叮组，每日两次，每次灌胃给予0. 25ml药液，相当于10mg/kg/d ;
[0033] 文拉法辛组，每日两次，每次灌胃给予0· 25ml药液，相当于10mg/kg/d ;
[0034] 青娥丸I组，每日两次，每25g体重每次灌胃0.25ml浓度为0. 18g/ml，随着体重的 增加，相应的给药体积随体重而变化，相当于3. 6g/kg/d ;
[0035] 青娥丸II组，每日两次，每25g体重每次灌胃0.25ml浓度为0.27g/ml，随着体重 的增加，相应的给药体积随体重而变化。相当于5. 4/kg/d。
[0036] 3实验方法
[0037] 3. 1 旷场实验（OFT)
[0038] 测试动物在新奇开场环境下的自发性活动和探索行为，可用于评价其兴趣大小程 度。实验前，小鼠在测试房间内先适应lh，房间内保持安静，光照柔和。旷场箱由4块50cm 高的白色亚克力板围成50cm*50cm大小的正方形，底板也为白色亚克力板，正上方有一摄 像头连接计算机轨迹跟踪系统。每只大鼠放置于旷场中央，记录其3min行为活动。通过计 算机轨迹跟踪系统分析下列参数：行走总距离和站立次数（动物两前爪同时离地次数）。行 走总距离和站立次数降低表明动物在新奇环境下兴趣度下降。每测试1只动物后用酒精清 洁旷场箱底板
[0039] 3. 2 强迫游泳（FST)
[0040] 小鼠进行强迫游泳刺激：实验时迫使小鼠在一局限的空间游泳，它们首先拼命泳 动试图逃跑，随后处于一种漂浮的不动状态，仅露出鼻孔维持呼吸，四肢偶尔划动以保持身 体不至于沉下去，这种状态被称为不动状态，实际是动物放弃逃脱的希望。每次刺激从大鼠 入水到离开泳池，时间为IOmin (适应6分钟，取样测定4分钟）。
[0041] 3. 3 悬尾（TST)
[0042] 悬尾（TST)是一种经典而又能快速评价抗抑郁药物的方法。其原理是利用小鼠悬 尾后企图逃脱但又无法逃脱，从而放弃挣扎，进入特有的抑郁不动状态，实验过程中记录动 物不动时间来反映抑郁状态，抗抑郁药物、兴奋药物能明显地缩