鲑鱼降钙素磷脂复合物及其脂质纳米粒和制备方法

鲑鱼降钙素磷脂复合物及其脂质纳米粒和制备方法
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及一种鲑鱼降钙素磷脂复合物及其脂质纳米粒和制备方法，本发明所解决的技术问题是提供的鲑鱼降钙素磷脂复合物及其脂质纳米粒具有改善药物脂溶性，并使其具有一定的肠黏附性而易于透过肠粘膜吸收，且能保护药物免受胃肠道蛋白酶降解的优点。本发明鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒组分为鲑鱼降钙素磷脂复合物、脂质材料、表面活性剂和水，通过薄膜分散法等方法制备而成。本发明方法制备的水溶性药物纳米粒中，药物油水分配系数高，透膜性好，可改善其口服生物利用度，制备方法工艺过程简单。
【专利说明】
结鱼降巧素磯脂复合物及其脂质纳米粒和制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体设及娃鱼降巧素憐脂复合物及其脂质纳米粒和制 备方法。
【背景技术】
[0002] 降巧素(calcitonin)是甲状腺内的滤泡旁细胞分泌的一种激素，是由32个氨基酸 组成的多肤，由化rsh首次发现并证明它具有巧、憐代谢调节功能。降巧素 W骨为祀细胞，它 与破骨细胞表面受体结合后可抑制破骨细胞增殖，阻止骨溶解。根据来源不同，降巧素分为 人、猪、娃鱼和媛鱼降巧素，其中娃鱼降巧素 （salmon calcitonin)的比活性最高，约是人降 巧素的30倍，作用时间长、稳定性好，半衰期长，副作用小，因此娃鱼降巧素在临床的应用最 为广泛。娃鱼降巧素为易溶于水的白色粉末，分子式为Cl45也4〇N44〇48S2。分子量3432道尔顿， 结构式如下：
[0003]
[0004] 娃鱼降巧素最早由诺华公司于二十世纪60年代研制，先后上市了注射液和鼻喷 剂，90年代开始进入我国，目前国内已有十余家企业生产原料药和注射剂、鼻喷剂。
[0005] 娃鱼降巧素临床上主要治疗各种原因导致的骨质疏松症和高巧血症，此外还适用 于变形性骨炎、甲状旁腺机能亢进症、维生素 D中毒W及痛性神经营养不良症或Sudeck氏 病。
[0006] 中国正在进入一个老年化社会，老年人易患骨质疏松症，该疾病也是世界性公众 健康问题，每年约有130万人患骨质疏松症而引起的骨折。
[0007] 目前国内外娃鱼降巧素上市制剂包括娃鱼降巧素注射液和鼻腔喷剂，注射剂对于 需长期给药的患者而言，给药方便性及适应性均较差;鼻腔喷剂的给药剂量不易控制，若将 娃鱼降巧素制成口服制剂，则可W提高患者的临床适应性和耐受性，从而更好的发挥娃鱼 降巧素的临床作用。近年来国内外已有文献报道，将娃鱼降巧素制备成肠溶微粒和纳米粒 等口服制剂，如CN101569608A公开了一种降巧素的口服固体脂质纳米粒制剂及其制备方 法，其将娃鱼降巧素直接与脂质材料制备成纳米粒分散液。但由于娃鱼降巧素易溶于水，月旨 溶性差，在细胞膜上的透过率低，且在直接制备成纳米粒时包封率低。
[000引本发明是将娃鱼降巧素制备成憐脂复合物后再制备成脂质纳米粒，通过提高娃鱼 降巧素口服后在肠道黏膜的吸收率，来提高其口服生物利用度，并提高纳米的包封率。目前 尚未见有将娃鱼降巧素制成憐脂复合物后再制成脂质纳米粒，用W提高娃鱼降巧素口服生 物利用度的报道。

【发明内容】

[0009]本发明所解决的第一个技术问题是提供一种改善药物脂溶性的娃鱼降巧素憐脂 复合物。发明人采用憐脂复合物技术用于提高娃鱼降巧素的脂溶性，并结合脂质纳米粒増 溶祀向技术，将水溶性药物娃鱼降巧素制成了娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒，增加了 药物的脂溶性，从而促进药物的透膜吸收，提高药物的生物利用度;而且还能保护娃鱼降巧 素免受胃肠道蛋白酶降解。
[0010]本发明娃鱼降巧素憐脂复合物，包括下述重量配比的组分：
[00川娃鱼降巧素 1份
[001 ^ 憐脂 5-20 份；
[0013] 优选的，包括下述重量配比的组分：
[0014] 娃鱼降巧素 1份
[00巧]憐脂 10份；
[0016] 其中，娃鱼降巧素憐脂复合物是由娃鱼降巧素与憐脂采用溶剂挥发法制备。憐脂 为蛋黄卵憐脂、大豆憐脂中的至少一种。
[0017] 本发明解决的第二个技术问题是提供上述娃鱼降巧素憐脂复合物的制备方法，包 括W下步骤：
[0018] (a)将娃鱼降巧素和憐脂溶解于溶剂I;
[0019] (b)在适当溫度下恒溫揽拌回流反应后减压旋蒸除去溶剂I;
[0020] (C)加入乙酸，溶解憐脂复合物后过滤，将滤液减压旋蒸至干，除去未反应的娃鱼 降巧素，得到淡黄色的粘稠状娃鱼降巧素憐脂复合物。
[0021] 其中，步骤(a)所述溶剂I为弱极性溶剂;所述弱极性溶剂为乙酸、乙酸乙醋、二氯 甲烧、Ξ氯甲烧中的一种或两种的混合溶剂，其中步骤(a)所述溶剂I为二氯甲烧与乙酸按 体积比7:3-9:1混合所得试剂；当二氯甲烧与乙酸按体积比6:4~7:3混合时，得到的娃鱼降 巧素憐脂复合物复合率最高。
[0022] 其中步骤(b)所述溫度为40°CW下。
[0023] 本发明解决的第Ξ个技术问题是将提供一种改善药物脂溶性，易于透过肠粘膜吸 收，提高药物的生物利用度的娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒，包括下述重量配比的组 分： 娃鱼降巧素憐脂复合物^ 6-21份 脂质材料 1-8份
[0024] 表面活性剂 1 20份 氷 1OO0-斗卵灯化。
[0025] 优选包括下述重量配比的组分： 猶鱼除巧素憐脂复合物 1.1汾 脂质材料 1-8份
[0026] 表面活性剂 1-20份 水 1000-4000 份。
[0027] 进一步优选包括下述重量配比的组分： 蛙鱼降钩素憐脂复合物 Π 份 脂质材料 2.98份
[002引 表面活性剂 么傲 水 2000份。
[0029] 其中娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒是由娃鱼降巧素憐脂复合物与脂质材料、 表面活性剂、水，采用薄膜分散法来制备的。其中脂质材料为单硬脂酸甘油醋、硬脂酸、栋桐 酸、Ξ栋桐酸甘油醋中的至少一种;表面活性剂为泊洛沙姆188、吐溫80中的至少一种;本发 明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒W混悬液形式存在，或者将混悬液制成冻干粉形式， 然后进一步将混悬液或冻干粉加工成固体制剂，如片剂、胶囊剂等，制成的固体制剂具有良 好的长期稳定性，且有利于药物的长期储存和运输。
[0030] 本发明解决的第四个技术问题是提供上述娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的 制备方法，包括W下步骤：（i)表面活性剂加水制成表面活性剂水溶液;娃鱼降巧素憐脂复 合物加入脂质材料，用溶剂Π 溶解后减压旋蒸去除溶剂Π ，加入适量表面活性剂水溶液浸 泡过夜；（ii)将（i)溶液采用细胞破碎仪超声或高压均质机均质，得娃鱼降巧素憐脂复合物 脂质纳米粒混悬液。其中，步骤(i)所述表面活性剂水溶液的浓度为0.1%-0.5%。
[0031] 本发明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的粒径为102~22化m，多分散指数为 0.2~0.4，Ze化电势为-20~-30mV。
[0032] 进一步的，为了提高产品的稳定性和便于胆存，还可W将步骤（ii)制得的纳米混 悬液制成冻干粉。即向步骤(ii)制得的纳米混悬液中加入冻干保护剂，进行冷冻干燥，得到 娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒冻干粉。其中，冻干保护剂为甘露醇、海藻糖、中的一种 或两种的混合物。
[0033] 其中，步骤(i)所述脂质材料为单硬脂酸甘油醋、硬脂酸、栋桐酸、Ξ栋桐酸甘油醋 中的至少一种。
[0034] 进一步优选，步骤(i)所述脂质材料为单硬脂酸甘油醋与硬脂酸的混合物，其重量 比为:单硬脂酸甘油醋1-4份、硬脂酸1-4份。
[0035] 最优选，步骤（i)所述脂质材料为单硬脂酸甘油醋与硬脂酸的混合物，其重量比 为:单硬脂酸甘油醋1份、硬脂酸3.125份。
[0036] 其中，步骤(i)所述溶剂Π 为脂溶性溶剂，所述脂溶性溶剂为乙酸、乙酸乙醋、二氯 甲烧、Ξ氯甲烧中的一种或两种的混合溶剂，其中乙酸的溶解效率最高。
[0037] 其中，步骤(i)所述表面活性剂为泊洛沙姆188、吐溫80中的至少一种;优选泊洛沙 姆188。表面活性剂也称为乳化剂，其作用是降低表面张力，促进粒子分离，减少粒子聚集而 达到稳定脂质纳米粒的作用。表面活性剂采用浓度为〇.〇5%-〇.5%的泊洛沙姆188;进一步 优选浓度为0.1 %的泊洛沙姆188。
[0038] 本发明的纳米粒混悬液可W直接作为滴鼻剂或冻干后进一步加工成固体制剂，如 片剂、胶囊剂等，制成的固体制剂具有良好的长期稳定性，且有利于药物的长期储存和运 输。
[0039] 测定本发明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的粒径大小、分布及其zeta电位： 将本发明制得的娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒混悬液用纯化水适当稀释，用马尔文激 光粒度仪测定器粒径大小及其分布，结果如下：粒径范围为102~22化m，Zeta电势-20~- 30mV，多分散指数(PDI)O. 2~0.4。经测定，本发明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒包封 率更高，应用时在肠道的吸收更好，优于普通娃鱼降巧素脂质纳米粒。
【附图说明】
[0040]图1红外光谱图：其中A-D分别表示:A-娃鱼降巧素;B-娃鱼降巧素和憐脂物理混合 物;C-憐脂;D-娃鱼降巧素憐脂复合物。
[0041 ] 图2 X畑图：其中图2A-图2D分别表示：图2A-娃鱼降巧素 XRD图；图2B-娃鱼降巧素 和憐脂物理混合物X畑图；图2C-憐脂X畑图；图2D-娃鱼降巧素憐脂复合物X畑图。
[0042] 图3 DSC图：其中图3A-图3D分别表示：图3A-娃鱼降巧素 DSC图；图3B-娃鱼降巧素 和憐脂物理混合物DSC图；图3C-憐脂DSC图；图3D-娃鱼降巧素憐脂复合物DSC图。
[0043] 图4娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒透射电镜图。
[0044] 图5娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的释放曲线。
[0045] 图6血巧百分率-时间曲线：其中A-D分别表示:A-娃鱼降巧素注射液皮下给药;B- 空白纳米粒结肠给药;C-娃鱼降巧素水溶液结肠给药;D-娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米 粒结肠给药;E-娃鱼降巧素脂质纳米粒结肠给药。
【具体实施方式】
[0046] W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明，说明但不限制本发明。
[0047] 鉴于娃鱼降巧素的脂溶性差、透膜吸收差、易被胃肠道蛋白水解酶降解、对胃肠道 抑敏感，口服生物利用度低。发明人采用了将娃鱼降巧素制成憐脂复合物后，W娃鱼降巧素 憐脂复合物、脂质材料、表面活性剂和水为原料，通过薄膜分散法制成脂质纳米粒的方式克 服了上述缺陷，得到了具有药物油水分配系数高，粘膜透过率高、稳定性好、免受蛋白酶降 解等优点的娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的，可达到提高口服生物利用度和临床疗效 的目的。
[004引憐脂复合物(phospholipid complex)是一种在非质子传递体系溶剂中，药物与憐 脂W-定配比关系结合而形成的复合物。娃鱼降巧素易溶于水，而脂溶性很差，鉴于生物膜 脂质双分子层结构，脂溶性小的药物不易透膜吸收。将娃鱼降巧素制备成憐脂复合物后增 加其油水分配系数，使其具有一定的亲脂性，在不改变娃鱼降巧素和憐脂的化学结构和药 理作用的同时，促进其透膜吸收。
[0049] 脂质纳米粒（lipid nanoparticles，LN)是20世纪90年代初发展起来的新型胶体 给药系统。它是W具有生理相容性和生物可降解性的、高烙点的天然或合成脂质为骨架材 料所制成的纳米尺度的载药系统，其主要优点表现在：（a)具有良好的生理相容性；（b)保护 药物免受胃肠道蛋白酶的降解，增加蛋白、多肤类药物的口服吸收；（C)具有缓控释、祀向、 长效的作用；（d)对亲脂性药物具有较高的包封率；（e)对体内的粘膜组织具有粘附性，延长 药物的体内滞留时间，提高药物的生物利用度；（f)有适合于工业大生产的生产方式。可有 效解决娃鱼降巧素易被体内蛋白水解酶水解、透膜性差等问题。
[0050] W下，娃鱼降巧素简称sCT，憐脂简称SPC，娃鱼降巧素憐脂复合物简称sCT-SPC，二 甲基亚讽简称DMSO,娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒简称sCT-PC-LN。
[0051]( - )娃鱼降巧素憐脂复合物的制备工艺选择及优化
[0052] 1.冻干法制备sCT-SPC:称取lOmg sCT、100mg SPC，分别加入反应溶剂10ml，在25 °(：条件下磁力揽拌反应化，将反应液转移至称量瓶，冻干。按照sCT-SPC复合率测定法测定 其复合率。
[0053 ] 实验分别考察了 DMS0、含1 %冰乙酸的DMS0、3 %冰乙酸的DMS0、5 %冰乙酸的DMS0、 8 %冰乙酸的DMS0运几种反应溶剂对复合率的影响。结果见表1.
[0054] 表1:不同冰乙酸含量冻干法sCT-SPC复合率
[0化5]
[0056]实验表明随着冰乙酸含量的增加，冻干法sCT-SPC的复合率有减少的趋势，所W冰 乙酸的量越少越好，但是DMS0显碱性，而sCT在弱酸性条件下稳定，经稳定性考察实验得sCT 在含1%冰乙酸DMS0的溶液中稳定。所W选择的反应溶剂为含1%冰乙酸DMS0的溶液。
[0057] 2.溶剂挥发法制备sCT-SPC:称取sCT5mg，溶于1 %冰乙酸甲醇溶液中，加入大豆憐 月旨50mg，再加入反应溶剂10ml，使憐脂全部溶解。将上述溶液分别于25°C条件下磁力揽拌反 应化，于30°C恒溫旋蒸，将有机溶剂蒸干，减压干燥过夜，-20°C保存。照sCT-SPC复合率测定 法(直接法和间接法)测定其复合率。
[005引 2.1反应溶剂的影响：首先考察了二氯甲烧、乙酸、Ξ氯甲烧、二氯甲烧：乙酸=5: 5、Ξ氯甲烧：乙酸=5:5、Ξ氯甲烧:二氯甲烧=5:5作为反应溶剂对复合率的影响。结果如 表2。
[0059] 表2反应溶剂对溶剂挥发法复合率的影响
[0060]
[0061] 据表2可知，混合溶剂的复合率明显高于单一溶剂，混合溶剂的复合率均大于 50 %，且Ξ氯甲烧与其他溶剂混合时反应更完全，但Ξ氯甲烧毒性较大，综合考虑选择二氯 甲烧与乙酸的混合溶剂作为反应溶剂。
[0062] 小结：由表1和表2可W看出冻干法制备的sCT-SPC的复合率低于溶剂挥发法，同时 冻干法耗时长，操作麻烦，综合考虑采用溶剂挥发法制备sCT-SPC。
[0063] 2.2反应溶剂比例的影响
[0064] 选择反应溶剂为二氯甲烧与乙酸的混合溶剂，分别考察二氯甲烧与乙酸的混合比 例按体积比分别为1:9、3:7、5:5、6:4、7:3、9:1对复合率的影响。结果见表3。
[0065] 表3反应溶剂对溶剂挥发法复合率的影响
[0066]
[0067] 小结：由表3可W看出，反应溶剂比例对复合率有较大的影响，随着二氯甲烧的比 例增加，复合率具有先增加后减小的趋势，故优选二氯甲烧与乙酸按体积比7: 3-9:1的范 围，最优选二氯甲烧与乙酸按体积比为6:4~7:3。
[0068] 2.3反应溫度的影响
[0069] 选择反应溶剂的比例为二氯甲烧与乙酸按体积比7:3，分别考察-25°(：、0°(：、251： 时的复合率。结果见表4。
[0070] 表4反应溫度对复合率的影响
[0071]
[0072] 小结：由表4可见，反应溫度对复合率的影响较小，在常溫下即可进行，为了便于控 审IJ，选择25 °C作为反应溫度。
[0073] 2.4反应时间的影响
[0074] 选择反应溫度为25°C考察不同反应时间对复合率的影响，结果见表5。
[0075] 表5反应时间对复合率的影响。
[0076]
[0077] 小结：由表5可W看出，药物与憐脂的复合率随时间增加，先增加后趋于平衡，受时 间影响较大。
[0078] 2.5sCT-与SPC质量比的影响
[00巧]考察质量比分别为1: 5、1:10、1:15、1:20时的复合率，结果见表6。
[0080] 表6质量比对复合率的影响
[0081]
[0082]小结：由表6可得，质量比对复合率的影响较大，质量比越大，复合率显著增加。但 当sCT与憐脂比例为1:10时，复合率趋于稳定，结合也趋于完全。
[0083] 2.6正交实验设计
[0084] 根据单因素考察的结果可知，反应溶剂比例、反应时间和质量比对sCT-SPC的复合 率影响较大，W复合率为指标，对A(反应溶剂比例）、B(反应时间）、C(质量比）为因素，进行 Ξ因素四水平正交设计，采用L16(45)表，见表7,实验结果见表8。
[00化]表7因素水平表
[0089] 各因素极差的大小反映同一因素不同水平时试验指标变化的幅度，变化幅度越 大，表明该因素对试验指标的影响越大。由表中可看出，因素对指标的影响顺序为，质量比 最大，溶剂比例次之，反应时间最小。
[0090] 表9方差分析结果
[0091]
[0092] 注：F0.05(3,3) = 9.280
[0093] 小结:根据表9方差分析的结果可知，质量比对复合率的影响显著。优化后的工艺 条件为反应溶剂二氯甲烧与乙酸的比例为6:4,反应时间为4h，sCT与SPC质量比为1:10。按 照优化后的工艺重复制备3批样品，测定复合率平均为47.81%，RSD为1.29%。复合物为淡 黄色的粘稠物。
[0094] 3娃鱼降巧素憐脂复合物的理化性质表征
[0095] 3.1娃鱼降巧素在正辛醇中溶解性能的测定
[0096] 精密称取娃鱼降巧素、娃鱼降巧素与憐脂物理混合物(质量比为1:10)、娃鱼降巧 素憐脂复合物适量(娃鱼降巧素的质量相当），分别加入等量正辛醇，放置在25Γ恒溫水浴 振荡器中，150r · mirTi水浴振荡2地，使溶解达到平衡。平衡好的溶液用0.祉m的微孔滤膜过 滤后，取续滤液SOiiL按"2.1. Γ项下测定娃鱼降巧素溶解百分率。结果见表10。
[0097] 表10娃鱼降巧素、物理混合物和憐脂复合物在正辛醇中的溶解百分率 [009引
[0099] 小结:表10结果表明，娃鱼降巧素完全不溶于正辛醇中，与憐脂进行物理混合或制 备成娃鱼降巧素憐脂复合物都对娃鱼降巧素有一定的增溶作用。娃鱼降巧素憐脂复合物对 娃鱼降巧素在正辛醇中的增溶作用不同于物理混合物，是物理混合物的20.67倍，说明娃鱼 降巧素与憐脂确实形成了复合物，而不是简单的物理混合物。
[0100] 3.2娃鱼降巧素表观油水分配系数的测定
[0101] 精密称取娃鱼降巧素、娃鱼降巧素与憐脂的物理混合物(质量比为1:10)、娃鱼降 巧素憐脂复合物适量(娃鱼降巧素的质量相当），分别加入等量〇.〇2mol · 1/1四甲基氨氧化 锭（用憐酸调pH2.5)饱和的正辛醇溶液和正辛醇饱和的0.02mol · 1/1四甲基氨氧化锭(用憐 酸调PH2.5)溶液，放置在恒溫水浴振荡器中于25°C，150r-mirTi水浴振荡2地，使溶解达到 平衡。取出溶液1300化· min-i离屯、15min，分离油相和水化并用0.祉m的微孔滤膜过滤后， 分别测定油相和水相中娃鱼降巧素的浓度，计算表观油水分配系数。结果见表11。
[0102] 表11娃鱼降巧素、物理混合物和娃鱼降巧素憐脂复合物的表观油水分配系数
[0103]
[0104] 小结：由表11可W看出，物理混合物使娃鱼降巧素的油水分配系数稍有提高，而娃 鱼降巧素憐脂复合物的表观油水分配系数较物理混合物提高了245.50倍。可见，娃鱼降巧 素憐脂复合物显著提高了娃鱼降巧素的表观油水分配系数。
[0105] 3.3红外光谱分析(IR)
[0106] 采用邸r压片法分别对娃鱼降巧素、憐脂、娃鱼降巧素与憐脂物理混合物（质量比 为1:10)、娃鱼降巧素憐脂复合物在400~4000cm-l进行红外扫描（图1)，由图1可见，娃鱼降 巧素(A)的特征吸收峰是1656、1538cm-l;憐脂(C)的特征吸收峰是1740、1620、1236、1064、 824cm-l;在娃鱼降巧素与憐脂物理混合物(B)的红外图谱中无新峰形成;在娃鱼降巧素憐 脂复合物(D)红外图谱中，娃鱼降巧素的特征吸收峰强度减小，憐脂的特征吸收峰增强，但 并无新的峰形成。从运些光谱特征看出，憐脂复合物区别于物理混合物，且在复合物的制备 过程中，娃鱼降巧素和憐脂是通过物理作用结合在一起的，并没有形成新的化学键。
[0107] 3.4X-射线衍射分析(X畑）
[010引检测条件:石墨单色器单色化化-Ka，管压40kV，管流20Ma，衍射范围5-60°，分别将 娃鱼降巧素、憐脂、娃鱼降巧素与憐脂物理混合物(质量比为1:10) W及娃鱼降巧素憐脂复 合物进行X-射线衍射分析，结果见图2(图2A-图2D)。由图2可见，娃鱼降巧素和憐脂均为无 定形粉末。由于憐脂的比例大，娃鱼降巧素与憐脂的物理混合物及复合物图谱均和憐脂相 似，但娃鱼降巧素憐脂复合物的衍射强度明显低于物理混合物，说明娃鱼降巧素憐脂复合 物不同于物理混合物，娃鱼降巧素憐脂复合物中娃鱼降巧素高度分散于憐脂中，使衍射强 度降低。
[0109] 3.5差示扫描量热分析(DSC)
[0110] 测定条件:溫度40-500°C，升溫速度10°C -min-1。分别测定娃鱼降巧素、憐脂、娃 鱼降巧素与憐脂物理混合物(质量比为1:10)及娃鱼降巧素憐脂复合物的相变溫度，图谱见 图3(图3A-图3D)。可见娃鱼降巧素在66.2°C和187.2°C存在特征性吸热峰，憐脂在92.3°C、 191.7、261.7°C分别存在吸热峰。在物理混合物的DSC图谱中存在娃鱼降巧素的特征吸收峰 (188.3 °C )和憐脂的特征吸收峰(268.3 °C )，出现了 75.3 °C的吸收峰，可能是娃鱼降巧素与 憐脂混合后娃鱼降巧素的66.2°C峰和憐脂的92.3°C的峰形成的。娃鱼降巧素憐脂复合物的 DSC图谱中，出现了一个新的吸热峰(336. rC)，娃鱼降巧素的特征吸收峰均消失，且憐脂的 吸热峰由261.7°C减小到237. rC，提示娃鱼降巧素形成复合物后对娃鱼降巧素和憐脂的相 变溫度都有影响，而物理混合物图谱只是二者吸收峰的叠加，可见娃鱼降巧素憐脂复合物 不同于物理混合物。
[0111] (二)脂质纳米粒的工艺选择及优化
[0112] 1.溶剂分散法制备脂质纳米粒
[0113] 1. IsCT脂质纳米粒的制备
[0114] 称取2.5mg硬脂酸、2.5mg单硬脂酸甘油醋、25mg大豆卵憐脂溶于2.5mL乙酸乙醋 中，作为油相;称取2mgsCT溶于0.5mL纯净水中，作为水相;将水相缓慢加入油相中，冰浴下， 细胞破碎仪探头超声(5s*6次，40w)得初乳；向其中加入lOmLO. 3 %泊洛沙姆188溶液，冰浴 下，探头超声（5s*6次，80w)，得复乳。将上述复乳用0.3%泊洛沙姆188溶液稀释至25mL，冰 浴下探头超声（5s*6次，40w)，于40°C旋蒸除去有机溶剂，得到略带乳光的半透明液体。用 ATS100D均质机均质后得到sCT脂质纳米粒混悬液。测定其粒径和ze化电位值。
[0115] 1.2sCT-SPC脂质纳米粒的制备
[0116] 称取2.5mg硬脂酸，2.5mg单硬脂酸甘油醋、适量sCT-SPC(相当于sCT2mg)溶于 2.5mL乙酸乙醋中，作为油相;量取0.5mL纯净水中缓慢加入油相中，冰浴下，细胞破碎仪探 头超声（5s*6次，40w)得初乳；向其中加入lOmLO. 3 %泊洛沙姆188溶液，冰浴下，探头超声 (5s*6次，80w)，得复乳。将上述复乳用0.3%泊洛沙姆188溶液稀释至25mL，冰浴下探头超声 (5s*6次，40w)，于40°C旋蒸除去有机溶剂，得到略带乳光的半透明液体。用ATS100D均质机 均质后得到S CT-SPC脂质纳米粒混悬液。测定其粒径和Z e化电位值。
[0117] 实验后发现不管是sCT脂质纳米粒还是sCT-SPC脂质纳米粒，Zeta电位均为-45~- 50，较稳定;粒径也符合纳米粒要求，但是两者的PDI的分布较大，在0.45~0.5之间；增加均 质次数可W明显降低其PDI，可是均质机需要溶液进行循环，无法准确计算均质次数，运样 势必会使工艺的重复性降低。且此法的操作也较复杂，制备周期长。
[011引2.薄膜分散法制备脂质纳米粒
[0119] 2. IsCT脂质纳米粒的制备
[0120] 称取2.5mg的sCT，溶于1%冰醋酸的甲醇溶液中；加入处方量的脂质材料后用乙酸 溶解后旋蒸除去乙酸，得到一层淡黄色的薄膜。加入适量表面活性剂水溶液浸泡过夜，并加 表面活性剂水溶液至5mL，将溶液采用细胞破碎仪超声，功率为200W，超声9次，每次间隔5s， 得娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒混悬液；向制得的纳米混悬液中加入冻干保护剂，进 行冷冻干燥，得到娃鱼降巧素固体脂质纳米粒冻干粉。结果发现sCT脂质纳米的粒径与Zeta 电位均较好，但由于sCT是水溶性的，故直接将其制备成纳米粒的包封率较低。
[0121] 2.2sCT-SPC脂质纳米粒的制备
[0122] 称取处方量的脂质材料，加入含2.5mg娃鱼降巧素的憐脂复合物中，用乙酸溶解后 旋蒸除去乙酸，得到一层淡黄色的薄膜。加入适量表面活性剂水溶液(泊洛沙姆188溶液)浸 泡过夜，并加上述表面活性剂水溶液至5mL，将溶液采用细胞破碎仪超声，功率为200W，超声 9次，每次间隔5s，得sCT-SPC脂质纳米粒混悬液；向制得的纳米混悬液中加入冻干保护剂， 进行冷冻干燥，得到sCT-SPC脂质纳米粒冻干粉。结果发现sCT-SPC脂质纳米粒的包封率大 于sCT脂质纳米粒的包封率。
[0123] 2.3SCT-SPC脂质纳米粒工艺的单因素考察
[0124] 分别考察脂质材料与sCT比例、泊洛沙姆188浓度、单硬脂酸甘油醋与硬脂酸比例 及超声破碎次数运四个因素对纳米粒包封率、电位及粒径的影响。
[0125] 2.3.1脂质材料与sCT比例
[01 %]考察当脂质材料与sCT质量比例为1:1、4:1、8:1时，包封率、电位及粒径的变化规 律。
[0127]表12脂质材料与sCT比例 [012 引
[0129] 小结:随着脂质材料的增加，纳米粒的粒径逐渐增大，PDI也有增大的趋势;Zeta电 位的变化不大;当脂质材料为sCT的4倍时，包封率已达到饱和，增大的趋势不再明显。
[0130] 2.3.2泊洛沙姆188浓度
[0131] 当脂质材料与sCT比例为4:1时，考察泊洛沙姆浓度(重量体积浓度g/ lOOmL)分别 为0.05 %、0.3%、0.5%，对纳米粒各个指标的影响。
[0132] 表13泊洛沙姆浓度
[0133]
[0134] 小结：泊洛沙姆浓度对纳米粒粒径、PDI的影响很小；Zeta电位随浓度的增加呈先 减小后增加的变化;随泊洛沙姆浓度的增加包封率也有所增大。
[0135] 2.3.3单硬脂酸甘油醋与硬脂酸比例
[0136] W脂质材料与sCT比例为4:1，泊洛沙姆浓度为0.3%，当单硬脂酸甘油醋与硬脂酸 重量比分别为4:1、1:1、1:4时，考察纳米粒的各个指标的变化。
[0137] 表14单硬脂酸甘油醋与硬脂酸比 [013 引
[0139] 小结：由表14可W看出单硬脂酸甘油醋与硬脂酸比的变化并不会引起包封率及 Zeta电位的变化;增加单硬脂酸甘油醋或硬脂酸的比例都会使粒径增大，PDI随着硬脂酸比 例的增大而增大。
[0140] 2.3.4超声破碎次数
[0141] 当脂质材料与sCT重量比为4:1，泊洛沙姆浓度为0.3%，单硬脂酸甘油醋与硬脂酸 重量比为1:1时，考察超声次数分别为3次、6次、9次时纳米粒的各个指标。
[0142] 表15超声破碎次数
[0143]
[0144] 小结：由表15可知:超声破碎次数增大，纳米粒的粒径减小，包封率逐渐增加，超声 次数为9次时的粒径和包封率值最优。
[0145] 2.4sCT-SPC脂质纳米粒工艺优化
[0146] 从单因素考察的结果可W看出，脂质材料的用量、泊洛沙姆188的浓度、单硬脂酸 甘油醋与硬脂酸对娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的粒径和包封率影响较大，为了得到 最佳的处方工艺，在固定细胞破碎仪的超声次数为9次的条件下，W脂质材料的用量(XI)、 泊洛沙姆188的浓度(X2)、单硬脂酸甘油醋比硬脂酸的质量比(X3)为影响因素，W平均粒径 (Y1)，包封率(Y2)为指标，在3个水平上进行研究，并根据Box-Behnken响应面法设计优化实 验。因素水平实验和处方的组合及结果，见表16、17。
[0147] 表1GBox-Betuiken设计因素水平实验表 [014 引
[0149] 表UBox-Belmken优化sCT-PC-LN处方的组合及结果
[0150]
[0151] 2.4.1二次回归方程的建立
[0152] 运用Desi即-Expert.8.05b版软件对表17中实验数据进行二次多元回归拟合，得 到模型的二次多项式回归方程：￥1 = 144.14+47.81乂1+8.15乂2+3.7^3 + 11.32乂1乂2- 0.15X1X3+10.23X2X3-4.77X1 化4.60X2 化 27.6 拙32(P = 0.0007，R2 = 0.95：M)
[0153] Υ2 = 0.91+0.10X1-0.026X2-0.036X3+0.038X1X2+0.089X1X3+0.044X2X3- 0.070X12-0.031X22-0.036Χ32(Ρ = 0.0013,R2 = 0.9446) ο
[0154] 2.4.2方差分析和统计学检验
[01W]经方差分析和统计学检验，其结果见表18。
[0156]表18方差分析与统计学检验结果
[0157]
[0158] 注:*表示经统计学检验，其差异有统计学意义(P<0.05)。
[0159] 上述2个拟合方程的相关系数说明设计模型拟合程度良好，可W用此模型对脂质 纳米粒的处方进行分析和预测。由表16显示的回归系数可知，对于粒径，X1(P〈0.0001)，X32 (P = 0.0030)，其差异具有统计学意义，其他项的差异没有统计学意义;对于包封率，X1(P = 0.0001)，X3(P = 0.0335)，X1X3(P = 0.0025)，X12(P = 0.0079)，其差异具有统计学意义，其 他项其差异无统计学意义。
[0160] 2.4.3效应面优化与预测
[0161 ] 根据"2.4.1"项中的二元多次回归方程，应用软件Design-Expert. 8.0f5b版本，并 对处方进行优化和预测，得到优化后的处方为XI = 7.45，X2 = 0.1，X3 = 0.32，对评价指标进 行预测得 Υ1 = 159.6，Υ2 = 94.44。
[0162] 2.4.4工艺验证
[0163] 经上述结果可知，优化后的处方为:含娃鱼降巧素2.5mg的憐脂复合物，脂质材料 总质量(Xl)7.45mg，其中单硬脂酸甘油醋与硬脂酸的质量比(X3)为0.32,泊洛沙姆188浓度 (X2)为0.1 %，超声功率为200W，超声次数为9次。
[0164] 即本发明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒中组分的重量配比为： 蛙鱼降巧素憐脂复合物^ 6-21份 脂质材料 1-8份
[01 化] 表面活性剂 1-20份 水 1000-视齡儉。
[0166] 优选组分的重量配比为： 魅鱼降巧素憐脂复合物 1]份 脂质材料 1-8份
[0167] 表面活性剂 1-20傲 水 1000-4000 化。
[0168] 最优选组分的重量配比为： 蛙鱼降巧素磯脂复合物 11巧 脂质材料 ：1;蹤份
[0169] 表面活性剂 2份 水 2000份。
[0170] 按优选的处方制备3批娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒，并测定其粒径和包封 率值。其粒径和包封率情况，见表19。
[0171] 表19显示W优化后的处方制备娃鱼降巧素憐脂复合物的脂质纳米粒，其粒径和包 封率的实测值和预测值的相对偏差均较低，Ξ批测定的粒径平均值为160.4nm，包封率平均 值为 93.01 %。
[0172] 表19实测值与预测值的比较
[0173]
[0174] 发明人先将sCT制备成憐脂复合物，再在其基础上制备脂质纳米粒的原因有W下 几点：
[01对 一.sCT为水溶性药物，脂溶性差，而细胞膜为憐脂双分子层结构，sCT难W透过细 胞膜而被吸收，所W将其制备成憐脂复合物W改变其理化性质，增加其油水分配系数，W使 sCT能够更好地透过细胞。在实验过程中，发明人也证明了sCT-SPC的油水分配系数和脂溶 性比sCT及sCT与SPC的物理混合物有很大提高。
[0176] 二.制备成脂质纳米粒主要是由于sCT作为一个多肤，口服后易被胃肠道的蛋白水 解酶水解代谢，制成纳米粒可W避免药物被水解酶代谢，所W将其制备成脂质纳米粒是为 sCT在体内的稳定性考虑的。
[0177] 水溶性的药物直接制备成纳米粒的包封率较脂溶性药物低，所W在憐脂复合 物的基础上制备纳米粒相当于将水溶性的药物的脂溶性提高，不仅增加其透膜吸收，也提 高了纳米粒的包封率。
[0178] (Ξ)透射电镜检查
[0179] 取稀释的sCT-PC-LN混悬液1滴，滴于覆盖碳膜的铜网上，W0.1%憐鹤酸负染。在 室溫条件下干燥，并于透射电子显微镜下观察该纳米粒的形态特征。电镜下可W看到该固 体脂质纳米粒的呈圆整的圆形，且分布均匀，结果见图4。
[0180] (四）释放度考察
[0181] 照优化处方制备纳米粒，用pH4.5的PBS为释放介质，进行释放度的考察，按设定的 时间取样，0.8皿水性滤膜过滤，进行HPLC测定分析，计算各时间的累积释放量，绘制释放曲 线如图5。
[0182] (五)药效血巧实验
[0183] 照优化处方制备纳米粒，肠道给予SD大鼠考察体内降巧效果
[0184] 试验方法:取15只SD雌性大鼠，体重200 ± 25g，将大鼠随机分为5组(每组3只），A组 大鼠皮下注市售娃鱼降巧素注射液，分别在给药后〇、〇.5、1、1.5、2、化于眼静脉丛取血0.3- 0.4mL，37°C解育30min后4000Γ · min-i离屯、15min，分别取出血清，测定巧离子浓度。
[0185] 另四组大鼠予W结肠给药，用戊己比妥钢麻醉(30mg · kg-1)后固定，分离颈静脉， 先取空白血0.3-0.4mL，作为0时刻血样;沿腹中线打开腹腔，分离结肠，从上端注射生理盐 水把肠道排空，结扎结肠上端和下端，用注射器将含有一定浓度药物的肠灌注液(B:空白纳 米粒;C:娃鱼降巧素水溶液;D:娃鱼降巧素憐脂复合物固体脂质纳米粒(sCT-PC-LN)、E:娃 鱼降巧素脂质纳米粒(sCT-LN))约0.5mL注入结肠肠臀中，并注入少量空气将药液完全推入 肠臀中，检查药液是否充满整个肠段，再结扎注药处W免药液外漏，将注药后的肠臀放入腹 腔内，用红外灯保持体溫，并开始记时。分别在0.5、1、1.5、2、化于颈静脉取血0.3-0.4mL，37 °C解育20min后4000r · min-1离屯、，分离取出血清，测定巧离子浓度。
[0186] W时间（TA)为横坐标，W各时间点血巧百分率(w/%)为纵坐标作图，得到血巧百 分率和时间的关系曲线。各时间点血巧浓度变化率按W% = CT/C0 X 100% (CT和C0分别表示 化和给药前大鼠血清巧离子浓度，并W给药前大鼠血清巧离子浓度作为100%)计算得到。 不同样品结肠给药后各时间点的血巧百分率-时间曲线见图6。
[0187] 由图6可知:皮下注射娃鱼降巧素注射液能快速降低血巧水平，降血巧幅度大，达 到70% W下。结肠给予空白纳米粒后，血巧浓度上下波动，无明显降血巧效应;娃鱼降巧素 水溶液、娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒、娃鱼降巧素脂质纳米粒组均有一定的降血巧 效应，在1-化达到血巧浓度最低值，其中娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的血巧浓度可 降至初始浓度的75 %左右。
[0188] 采用梯形法计算血巧百分率-时间曲线上的面积(AAC)来评价在娃鱼降巧素在大 鼠体内的药理相对生物利用度(F% ) "AAC的计算方法为
[0189] AAC = SUM{(Ti + l-Ti)[(100-Ci) + (100-Ci + l)]/2}
[0190] 其中Ti，Ci分别为第i个取血点所对应的时间值和血巧百分率值。AAC为所有相邻 两点与100%水平线构成的梯形面积的总和。
[0191] 娃鱼降巧素在大鼠体内的药理相对生物利用度F%通过下式计算得到，对各样品 结肠给药的F%用SPSS19.0进行方差分析。
[0192]
[0193] 其中，F为结肠给药制剂相对于皮下注射娃鱼降巧素注射液的药理相对生物利用 度;AACcoi。。和AACsc分别为娃鱼降巧素结肠给药和皮下注射娃鱼降巧素注射液的血巧百分 率-时间曲线上面积；（(1〇36)。。1。。，（(1〇36)3。分别为结肠给药和皮下注射娃鱼降巧素的剂量。
[0194] 对各样品结肠给药相对于皮下注射娃鱼降巧素注射液的药理相对生物利用度和 方差分析结果见表20所示。方差分析的结果WP值表示，为各组与G组进行统计学差异比较 的结果。
[01M]表20大鼠给药后药理相对生物利用度和方差分析结果(x±s，n = 3)
[0196]
[0197] 由表20可知，娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒在结肠给药后的药理相对生物利 用度为0.32%，分别是娃鱼降巧素溶液(0.16%)和娃鱼降巧素脂质纳米粒(0.15%)的2倍， 且方差分析结果显示具有显著性差异，可见在憐脂复合物基础上制备成脂质纳米粒后极大 地提高了娃鱼降巧素在结肠粘膜的吸收。
[0198] 本发明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒组分为娃鱼降巧素憐脂复合物、脂质材 料、表面活性剂和水，通过薄膜分散法制备而成;具有改善药物脂溶性，并使其具有一定的 肠黏附性而易于透过肠粘膜吸收，且能保护药物免受胃肠道蛋白酶降解的优点。本发明方 法制备的水溶性药物纳米粒中，药物油水分配系数高，透膜性好，可改善其口服生物利用 度，制备方法工艺过程简单，为临床应用提供了一种全新的选择。
[0199] 名词解释及技术说明
[0200] 本发明的娃鱼降巧素憐脂复合物复合率可通过间接法和直接法测定。间接法是将 娃鱼降巧素憐脂复合物用乙酸溶解后过滤测定滤纸上游离娃鱼降巧素的量计算复合率;直 接法是通过测定滤液中娃鱼降巧素浓度来推算娃鱼降巧素憐脂复合物的复合率。
[0201] 本发明的娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒的包封率测定方法如下:取新制备的 一定体积的娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒混悬液，加入不同体积的O.lmol · 1/1肥1溶 液，对混悬液的pH进行调节，并测定相应的Zeta电位。取Zeta电位接近0时的混悬液与 0.1mol · [1肥1的比例为包封率测定的比例（1:0.2)，12000巧m离屯、15min，分离上清液与纳 米粒，取上清直接进样分析间接计算脂质纳米粒的包封率。
[0202] 动物血清中血巧离子浓度的测定。目前通用的检测方法有MTB甲基廳香草酪兰法、 0CPC邻甲酪献络合法和AR3偶氮神虹法。本发明采用稳定性较好的0CPC邻甲酪献络合法用 于动物实验中血巧的分析测定，本法也是中国药典引用的测定方法。其测定原理为化离子 与0CPC在碱性条件下作用，生成紫色馨合物，而邸TA与化离子络合能力强于0CPC，竞争络合 化离子，使0CPC游离，从而吸光度下降，与化离子浓度成正比。
[0203] 综上，本发明提供的娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒具有改善药物脂溶性，并 使其具有一定的肠黏附性而易于透过肠粘膜吸收，且能保护药物免受胃肠道蛋白酶降解的 优点。本发明娃鱼降巧素憐脂复合物脂质纳米粒组分为娃鱼降巧素憐脂复合物、脂质材料、 表面活性剂和水，通过薄膜分散法制备而成。本发明方法制备的水溶性药物纳米粒中，药物 油水分配系数高，透膜性好，可改善其口服生物利用度，制备方法工艺过程简单。
【主权项】
1. 鲑鱼降钙素磷脂复合物，其特征在于:包括下述重量配比的组分： 鲑鱼降钙素 1份 磷脂 5-20份； 优选，包括下述重量配比的组分： 鲑鱼降钙素 1份 磷脂 10份。2. 根据权利要求1所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物，其特征在于：以下至满足少任意一 项： 所述磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂中的至少一种； 由鲑鱼降钙素与磷脂采用溶剂挥发法、冻干法制备而成;优选的，由鲑鱼降钙素与磷脂 采用溶剂挥发法制备而成。3. 权利要求1或2所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物的制备方法，其特征在于:包括以下步 骤： (a) 将鲑鱼降钙素和磷脂溶解于溶剂I; (b) 在适当温度下恒温搅拌回流反应后减压旋蒸除去溶剂I; (c) 加入乙醚，溶解磷脂复合物后过滤，将滤液减压旋蒸至干，除去未反应的鲑鱼降钙 素，得到淡黄色的粘稠状鲑鱼降钙素磷脂复合物。4. 根据权利要求3所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物的制备方法，其特征在于：以下至满足 少任意一项： 步骤(a)所述溶剂I为弱极性溶剂； 进一步的，所述弱极性溶剂为乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种或两种的 混合溶剂； 步骤(a)所述溶剂I为二氯甲烷与乙醚按体积比7:3-9:1混合所得试剂； 优选，步骤(a)所述溶剂I为二氯甲烷与乙醚按体积比6:4~7:3混合所得试剂； 步骤(b)所述温度为40°C以下； 优选的，步骤(b)所述温度为25 °C。5. 鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒，其特征在于：以权利要求1或2所述鲑鱼降钙素 磷脂复合物为原料之一，包括下述重量配比的组分： 鲑鱼降钙素磷脂复合物 6-21份 脂质材料 1-8份 表面活性剂 1-20份 水 1000-4000 份； 优选的，包括下述重量配比的组分： 鲑鱼降钙素磷脂复合物 11份 脂质材料 1-8份 表面活性剂 1-20份 水 1000-4000 份； 最优选，包括下述重量配比的组分： 鲑鱼降钙素磷脂复合物 11份 脂质材料 2.98份 表面活性剂 2份 水 2000份。6. 根据权利要求5所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒，其特征在于：以下至满足 少任意一项： 所述脂质材料为单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、三棕榈酸甘油酯中的至少一种； 所述表面活性剂为泊洛沙姆188、吐温80中的至少一种； 由鲑鱼降钙素磷脂复合物与脂质材料、表面活性剂、水采用薄膜分散法或溶剂分散法 制备而成； 优选的，由鲑鱼降钙素磷脂复合物与脂质材料、表面活性剂、水采用薄膜分散法制备而 成； 所述鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒以混悬液形式存在;或者将混悬液制成冻干粉 形式。7. 权利要求5或6所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒制备方法，其特征在于包括 以下步骤： (i) 表面活性剂加水制成表面活性剂水溶液;鲑鱼降钙素磷脂复合物加入脂质材料，用 溶剂Π 溶解后减压旋蒸去除溶剂Π ，加入适量表面活性剂水溶液浸泡过夜。 (ii) 将（i)溶液采用细胞破碎仪超声或高压均质机均质，得鲑鱼降钙素磷脂复合物脂 质纳米粒混悬液。8. 根据权利要求7所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒制备方法，其特征在于：以 下至满足少任意一项： 步骤(i)所述表面活性剂水溶液的浓度为〇. 1 %_〇. 5% ; 步骤（i)所述脂质材料为单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、三棕榈酸甘油酯中的至少 一种； 进一步优选，步骤（i)所述脂质材料为单硬脂酸甘油酯与硬脂酸的混合物，其重量比 为:单硬脂酸甘油酯1-4份、硬脂酸1-4份； 最优选，步骤（i)所述脂质材料为单硬脂酸甘油酯与硬脂酸的混合物，其重量比为：单 硬脂酸甘油酯1份、硬脂酸3.125份； 步骤(i)所述溶剂Π 为脂溶性溶剂； 步骤（i)所述脂溶性溶剂为乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种或两种的混 合溶剂； 步骤(i)所述脂溶性溶剂为乙醚； 步骤(i)所述表面活性剂为泊洛沙姆188、吐温80中的至少一种； 优选，步骤(i)所述表面活性剂为泊洛沙姆188; 进一步优选，步骤(i)所述表面活性剂为浓度为〇. 05 %-0.5 %的泊洛沙姆188; 最优选，步骤(i)所述表面活性剂为浓度为0.1 %的泊洛沙姆188。9. 根据权利要求7所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒制备方法，其特征在于：向 步骤(ii)制得的纳米混悬液中加入冻干保护剂，进行冷冻干燥，得到鲑鱼降钙素磷脂复合 物脂质纳米粒冻干粉。10. 根据权利要求9所述的鲑鱼降钙素磷脂复合物脂质纳米粒制备方法，其特征在于： 所述冻干保护剂为甘露醇、海藻糖中的一种或两种的混合物。
【文档编号】A61K9/51GK105919974SQ201610272127
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】张颖, 王彩云, 高燕, 杜伟宏, 符海娟, 李佳
【申请人】中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所