专利名称：茶氨酸标准对照品的分离制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及茶氨酸标准对照品的分离制备工艺。
背景技术：
茶氨酸(theanine，N-乙基-r-L-谷氨酰胺)是茶叶中特有的非蛋白氨基酸，现代医学和药理研究表明，茶氨酸不但具有鲜爽、缓解苦涩、增加茶汤香甜味的作用，还具有拮抗咖啡碱引起的神经系统兴奋，以及降血压的功效。茶氨酸含量作为茶叶质量控制的一项重要指标，传统的定量分析方法主要为强酸性阴离子交换树脂层析法、茚三酮显色的薄层色谱法、气相色谱法和衍生法等，这些方法较为繁琐，抗干扰能力较差。目前，随着分析技术日趋成熟，针对氨基酸的分析，已有专门化的仪器，如Waters公司生产的Pico-Tag，AccQ-Tag等系统，但此类方法的运行成本较高，将其应用于茶氨酸的分析时间较长。高效液相色谱法(HPLC)具有高的分离定量能力，可对茶氨酸进行定量测定，但此方法需要有茶氨酸标准对照品，以利于方法的外标法定量测定。目前，国内还未有茶氨酸标准对照品提供；国外茶氨酸的合成，由于要采用乙胺或三乙胺有毒和可燃性原料，通过高温高压而合成，生产中可能对人体造成危害，而采用生化合成的方法成本太高，这些产品最终均得通过溶剂分配和液相色谱的手段进行分离、纯化，工艺复杂。
发明内容
本发明的目的是提供一种纯度高、收率高、污染少、生产成本低、可作为茶氨酸高效液相色谱测定的定性、定量标准对照品的茶氨酸分离制备工艺。
本发明包括以下步骤
1.取茶氨酸含量大于10％(W/W)的茶叶提取物，加水使其溶解，超声提取10-60min，离心(转速大于8000转/分)，上清液用水膜过滤，所用水膜孔径以0.2-0.5μm为宜；2.滤液直接进半制备或制备色谱进行制备，分离固定相宜采用反相填料，流动相宜采用0.01-0.2％(v/v)甲酸水溶液，控制流速为3-8ml/min；同步采用紫外检测器在195-220nm监视流出曲线，3.制备收集液于水浴上浓缩得产品。
最终产品用紫外、红外及等度高效液相色谱鉴定其纯度并进行产品质量控制。
本方法得到的产品纯度达98％以上(HPLC)，可作为茶叶制品中茶氨酸高效液相色谱测定的定性、定量标准对照品。其方法回收率达60％以上，生产成本低，对环境污染少，操作安全。
图1为茶氨酸紫外扫描谱图(195-300nm)。
图2为茶氨酸等度高效液相色谱分析谱图。
图3为茶氨酸红外扫描谱图；(4000-400cm-1)图4为茶氨酸的等度制备色谱图。
具体实施例方式
实施例称取1克茶氨酸含量为30％(w/w)的茶叶提取物，加入20ml水使其溶解，超声提取20min，离心(转速11000转/分)，上清液用水膜过滤，水膜孔经为0.45μm，样液浓度为12mg/ml，直接进制备色谱进行制备。
色谱条件为色谱柱Prep Nova_pakR HR C18 6μm 19×300mm HPLC column；流动相0.1％(v/v)甲酸水溶液；流速5ml/min；监视检测波长215nm；进样量1.5ml。
制备收集液于水浴锅上浓缩蒸干，得茶氨酸产品。收率为80％，产品纯度达98.5％；茶氨酸等度制备色谱图见图4。茶氨酸紫外扫描谱图，茶氨酸等度高效液相色谱分析谱图，茶氨酸红外扫描谱图分别见图1，图2，图3。
权利要求
1.一种茶氨酸标准对照品分离制备工艺，其特征在于包括以下步骤①.取茶氨酸含量大于10％(w/w)的茶叶提取物，加水使其溶解，超声提取10-60min，在转速大于8000转/分的条件下离心，上清液用水膜过滤；②.滤液直接进半制备或制备色谱进行制备，分离固定相采用反相填料，流动相采用0.01-0.2％(v/v)甲酸水溶液，控制流速为3-8ml/min；同步采用紫外检测器在195-220nm监视流出曲线；③收集液于水浴上浓缩得产品。
2.根据权利要求1所述的茶氨酸标准对照品分离制备工艺，其特征在于所述水膜孔径为0.2-0.5μm。
全文摘要
本发明公开了一种从茶叶提取物中直接制备茶氨酸标准对照品的制备方法。取茶氨酸含量大于10％的茶叶提取物，加水溶解，经超声提取，离心，上清液用水膜过滤，经制备型或半制备型高效液相制备色谱分离得到茶氨酸，最终产品用紫外、红外及等度高效液相色谱鉴定其纯度并进行产品质量控制。产品纯度达98％以上(HPLC)，可作为茶叶制品(含绿茶、红茶及茶叶提取物和保健食品)中茶氨酸高效液相色谱测定的定性、定量标准对照品。
文档编号C07C231/24GK1532186SQ0311818
公开日2004年9月29日 申请日期2003年3月19日 优先权日2003年3月19日
发明者波 陈, 陈波, 姚守拙, 朱小兰, 罗旭彪, 张斐 申请人:湖南师范大学