新型免疫治疗组合物及其用图

新型免疫治疗组合物及其用图
【专利摘要】本发明总体上涉及一种免疫治疗组合物。更具体地说，本发明涉及一种与患有花生过敏或对其他树坚果过敏的受试者中的T淋巴细胞发生免疫相互作用的免疫治疗组合物。这种组合物优选地与患有对Ara h 1和/或Ara h 2过敏原的过敏症的受试者中的T细胞发生免疫反应。本发明的组合物可用于治疗性或预防性治疗特征在于对花生、Ara h1和/或Ara h 2或其衍生物或同系物的异常、不当或其他方面不需要的免疫应答的病状。
【专利说明】新型免疫治疗组合物及其用途 发明领域
[0001] 本发明总体上涉及一种免疫治疗组合物。更具体地说，本发明涉及一种与患有花 生过敏或对其他树坚果过敏的受试者中的T淋巴细胞发生免疫相互作用的免疫治疗组合 物。这种组合物优选地与对Ara h 1和/或Ara h 2过敏原过敏的受试者中的T细胞发生免疫 反应。本发明的组合物可用于治疗性或预防性治疗特征在于对花生、Ara hi和/或Ara h 2 或其衍生物或同系物的异常、不当或其他方面不需要的免疫应答的病状。
[0002] 发明背景
[0003] 作者在此说明书中提及的出版物的书目细节按字母顺序收集在本说明书的末尾。
[0004] 本说明书中对任何现有技术的提及不是、并且不应被当做是承认或任何形式的暗 示，即承认或暗示这样的现有技术形成了普通公知常识的一部分。
[0005] 花生过敏是危及生命且不能治愈的病症，影响大约1%的普通人群(侯赛因等人， 美国皮肤病学会杂志66(1) :136-43，2012,伯克斯，柳叶刀371(9623): 1538-46,2008 (Husain et al.J Am Acad Dermatol.66( I)：136-43,2012,Burks, Lancet.371(9623)： 1538-46，2008))。花生过敏的特征在于过敏反应的突然发作，其可能在暴露于微量花生蛋 白时发生(赫里哈尼等人，变态反应与临床免疫学杂志100:596-600，1997;庞弗里，变态反 应和免疫学的研究现状4(4): 285-90，2004(Hourihane et al ·，J Allergy Clin Immunol 100：596-600,1997；Pumphrey,Current Opinion in Allergy&Immunology.4(4):285-90, 2004))。花生诱导的过敏反应最常与死亡率或危及生命的特征相关联(博克等人，变态反应 与临床免疫学杂志 119(4):1016-8,2007;伯克斯 2008,同上（Bock et al J Allergy Clin Immunol. 119(4): 1016-8，2007 ;Burks 2008，supra))。花生蛋白经常隐藏在表面安全的食 物来源内，使得在5年时间内多达50%的患者与花生蛋白发生偶然接触（西歇雷尔等人，儿 科学 102:e6，1998(Sicherer et al. ,Paediatrics 102:e6，1998))。并不意外的是，花生和 树坚果过敏症与受害者和看护者的重大心理发病率相关联，这与患有诸如类风湿关节炎的 慢性衰弱疾病的患者所遭受的类似(普里米等人，临床与实验变态反应30:1135-43，2000; 肯普等人，澳大利亚医学杂志 188(9) :503_4,2008(Primeau et al.，Clin Exp Allergy 30:1135-43，2000;Kemp et al .Med. J.Aust. 188(9):503-4,2008))。尽管治愈对于去除造 成死亡率的一个原因的花生和树坚果过敏是迫切的，但也有必要消除花生过敏受试者所承 受的长期心理负担。
[0006] 迄今为止，在针对花生过敏的免疫疗法方面做出的努力成果极其有限。纳尔逊等 人已经证明可使用利用未分级花生提取物的急速免疫疗法方案来诱导花生的临床脱敏，但 在维持给药的过程中这种临床脱敏作用在约一半的受试者中消失了，另外注射与建立期与 维持期过程中大部分受试者的过敏反应的频繁发作相关联(纳尔逊等人，变态反应与临床 免疫学杂志 99 : 744-51，1997 (Nelson et al ·，J Al lergy Cl in Immunol 99:744-51， 1997))。奥本海默(Oppenheimer)等人在他们的研究中证实了相似的发现，也显示利用未分 级花生提取物的主动疗法与全身性过敏反应的高发率相关联。在将花生提取物给予安慰剂 随机的受试者导致其死亡之后终止那项研究中的数据收集，这突出了这种病状的危险性质 (奥本海默等人，变态反应与临床免疫学杂志90:256-62，1992(0ppenheimer et al.，J Allergy Clin Immunol 90:256-62,1992))。使用完整花生粉的口服免疫疗法的最近研究 鼓励脱敏是可行的，但观察到的不良反应突出了主要的安全隐患(霍夫曼等人，变态反应与 临床免疫学杂志124，286，2009;琼斯等人，变态反应与临床免疫学杂志24，292，2009;克拉 克等人，变态反应64，1218,2009;瓦什尼等人，变态反应与临床免疫学杂志127(3):654-60， 2011;瓦什尼等人，变态反应与临床免疫学杂志124(6):1351-2,2009;安尼诺斯图等人，临 床与实验变态反应41 (9): 1273-81，2011;艾伦和奥赫希尔，临床与实验变态反应41 (9): 1172-4,2011;于等人，变态反应与免疫学国际档案159(2): 179-182,2012;斯亚咖依等人， 变态反应与临床免疫学杂志126(1) :31-2,2010;布朗成等人，变态反应与临床免疫学杂志 126(1):83-91,2010(Hofmann et al.J.Allergy Clin.Immunol.124,286,2009；Jones et al.J.Allergy Clin.Immunol.24,292,2009;Clark et al.Allergy 64，1218,2009; Varshney et al.J Allergy Cl in Immunol·127(3):654-60，2011;Varshney et al.J Allergy Clin Immunol·124(6):1351-2，2009;Anagnostou et al.Clin Exp Allergy.41 (9):1273-81,2011；Allen&0/Hehir.Clin Exp Allergy.41(9)：1172-4,2011；Yu et al.Int Arch Allergy Tmmunol.159(2)：179-182,2012；Thyagarajan et al.J Allergy Clin Tmmunol.126(1):31-2,2010；Blumchen et al.J Allergy Clin Tmmunol.126(1)： 83-91，2010))。即使排除有重度症状或哮喘倾向的儿童，但两项研究报道了过敏发作，一个 病例在初始食物激发期间（克拉克等人，变态反应64,1218,2009(Clark et al.Allergy 64，1218,2009))，另一个病例在治疗先前没有经历过敏反应的儿童期间（霍夫曼等人，变态 反应与临床免疫学杂志 124,286,2009(Hofmann et al.J.Allergy Clin. Immunol .124， 286.2009) )。
[0007] 克服与过敏原免疫疗法相关联的发病率的新策略的发展取决于对成功免疫疗法 的免疫学基础及其副作用的准确理解。长久以来已经确立了过敏原免疫疗法所引起的发病 率是由于IgE的交联，而且这种作用不是这种治疗起效所必需的（利特温等人，变态反应与 免疫学国际档案87:361-61，998(Litwin et al·，Int Arch Allergy Appl Immunol87: 361-61，998))。还已知的是，常规(皮下注射或舌下或口服未分级过敏原提取物)免疫疗法 产生耐受性的关键作用之一是其能够将主要的特异性T细胞表型从Th2变为调节性表型。这 些调节性T细胞通过产生抗炎细胞因子IL-10和/或TGF起作用β。（阿迪斯和阿迪斯，变态反 应与临床免疫学杂志123 : 735-46，2009 ;阿迪斯和阿迪斯，自然综述：药物发现8 : 645-60.2009;阿迪斯和阿迪斯，变态反应与临床免疫学杂志127 :18-27，2011 (Akdis&Akdis，J Allergy Clin ImmunoI·123:735-46，2009;Akdis&Akdis，Nature Reviews：Drug Discovery.8:645_60.2009;Akdis&Akdis，J Allergy Clin Immunol.l27:18_27,2011))。
[0008] 抗体应答和淋巴细胞应答的关键区别在于抗原识别，抗体依赖分子三级结构识别 构象B细胞表位，而⑶4+T细胞识别短的线性肽。抗原识别的这种差异是许多新免疫疗法策 略的基础，包括基于T细胞表位、B细胞表位突变体和改变肽配体来使用肽(罗兰德等人，药 理学与治疗学121:273-284,2009(1?〇11311(16七31.?1^^^(3〇1(^7&1116瓜？6扯。8 121:273- 284.2009) )。此类方法均取决于分子三级结构的改变或缺失，这样IgE交联和效应细胞活化 消失。肽免疫疗法是存在功效证据的方法，对于猫毛过敏与蜂毒过敏都有记录。三项不同研 究显示表明，在不存在任何系统性副作用的情况下，可使用含有T细胞表位的序列针对主要 蜂毒过敏原磷脂酶A2(PLA2)实现临床和免疫耐受(穆勒等人，变态反应与临床免疫学杂志 101:747-54，1998;塔尔齐等人，临床与实验变态反应36:465-74，2006;费尔拉斯等人，变态 反应与临床免疫学杂志111 :854-61，2003(Muller et al. J Allergy Clin Immunol .101: 747-54,1998；Tarzi et al.Clin Exp Allergy.36：465-74,2006；Fellrath et al.J Allergy Clin Immunol · 111 :854-61，2003)，而一些研究已经证明，基于主要猫过敏原Fel dl的结构的肽可用于诱导减弱的临床反应(诺曼等人，美国呼吸与重症护理医学154:1623-8，1996;马克特等人，变态反应与临床免疫学杂志101:506-13，1998;佩内等人，变态反应与 临床免疫学杂志102:571-8，1998;奥德菲尔德等人，柳叶刀360:47-53，2002;亚历山大等 人，临床与实验变态反应35:52-8，2004;亚历山大等人，变态反应60:1269-74，2005 (Norman et al.,Am J Respir Crit Care Med 154：1623-8,1996；Marcotte et al.,J Allergy Clin Immunoll01:506_13，1998;Pene et al.，J Allergy Clin Immunoll02:571_8，1998; Oldfield et al.Lancet 360:47-53,2002；Alexander et al.Clin Exp Allergy 35:52-8,2004;Alexander et al.Allergy 60:1269_74,2005))。最近，IIa期试验确认了来自Fel dl的七肽混合物（Toleromune猫.◎，英国牛津切尔卡西亚公司（Toleromune Cat?，Cicassia Ltd.，0xford，UK)的安全性、耐受性和潜在功效(沃尔姆等人，变态反应与临床免疫学杂志 127:89-97,2011(Worm et al.J Allergy Clin Immunol.l27:89-97,2011))，同时IIb期试 验正在进行中（莫达维尔和拉尔克，变态反应66:784-91，2011;沃尔姆等人，调研药物专家 评论22(10) :1347-1357，2013(Moldaver&Larche. AlIergy .66 :784-91，2011; Worm et al .Expert Opin· Investig.Drugs.22( 10): 1347-1357,2013))。发展此类策略的关键是保 留T细胞表位，这样可诱导T细胞表型改变。
[0009] 能够直接结合到MHC II类分子上的能力使得肽可由非专业或不成熟的APC呈递， 而无需促进诱导应答性T细胞（莫达维尔和拉尔克，变态反应66:784-91，2011 (Moldaver& Larche,Allergy 66:784-91，2011))和/或表达MHC II类的其他CD4+T细胞中的耐受性、无 反应性和/或抑制活性的促炎性和共同刺激性信号。这还允许肽以比从整个分子加工的肽 更高的频率呈递(圣安布罗焦等人，美国科学院院报，1999,96:15056-61(3 &1^&1111^(^丨〇6七 al.Proc Natl Acad Sci U S A，1999,96:15056-61))，并且因为它们还比整个过敏原更安 全，肽可以更高浓度提供，因此更有效地复极化T细胞应答。
[0010] 重要的是，靶向特异于主要过敏原的显性T细胞表位的T细胞可改变对完整过敏原 提取物的应答(连锁抑制）。报道在鼠过敏模型中获得肽免疫疗法成功的许多研究表明，给 予主要过敏原的显性T细胞表位肽不仅诱导对这些肽的耐受性还诱导对纯化过敏原和完整 过敏原提取物的耐受性(杨等人，临床与实验变态反应40(4):668-78,2010;吉富町等人，肽 科学杂志13(8) :499-503，2007;马拉苏埃拉等人，分子免疫学杂志45(2) :438-45，2008;鲁 帕等人，变态反应67(1) :74-82,2012;霍因等人，实验医学杂志178(5): 1783-8,1993;哈勒 等人，疫苗21(5-6):549-61，2003(Yang et al.Clin Exp Allergy 40(4):668-78,2010; Yoshitomi et al.J Pept Sci.13(8):499-503,2007；Marazuela et al.Mol Tmmunol.45 (2):438-45,2008；Rupa et al.Allergy.67(I)：74-82,2012；Hoyne et al.J Exp Med.178 (5)：1783-8,1993；Ηβ11 et al.Vaccine.21(5-6)：549-61,2003))〇
[0011] 因此，存在鉴别主要花生过敏原，以及进一步地鉴别这些过敏原的T细胞表位两者 的需要。这些T细胞表位的鉴别、表征和分析对于发展特定的免疫治疗方法学或预防方法学 是关键的。为此，尽管Ara h 1和/或Ara h 2花生过敏原分子之前已成为分析的主题，但T细 胞核心表位区的鉴别是开发有效疫苗所必须的。
[0012] 在进行本发明的工作中，已鉴别出显性HLA简并Ara h 1和/或Ara h 2核心T细胞 表位区。这组核心T细胞表位区的独特之处在于其高功效水平。不同于之前研究的仅基于其 表现一定T细胞反应性水平的能力而被鉴别的20mer Ara h 1和/或Ara h 2肽，已经鉴别出 一组选定的核心T细胞表位区，这组核心T细胞表位区相对于其他Ara h 1和/或Ara h 2肽 片段是免疫显性的，并且由于其结合至两种或更多种HLA类型也是HLA简并的。再进一步，这 些T细胞表位核心区中的许多由HLA-DQ分子呈递。HLA-DQ分子在混合种群中比HLA-DR分子 更保守。因此，在HLA-DQ上呈递的肽实现更广泛的群体覆盖。
[0013] 在再进一步的研究中还确定的是，七个这些含有Ara h 1和Ara h 2T细胞表位两 者的肽的特定亚组提供特别有效的免疫效果。因此，对这个独特有效群组的肽的鉴别促进 了用于治疗以下病状的特别有效的治疗性预防方法的发展，所述病状特征在于对Ara hi 和/或Ara h 2或其衍生物或同系物、其他树坚果过敏、或含有Ara h 1和/或Ara h 2分子的 组合物诸如食物中的过敏原的异常、不当或其他方面不需要的免疫应答。

【发明内容】

[0014] 贯穿本说明书及其后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语"包括 (comprise)"以及变型诸如"包括(comprises)"或"包括(comprising)"应当被理解成是指 包含一个提及的整体或步骤或者多个整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤或者 多个整体或步骤的组。
[0015] 如在此所使用的，术语"源自"应被理解为表示具体整体或整体组来源于指定物 种，但不一定直接获自指定来源。此外，如在此使用的，单数形式"一种(a)"、"一种(an)"以 及"该"包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。
[0016] 除非另外定义，在此所使用的全部技术术语和科学术语具有与本发明所属领域之 内的普通技术人员通常所理解的相同的意思。
[0017] 本说明书含有使用程序PatentIn版本3.5制作的氨基酸序列信息，该信息在此于 参考书目后示出。每个氨基酸序列在序列表中以数字指示符〈210>继之以序列标识符（例 如，〈210>1、〈210>2等)来标识。每个序列的长度、序列类型(蛋白质等)生物体来源分别由数 字指示符字段〈211>、〈212>和〈213>中提供的信息来指示。说明书中所提及的氨基酸序列由 指示符SEQ ID NO:继之以序列标识符(例如，SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2等)来标识。说明书 中所提及的序列标识符与序列表中数字指示符字段〈400>继之以序列标识符(例如，〈400> 1、〈400>2等）中提供的信息相关联。即，如在本说明书中所详述的SEQ ID NO: 1与在序列表 中指不为〈400>1的序列相关。
[0018] 本发明的一个方面涉及一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含来自由以下 各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的至少五个：
[0019] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0020] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0021] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0022] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0023] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0024] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0025] (vii)LRPXEQHLM(SEQ ID NO：7)
[0026] (viii)ENNQRXMXEA(SEQ ID N0：8)
[0027] 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸，并且所述组合物包 含选自SEQ ID N0S: 1-6的至少一个T细胞表位区和选自SEQ ID N0S:7-8的至少一个T细胞 表位区。
[0028] 在另一个方面中，所述LRPXEQHLM为LRPSEQHLM(SEQ ID N0:137)。
[0029] 在又另一个方面中，所述ENNQRXMXEA为ENNQRSMSEA(SEQ ID N0:138)。
[0030] 根据本发明的这些方面和实施例，所述组合物包含所述T细胞表位区中的至少6 个。
[0031] 在另一个方面中，所述组合物包含所述T细胞表位区中的至少7个。
[0032] 在又另一个方面中，所述组合物包含所述8个T细胞表位区中的每个。
[0033] 在另一个方面中，在此提供一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含来自由 以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的每个：
[0034] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0035] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0036] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0037] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0038] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0039] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0040] (vii)LRPXEQHLM(SEQ ID NO：7)
[0041] (viii)ENNQRXMXEA(SEQ ID N0：8)
[0042] 或其功能性衍生物或同系物，其中所述残基X为半胱氨酸或丝氨酸。
[0043] 在又另一个方面中，在此提供一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含来自 由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的每个：
[0044] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0045] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0046] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0047] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0048] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0049] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0050] (vii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：137)
[0051 ] (viii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：138)
[0052] 或其功能性衍生物或同系物。
[0053] 在相关的方面中，本发明涉及一种包含一种或多种肽的免疫调节组合物，这些肽 中的每个的长度多达60个连续的氨基酸，并且这些肽包含上文所详述的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区组合中的每个。
[0054]在另一个方面中，本发明涉及一种包含一种或多种肽的免疫调节组合物，这些肽 中的每个的长度多达60个连续的氨基酸，并且这些肽包含来自由以下各项组成的清单的 Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的每个：
[0055] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0056] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0057] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0058] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0059] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0060] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0061 ] (vii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：7)
[0062] (viii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：8)
[0063] 或其功能性衍生物或同系物。
[0064] 在又另一个方面中，所述肽或T细胞表位区当呈递至从患有特征在于对Ara hi和/ 或Ara h 2或对存在于包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物诸如食物中的过敏原的异常、不 需要或其他方面不当的免疫应答的病状的受试者分离的T细胞时能够修饰T细胞功能，但这 些肽不能结合Ara h 1特异性和/或Ara h 2特异性IgE。
[0065] 根据这些方面，所述肽选自由以下各项组成的清单：
[0066] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTIV(SEQ ID NO：11)
[0067] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0068] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0069] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0070] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0071] (vi)ANLRPXEQHLM(SEQ ID NO：15)
[0072] (vii)EFENNQRXMXEALQ(SEQ ID NO：16)
[0073] (viii)NNFGKLFEVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：17)
[0074] (ix)⑶VF頂PAAHPVAINASSE(SEQ ID N0:18)
[0075] (x)SQLERANLRPXEQHLM(SEQ ID NO：19)
[0076] (xi)ELNEFENNQRXMXEALQ(SEQ ID N0：20)
[0077] (xii)FQNLQNHRIV(SEQ ID N0：21)
[0078] (xiii)RIVQIEAKPNTLV(SEQ ID N0：22)
[0079] (xiv)ENNEGVIVKVSKE(SEQ ID N0：23)
[0080] (xv)EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：24)
[0081] (xvi)EFENNQRXMXEALQQI(SEQ ID N0：25)
[0082] (xvii)NNFGKLFEVKPDKKNPQLQD(SEQ ID N0：26)
[0083] (xviii)ELNEFENNQRXMXEALQQI(SEQ ID N0：27)
[0084] (xx)WSTRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID N0：28)
[0085] (xxi)⑶VF頂PAAHPVAINASS(SEQ ID N0:29)
[0086] 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸。
[0087] 在一个实施例中，所述残基X为丝氨酸。
[0088]在另一个方面中，所述肽选自：
[0089] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0090] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0091] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0092] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0093] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0094] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ ID N0：31)
[0095] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ ID N0：32)
[0096] (viii)EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID N0：24)
[0097] (ix)EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0：33)
[0098] 或其功能性衍生物或同系物。
[0099] 在另一个方面中，所述免疫调节组合物包含来自由以下各项组成的清单的Ara hi 和Ara h 2T细胞肽中的每个：
[0100] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)；
[0101] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)；
[0102] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:34#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0 :24);
[0103] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID N0：13)；
[0104] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID N0：14)；
[0105] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ ID N0:31);以及
[0106] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ ID N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)。
[0107] 或其功能性衍生物或同系物。
[0108] 在又另一个方面中，本发明人已设计出一个优选的七种肽的组，这些肽中的五种 包含Ara h IT细胞表位且这些肽中的两种包含Ara h 2T细胞表位，当一起给予时这些肽特 别有效地起作用从而诱导脱敏或耐受并且由此预防性地或有疗效地治疗对包含Ara h 1 和/或Ara h 2的组合物诸如食物的超敏反应。这些肽为：
[0109] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0110] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0111] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:4#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0:24)
[0112] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0113] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0114] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ NO：31)
[0115] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)
[0116] 在仍然又另一个方面中，在此提供一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含 来自由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽中的每个：
[0117] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0118] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0119] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:4#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0:24)
[0120] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0121] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0122] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ NO：31)
[0123] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)
[0124] 在仍然又另一个方面中，在此提供一种组合物，该组合物包含来自由以下各项组 成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽中的每个：
[0125] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTIV(SEQ ID NO：11)
[0126] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：30)
[0127] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:4#P/SEVKPDKKNPQLD(SEQIDN0:24)
[0128] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0129] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0130] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ NO：31)
[0131] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)
[0132] 当给予患有特征在于Ara h I和/或Ara h 2超敏或对包含Ara h I和/或Ara h2的 组合物超敏的病状的受试者时，这些肽能够减轻所述超敏。
[0133] 本发明涉及一种包含上文所定义的肽的组合物。但应当理解，主题组合物可包含 另外的组分，诸如另外的肽。可包含在组合物中的其他肽的实例包括但不限于：
[0134] (i)ALMLPHFNSKAMVIVVV(SEQ ID NO：34)
[0135] (ii)NNFGKLFEVKPDKKNPQ(SEQ ID N0：35)
[0136] (iii)SQLERANLRPXEQ(SEQ ID NO：36)
[0137] (iv)ELNEFENNQRXM(SEQ ID NO：37)
[0138] (v)NNFGKLFEVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：38)
[0139] (vi)NNFGKLFEVKPDKKNPQL(SEQ ID N0：40)
[0140] (vii)SQLERANLRPXEQH(SEQ ID NO：41)
[0141] (viii)KAMVIVVVNKGTGNLELVAV(SEQ ID NO：42)
[0142] (ix)RELRNLPQQXGLRA(SEQ ID N0：43)
[0143] (x)KAMVIVVVNKG(SEQ ID N0：44)
[0144] (xi)AMVIVVVNKGTGNLELV(SEQ ID NO：45)
[0145] (xii)VVNKGTGNLELVAVRK(SEQ ID N0：46)
[0146] 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸。
[0147] 在另一个方面中，本发明提供一种核酸分子组合物，该核酸分子组合物包含对编 码上文所定义的T细胞表位和肽或其衍生物、同系物或类似物的序列进行编码或与之互补 的一种或多种核酸分子。
[0148] 在另一个方面中，本发明提供一种用于治疗和/或预防受试者的病状的方法，该病 状的特征在于对Ara h 1和/或Ara h 2或对包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物中的过敏 原的异常、不需要或其他方面不当的免疫应答，所述方法包括在足以消除或减少所述受试 者中针对所述Ara h 1和/或Ara h 2或其他过敏原的T细胞的存在或功能的条件下向所述 受试者给予有效量的如上文所定义的免疫调节组合物，持续一段时间。
[0149] 在又一个方面中，所述病状是对花生或含有Ara h 1和Ara h 2或者Ara h ISAra h 2类似分子的树坚果，诸如榛子、杏仁或巴西坚果超敏。
[0150]在另一个方面中，所述方法使得对Ara h 1和/或Ara h 2或所述组合物的其他过 敏原脱敏或诱导对这些的免疫耐受。
[0151]在另一个方面中，所述脱敏或耐受通过诱导T细胞无反应性或凋亡来实现。
[0152] 在又另一个方面中，所述脱敏或耐受通过诱导Ara h 1或Ara h 2特异性Treg细胞 来实现。
[0153] 本发明的另一个方面涵盖如上文所定义的免疫调节组合物在制造用于治疗哺乳 动物的病状的药物中的用途，该病状特征在于对Ara h 1和/或Ara h 2的异常、不需要或其 他方面不当的免疫应答。
[0154] 优选地所述病状是对花生或含有Ara h 1和/或Ara h 2或者Ara h 1和/或Ara h 2类似分子的树坚果诸如榛子超敏。
[0155] 在又另一个方面中，本发明涵盖一种包含如上文所定义的组合物以及一种或多种 药学上可接受的载体和/或稀释剂的疫苗。所述组合物被称为活性成分。
[0156] 本发明的又一个方面涉及如上文所定义的当用于本发明的方法时的组合物。
[0157] 附图简要说明
[0158] 图1是对肽特异性PBMC T细胞的CFSE筛选的图形表示：（A)来自花生过敏受试者的 与完整花生提取物或Vax(7肽编译)一起孵育的CFSE标记的PBMC。方框示出了活化增殖CD4+ T细胞(CD25+CFSE10)的百分比。SI指示相比无抗原对照的T细胞活化的成倍增加。（B)响应 于7名受试者（均具有阳性SI >2.5)中的Vax(7肽编译）的花生过敏供体PBMC CD4+T细胞活 化和增殖的确认。
[0159] 图2是嗜碱性粒细胞活化检验(BAT)的图形表示：（A)示出来自花生过敏受试者的 与完整花生提取物或Vax(7肽编译）一起孵育的血液的FACS图。嗜碱性粒细胞被标识为 IgEhi细胞(方框，第一个图）且活化嗜碱性粒细胞被标识为CD63hi (方框，第2-4个图）。（B) BAT数据；以及(C)来自与增大浓度(μg/ml)的完整花生提取物或Vax-起孵育后的花生过敏 受试者的组胺释放数据(通过商业试剂盒测量）。阳性对照是抗-IgE和fMLP。完整花生提取 物致使高水平的嗜碱性粒细胞活化和组胺释放，但Vax不会。数据代表所测试的14名花生过 敏受试者。
[0160]图3是用于鉴别主要花生过敏原Ara h 1和Ara h 2的显性表位的方法的示意性表 不。
[0161] 图4是设计用来检测显性20-mer肽诱导花生过敏供体的完整PBMC中的T细胞增殖 的能力的7天CFSE测定的图形表示。方框中的数字指示分裂(CFSE-low)CD4+T细胞的％，SI =相比未刺激对照的分裂细胞的成倍增加。
[0162] 图5是示出了T细胞系对Ara h 120-mer肽的应答频率的图形表示。方框指示最终 选择(基于多项参数)的9种显性20-mer。
[0163] 图6是对显性Ara h 120-mer的PBMC筛选的图形表示。测试显性20-mer靶向来自花 生过敏供体的PBMC中的特异性⑶4+T细胞的能力。
[0164] 图7是示出了T细胞系对Ara h 220-mer肽的应答频率以及每20-mer的特异性TCL 数目的图形表示。方框指示基于多项参数而最终选择的4种显性20-mer肽。
[0165] 图8是核心T细胞表位作图结果的图形表示。
[0166] 图9是显性Ara h 1和Ara h 2T细胞表位的HLA限制的图形表示。
[0167] 图10是其中所选半胱氨酸残基被丝氨酸残基置换的肽的T细胞识别的图形表示。 如通过3H胸苷摄取测定的响应于"亲本"（含半胱氨酸的）或丝氨酸取代的Ara h 2肽的TCL 增殖。图示出了针对各个表位的代表性TCL(平均cpm重复孔+SD) ^Ara h 2(32-44) ;B)Ara h 2(37-47);C)Ara h 2(91-102);D)Ara h 2(95-107);E)Ara h 2(128-141)。
[0168] 图11是响应于其中所选半胱氨酸残基被丝氨酸残基置换的肽的T细胞细胞因子产 生的图形表示。通过ELISP0T测定的响应于"亲本"或半胱氨酸取代的Ara h 2肽的细胞因子 分泌。图示出了针对各个表位的代表性TCL(平均重复孔斑点+SD)。几-4,黑条；IL-5,阴影 条；IFN-γ，白条；A)Ara h 2(32-44);B)Ara h 2(37-47);C)Ara h 2(91-102);D)Ara h 2 (95-107);E)Ara h 2(128-141)。
[0169] 图12是对肽库与完整花生的PBMC应答的图形表示。各个库中所包含的肽在表23中 示出。P值示出威尔科克森(Wilcoxon)配对符号秩检验(用于非参数数据）。
[0170] 图13是对肽库与完整花生的PBMC应答的图形表示。各个库中所包含的肽在表23中 示出。P值示出威尔科克森配对符号秩检验(用于非参数数据）。
[0171] 图14是包括对优选的7肽库的PBMC T细胞应答的图形表示。统计:用于非参数数据 的克鲁斯卡尔-瓦利斯二氏检验与用以测试多个组之间的差异的事后校正。*由于在针对不 同库分析的不同群组中的不同受试者的应答量级的变化，而归一化为对完整花生的应答％ 的数据。
[0172] 图15是Ara h 2肽诱导的T细胞增殖抑制的图形表示。
[0173] 图16是Ara h 1肽诱导的抑制T细胞增殖的图示。
[0174]发明的具体说明
[0175] 本发明部分依据Ara h 1和Ara h 2表位组的鉴别，当以至少5个一组一起给予时， 这些表位产生的免疫效果比任何这些表位单独使用或与这些或其他Ara h 1或Ara h 2肽 的组合一起使用所产生的免疫效果更有效。具体地说，已确定的是，使用所有八个表位产生 特别且异常有效的功能结果，当这八个表位在此处例证的七肽背景下给予时尤其如此。这 种组合物的设计使得能够开发相比迄今可用的显著更有效的治疗性和预防性组合物和治 疗方法，用于诸如但不限于花生过敏的病状。
[0176] 因此，本发明的一个方面涉及一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含来自 由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的至少五个：
[0177] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0178] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0179] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0180] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0181] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0182] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0183] (vii)LRPXEQHLM(SEQ ID NO：7)
[0184] (viii)ENNQRXMXEA(SEQ ID N0：8)
[0185] 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸，并且所述组合物包 含选自SEQ ID N0S: 1-6的至少一个T细胞表位区和选自SEQ ID N0S:7-8的至少一个T细胞 表位区。
[0186] 在一个实施例中，所述LRPXEQHLM为LRPSEQHLM(SEQ ID N0:137)。
[0187] 在另一个实施例中，所述ENNQRXMXEA为ENNQRSMSEA(SEQ ID N0:138)。
[0188] 根据本发明的这些方面和实施例，所述组合物包含所述T细胞表位区中的至少6 个。
[0189] 在另一个实施例中，所述组合物包含所述T细胞表位区中的至少7个。
[0190] 在又另一个实施例中，所述组合物包含所述8个T细胞表位区中的每个。
[0191]根据此实施例，由此提供一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含来自由以 下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的每个：
[0192] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0193] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0194] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0195] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0196] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0197] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0198] (vii)LRPXEQHLM(SEQ ID NO：7)
[0199] (viii)ENNQRXMXEA(SEQ ID N0：8)
[0200] 或其功能性衍生物或同系物，其中所述残基X为半胱氨酸或丝氨酸。
[0201] 在另一个实施例中，在此提供一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含来自 由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的每个：
[0202] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0203] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0204] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0205] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0206] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0207] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0208] (vii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：137)
[0209] (viii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：138)
[0210]或其功能性衍生物或同系物。
[0211] 在相关的方面中，本发明涉及一种包含一种或多种肽的免疫调节组合物，这些肽 中的每个的长度多达60个连续的氨基酸，并且这些肽包含上文所详述的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区组合中的每个。
[0212] 根据此方面，本发明涉及一种包含一种或多种肽的免疫调节组合物，这些肽中的 每个的长度多达60个连续的氨基酸，并且这些肽包含来自由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的每个：
[0213] (i)FQNLQNHR(SEQ ID N0：1)
[0214] (ii)IVQIEA(SEQ ID NO：2)
[0215] (iii)NEGVIVKVSK(SEQ ID NO：3)
[0216] (iv)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0217] (v)EGALML(SEQ ID N0：5)
[0218] (vi)IMPAAHP(SEQ ID N0：6)
[0219] (vii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：7)
[0220] (viii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：8)
[0221] 或其功能性衍生物或同系物。
[0222] 在本发明前述方面的另一个实施例中，所述肽或T细胞表位区当呈递至从患有特 征在于对Ara hi和/或Ara h 2或对存在于包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物诸如食物中 的过敏原的异常、不需要或其他方面不当的免疫应答的病状的受试者分离的T细胞时能够 修饰T细胞功能，但这些肽不能结合Ara h 1特异性和/或Ara h 2特异性IgE。
[0223] 不以任何方式限制本发明，花生含有许多蛋白质，其中在SDS-PAGE上可见的特征 带的数目取决于所使用的方法。在高压液相色谱法之后至多53个带是可见的(德容等人，临 床与实验变态反应28:743-51，1998(de Jong et al.，Clin Exp Allergy 28:743-51， 1998))。这些蛋白质中仅两种使用标准准则证实分类为主要过敏原，由此IgE反应性在超过 50%的花生过敏群体中出现;这些蛋白质被称为Ara h 1和Ara h 2(伯克斯等人，变态反应 53:725-30，1998(Burks et al. ,Allergy 53:725-30,1998))。尽管许多研究表明这两种过 敏原中Ara h 2是更强的（布兰克等人，临床与实验变态反应2009;39(8) :1277-85;科佩尔 蒙等人，临床与实验变态反应2004; 34(4): 583-90;帕尔默等人，临床免疫学2005; 115(3): 302-12(Blanc et al.Clin Exp Allergy.2009；39(8)：1277-85；Koppelman et al.Clin Exp Allergy.2004；34(4):583-90;Palmer et al.Clin Immunol.2005；115(3):302-12)), Ara h I也在花生过敏的发病机理中起到主要作用，其中大量研究报道了症状严重程度与 针对Ara h 1和Ara h 2两者的IgE反应性之间的强关联（古拉曼等人，变态反应2012;67 (2): 242-7;蒋等人，儿科变态反应和免疫学2009; 21 (2Pt 2): Θ429-38;阿斯兰拿等人，变态 反应2010,65(9): 1189-95;木乌拉等人，变态反应与免疫学国际档案2011; 156(3) :282-90; 林等人，微生物学和免疫学杂志2012;皮特斯等人，临床与实验变态反应2007;37(I): 108-15(Glaumann et al·AlIergy·2012;67(2):242-7;Chiang et al.Pediatr Allergy Immunol.2009;21(2Pt 2):e429_38;Asarnoj et al.Allergy.2010,65(9):1189_95; Moverare et al.Int Arch Allergy Immunol2011;156(3):282-90;Lin et al.J Microbiol Immunol Infect.2012；Peeters et al.Clin Exp Allergy.2007；37(1)：108-15)) Jra h I是花生中最丰富的主要过敏原，占总花生蛋白的12%-16%(科佩尔蒙等人， 变态反应2001; 56(2): 132-7(Koppelman et al .Allergy · 2001; 56(2): 132-7)) 〇
[0224] 仍然不以任何方式限制本发明，Ara h 1过敏原为7S种子贮藏糖蛋白或豌豆球蛋 白。花生中Ara h 1的浓度随着核仁尺寸而增大(4-16mg提取的Ara hl/g花生），因此蛋白质 的表达与花生成熟度相关联(波梅斯等人，2006,临床与实验变态反应36(6) :824-30(P〇m6s et al.2006，Clin.Exp.Allergy 36(6):824_30))。厶抑h 1是通过单体远端处的疏水区保 持在一起的同源三聚体，其中定位有大多数IgE结合B细胞表位。每个64.5kD单体具有由两 个核心β-桶组成的cup in基序，每个β-桶与α-螺旋的环结构域缔合。
[0225] Ara h 2是已被鉴别为羽扇豆球蛋白种子贮藏家族成员的糖蛋白。Ara h 2的20% 分子量代表碳水化合物侧链，并且其作为双联体在SDS-PAGE上迀移，平均分子量为17.5kDa (伯克斯等人，变态反应与免疫学国际档案119:165-172，1992(Burks et al，Int Arch Allergy Immunolll9:165_172，1992))。基于Ara h 2与6/6测试血清的反应性，Ara h 2被 表征为主要过敏原(伯克斯等人，1992,同上(Burks et &1，1992,8卯瓜））。其他人也证实了 Ara h 2的重要性;克拉克(Clarke)证实，依据对粗花生提取物的蛋白质印迹法，71%的受 试者具有特异于Ara h 2的IgE。克勒贝尔-扬克(Kleber-Janke)等人已证实依据蛋白质印 迹法85 %的受试者具有针对其重组形式的IgE，而德容的小组已表明其小组中的约78 %表 现出特异于纯化天然Ara h 2的IgE(克拉克等人，临床与实验变态反应28:1251-7,1998;德 容等人，1998同上；克勒贝尔-扬克等人，变态反应与免疫学国际档案119: 265-274,1999 (Clarke et al·，Clin Exp Allergy28:1251-7,1998;de Jong et al,1998supra；Kleber-Janke et al·，Int Arch Allergy Immunolll9:265-274,1999))〇
[0226] 提及"Ara h Γ应当理解成提及此分子的所有形式，包括提及可由Ara h ImRNA的 选择性剪接所产生的任何同工型，或Ara h 1的功能性突变体或多态形式。这应再进一步理 解为延伸至由Ara h 1基因编码的任何蛋白质，任何亚单元多肽，诸如可能会产生的前体形 式，无论作为单体、多聚体还是融合蛋白存在。还包括提及Ara h 1类似物或等效物，这些可 能在出于生成诸如食品添加剂的产品的目的而合成生成天然包含Ara h 1的产品的情况下 出现。本发明因此提供T细胞表位和将其用于诊断和治疗特征在于对Ara h 1或Ara h 1类 似分子超敏(诸如花生过敏或树坚果过敏)或对存在于组合物诸如食物（该组合物也包含 Ara h 1)中的过敏原过敏的任何病状的方法。优选地，所述Ara h 1包含以SEQ ID N0:9列 出的序列，并且Ara h 2包含以SEQ ID N0:10列出的序列。
[0227] 提及"T细胞"应当理解成提及包含T细胞受体的任何细胞。在此方面，T细胞受体可 包含α、β、γ或δ链中的任何一个或多个。本发明并不旨在局限于T细胞的任何具体功能性子 类，但在优选实施例中，主题T细胞为T辅助细胞并且仍然更优选地为Th2型细胞和/STreg 细胞。在此方面，提及"修饰T细胞功能"应当理解成提及修饰T细胞能够执行的任何一种或 多种功能。例如，主题功能可以是增殖、分化或其他形式的细胞功能活动，诸如细胞因子产 生。在一个实施例中，主题功能活动是增殖。
[0228] 就从患有特征在于对Ara hi和/或Ara h 2或对包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合 物的异常、不需要或不当的免疫应答的病状的受试者分离的T细胞"功能修饰"而言，应理解 这不一定是提及修饰给定的生物样品中的全部T细胞的功能，而实际上可能是反映样品中 仅一些T细胞的功能修饰。例如，给定T细胞样品中仅一部分T辅助细胞可以在功能上响应于 与主题肽接触。这种部分应答应理解成在本发明的范围内。还应当理解，源自受试者的T细 胞可以是新鲜收获的T细胞或它们可以在测试之前已经历某种形式的体外或体内操作。例 如，T细胞系可以从细胞样品中产生，并且正是这些T细胞系随后形成根据本发明测试的源 自受试者的T细胞群。就主题功能活动是T细胞增殖来说，优选地如在此披露地进行T细胞增 殖测定。仍然更优选地，T细胞功能的主题修饰是诱导增殖。在此方面，提及"Ara h 1-反应 性"或"Arah 2-反应性"T细胞应当理解成提及在功能上分别响应于Ara h 1和/或Ara h 2T 细胞表位的HLA呈递的T细胞。类似地，提及"Ara h 1特异性"或"Arab 2特异性" IgE应当理 解成提及分别针对Ara h 1或Ara h 2B细胞表位的IgE。
[0229] 提及"异常、不需要或其他方面不当的"免疫应答应当理解成提及任何形式的生理 活性，其涉及一种或多种免疫细胞的活化和/或功能化，免疫细胞的活性的不当之处在于其 为不当的类型或进展至不当的程度。异常之处可能在于，根据已知的免疫学原理，其在应该 发生时不发生，或者其在不应发生时发生。在另一个实例中，免疫应答的不当之处可能在于 其为生理上正常的应答，但是不必要的和/或不需要的，诸如关于对无害的过敏原的I型超 敏反应所发生的。在本发明的上下文中，这种免疫应答可针对Ara h 1和/或Ara h 2或它可 针对与Ara h 1和/或Ara h 2-起存在于组合物中的不同过敏原。在不将本发明限于任一 种理论或作用模式的情况下，已确定的是，甚至在超敏反应针对Ara h 1和/或Ara h 2以外 的过敏原时，该过敏原存在于仍然包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物中，经由针对Ara h 1和/或Ara h 2的本发明方法的治疗仍然诱导Th2和Treg功能性的有益调节，使得所存在的 对无关过敏原的超敏仍然被减少。优选地所述免疫应答为花生超敏。
[0230] "花生超敏"意指诱导IgE介导的花生超敏的临床症状。然而，应当理解虽然临床症 状可能是明显的，但不是所有这样的个体必定会表现出使用Kallestad Allercoat EAST系 统（美国赛诺菲巴斯德公司（Sanofi-Pasteur Diagnostics，USA))测量的可检测水平的花 生特异性血清IgE，，不过这样的个体仍然应理解为落在表现出"花生超敏"的那些人的定义 的范围内。可替代地，试验可利用任何EAST、Pharmacia或UniCap系统或过敏原皮刺试验来 进行。提及"Ara h 1和/或Ara h 2超每女"应当理解成具有在对Ara h 1和/或Ara h 2蛋白质 的反应性的情形中相对应的含义。
[0231] 根据前述方面，所述肽选自由以下各项组成的清单：
[0232] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0233] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0234] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0235] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0236] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0237] (vi)ANLRPXEQHLM(SEQ ID NO：15)
[0238] (vii)EFENNQRXMXEALQ(SEQ ID NO：16)
[0239] (viii)NNFGKLFEVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：17)
[0240] (ix)⑶VF頂PAAHPVAINASSE(SEQ ID N0:18)
[0241] (x)SQLERANLRPXEQHLM(SEQ ID NO：19)
[0242] (xi)ELNEFENNQRXMXEALQ(SEQ ID N0：20)
[0243] (xii)FQNLQNHRIV(SEQ ID N0：21)
[0244] (xiii)RIVQIEAKPNTLV(SEQ ID N0：22)
[0245] (xiv)ENNEGVIVKVSKE(SEQ ID N0：23)
[0246] (xv)EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：24)
[0247] (xvi)EFENNQRXMXEALQQI(SEQ ID N0：25)
[0248] (xvii)NNFGKLFEVKPDKKNPQLQD(SEQ ID N0：26)
[0249] (xviii)ELNEFENNQRXMXEALQQI(SEQ ID N0：27)
[0250] (xx)WSTRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID N0：28)
[0251] (xxi)⑶VF頂PAAHPVAINASS(SEQ ID N0:29)
[0252] 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸。
[0253] 在一个实施例中，所述残基X为丝氨酸。
[0254] 优选地，所述肽选自：
[0255] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0256] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0257] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：4)
[0258] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0259] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0260] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ ID N0：31)
[0261] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ ID N0：32)
[0262] (viii)EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID N0：24)
[0263] (ix)EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0：33)
[0264] 或其功能性衍生物或同系物。
[0265] 在另一个实施例中，所述免疫调节组合物包含来自由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽中的每个：
[0266] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)；
[0267] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)；
[0268] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:34#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0 :24);
[0269] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID N0：13)；
[0270] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID N0：14)；
[0271] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ ID N0:31);以及
[0272] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ ID N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)。
[0273] 或其功能性衍生物或同系物。
[0274] 花生、Ara h 1和Ara h 2超敏(更一般地说，过敏原超敏）的减轻在下文将更加详 细地讨论。简单地说，然而，这可以采取使个体特异性地对Ara h 1和Ara h 2或更一般地说 对花生或其他蛋白质部分或完全脱敏或耐受的形式。
[0275] 提及"肽"包括提及肽、多肽或蛋白质或其部分。肽可以是糖基化的或非糖基化的 并且/或者可以含有一系列与蛋白质融合、连接、结合或以其他方式缔合的其他分子，诸如 氨基酸、脂质、碳水化合物或其他肽、多肽或蛋白质。下文中提及"肽"包括包含氨基酸序列 的肽以及与其他分子(诸如氨基酸、脂质、碳水化合物或其他肽、多肽或蛋白质)缔合的肽。
[0276] "衍生物"包括来自天然、合成或重组来源的片段、部分(part/portion)以及变体， 包括融合蛋白。部分或片段包括例如主题肽的活性区。衍生物可源自氨基酸的插入、缺失或 取代。氨基酸插入衍生物包括氨基和/或羧基端融合以及单个或多个氨基酸的序列内插入。 插入型氨基酸序列变体是将一个或多个氨基酸残基引入蛋白质中的预定位点的变体，不过 在所得产物的适合筛选下随机插入也是可能的。缺失型变体的特征在于将一个或多个氨基 酸从序列中去除。
[0277] 取代型氨基酸变体是序列中的至少一个残基已被移除并且在其位置处插入不同 残基的变体。取代型氨基酸变体的实例是保守性氨基酸取代。保守性氨基酸取代典型地包 括在下组内的取代:甘氨酸和丙氨酸;缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸;天冬氨酸和谷氨酸;天冬 酰胺和谷氨酰胺;丝氨酸和苏氨酸;赖氨酸和精氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。对氨基酸序 列的添加包括用其他肽、多肽或蛋白质融合。在一个实施例中，如在此所例证，半胱氨酸残 基被丝氨酸取代。
[0278] 主题肽的化学和功能性等效物应当理解为表现出这些分子的功能活性中的任何 一个或多个的分子并且可以源自任何来源，诸如以化学方式合成或经由诸如天然产物筛选 的筛选过程来鉴别。
[0279] 同系物包括源自除花生之外的品种的肽，诸如源自其他树坚果的肽。
[0280] 在此涵盖的类似物包括但不限于，对侧链的修饰，在肽、多肽、或蛋白质合成期间 并入非天然氨基酸和/或其衍生物，以及使用对蛋白质性分子或其类似物施加构象限制的 交联剂和其它方法。突变体包括表现出经过修饰的功能活性的分子(例如，表达一个或多个 T细胞表位但缺乏B细胞反应性的Ara h 1肽）。
[0281] 本发明所涵盖的侧链修饰的实例包括诸如通过以下方式修饰氨基：通过与醛反 应，接下来用NaBH4还原进行还原烷基化;用乙酰亚氨酸甲酯进行脒化；用乙酸酐进行酰化； 用氰酸酯对氨基进行氨甲酰化；用2,4,6_三硝基苯磺酸(TNBS)对氨基进行三硝基苄基化； 用琥珀酸酐和四氢邻苯二甲酸酐对氨基进行酰化；以及用吡哆醛-5-磷酸酯对赖氨酸磷酸 进行吡哆醛化，随后用NaBH 4还原。
[0282] 精氨酸残基的胍基可通过与诸如2,3_ 丁二酮、苯甲酰甲醛和乙二醛的试剂形成杂 环缩合产物来修饰。羧基可通过经由形成〇-酰基异脲随后衍生成例如相应的酰胺进行碳二 亚胺活化来修饰。巯基可以通过以下方法来修饰:诸如用碘乙酸或碘乙酰胺进行羧甲基化； 过甲酸氧化成磺基丙氨酸;与其他巯基化合物形成混合二硫化物;与马来酰亚胺、马来酸酐 或其他取代的马来酰亚胺反应;使用4-氯汞苯甲酸酯、4-氯汞苯磺酸酸、氯化苯汞、2-氯汞 基-4-硝基酚和其他汞剂形成汞衍生物;在碱性pH下用氰酸酯进行氨甲酰化。色氨酸残基可 通过例如，用N-溴代琥珀酰亚胺进行氧化或用2-羟基-5-硝基苄基溴或硫苯氯化物对吲哚 环进行烷基化来修饰。另一方面，酪氨酸可通过用四硝基甲烷进行硝化以形成3-硝基酪氨 酸衍生物来改变。
[0283] 组氨酸残基的咪唑环的修饰可通过用碘乙酸衍生物进行烷基化或用焦碳酸二乙 酯进行N-羧甲基化来实现。
[0284] 在蛋白质合成过程中并入非天然氨基酸和衍生物的实例包括但不限于，使用正亮 氨酸、4-氨基丁酸、4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸、6-氨基已酸、叔丁基甘氨酸、正缬氨酸、苯 基甘氨酸、乌氨酸、肌氨酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸、2-噻吩丙氨酸和/或氨基酸的D-异 构体。在此涵盖的非天然氨基酸的清单在表1中示出。
[0285] 表 1



[0290] 可以使用例如交联剂来稳定3D构象，使用诸如具有(CH2)n间隔基团（其中η= 1至η =6)的双官能亚氨酸酯、戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯的同双功能交联剂和通常含有诸如 N-羟基琥珀酰亚胺的氨基反应性部分以及另一种基团特异性反应性部分的异双功能试剂。
[0291] 有可能修饰根据本发明的肽的结构用于达成各种目的，诸如用于增大溶解度、提 高治疗或预防效果、增强稳定性或增加对蛋白质降解的抗性。可通过诸如氨基酸取代、缺失 或添加产生其中氨基酸序列被改变的经修饰的肽，从而修饰免疫原性和/或减少过敏原性。 类似地，可以将组分添加至本发明的肽中以产生相同结果。
[0292] 例如，可以对肽进行修饰以使其表现诱导T细胞无反应性的能力。在这种情况下， 可使用已知技术(例如取代每个残基并且确定T细胞反应性的存在与否）来确定用于T细胞 受体的关键结合残基。在一个实例中，显示对与T细胞受体反应所必需的那些残基可通过用 另一个氨基酸残基、优选类似的氨基酸残基置换必需氨基酸(保守取代)来修饰，这个氨基 酸残基的存在显示可改变T细胞反应性或T细胞功能。此外，对于T细胞受体相互作用并非必 需的那些氨基酸残基可以通过用另一个氨基酸置换来修饰，这另一个氨基酸的并入然后可 以改变T细胞反应性或T细胞功能，但不会例如消除与相关MHC蛋白质的结合。在又一个实例 中，可以产生表现正常T细胞结合但消除IgE结合的突变体肽。 「02931 元仿IlW俣夺袢取代诖怵干下丟2由.并日钮栝.

[0296] 此类修饰将促使产生落入如在此所定义的主题肽的"突变体"范围内的分子。"突 变体"应当理解为提及表现出一种或多种不同于非突变的肽对应物所表现的结构特征或功 能活动的妝。
[0297] 还可以对本发明的肽进行修饰以并入一种或多种由天然等位基因变异产生的多 态现象，并且可将非天然氨基酸或氨基酸类似物取代至这些肽内以产生落入本发明范围内 的修饰的肽。还可以通过已知技术与聚乙二醇(PEG)缀合来对肽进行修饰。还可以添加报道 基团以促进纯化并潜在地增加根据本发明的肽的溶解度。还可以使用其他熟知类型的修 饰，包括插入特异性内切蛋白酶切割位点、添加官能团或用疏水性更小的残基置换疏水性 残基，以及对编码本发明的肽的DNA的定点诱变，以引入可用于大范围的目的的修饰。以上 提及的对根据本发明的肽的各种修饰仅通过举例的方式提及并且仅旨在表示可以实现的 大范围的修饰。
[0298] 如上文所详述的，本发明提供保留与T细胞相互作用的全部或一些能力但表现出 部分或完全抑制、消除或以其他方式下调抗体反应性的肽。可通过任何适合的方法实现抗 体反应性的下调，这些方法将为本领域技术人员所熟知。例如，在B细胞表位由其线性氨基 酸序列定义的情况下，可以添加、缺失或取代一个或多个氨基酸残基以使得突变的线性序 列不同于天然存在的序列。在表位可另外地、或可替代地由构象表位定义的情况下，可以设 法通过破坏肽的2°结构或在同源二聚体或异源二聚体存在的情况下破坏肽的3°结构来破 坏那种构象。这可以例如通过破坏据知稳定2°和/或3°结构的键诸如二硫键的形成来实现。 就上文定义的T细胞表位来说，这些T细胞表位区不包含B细胞表位。
[0299] 在相关方面中，本发明人已设计出一个优选的七种肽的组，这些肽中的五种包含 Ara h IT细胞表位且这些肽中的两种包含Ara h 2T细胞表位，当一起给予时这些肽特别有 效地起作用从而诱导脱敏或耐受并且由此预防性地或有疗效地治疗对包含Ara h 1和/或 Ara h 2的组合物诸如食物的超敏反应。这些肽为：
[0300] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0301] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0302] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:4#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0:24)
[0303] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0304] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0305] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ NO：31)
[0306] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)
[0307] 因此，在优选的实施例中，在此提供一种免疫调节组合物，该免疫调节组合物包含 来自由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽中的每个：
[0308] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0309] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0310] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:4#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0:24)
[0311] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0312] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0313] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ NO：31)
[0314] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)
[0315] 在另一个方面中，在此提供一种组合物，该组合物包含来自由以下各项组成的清 单的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽中的每个：
[0316] (i)FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)
[0317] (ii)STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)
[0318] (iii)EVKPDKKNPQLQ(SEQIDN0:4#P/SEVKPDKKNPQLQD(SEQIDN0:24)
[0319] (iv)VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)
[0320] (v)VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)
[0321] (vi)ANLRPSEQHLM(SEQ NO：31)
[0322] (vii)EFENNQRSMSEALQ(SEQ N0:32)和/或EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID N0:33)
[0323] 当给予患有特征在于Ara h I和/或Ara h 2超敏或对包含Ara h I和/或Ara h 2 的组合物超敏的病状的受试者时，这些肽能够减轻所述超敏。
[0324] 本发明的肽可以通过重组或化学合成方式来制备。根据本发明的优选方面，在此 提供一种优先与来自患有花生超敏的个体的T细胞发生免疫反应的重组肽或其突变体，其 通过被编码本发明肽序列的载体转化的宿主细胞的表达来表达。可将肽与另一种肽、多肽 或蛋白质融合。可替代地，可通过化学合成技术，诸如通过梅里菲尔德(Merrifield)固相合 成程序来制备肽。此外，尽管以上所给出的序列的合成肽代表优选的实施例，但本发明还延 伸至天然存在的肽及其片段的生物上纯的制剂。"生物上纯的"意指如通过重量、活性或其 他适合的方式所确定的包含至少约60%、优选至少约70%、或优选至少约80%并且仍然更 优选至少约90 %或更多的制剂。
[0325] 因此本发明应当理解为涵盖包含如上文所定义的Ara h 1和/或Ara h 2的至少一 个T细胞核心表位区，连同其他氨基酸(可能是也可能不是天然存在的）或其他化学物质的 肽。在本发明的优选方面中，此类肽可包含Ara h 1和/或Ara h 2的一个或多个表位，这些 表位是T细胞核心表位区。具有Ara h 1和/或Ara h 2的一个或多个T细胞表位的肽是增加 治疗有效性所需要的。
[0326]如上文所详述的，本发明涉及一种包含上文所定义的肽的组合物。但应当理解，主 题组合物可包含另外的组分，诸如另外的肽。这些肽可涵盖例如核心最小表位的部分区域。 可替代地，它们可不包括如在此披露的T细胞表位的任何部分但可出于其他原因被并入。可 包含在组合物中的其他肽的实例包括但不限于：
[0327] (i)ALMLPHFNSKAMVIVVV(SEQ ID NO：34)
[0328] (ii)NNFGKLFEVKPDKKNPQ(SEQ ID N0：35)
[0329] (iii)SQLERANLRPXEQ(SEQ ID NO：36)
[0330] (iv)ELNEFENNQRXM(SEQ ID NO：37)
[0331] (v)NNFGKLFEVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：38)
[0332] (vi)NNFGKLFEVKPDKKNPQL(SEQ ID N0：40)
[0333] (vii)SQLERANLRPXEQH(SEQ ID NO：41)
[0334] (viii)KAMVIVVVNKGTGNLELVAV(SEQ ID NO：42)
[0335] (ix)RELRNLPQQXGLRA(SEQ ID N0：43)
[0336] (x)KAMVIVVVNKG(SEQ ID N0：44)
[0337] (xi)AMVIVVVNKGTGNLELV(SEQ ID NO：45)
[0338] (xii)VVNKGTGNLELVAVRK(SEQ ID N0：46)
[0339] 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸。
[0340]考虑到具体情况的细节，还可包括可能有利的其他肽或分子。
[0341]在另一个方面中，本发明提供一种核酸分子组合物，该核酸分子组合物包含对编 码上文所定义的T细胞表位和肽或其衍生物、同系物或类似物的序列进行编码或与之互补 的一种或多种核酸分子。
[0342]应当理解，提及"肽"包括提及包含一个或多个T细胞表位的肽。编码主题肽的核酸 分子优选地是脱氧核糖核酸(诸如cDNA)的序列或基因组序列。基因组序列可包含外显子和 内含子。基因组序列还可包含启动区或其他调节区。
[0343] 核酸分子可以接合至能够在原核细胞(例如，大肠杆菌)或真核细胞(例如，酵母细 胞、真菌细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞或植物细胞）中表达的表达载体。核酸分子可以与编 码另一个实体(诸如，例如信号肽）的核酸分子接合或融合或以其他方式缔合。核酸分子还 可以包含在3'或5'末端部分或在3'和5'末端部分与其融合、接合或以其它方式缔合的另外 的核苷酸序列信息。核酸分子还可以是载体诸如表达载体的一部分。后一实施例有助于产 生重组形式的主题肽，这些形式被本发明所涵盖。
[0344] 此类核酸可用于通过插入适当载体中并且转染到适合的细胞系内来重组产生Ara h 1和/或Ara h 2或包含它们的蛋白质的T细胞表位。此类表达载体和宿主细胞系也形成本 发明的一个方面。
[0345] 在通过重组技术产生肽的过程中，将用具有编码根据本发明的肽的序列的核酸或 核酸序列的功能性等效物转化的宿主细胞在适合于相关特定细胞的培养基中培养。然后可 使用本领域众所周知的技术，诸如离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法、超滤、电泳或使用特 异于肽的抗体的免疫纯化将肽从细胞培养基、宿主细胞或两者中纯化。
[0346] 编码Ara h 1和/或Ara h 2的核酸或包含Ara h 1和/或Ara h 2的T细胞核心表位 区的肽可在细菌细胞(诸如大肠杆菌）、昆虫细胞、酵母或哺乳动物细胞(诸如中国仓鼠卵巢 细胞(CHO))中表达。适合的表达载体、启动子、增强子和其他表达控制元件在山姆布鲁克等 人(Sambruck et al(1989))中有所提及。其他适合的表达载体、启动子、增强子和其他表达 控制元件是本领域技术人员熟知的。酵母中适合的表达载体的实例包括Y印Sec 1(巴尔德 里等人，1987,欧洲分子生物学组织杂志，6:229-234(Balderi et al.，1987，Embo J.，6: 229-234));pMFa(库简和赫斯科威茨，1982，细胞，30:933-943(Kurjan and Herskowitz ·， 1982，Cell.，30:933-943));JRY88(舒尔茨等人，1987,基因，54:113-123(Schultz et al.， 1987，Gene·，54:113-123))以及pYES2(美国圣地亚哥英杰公司（Invitrogen Corporation， San Diego，CA))。这些载体可随意地用作杆状病毒和哺乳动物表达系统。例如，杆状病毒系 统是可商购获得的（美国圣地亚哥的帕明根公司（ParMingen，San Diego,CA))用于在昆虫 细胞中表达的，而PMsg载体是可商购获得的（新泽西皮斯卡塔韦的法玛西亚公司 (Pharmac ia，P i s cataway，NJ))用于在哺乳动物细胞中表达。
[0347] 对于在大肠杆菌中表达，适合的表达载体尤其包括pTrc(阿曼等人，1998,基因， 69:301-315(Amann et al.，1998，Gene.，69:301-315));pGex(澳大利亚墨尔本的阿玛兰德 公司（Amrad Corporation ,Melbourne ,Australia)) ;pMal (马萨诸塞州贝弗利的N. E ·生物 实验室(N.E. Bio labs，Beverley，MA)) ;pRit5(新泽西皮斯卡塔韦的法玛西亚公司）；pEt-1 Id (威斯康辛州麦迪逊的诺维信公司(Novagen，Maddi son，WI))(贾米勒等人，1990,病毒学 杂志，64:3963-3966( Jameel et al.，1990, J. Virol. ,64:3963-3966))以及 pSem(纳普等 人，1990,生物技术，8:280-281(Knapp et al.，1990，Bio Techniques.，8:280-281))。口丁此 和pEt-lld的使用例如将导致非融合蛋白质表达。。1&11^1^5^361]1和?661的使用将使得融 合至麦芽糖E结合蛋白（pMal)、蛋白质A(pRit5)、截短的半乳糖苷酶(PSEM)或谷胱甘肽S-转 移酶(PGex)的过敏原表达。当Ara h 1的T细胞表位或包含其的肽以融合蛋白形式表达时， 在载体蛋白与相关肽之间的融合接点处引入酶裂解位点将是特别有利的。然后可以通过在 酶位点处的酶促裂解并且使用纯化蛋白质和肽的常规技术进行生化净化，将本发明的肽从 融合蛋白中回收。不同的载体还具有不同的启动区，从而允许组成型或诱导型表达或温度 诱导。另外在不同大肠杆菌宿主中表达重组肽可能是适当的，这些宿主具有使重组表达的 蛋白质降解的改变的能力。可替代地，改变核酸序列以使用由大肠杆菌优先利用的密码子 可能是有利的，其中这种核酸改变将不会影响表达的蛋白质的氨基酸序列。
[0348] 可使用诸如磷酸钙或氯化钙共同沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染或电穿孔的常规 技术转化宿主细胞以表达本发明的核酸。用于转化宿主细胞的适合方法可以见于山姆布鲁 克等人（1989)和其他实验室文本。本发明的核酸序列还可以使用标准技术以化学方式合 成。
[0349] 除重组产生根据本发明的肽之外，核酸可以用作探针用于实验或纯化目的。
[0350] 如在此披露的肽的鉴别和合成现在有助于开发一系列预防性和治疗性治疗方案 用于花生相关的免疫病状。还有助于开发其中所使用的试剂。因此，本发明应当理解为延伸 至肽或其功能性衍生物、同系物或类似物在治疗性和/或预防性治疗患者中的用途。此类治 疗方法包括但不限于：
[0351] (i)将主题肽给予受试者，作为对花生、Ara h 1和/或Ara h 2或者Ara h 1和/或 Ara h 2类似分子脱敏或诱导对这些的免疫耐受的方式。这可通过例如诱导Ara h 1和/或 Ara h 2定向的Th2无反应性或细胞凋亡来实现。在优选实施例中，这样的结果通过使用保 持T细胞表位反应性但无法经受IgE结合的肽来获得。可替代地，可使用这样的治疗方案:其 基于根据特定方案给予特定浓度的给定肽，以便诱导耐受。这种方法可消除Ara h 1和/或 Ara h 2超敏或它可减轻Ara h 1和/或Ara h 2超敏或对存在于包含Ara h 1和/或Ara h 2 的组合物中的过敏原敏感(诸如花生过敏）的严重程度。在此提及Ara h 1和/或Ara h 2敏 感的治疗应当理解为在其范围内涵盖特征在于对包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物(诸 如，一般为花生）敏感的过敏的病状的治疗，即使这种敏感是针对除Ara h 1和/或Ara h 2 之外的过敏原。
[0352]优选地此类治疗方案能够修饰相关个体的T细胞应答或B细胞和T细胞应答两者。 如在此所使用的，对患有花生超敏的个体的过敏反应的修饰可以被定义为诱导对Ara h 1 分子的无反应性或减少症状，如通过标准临床程序所测定的（瓦尔内等人，1991英国医学杂 志302:265-269(Varney et al.l991British Medical Journal302:265-269))。症状减少 包括在完成治疗方案后个体对Ara h 1的过敏反应的任何减少。这种减少可以是主观的或 例如通过使用本领域已知的标准食物激发试验或标准皮肤试验在临床上测定的。
[0353]个体暴露于本发明的肽可以耐受适当的T细胞亚群或使适当的T细胞亚群无反应 性，以使得其在这种暴露后对Ara h 1和/或Ara h 2无反应并且不参与刺激免疫应答。优选 地根据本发明的肽将保留免疫显性T细胞表位但具有消除的IgE结合。再者，即使问题中的 过敏原不是Ara h 1和/或Ara h 2,而是针对同Ara h 1和/或Ara h 2-样存在于相同组合 物中的不同过敏原(诸如不同的花生过敏原），用Ara h 1和/或Ara h 2免疫仍然可以诱导 旁观抑制效应，其用以降低对那种过敏原超敏的程度。
[0354]与暴露于天然存在的Ara h 1和或Ara h 2过敏原相比，给予本发明的肽可修饰细 胞因子分泌型态。这种暴露还可能影响通常参与过敏反应的T细胞亚群，以远离正常暴露于 过敏原的位点并且朝向治疗性给药的位点迀移。T细胞亚群的这种再分布可改善或降低个 体的免疫系统在正常暴露于过敏原的位点处刺激普通免疫应答的能力，从而导致减少过敏 症状。
[0355] 如上文所详述，B细胞应答的修饰可以例如经由调节由T细胞产生的细胞因子型态 来实现。具体地说，减少源自T细胞的IL-4和IL-13产生，从而减少I gE合成。
[0356] (ii)本发明的肽可以用于吸附剂从生物样品或从患者中去除Ara h 1和/或Ara h 2定向的T细胞的能力中。
[0357] 因此，在另一个方面中，本发明提供一种用于治疗和/或预防受试者的病状的方 法，该病状的特征在于对Ara h 1和/或Ara h 2或对包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物中 的过敏原的异常、不需要或其他方面不当的免疫应答，所述方法包括在足以消除或减少所 述受试者中针对所述Ara h 1和/或Ara h 2或其他过敏原的T细胞的存在或功能的条件下 向所述受试者给予有效量的如上文所定义的免疫调节组合物，持续一段时间。
[0358] 优选地，所述病状是对花生或含有Ara h 1和Ara h 2或者Ara h 1或Ara h 2类似 分子的树坚果，诸如榛子、杏仁或巴西坚果超敏。
[0359] 在一个实施例中，所述方法使得对Ara h 1和/或Ara h 2或所述组合物的其他过 敏原脱敏或诱导对这些的免疫耐受。
[0360] 在另一个实施例中，所述脱敏或耐受通过诱导T细胞无反应性或凋亡来实现。
[0361]在又另一个实施例中，所述脱敏或耐受通过诱导Ara h 1或Ara h 2特异性Treg细 胞来实现。
[0362] "有效量"意指至少部分地达到所希望的免疫应答或延迟待治疗的特定病状的发 作或抑制其进展或完全停止其发作或进展所必需的量。该量取决于待治疗个体的健康和身 体状况、待治疗的个体的分类群、所希望的防护等级、组合物的配方、医疗情况的评估以及 其他相关因素而改变。所预期的是该量将在可通过常规试验确定的相对宽的范围内。
[0363] 治疗或预防的受试者通常为哺乳动物，诸如但不限于人类、灵长类动物、牲畜动物 (例如绵羊、母牛、马、驴、猪）、伴侣动物(例如狗、猫）、实验室试验动物(例如小鼠、兔、大鼠、 豚鼠、仓鼠）、圈养野生动物(例如狐狸、鹿）。优选地，哺乳动物是人类或灵长类动物。最优选 地，哺乳动物是人类。
[0364] 在此提及"治疗"和"预防"应被认为处于其最宽泛的情形中。术语"治疗"不一定意 味着治疗受试者直至完全恢复。类似地，"预防"不一定意指受试者最终将不会染上疾病病 状。因此，治疗和预防包括改善特定病状的症状或预防或以其他方式降低发展特定病状的 风险。术语"预防"可被认为是降低特定病状的严重程度或发作。"治疗"也降低现有病状的 严重程度。
[0365] 以药用组合物的形式给予本发明的组合物(在此被称为"药剂"）可通过任何便利 的方式来进行。可预期的是当以根据具体情况的量给药时，药用组合物的药剂表现出治疗 活性。变化取决于例如所选的人类或动物和药剂。宽范围的剂量可能是适用的。考虑到患 者，例如，可给予每剂量约〇. Olyg至约Img的药剂。可以对给药方案进行调节以提供最适宜 的治疗反应。例如，每天、每周、每个月或其他适合的时间间隔可服用几个分开剂量，或可以 按状况的紧急程度按比例地减少剂量。在另一个实例中，最初就给予所述组合物以诱导耐 受，并且随后如果必要的话，加强组合物给予以保持耐受。例如可每个月给予这些加强物， 并且可给予持续任何时段，包括患者的一生。
[0366] 药剂可以方便的方式来给予，诸如通过：口服、静脉内（可溶于水时）、腹膜内、肌肉 内、皮下、真皮内（使用或不使用传统针刺或其他经皮递送设备）、经皮、鼻内、舌下或栓剂途 径或植入(例如，使用缓释分子）。优选地，将所述组合物经真皮内给予。药剂可以按以下形 式给予:药学上可接受的无毒盐，诸如酸加成盐或例如与锌、铁等形成的金属络合物（出于 本申请的目的，其被视为盐）。此类酸加成盐的示例为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、马 来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐等。如果 活性成分以片剂形式给药，则该片剂可以含有粘合剂，诸如黄芪胶、玉米淀粉或明胶；崩解 剂，诸如藻酸；以及润滑剂，诸如硬脂酸镁。
[0367] 根据这些方法，根据本发明定义的药剂可与一种或多种其他化合物或分子一起给 予。"共同给予"意指在相同配制品中或在两种不同配制品中经由相同或不同途径同时给 予，或通过相同或不同途径依序给予。"依序"给予意指在给予两种类型的分子之间存在几 秒、几分钟、几小时或几天的时差。这些分子可以任何顺序来给予。还应当理解，本发明的肽 本身可同时或依序给予。它们可作为一种或多种组合物同时或依序给予。例如，可将这些肽 中的一些配制到一种配制品中并且将其他肽配制到另一种单独的配制品中；其中这两种配 制品每个手臂上给予一种。可替代地，可产生另外单独的配制品并且同时给予至不同位点 或依序给予。设计并产生适当配制品或配制品混合物的产品完全在本领域技术人员的能力 范围之内。
[0368] 本发明的另一个方面涵盖如上文所定义的免疫调节组合物在制造用于治疗哺乳 动物的病状的药物中的用途，该病状特征在于对Ara h 1和/或Ara h 2的异常、不需要或其 他方面不当的免疫应答。
[0369] 优选地所述病状是对花生或含有Ara h 1和/或Ara h 2或者Ara h 1和/或Ara h2 类似分子的树坚果诸如榛子超敏。
[0370] 在又另一个方面中，本发明涵盖一种包含如上文所定义的组合物以及一种或多种 药学上可接受的载体和/或稀释剂的疫苗。所述组合物被称为活性成分。
[0371] 适合于注射使用的药物形式包括无菌水溶液(可溶于水时）或分散体和用于临时 制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末，或者可以呈乳膏的形式或适于局部应用的其他 形式。此类药物形式在制造和储存条件下必须稳定并且必须被保存以防诸如细菌和真菌的 微生物污染作用。该载体可以是包含以下物质的一种溶剂或分散介质:例如，水、乙醇、多元 醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等）、其适合的混合物、以及植物油。适当流动性可以 例如通过使用诸如卵磷脂的涂层、在分散体的情况下通过维持所要求的颗粒大小、以及通 过使用表面活性剂来维持。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、 苯酚、山梨酸等来防止微生物的作用。张力调节剂可用于保持制剂与人血浆的等渗并且由 此避免组织损伤。常用的张度剂包括右旋糖、海藻糖、甘油和甘露醇。甘油和氯化钠是其他 选择但通常较少使用。在许多情况下，优选地包括等渗剂，例如糖或氯化钠。可通过使用延 迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)的组合物来实现可注射组合物的延长的吸收。
[0372] 通过以下方式制备无菌可注射溶液:将活性化合物以所需的量根据需要与以上枚 举的各种其他成分掺入适当的溶剂中，然后过滤灭菌。总体上，通过将各种灭菌的活性成分 掺入无菌载体中来制备分散体，该无菌载体含有基础分散介质以及来自以上枚举的那些的 所需其他成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选制备方法为真空干燥和 冷冻干燥技术，这些方法产生活性成分的粉末以及来自其以前的无菌过滤溶液的任何另外 的所需成分。
[0373] 当活性成分被适当保护时，它们可以例如与惰性稀释剂或与可吸收的可食用载体 一起口服给予，或可以封闭在硬壳或软壳胶囊中，或可以压缩成片剂，或可以直接掺入饮食 的食物中。对于口服治疗性给药，可将活性化合物与赋形剂结合并且以可摄入片剂、口含片 剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。此类组合物和制剂应含有至 少1重量％的活性化合物。当然，组合物和制剂的百分比可改变并且可优选地在单元重量的 约5%至约80%之间。此类治疗有用的组合物中活性化合物的量，应使得能够获得适当的剂 量。制备根据本发明的优选的组合物或制剂，使得口服单位剂型含有在约〇. Iyg与1000 yg之 间的活性化合物。
[0374] 片剂、口含片剂、丸剂、胶囊等还可以含有如下所列出的组分:粘合剂，诸如树胶、 阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂，诸如磷酸氢钙;崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃著淀粉、藻 酸等;滑润剂，诸如硬脂酸镁;并且可以添加甜味剂，诸如蔗糖、乳糖或糖精;或调味剂，诸如 薄荷、冬青油或樱桃香料。当单位剂型为胶囊时，除上述类型的材料之外，它可含有液体载 体。各种其他材料可作为涂层存在或以其他方式修饰剂量单位的物理形式。例如，可用紫 胶、糖或两者包覆片剂、丸剂或胶囊。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖、 作为防腐剂的对羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯、染料以及诸如樱桃或橙香料的调味剂。 当然，制备任何单位剂型中所使用的任何材料应为药用纯的并且当以大量使用时基本上无 毒。此外，可将活性化合物掺入缓释制剂和配制品中。
[0375] 药用组合物还可包含基因分子，诸如能够转染靶细胞的载体，其中该载体带有编 码调节剂的核酸分子。例如，该载体可为病毒载体。
[0376] 给药途径包括但不限于:呼吸(例如，通过气溶胶的鼻内或口服）、气管内、鼻咽、静 脉内、腹膜内、皮下、颅内、真皮内、经皮、肌内、眼内、鞘内、大脑内、鼻内、输注、口服、经直 肠、经由IV滴注、植入以及舌下。优选地，所述给药路径为皮下、真皮内、经皮或鼻内。
[0377] 本发明的又一个方面涉及如上文所定义的当用于本发明的方法时的组合物。
[0378] 参考以下非限制性实例对本发明来进一步描述本发明。
[0379] 实例 1
[0380] Ara h 1和Ara h 2是花生中最易引起过敏且最丰富的蛋白质，使得在治疗中包含 含有其显性T细胞表位的肽是必要的。选择用于免疫疗法的肽时的另一个重要考虑是，它们 是否可由不同MHC II类分子(人类中的HLA分子)呈递并且因此适用于治疗遗传多样性人类 种群。使用封闭抗体和HLA基因分型来测试肽呈递至T细胞的HLA限制，并且显示鉴别出的每 个T细胞表位可在两个或更多个不同HLA分子上呈递。此外，已证实鉴别出的T细胞表位总体 在HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP分子的组合上呈递(表2)。包含HLA-DQ和HLA-DP限制性T细胞表 位对治疗特别有利，因为这些HLA类型在混合种群中比HLA-DR分子更加保守，使得能够以更 少的T细胞表位序列实现更广泛的种群覆盖。
[0381] 将相邻的或重叠的T细胞表位组合成单肽(长度<20aa)以最小化最终治疗组中肽 的数量，得到来自Ara h 2的三个候选肽和来自Ara h 1的七个候选肽。由于半胱氨酸残基 在肽稳定性和生物活性方面可能称问题，所以用结构保守但反应性较低的丝氨酸残基替代 半胱氨酸残基。还对两种Ara h 1肽进行小改变以提高稳定性和/或溶解度(表2)。在所有情 况下，已确认针对变体肽的T-细胞反应性已被保留。
[0382] 表2:Ara h 1和Ara h 2的治疗候选肽
L0384」Ara h 1肽，有阴影的；Ara h 2肽，无阴影的。HLA列示出已知呈递肽内T细胞表位 的HLA类型。*改变肽以提高性能;hW'，从N-端省略的;2?'（来自自然序列)添加到C-端。3粗 体，丝氨酸置换半胱氨酸。
[0385] 这些肽的临床筛选证实了PBMC T-细胞反应性（图1)，炎性细胞活化的缺乏（图2) 以及在另外的花生过敏组群组中的血清稳定性(η = 40)。已确认，PBMC T细胞识别了在所分 析的100 %受试者(η = 20)中的这十种肽中的一个或多个，其中50 % -90 %响应于各肽。至今 的数据清楚地表明，以上表2中的十种肽，提供了充分的、可行的且适合的混合物。
[0386] 实例2
[0387] 步骤的简要概述
[0390] 材料与方法
[0391] 受试者：花生过敏成人受试者从澳大利亚墨尔本的阿尔弗雷德过敏诊所（The Alfred Allergy Clinic ,Melbourne ,Australia)招募。花生过敏受试者具有IgE介导的花 生过敏的临床症状并且花生特异性IgE CAP分数2 2Ul.l6kUA/l;Pharmacia CAP SystemTM，瑞典乌普萨拉市法玛西亚诊断公司（Pharmacia Diagnostics，Uppsala， Sweden))并且许多受试者具有过敏反应的历史。由维多利亚式移植和免疫遗传学服务 (Victorian Transplantation and Immunogenetics Service)对一些受试者进行基因分 型(HLA-DRB1、HLA-DQB1和HLA-DI3Bl,外显子2)。这项研究经阿尔弗雷德和莫纳什大学伦理 委员会（The Alfred and Monash University Ethics Committees)批准并且通报从各受 试者获得的书面同意书。
[0392] 抗原:粗的花生提取物(CPE)由如别处所述的商业的未加盐的干烤花生制备(德莱 昂等人，临床与实验变态反应2003;33(9):1273-80(de Leon et al.Clin Exp Allergy. 2003;33(9): 1273-80))，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)透析且无菌过滤(0.2μπι)。基于 公开的方法从CPE富集天然Ara h 1和Ara h 2。（德容EC等人，临床与实验变态反应1998;28 (6):743-51(de Jong EC et al.Clin Exp Allergy.l998;28(6):743-51))简言之，使用 Vivaspin柱（法国欧巴涅的赛多利斯斯泰迪生物技术有限公司（Sartorius Stedim Biotech S.A.，Aubagne，France))将CPE的缓冲液交换成20mM TRIS-Ms-丙烷（TBP)(pH 7.2)，并且施加到用TBP平衡的5mL Mono-Q 10/10柱(Pharmacia FPLC系统，英国圣奥尔本 斯）上。在用TBP洗涤后，应用30mL O-IM NaCl/TBP的线性梯度以洗脱结合蛋白质（ImL/ min)。通过SDS-PAGE分析0.5mL级分，并且将含有Ara h 1或Ara h 2与最小量其他蛋白质的 级分汇集，并用PBS透析。CPE、Ara h 1和Ara h 2的内毒素含量分别为1.7、4.(^P78.0EU/mg (Endpoint Chromogenic LAL检验，美国沃克斯维尔隆萨公司（Lonza，Walkersvi IIe， USA))。按照说明将肽(澳大利亚维多利亚州的迈拓公司和美国新泽西州的金思特美国公司 (Mimotopes,Victoria,Australia and GenScript USA Inc，New Jersey，USA))以l-4mg/ ml在10%二甲亚砜/PBS(20-mer和截短的肽组)或PBS、I 乙酸或0.1 M碳酸氢铵缓冲液 中重构（定制合成的核心表位肽）。如所描述的确认所有抗原既不会致有丝分裂，也没有毒 性(尤西比乌斯即等人，变态反应与免疫学国际档案2002;127(3):234-44化11861^1^即6七 al·，Int Arch Allergy Immunol.2002;127(3):234-44))〇
[0393] 产生Ara h 1和Ara h 2特异性⑶4+T细胞系（TCL):使用基于5,6_羧基荧光素二乙 酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)的方法由花生过敏受试者的外周血单核细胞(PBMC)生成Ara h 1或 Ara h 2特异性寡克隆TCLJ曼纳林SI等人，免疫学方法杂志2005;298(1-2):83-92 (Mannering SI et al.，J Immunol Methods.2005;298(l-2):83-92));普里克特SR等人， 变态反应与临床免疫学杂志2011; 127(3) :608-15el-5(Prickett SR，et al.，J Allergy Clin Immunol .2011; 127(3) :608-15el-5)。简而言之，在含有2mM L-谷氨酰胺、100IU/mL青 霉素-链霉素以及5%人AB血清的RPMI-1640(美国圣路易斯市的西格玛奥德里奇（5丨8111 &-Aldrich，St Louis，USA)) (cRPMI)中进行培养。PBMC用0. ΙμΜ CFSE(美国尤金分子探针公司 (Molecular Probes，Eugene，USA))标记并且在37C下与单独的cRPMI、CPE(100yg/mL)、Ara h 1 或Ara h 2(10yg/mL)、Ara h 1 或Ara h 2 2〇-mer肽库（10yg/mL/肽）或作为对照的破伤 风类毒素（TT;10LfU/mL;丹麦哥本哈根国家血清研究所（Statens Serum Institute， Copenhagen，Denmark)) -起培养（2 · 5 X 106/mL)7天。在用CD4-PE和7AAD(美国圣地亚哥市 的BD Pharmingen公司（BD Pharmingen，San Diego，USA))染色后，如所述地将CD4+ CFSEdim7AAD细胞分选（10个细胞/孔）到含有辐照的同种异体饲养细胞、抗CD3(0KT-3)、 rIL-2(美国埃默里维尔市的Cetus公司（Cetus，Emeryville，USA))和二性霉素 B(美国卡尔 斯巴德市的英杰公司（Invitrogen，Carlsbad，USA))的96-U-孔板内。根据需要用rIL-2饲养 细胞，并且在10-14天后，将细胞转移到48孔板并且测试对Ara h 1或Ara h 2(10yg/mL)的 增殖。用抗⑶3和rIL-2将Ara h 1或Ara h 2-阳性TCL在T25培养瓶(美国富兰克林湖的BD公 司（BD，Franklin 1^1?58，1^4))中扩增1〇-12天，然后测试对跨越相应序列的重叠2〇1^^肽 (10yg/mL)的特异性（增殖）。如所述的使用从20-mer的N-或C-端截短的肽组在选定20-mer 内对核心表位序列作图（普里克特SR等人，变态反应与临床免疫学杂志2011;127(3):608_ 15el_5(Prickett SR，et alc.J Allergy Clin Immunol.2011;127(3):608-15el-5))〇
[0394] T细胞测定:在含有2mM L-谷氨酰胺、lOOIU/mL青霉素-链霉素以及5%热灭活的人 AB血清的RPMI-1640(美国圣路易斯市的西格玛奥德里奇）（cRPMI)中进行全部培养。如下通 过3H-胸苷(3H-TdR)摄取测定如下评估抗原诱导的TCL增殖:在96-U-孔板中对72小时一式 两份或一式三份培养基进行测定，该96-U-孔板含有I X IO4个T细胞/孔、作为抗原呈递细胞 的I X IO4个辐照的（5000拉德）自体EBV转化的PBMC(EBV-B细胞）以及指定抗原。负对照为单 独的cRPMI。在最后16个小时用 3H-胸苷(3H-TdR; 0.5yCi/孔)对细胞进行脉冲并且摄取记录 为复制培养物的每分钟平均计数(cpm)。刺激指数(SI; cpm抗原刺激的T细胞/cpm未受刺激 的T细胞)2.5被认为是阳性的并且在2 2个测定中确认所有阳性应答。为了允许检测在整个 PBMC内肽诱导的⑶4+T细胞增殖，如对于TCL产生所描述的建立CFSE标记的PBMC的7天培养， 其中添加抗CD25抗体(BD)以除了增殖之外评估T细胞活化。每个样品至少分析10,000个CD4 +T细胞，并且SI以含有抗原的CD4+CFSElo(增殖的）、CD4+CD25+(活化的）或CD4+CD25+ CFSElo(活化和增殖的）细胞的百分比/不含抗原的相同种群(背景）的百分比计算。分析CD4 +CD25+CFSE10(活化的和增殖的）细胞提供了用于检测T细胞应答的最灵敏的方法，其中指 定SI 1.5为阳性。
[0395] HLA II类阻断测定:将T细胞与辐照的EBV-B细胞(各I X IO4个)与抗HLA-DR(L243， BD Pharminge)、HLA-DQ(SVP-L3)或HLA-DP(B7/21)的0.1-10yg/mL阻断单克隆抗体(mAb)S 同种型对照抗体（IgG2a: BD Pharmingen公司；IgGl:美国圣地亚哥市BioLegend公司 (BioLegencUSan Diego，USA))在37°C下孵育 1 小时，随后添加肽（2-10yg/mL)或CPE(H)Oyg/ mL)并且如上测试增殖反应。
[0396] 细胞因子ELISP0T测定：用在PBS中的10yg/mL IL-4、IFN-y或IL-5抗体（美国圣地 亚哥市eBioscience公司（eBioscience，San Diego，USA))将MAIPELISPOT板（美国比勒利卡 的密理博公司(Millipore ,Billerica，USA))在4°C下涂覆过夜。将孔阻断（CRPMlPjWt 37C)然后将roMC(3.5X IO5个）或T细胞和辐照的EBV-B细胞(各IX 104个)添加到具有CPE (100yg/mL)、nAra h 2(10yg/mL)或肽（10yg/mL)的IOOyL重复培养物中。对照为单独的 cRPMI、TT( lOlfU/ml)和植物凝集素（lyg/mL;西格玛奥德里奇）。在37°C下培养48小时后，将 板与生物素化的IL-4、IL-5或IFN-γ抗体(eBioscience)-起孵育（lμg/ml PBS，2小时），随 后与ExtrAvidin?-碱性磷酸酶(西格玛奥德里奇）（1/3，OOOPBS，2小时)孵育，然后用碱性磷 酸酶底物（Bio-Rad)发展。当点在阳性对照孔中出现时，将板洗涤、风干并读取（AID ELISP0T 4.0h读取仪，德国施特拉斯贝格的艾迪公司（Autoimmun Diagnostika， Strassberg，Germany))〇
[0397] 嗜碱性粒细胞活化测试:如所述的由通过流式细胞术检测的CD63上调来评估嗜碱 性粒细胞活化（德鲁4(：等人，免疫学杂志2004 ;173(9):5872-9(0^￥厶(：，6丨31.，了 Immunol .2004; 173(9) :5872-9))。阳性对照是兔抗人IgE抗体(7.5yg/mL;美国加州的DAKO 公司（DAK0 Corporation，CA，USA))、N-甲酰基-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLP) (0.4yg/ mL;西格玛）以及CPE。在3log浓度范围（50、5和0.5yg/mL)上测试CPE并且在4-log浓度范围 (50、5、0.5和0.05μg/mL)上测试肽库。使用组胺释放和组胺ELISA试剂盒(德国汉堡市的IBL 国际有限公司（IBL International GmbH，Hamburg，Germany))按照制造商的指示来评估组 胺释放。
[0398] 莖里
[0399] 在显性20-mer选择中考虑的因素包括：
[0400] ?应答频率
[04011 ?每个患者产生的特异性TCL的数目/患者PBMC中特异性T细胞的发生率
[0402] · T细胞应答的量级
[0403] · T细胞应答的模式(在受试者内或受试者之间识别的肽组合）
[0404] ?用肽直接靶向整个PBMC群中的特异性T细胞的能力(CFSE筛选）
[0405] · T细胞应答的一致性
[0406] · 20-mer肽内的核心T细胞表位的鉴别
[0407] Ara h 1 显性2〇-mer选择
[0408] 从18名花生过敏供体产生145个Ara h 1特异性T细胞系（TCL)，并且跨越Ara h 1 的65/69重叠20-mer肽被这些TCL识别（参见表3和图5)。这65种20-mer中的14种被选为最常 识别的（18名中4-6名应答者;22%-33%)(肽编号23、24、26、38、40、44-51和57)。在这14种 肽中选择9种用于进一步分析(肽编号23、24、40、46、47、49、50、51和57)(表4)。
[0409] 基于每个受试者特异性TCL的数目、TCL应答的量级、TCL应答的可再现性以及靶向 PBMC中特异性T细胞的能力来进行这些选择。所选择的9种20-mer:
[0410] ?由这个组群中18名受试者中的16名(89%)的TCL共同识别
[0411] ?典型地在特异性TCL中诱导强烈且一致的应答
[0412] ?各自由来自许多应答者的多个TCL识别
[0413] ?各自能够靶向供体PBMC中的特异性T细胞(在18/20名另外的受试者中共同诱导 可检测的PBMC T细胞应答，其中每种20-mer中8-16名应答者(40-80%))。
[0414] 在通过TCL分离和/或CFSE筛选进行分析的38名受试者中的35名（92%)中，T细胞 识别九种20-mer中的一种或多种(表3)。
[0415] 表3:
[0416] TCL对Ara h 120-mer肽的增殖应答(胸苷摄取）。表格示出SI值（=存在肽的TCL增 殖相比未受刺激的TCL增殖的成倍增加）。仅示出2 2.5的刺激指数(SI)。针对具有特异于给 定20-mer的多种TCL的受试者，示出最高SI。深灰色，SI 2 2.5<5.0;SI 2 5.0。最终选择的9 种显性肽在表4中示出。
[0417] 表3:

[0422] 显性Ara h I 20-mer的PBMC筛选
[0423] 表5示出，2 1的显性20-mer肽由18/20(或全部数据的22/24)识别。每种20-mer肽 被至少7名受试者识别。组合的CFSE和TCL数据:在43/45名受试者中确认的识别。
[0424] 表5:
[0425] 24名受试者的肽诱导增殖的SI。上部分示出了新的花生过敏供体组群(与用于TCL 的组群不同）。下图示出了来自用于TCL产生的组群的4名受试者，以及上部分和下部分的总 数。
[0426] CPE，粗的花生提取物;+ve，阳性;nt，未测试(肽储备物在测试时不可用）；灰色，刺 激指数2 1.1 < 2.5;黑色，刺激指数2 2.5。
[0428] Ara h 2显性2〇-mer选择
[0429] 从16名花生过敏供体产生69个Ara h 2特异性T细胞系(TCL)，并且跨越Ara h 2的 16/17重叠 20-mer肽被这些TCL识别（表6)。这16种20-mer中的4种被选为最常识别的（各自 情况为16名中7-9名应答者;44 % -46 % )(肽编号4、5、11、15)(图7)。基于每个受试者特异性 TCL的数目、TCL应答的量级、TCL应答的可再现性以及靶向PBMC中特异性T细胞的能力来进 行这些选择。所选择的4种20-mer肽：
[0430] ?由这个组群中全部16名受试者（100%)的TCL共同识别
[0431 ] ?典型地在特异性TCL中诱导强烈且一致的应答
[0432] ?各自由来自许多应答者的多个TCL识别
[0433] ?由全部69个TCL中的约80%共同识别
[0434] ?能够靶向供体PBMC中的特异性T细胞(可检测的PBMC T细胞应答在所测试的6名 受试者中证实）。
[0435] 在通过TCL分离和/或CFSE筛选进行分析的受试者中的16/16(100%)中，T细胞识 别四种20-mer中的一种或多种(表6)。
[0436] 表6:
[0437] TCL对Ara h 2 20-mer肽的增殖应答(胸苷摄取）。表格示出SI值（=存在肽的TCL 增殖相比未受刺激的TCL增殖的成倍增加）。仅示出阳性刺激指数U 2.5):灰色，2 2.5 < 5.0;黑色，> 5.0 过敏原驱动的TCL; B)肽驱动的TCL。显性20-mer在表7中示出。
[0438] 表6:

[0443] 核心T细胞表位作图
[0444] 技术方法
[0445] 使用来自不同受试者的TCL对各核心T细胞表位进行作图。确切T细胞表位在TCL与 受试者之间变化。通过测试来自不同受试者的反应性TCL针对截短的肽组的增殖（图8)来在 每种所选的20-mer内的最小T细胞刺激序列(核心表位）。诱导最大T细胞增殖所需要的残基 的数目在不同TCL和/或受试者之间从6至19aa变化(表8和9)。归因于最佳表位识别所需的 侧接残基的数目的变化，如果含有共同核心序列的肽诱导识别，那么就认为TCL识别相同的 表位。基于这个准则，鉴别十个不同的Ara h 1和5个不同的Ara h 2CD4+T细胞表位（"统一 表位"，表8和9)，其中共同"最小核心表位"序列从5至12aa变化(加下划线的序列，表8和9)。 "统一表位"序列是涵盖跨越不同受试者的最佳T细胞反应性所需的所有残基来确保最广泛 可能的识别的最小序列。
[0446] ⑴在显性Ara h I 20_mer中发现的核心T细胞表位
[0447] 对显性Ara h 120-mer肽内的核心T细胞表位序列作图。鉴别出10个Ara h IT细胞 表位（"统一T细胞表位"），包括4对重叠的T细胞表位。（表8)
[0448] 表8:
[0450] (ii)在显性Ara h 2 20-mer中发现的核心T细胞表位
[0451 ] 在显性Ara h 2 20-mer肽内对核心T细胞表位序列作图。鉴别出5个Ara h 2T细胞 表位（"统一T细胞表位"），包括2对重叠的T细胞表位(表9)
[0452]表9:
[0454] Ara h 1和Ara h 2T细胞表位的HLA限制
[0455] 使用抗HLA-DP、HLA-DQ或HLA-DR的单克隆抗体阻断显性T细胞表位的T细胞识别 (图9)。当T细胞表位在HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR上共同呈递时，一些T细胞表位在HLA-DR和 HLA-DQ分子两者上呈递(表10)。
[0456] 表1〇:
[0459] Ara h 1和Ara h 2T细胞表位呈递的HLA限制
[0460] 通过TCL识别显性T细胞表位对受试者进行HLA分型，以便评估潜在地能够用于T细 胞呈递表位的HLA亚型。用于受试者识别具有确认的HLA-DR/DQ/DP限制的T细胞表位的共用 HLA等位基因的不存在表明T细胞表位HLA-结合简并性。Ara h 1结果在表11中示出并且Ara h 2结果在表12中不出。
[0461 ]表11:
[0462]灰色阴影指示当前7肽混合物中包含的T细胞表位
[0464] Nt = HLA限制未测试
[0465] Ara h 2表位呈递的HLA限制
[0466] 表12:
[0468] 在其Ara h 2T细胞表位(95-107)识别被抗HLA-DQ阻断的所有受试者之间的共用 HLA-DQBl等位基因的不存在表明，这种T细胞表位必须由多个HLA-DQBl分子呈递。类似地， 在其Ara h 2Τ细胞表位（127-141)或（37-47)识别被抗HLA-DR阻断的所有受试者之间的 HLA-DRBl等位基因中的多样性表明用于多个HLA-DRBl分子的T细胞表位的结合简并性。
[0469] 除了由至少2个HLA-DR分子呈递之外，Ara h 2T细胞表位(37-47)还由HLA-DQB1* 06:09呈递，原因在于在HLA-DQ的情况下识别这种T细胞表位的受试者具有这种等位基因， 并且对于受试者9,仅DQBl等位基因存在。
[0470] 由于DPB1*04:01或DRB1*15:01等位基因存在于分别识别Ara h 2T细胞表位（32-44)(被抗HLA-DP阻断)或(95-107)(被抗HLA-DR阻断）的所有受试者中，因此这些T细胞表位 的简并性无法被确定。然而，由于DPB1*0401和DRB1*1501在全球种群中普遍存在，所以由这 些HLA分子呈递的T细胞表位仍可被广泛识别。
[0471 ] 在识别给定HLA类型上的显性统一Ara h IT细胞表位的两名或更多名受试者之间 不存在共用等位基因，由此表明所鉴别的Ara h IT细胞表位中的每个也由两种或更多种不 同HLA分子呈递。
[0472] 预测HLA结合基序:Ara h I 20-mer肽
[0473] 表13提供了用于显性Ara h I 20-mer内的结合基序的HLA-DR预测算法的结果概 述。
[0474] 表13:
[0476] 预测HLA结合基序:Ara h 2 20-mer肽
[0477] 表14提供了用于3种显性Ara h 2 20-mer内的结合基序的2HLA-DR预测算法的结 果概述(NB显性'20-mer 5'未如预期示出并且实际表位与'20-mer 4'重叠）。
[0478]表14: LU^touj 衣丄0:
[0481 ]阴影指示在高加索人种群中特别常见的等位基因。
[0483] 用于治疗递送的精制肽
[0484] 用结构上保守但化学反应性较弱的丝氨酸残基置换潜在有问题的半胱氨酸残基。 确认保留的T细胞反应性（图10和11)。含有丝氨酸的T细胞表位肽显示出与天然的含有半胱 氨酸的肽相当的T细胞应答。
[0485] 将重叠的Ara h IT细胞表位组合成长度< 20aa的单个肽
[0486] 表16:
[0488] 灰色阴影指示组合成单肽的用于如本文中所述的进一步分析的重叠统一 T细胞表 位对。*星号和方框指示被建议用于治疗剂的七种Ara h 1候选肽。
[0489] 将重叠的Ara h 2T细胞表位组合成长度< 20aa的单个肽
[0490] 表17:
[0492] Ara h 1和Ara h 2候选肽概述
[0493] 存在10种候选肽:7种来自Ara h 1并且3种来自Ara h 2(表18)
[0494] 表18:
[0496] 还设计了另外13种较短的肽变体(基于单个T细胞表位）用于比较。一些序列被延 长或缩短（依照天然序列和用于T细胞识别的关键性残基）以提高肽的生产性能和溶解性。 这产生了一个23种候选肽的组用于比较。肽细节概述于表19中。
[0497] 表18中的所有肽均以95 %_99.9%的纯度产生并测定了在溶液中的溶解性。然后 比较来自25名花生过敏受试者的PBMC中的对2剂量的这些肽中的每个的T细胞应答以便选 择最终治疗剂组合。
[0499] · NB缓冲液:首先将所有肽在I3BS中试验;然后如果序列显示偏好高pH则使用0.1 M NH4H⑶3，或如果偏好低pH则使用1 %乙酸；如果在1 %乙酸中不可溶，则增加至2 %、5 %、 10% 等。
[0500] ?从'肽2省略N-端'W'以提高稳定性并且易于合成
[0501] ?将C-端'E'添加到'肽7以提高溶解性(否则肽不可溶，除非在有毒缓冲液中） [0502]选择最终肽的考虑
[0503] 目标:
[0504] 最大化种群覆盖和/或T细胞反应性，同时最小化序列数目和/或长度。
[0505] 对于肽选择的全面考虑:
[0506] · 23肽筛选中的T细胞应答比较
[0507] ?先前的T细胞反应性数据(针对个体T细胞表位/肽）
[0508] ?序列(生产便利性/溶解度）
[0509] · HLA限制(最简并的且HLA-DQ限制的T细胞表位）
[0510] 基于来自23肽筛选的数据的选择的考虑:
[0511] ?基于CD25+CFSE-l〇W细胞的SI值的主要评估准则
[0512] ?供体应答频率/肽(一个或两个浓度）
[0513] ?比较对长变体和短变体的应答
[0514] ?应答的强度/一致性（即，响应于两个浓度的那些受试者与仅响应于一个浓度的 那些受试者）
[0515] ?应答模式
[0516] 表20示出在34名花生过敏受试者中对全组23种候选肽的PBMC T细胞应答的分析。 这些数据示出存在肽的/未受刺激的％ra25+CFSElow⑶4+T细胞的SI值。
[0517] 将数据分组成各含有T细胞表位的区的长型式和短型式（参见列边框；例如第一 "组"=肽1、23和24[肽1组合了重叠的肽23和24,它们各自含有单独的T细胞表位])。各组底 部的总结评述了选自该组的最佳肽。（数据示出存在肽的/未受刺激的％ra25+CFSElow CD4 +T细胞的SI值）。
[0518] 通过对各肽"组"的长型式的50yg样品（或IOyg样品，如果应答好于这个剂量的话） 的值降序将数据分类。肽组内的每行示出单个受试者的数据，但各肽组中受试者的顺序变 化。




有其他可行肽的组：
[0526]例如：
[0527] 1)肽3可置换肽15
[0528] 2)肽8可置换肽21
[0529] 3)肽9可置换肽23
[0531 ] 39组群中的对7肽混合物的每种肽的应答的概述
[0532] ?所有受试者识别1种或多种肽
[0533] · 13/39(33%)识别100% 的肽
[0534] · 21/39(54%)识别>85% (6种或更多种)肽
[0535] · 31/39(79%)识别>70% (5种或更多种）肽
[0536] ?每种肽被至少25/39名受试者(64%)识别
[0537] 在测试的74名受试者中，全部对7种所选肽中的至少1种肽反应。
[0538] 对不同肽库的应答
[0539] 表23:
[0541] NB:表19提供了肽1-23各自的序列。
[0542] 库1=7 X原始Ara h 1 "候选者"
[0543] 库2 = 3 X原始Ara h 2"候选者"
[0544] 库3 = 10X上述2个库(Ara h 1和Ara h 2)的混合
[0545] 库4 = 3 XAra h Γ候选者"+5 X较短变体(Ara h 1序列覆盖率等于库1)
[0546] 库5 = 5XAra h 2候选者的较短(单表位)变体(Ara h 2序列覆盖率等于库2)
[0547] 表24:精制肽库


L0551J 厍7a = 5XAra h l+3XAra h 2,用于"精制"厍（与最终厍相问但具有额外的Ara h 2T细胞表位）
[0552]库7b = 5XAra h l+3XAra h 2,用于"精制"库7 [0553]对7肽库(库7b)的嗜碱性粒细胞应答
[0554] 在与跨3-41og浓度范围（g/ml)的花生(CPE)或7肽库(库7b)孵育后，从14名花生过 敏受试者收集嗜碱性粒细胞反应性数据（图2)。在这些受试者中，嗜碱性粒细胞活化和组胺 释放由完整花生和阳性对照诱导但不由7肽混合物诱导。
[0555] 在选择库7a和7b之前。随后设计并测试库7a和7b。
[0556] 比较对完整花生或表23的肽库1-5的PBMC T细胞应答。（图12和13)。相对于库1-5， 这些库中没有一个能够在所有测试的受试者中诱导阳性T细胞应答。几乎所有对肽库的应 答都显著低于对完整花生（以测试浓度）的应答，并且库2、3和4各自仅有一名受试者显示出 大于或等于完整花生应答的肽应答。关于库7a和7b，记录了对库7a和7b的100%应答(SI> 1.5)。库7a和7b在许多受试者中诱导了相比完整花生而言相当的或更大的应答，6/30= 2 IOOCPE 应答，6/30 = 50%-80% CPE 应答。
[0557] 当比较对7肽库的PBMC T细胞应答时（图14)，库7a与7b之间没有显著差异（比较配 对数据;n=15/组;添加第三Ara h 2肽没有优势）。当使用用于非参数数据的非配对曼惠特 尼检验比较库7b(n = 30)的完整数据组与库7a的组群时，仍没有显著差异;p = 0.9)。
[0558] 总之，库7a和7b两者都明显好于所测试的其他5个库。库7a相比库7b没有显著差 异。库7b被100%的测试受试者识别并且在超过33%的受试者中诱导相比花生而言相当的 或更大的PBMC T细胞应答。库1-5未被100%受试者识别并且很少诱导与完整花生相当的应 答。
[0559]表25:更详细的步骤和数据概述

[0562] 实例3
[0563] Ara h 2表位特异性TCC中，Ara h 2肽诱导的T细胞无反应性（图15)
[0564] 在以lOOμg/ml的Ara h 2肽(ANLRPSEQHLM(SEQ ID N0:31;标阴影的））存在下，在 缺乏辅助细胞的情况下或在单独的完全培养基*(无 Ag)中，将Ara h 2肽特异性人类T细胞 克隆的T细胞（IXlO6Ail)培养16小时。然后将T细胞充分洗涤，并且在作为辅助细胞的辐照 自体PBMC(IO 5个/孔)存在下，用单独的完全培养基（IL-2，50U/ml)或免疫原性浓度的Ara h 2肽（lOμg/ml)再次激发（104/孔）。在第72小时确定与氚标胸苷掺入相关的增殖。结果表示 为一式三份培养物的平均cpm+SD。*完全培养基:RPMI+5%AB血清+Pen/Str印/L-谷氨酰胺+ lOU/mL IL-2。
[0565] Ara h 1表位特异性TCC中，Ara h 1肽诱导的无反应性（图16)
[0566]在以l〇〇yg/ml的Ara h 1肽（STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID N0:12;标阴影的））或 无关的Bahia grass Pas η 1肽（点画的)存在下，在缺乏辅助细胞的情况下或在单独的完 全培养基*(无 Ag)中，将Ara h 1肽特异性人类T细胞克隆的T细胞（I X 106/ml)培养16小时。 然后将T细胞充分洗涤，并且在作为辅助细胞的辐照自体PBMC(105个/孔)存在下，用单独的 完全培养基（IL_2,50U/ml)或免疫原性浓度的Ara h I肽（10μg/ml)再次激发（104/孔）。在 第72小时确定与氚标胸苷掺入相关的增殖。结果表示为一式三份培养物的平均cpm。*完全 培养基:RPMI+5%AB血清+Pen/Str印/L-谷氨酰胺+lOU/mL IL-2。
[0567] 本领域的技术人员将会了解，可对在此描述的本发明加以除具体所描述的那些之 外的变化和修改。应理解的是，本发明包括所有这类变化和修改。本发明还包括在本说明书 中单独地或共同地提及或指示的步骤、特征、组合物和化合物的全部，以及所述步骤或特征 中的任意两个或更多个的任何组合。
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【主权项】
1. 一种免疫调节组合物，包含来自由以下各项组成的清单的Ara h 1和Ara h2T细胞表 位区中的至少五个： (i) FQNLQNHR(SEQ ID N0：1) (ii) IVQIEA(SEQ ID NO：2) (iii) NEGVIVKVXK(SEQ ID NO：3) (iv) EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：4) (v) EGALML(SEQ ID NO：5) (vi) IMPAAHP(SEQ ID NO：6) (vii) LRPXEQHLM(SEQ ID NO：7) (viii) ENNQRXMXEA(SEQ ID NO：8) 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸，并且所述组合物包含选 自SEQ ID N0S:l-6的至少一个表位区和选自SEQ ID N0S:7-8的至少一个表位区。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中表位区LRPXEQHLM是LRPSEQHLM(SEQ ID NO: 137)。3. 根据权利要求1或2所述的组合物，其中表位区ENNQRXMXEA是ENNQRSMSEA(SEQ ID NO：138)〇4. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含所述表位区中的至 少6个。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少7个表位区。6. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含所述8个表位区中 的每个。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含一种或多种肽，这 些肽中的每个的长度多达60个连续的氨基酸，并且这些肽包含由SEQ ID N0S: 1-8定义的 Ara h 1和Ara h 2T细胞表位区中的一个或多个。8. 根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含选自由以下各项组 成的清单的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽： (i) FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11) (ii) STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12) (iii) EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：4) (iv) VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13) (v) VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14) (vi) ANLRPXEQHLM(SEQ ID NO：15) (vii) EFENNQRXMXEALQ(SEQ ID NO：16) (viii) NNFGKLFEVKPDKKNPQLQ(SEQ ID NO：17) (ix) GDVFIMPAAHPVAINASSE(SEQ ID NO：18) (x) SQLERANLRPXEQHLM(SEQ ID NO：19) (xi) ELNEFENNQRXMXEALQ(SEQ ID NO：20) (xii) FQNLQNHRIV(SEQ ID NO：21) (xiii) RIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：22) (xiv) ENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：23) (xv) EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：24) (xvi) EFENNQRXMXEALQQI(SEQ ID NO：25) (xvii) NNFGKLFEVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：26) (xviii) ELNEFENNQRXMXEALQQI(SEQ ID NO：27) (xx) WSTRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：28) (xxi) GDVFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：29) 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸。9. 根据权利要求8所述的组合物，其中所述残基X为丝氨酸。10. 根据权利要求8所述的组合物，其中所述组合物包含选自由以下各项组成的清单的 Ara h 1和Ara h 2T细胞肽： (i) FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11) (ii) STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12) (iii) EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0：4) (iv) VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13) (v) VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14) (vi) ANLRPSEQHLM(SEQ ID NO：31) (vii) EFENNQRSMSEALQ(SEQ ID NO：32) (viii) EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：24) (ix) EFENNQRSMSEALQQI(SEQ ID NO：33) 或其功能性衍生物或同系物。11. 根据权利要求10所述的组合物，其中所述组合物包含选自由以下各项组成的清单 的Ara h 1和Ara h 2T细胞肽中的每个： (i) FQNLQNHRIVQIEAKPNTLV(SEQ ID NO：11)； (ii) STRSSENNEGVIVKVSKE(SEQ ID NO：12)； (iii) EVKPDKKNPQLQ(SEQ ID N0:4)和/或EVKPDKKNPQLQD(SEQ ID N0:24); (iv) VEIKEGALMLPHFNSKA(SEQ ID NO：13)； (v) VFIMPAAHPVAINASS(SEQ ID NO：14)； (vi) ANLRPSEQHLM(SEQ ID N0:31);以及 (vii) EFENNQRSMSEALQ(SEQIDN0:32WP/SEFENNQRSMSEALQQI(SEQIDN0:33) 或其功能性衍生物或同系物。12. 根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述肽当给予患有特征在于Ara h 1和/或Ara h 2超敏或对包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物超敏的病状的受试者时，能 够减轻所述超敏。13. 根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，所述组合物另外地包含选自由以下各 项组成的清单的一种或多种肽： (i) ALMLPHFNSKAMVIVVV(SEQ ID NO：34) (ii) NNFGKLFEVKPDKKNPQ(SEQ ID NO：35) (iii) SQLERANLRPXEQ(SEQ ID NO：36) (iv) ELNEFENNQRXM(SEQ ID NO：37) (v) NNFGKLFEVKPDKKNPQLQD(SEQ ID NO：38) (vi) NNFGKLFEVKPDKKNPQL(SEQ ID NO：40) (vii) SQLERANLRPXEQH(SEQ ID NO：41) (viii) KAMVIVVVNKGTGNLELVAV(SEQ ID NO：42) (ix) RELRNLPQQXGLRA(SEQ ID N0：43) (x) KAMVIVVVNKG(SEQ ID N0：44) (xi) AMVIVVVNKGTGNLELV(SEQ ID NO：45) (xii) VVNKGTGNLELVAVRK(SEQ ID NO：46) 或其功能性衍生物或同系物，其中残基X为半胱氨酸或丝氨酸。14. 一种组合物，包含对编码根据权利要求1至10或13中任一项所述的表位和肽的序列 进行编码或与之互补的一种或多种核酸分子。15. -种用于治疗和/或预防受试者的病状的方法，该病状的特征在于对Arah 1和/或 Ara h 2或对包含Ara h 1和/或Ara h 2的组合物中的过敏原的异常、不需要或其他方面不 当的免疫应答，所述方法包括在足以消除或减少所述受试者中针对所述Ara h 1和/或Ara h 2或其他过敏原的T细胞的存在或功能的条件下向所述受试者给予有效量的根据权利要 求1至14中任一项所述的免疫调节组合物，持续一段时间。16. 根据权利要求1至14中任一项所述的免疫调节组合物在制造用于治疗哺乳动物的 病状的药物中的用途，该病状特征在于对Ara h 1和/或Ara h 2的异常、不需要或其他方面 不当的免疫应答。17. 根据权利要求15或16中任一项所述的方法或用途，其中病状是对花生或含有Ara h 1和Ara h 2或者Ara h 1或Ara h 2类似分子的树坚果超敏。18. 根据权利要求17所述的方法或用途，其中所述坚果为榛子、杏仁或巴西坚果。19. 根据权利要求15至18中任一项所述的方法或用途，其中所述方法使得对Ara h 1 和/或Ara h 2或所述组合物的其他过敏原脱敏或诱导对这些过敏原的免疫耐受。20. 根据权利要求19所述的方法或用途，其中所述脱敏或耐受通过诱导T细胞无反应性 或凋亡来实现。21. 根据权利要求19所述的方法或用途，其中所述脱敏或耐受通过诱导Ara hi或Ara h 2特异性Treg细胞来实现。22. 根据权利要求15至21中任一项所述的方法或用途，其中所述组合物皮内地或经皮 地给予。23. 根据权利要求15至22中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者是人类。
【文档编号】A61P37/00GK105992589SQ201480052398
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2014年9月25日
【发明人】罗宾·伊利莎白·奥赫尔, 萨拉·拉谢尔·普里克特, 珍妮弗·梅·罗兰
【申请人】阿拉沃克斯有限公司