本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种微生物肥的制备方法。
背景技术
化肥在农业生产中起着重要作用。有专家认为，在其他生产因素不变的情况下，施用化肥可增加农业产量40%~60%；但长期使用化肥，易造成土壤养分结构失调，部分营养元素缺失，土壤物理性状变差，部分地块有害金属和有害病菌超标，进而导致作物营养失调，造成农产品品质降低。此外，土壤中残余的过量水溶性养分易被雨水和农田灌水淋溶到地下水及河流中，造成大面积的农业面源污染。
狭义的生物肥料，是通过微生物生命活动，使农作物得到特定的肥料效应的制品，也被称之为接种剂或菌肥，它本身不含营养元素，不能代替化肥。广义地生物肥料是既含有作物所需的营养元素，又含有微生物的制品，是生物、有机、无机的结合体它可以代替化肥，提供农作物生长发育所需的各类营养元素。化肥和农药的大量应用对于人类而言利弊并存，为兴利除弊，科学家提出了“生态农业”，逐步实现在农田里少使用或不使用化肥和化学杀虫剂，而使用有机生物肥料和采用微生物方法防治病虫害。
有机肥具有养分全、肥效长、无污染的特点，向农田中施用有机肥不仅可增加土壤有机质含量，提高土壤蓄水、保肥能力，还可以改善土壤的理化性状和团粒结构，补充有益元素，并提高农产品品质。但普通有机肥中微量元素种类和含量均较少，不能满足植物生长所需，直接影响了作物生长和农产品的品质。
食用菌废料又称菌渣、菌糠、下脚料等，是食用菌栽培后的培养料。相关研究表明，食用菌菌渣中含有大量可利用的营养元素，如粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、微量元素等，还含有多糖类、有机酸、酶、酚类等化学物质，是一种可被资源化利用的有机废弃物质。到目前为止，已有将废弃菌渣直接还田或将菌渣简单堆肥后制备有机肥研究。但废弃菌包中的营养物质大部分是以大分子形态存在，难于被植物直接吸收利用，既严重影响废弃菌包的农用效率，又会对环境承载造成相当大的压力，造成污染、影响农业可持续发展。并且，在制备有机肥过程中，依然存在制备过程容易起团结块，使得不易混合均匀，制得的生物肥应用于种子发芽率低，幼苗长势较差。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种高活力微生物肥的制备方法。
本发明的目的是通过如下技术措施实现的：
一种微生物肥的制备方法，其特征在于：它是以食用菌废弃菌渣、豆渣、粉煤灰、中微量元素盐、尿素、发酵菌菌剂、功能菌菌剂等为原料，分别经过四次发酵制备而得；其中所述食用菌废弃菌渣是金针菇废弃菌渣、香菇废弃菌渣中的一种。
进一步具体地，所述发酵菌包括发酵菌a菌剂和发酵菌b菌剂，其中所述发酵菌a菌剂为枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂组成的复合菌菌剂，其质量比为枯草芽孢杆菌菌剂：纤维素酶：黑曲霉菌剂：白腐菌菌剂=1~10：1~10：1~5：1~5；其中所述发酵菌b菌剂为枯草芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、乳酸杆菌菌剂、酵母菌菌剂、双歧杆菌菌剂、醋酸菌菌剂、放线菌菌剂以及纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶组成，其质量比为枯草芽孢杆菌菌剂：地衣芽孢杆菌菌剂：乳酸杆菌菌剂：酵母菌菌剂：双歧杆菌菌剂：醋酸菌菌剂：放线菌菌剂以及纤维素酶：蛋白酶：淀粉酶=1~10：1~10：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5。
进一步优选的，所述功能菌菌剂由根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂混合组成的复合功能菌菌剂，其质量比为根瘤菌菌剂：褐球固氮菌菌剂：枯草芽孢杆菌菌剂：巨大芽孢杆菌菌剂：地衣芽孢杆菌菌剂：苏云金芽孢杆菌菌剂：淡紫色拟青霉菌剂：绿色木霉菌剂=1~10：1~10：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5。
具体优选地，上述枯草芽孢杆菌为cgmcc编号1.12938；所述黑曲霉为cgmcc编号3.13901；所述白腐菌为gdmcc编号gim3.393；所述乳酸杆菌为cctcc编号cctccab200050；所述酵母菌为cctcc编号nkccmrnk3.00721；所述双歧杆菌为cgmcc编号1.15639；所述醋酸菌为gdmcc编号gim1.848；所述放线菌为gdmcc编号gim1.381；所述淀粉酶为cgmcc编号4.4751；所述根瘤菌为cgmcc编号1.15570；所述褐球固氮菌为gdmcc编号gim1.272；所述巨大芽孢杆菌为cgmcc编号1.9072；所述地衣芽孢杆菌为cgmcc编号1.9048；所述苏云金芽孢杆菌为cgmcc编号1.7902；所述淡紫色拟青霉为gdmcc编号gim3.405；所述绿色木霉为cgmcc编号3.11450。
进一步，上述四次发酵中第一次发酵是将收集的去除泥沙后的食用菌废弃菌渣、尿素与发酵菌液a菌剂按质量比1-10：1-10：1，充分混匀，用清水调节生物质堆含水量为40%-60%，在50-70℃条件下发酵3-10天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量，所述发酵菌a菌剂中枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂的质量比优选为2:4:3:1。
进一步，上述第四次发酵中的第二次发酵是将上述经过第一次发酵后的生物质堆与豆渣、粉煤灰、中微量元素盐以及发酵菌b菌剂按质量比10-40：5-20：1-10：1-10：1-10，充分混匀，用清水调节生物质堆含水量为40%-70%，在50-70℃条件下二次发酵4-7天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量，所述发酵菌b菌剂中枯草芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、乳酸杆菌菌剂、酵母菌菌剂、双歧杆菌菌剂、醋酸菌菌剂、放线菌菌剂以及纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶的质量比优选为2:1.5:0.5:0.5:1:1:0.5:1.5:1:0.5。
进一步，上述第四次发酵中的第三次发酵是将第二次发酵结束后的生物质进行高温发酵，发酵时温度需控制在80℃-100℃，发酵时间为3-5天。
进一步，上述第四次发酵中的第四次发酵是将第三次发酵结束后的生物质加入功能菌菌剂，上述物质按质量比10~40：1~10充分混匀，用清水调节生物质堆含水量为40%-60%，在40-60℃条件下发酵4-7天；发酵期间生物质堆内温度不超过60℃，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量，发酵结束即获得中微量元素生物有机肥，其中所述功能菌菌剂中根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂的质量比优选为2:1:1:1:2:1:1:1。
进一步，上述第一次发酵中食用菌废弃菌渣、尿素与发酵菌液a菌剂的质量比优选为8：1：1，所述用清水调节生物质堆含水量优选为50%，所述发酵时间优选为7天；所述第二次发酵中生物质堆与豆渣、粉煤灰、中微量元素盐以及发酵菌b菌剂的质量比优选为27：8：7：3：5，所述用清水调节生物质堆的含水量优选为40%，所述发酵时间优选为5天，所述粉煤灰需经过筛分处理，去除烧尽的灰分，再粉碎过50~100目土壤筛，并用0.1mol/l~0.5mol/l的naoh溶液浸泡24小时进行活化处理，所述粉煤灰与氢氧化钠溶液的质量体积比为1:1；所述第三次发酵中发酵时间优选为5天；在第四次发酵中所述清水调节生物质堆含水量优选为50%，发酵时间优选为5天。
更进一步，上述第二次发酵中中微量元素盐是由cacl2、mgso4、cao·mgo·sio2、fe2(so4)3、h3bo3、mnso4、cuso4、znso4、na2moo4组成的混合物，其摩尔比为0.1：0.1：0.05：0.05：0.01：0.01：0.05：0.05：0.01，所述氢氧化钠浓度优选为0.2mol/l。
进一步，上述制备过程中用到的菌剂，其活菌数均为2000~3000个/g。
本发明具有如下的有益效果：
本发明利用食用菌废弃菌渣、豆渣、粉煤灰、中微量元素盐、发酵菌、功能菌等物质按一定比例混合，经过多次发酵制备的生物有机肥，制备的微生物有机肥中有益菌活性高、大于3亿/g，各成分、基质的合理搭配使得长期放置达30个月、其含有的有益菌仍然能很好地保持了有益菌的高活性，不会出现拮抗、早衰现象，很好地发挥了固氮、解磷以及解钾菌的促进植物生长功效，通过病菌抑制菌进行生物防治，确保植物正常生长。同时其总养分高达18.6%、中微量元素高达7.6%，制备的中微量元素生物有机肥既可以满足植物生长所需要的大量元素，又及时补充植物生长所需要的中微量营氧元素。本发明制得的生物肥发芽率高，幼苗长势好，幼苗患病率低，发芽率高达96%。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例1一种微生物肥的制备方法，其制备过程如下：
（1）、将收集的去除泥沙后的食用菌废弃菌渣、尿素与发酵菌a菌剂按质量比为（8：1：1）充分混匀，用清水调节生物质堆含水量为50%，在60℃条件下发酵5天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。所述食用菌废弃菌渣为金针菇废弃菌渣；所述发酵菌a菌剂为从腐烂菌渣中分离出来的枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂组成的复合菌，且枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂复合比例为2：4：3：1。
（2）、向上述发酵后的生物质堆中加入豆渣、粉煤灰、中微量元素盐与发酵菌b菌剂，为提高生物质堆二次发酵效果，所述生物质堆、豆渣、活化粉煤灰、中微量元素盐、发酵菌b菌剂按质量比27：8：7：3：5充分混合，用清水调节生物质堆含水量为60%，在60℃条件下二次发酵5天；发酵期间生物质堆内温度不超过70℃，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。所述粉煤灰需经过筛分处理，去除烧尽的灰分，再粉碎过80目土壤筛，并用0.2mol/l的naoh溶液浸泡24小时进行活化处理，所述粉煤灰与氢氧化钠溶液的质量体积比为1:1；所述发酵菌b菌剂为枯草芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、乳酸杆菌菌剂、酵母菌菌剂、双歧杆菌菌剂、醋酸菌菌剂、放线菌菌剂等多种菌株及纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶制成的复合微生物菌剂，其质量比为2:1.5:0.5:0.5:1:1:0.5:1.5:1:0.5；所述微量元素盐是由cacl2、mgso4、cao·mgo·sio2、fe2(so4)3、h3bo3、mnso4、cuso4、znso4、na2moo4组成的混合物，其摩尔比为0.1：0.1：0.05：0.05：0.01：0.01：0.05：0.05：0.01。
（3）、将上述发酵后的生物质进行高温发酵以杀死生物质中的虫卵病菌，发酵时温度控制在90℃，发酵时间为4天。
（4）、向上述生物质对中加入由根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂等组成的复合功能菌菌剂，用清水调节生物质堆含水量为50%，在50℃条件下发酵6天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。发酵结束即获得中微量元素生物有机肥；所述生物质与复合功能菌菌剂的质量比为28:5；所述功能菌中根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂的质量比为2:1:1:1:2:1:1:1。
实验1：种子萌发及幼苗生长试验
（1）分别向经过高温消毒的培养皿中加入500g土壤3份，分别加入50g实施例1制得的生物肥、加入50g购至河北德沃多肥料有限公司生产的德沃多生物有机肥，将土壤与生物肥充分混匀后待用；余下一份不加任何肥料，作为空白对比。
（2）挑选10颗大小均一、颗粒饱满的木耳种子均匀分布于培养皿中，将培养皿放入恒温培养箱中进行恒温培养（25℃、避光）。以不加生物肥处理为对照，每一处理均重复3次。种子临用前用1%的naclo溶液浸泡30min，用去离子水洗净、风干后待用。
（3）待对照处理种子萌发率基本不变时停止萌发实验，记录各试验处理种子的萌发率以及相关参数；
（4）分别选取各处理中萌发一致的种子于培养箱中继续培养，10d后记录幼苗株高、生物量、叶面积等，并记录幼苗生长期间的患病情况。
经过分析发现，利用本发明所述技术方案制备的中微量元素生物有机肥中有益菌大于3亿/g生物肥、总养分含量为18.6%、中微量元素含量为7.6%。利用制备的生物有机肥种植木耳菜种子（以市售某生物有机肥以及不施肥为对照）萌发率比对照和不施肥处理分别高9.3%和18.2%，木耳菜生物量比市售生物有机肥和不施肥处理分别高23.6%、48.2%，株高比市售生物有机肥和不施肥处理分别高26.9%、52.1%，叶面积分别大21.5%、39.2%，幼苗患病率比市售生物有机肥和不施肥处理分别低9.1%和17.9%。
实施例2一种微生物肥的制备方法，其制备过程如下：
（1）、将收集的去除泥沙后的食用菌废弃菌渣、尿素与发酵菌a菌剂按质量比为7：3：1充分混匀，用清水调节生物质堆含水量为40%，在50℃条件下发酵10天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。所述食用菌废弃菌渣为香菇废弃菌渣；所述发酵菌a菌剂为从腐烂菌渣中分离出来的枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂组成的复合菌菌剂，且枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂复合比例为2：4：3：1。
（2）、向上述发酵后的生物质堆中加入豆渣、粉煤灰、中微量元素盐与发酵菌b菌剂，为提高生物质堆二次发酵效果，所述生物质堆、豆渣、活化粉煤灰、中微量元素盐、发酵菌b菌剂按质量比31：12：5：2：5充分混合，用清水调节生物质堆含水量为40%，在70℃条件下二次发酵7天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。所述粉煤灰需经过筛分处理，去除烧尽的灰分，再粉碎过50目土壤筛，并用0.1mol/l的naoh溶液浸泡24小时进行活化处理，所述粉煤灰与氢氧化钠溶液的质量体积比为1:1；所述发酵菌b菌剂为枯草芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、乳酸杆菌菌剂、酵母菌菌剂、双歧杆菌菌剂、醋酸菌菌剂、放线菌菌剂等多种菌株及纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶制成的复合微生物菌剂，其质量比为2:1.5:0.5:0.5:1:1:0.5:1.5:1:0.5；所述微量元素盐是由cacl2、mgso4、cao·mgo·sio2、fe2(so4)3、h3bo3、mnso4、cuso4、znso4、na2moo4组成的混合物，其摩尔比为0.1：0.1：0.05：0.05：0.01：0.01：0.05：0.05：0.01。
（3）、将上述发酵后的生物质进行高温发酵以杀死生物质中的虫卵病菌，发酵时温度控制在80℃，发酵时间为5天。
（4）、向上述生物质对中加入由根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木菌剂等组成的复合功能菌菌剂，用清水调节生物质堆含水量为40%，在60℃条件下发酵4天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。发酵结束即获得中微量元素生物有机肥；所述生物质与复合功能菌菌剂的质量比为30:2；所述功能菌中根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂的质量比为2:1:1:1:2:1:1:1。
按实施例1的实验方法进行种子萌发及幼苗生长试验，实验结果表明，利用本发明实施例2技术方案制备的生物有机肥中有益菌大于3亿/g生物肥、总养分含量为18.2%、中微量元素含量为7.3%。利用制备的生物有机肥种植木耳菜种子（以市售某生物有机肥以及不施肥为对照）萌发率比对照和不施肥处理分别高9.1%和17.3%，木耳菜生物量比市售生物有机肥和不施肥处理分别高21.8%、47.3%，株高比市售生物有机肥和不施肥处理分别高25.3%、51.9%，叶面积分别大20.3%、38.6%，幼苗患病率比市售生物有机肥和不施肥处理分别低8.8%和17.1%。
实施例3一种微生物肥的制备方法，其制备过程如下：
（1）、将收集的去除泥沙后的食用菌废弃菌渣、尿素与发酵菌a菌剂按质量比为5：3：1充分混匀，用清水调节生物质堆含水量为60%，在50℃条件下发酵3天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。所述食用菌废弃菌渣为金针菇废弃菌渣；所述发酵菌a菌剂为从腐烂菌渣中分离出来的枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂组成的复合菌，且枯草芽孢杆菌菌剂、纤维素酶、黑曲霉菌剂、白腐菌菌剂复合比例为2：4：3：1。
（2）、向上述发酵后的生物质堆中加入豆渣、粉煤灰、中微量元素盐与发酵菌b菌剂，为提高生物质堆二次发酵效果，所述生物质堆、豆渣、活化粉煤灰、中微量元素盐、发酵菌b菌剂按质量比18：11：5：5：5充分混合，用清水调节生物质堆含水量为70%，在50℃条件下二次发酵5天，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。所述粉煤灰需经过筛分处理，去除烧尽的灰分，再粉碎过100目土壤筛，并用0.5mol/l的naoh溶液浸泡24小时进行活化处理，所述粉煤灰与氢氧化钠溶液的质量体积比为1:1；所述发酵菌b菌剂为枯草芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、乳酸杆菌菌剂、酵母菌菌剂、双歧杆菌菌剂、醋酸菌菌剂、放线菌菌剂等多种菌剂及纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶制成的复合微生物菌剂，其质量比为2:1.5:0.5:0.5:1:1:0.5:1.5:1:0.5；所述微量元素盐是由cacl2、mgso4、cao·mgo·sio2、fe2(so4)3、h3bo3、mnso4、cuso4、znso4、na2moo4组成的混合物，其摩尔比为0.1：0.1：0.05：0.05：0.01：0.01：0.05：0.05：0.01。
（3）、将上述发酵后的生物质进行高温发酵以杀死生物质中的虫卵病菌，发酵时温度控制在100℃，发酵时间为3天。
（4）、向上述生物质对中加入由根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂等组成的复合功能菌菌剂，用清水调节生物质堆含水量为50%，在40℃条件下发酵6天；发酵期间生物质堆内温度不超过60℃，每隔3天翻转生物质1次，并用清水保持生物质堆的相对含水量。发酵结束即获得中微量元素生物有机肥；所述生物质与复合功能菌菌剂的质量比为25:5；所述功能菌中根瘤菌菌剂、褐球固氮菌菌剂、枯草芽孢杆菌菌剂、巨大芽孢杆菌菌剂、地衣芽孢杆菌菌剂、苏云金芽孢杆菌菌剂、淡紫色拟青霉菌剂、绿色木霉菌剂的质量比为2:1:1:1:2:1:1:1。
按实施例1的实验方法进行种子萌发及幼苗生长试验，实验结果表明，利用本发明实施例3技术方案制备的生物有机肥中有益菌大于3亿/g生物肥、总养分含量为17.8%、中微量元素含量为6.9%。利用制备的生物有机肥种植木耳菜种子（以市售某生物有机肥以及不施肥为对照）萌发率比对照和不施肥处理分别高8.9%和16.8%，木耳菜生物量比市售生物有机肥和不施肥处理分别高22.3%、48.5%，株高比市售生物有机肥和不施肥处理分别高25.1%、52.3%，叶面积分别大21.5%、39.3%，幼苗患病率比市售生物有机肥和不施肥处理分别低9.1%和17.5%。