专利名称：纯化普伐他汀的方法
技术领域：
本发明涉及普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，进行用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤；涉及以进行用无机酸分解杂质的步骤为特征的普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法；涉及以进行用无机碱分解杂质的步骤为特征的普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法。
本发明还涉及普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于将选自上述三个步骤中的两个或多于两个步骤组合。
本发明进而涉及一种含有可工业生产的普伐他汀钠的组合物，其特征在于含有相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物。
背景技术：
普伐他汀为特开昭57-2240号公报(USP4,346,227)中作为HMG-CoA还原酶抑制剂公开的化合物，具有下式(II)，
现在普伐他汀钠正作为高脂血症治疗药物出售。
作为HMG-CoA还原酶抑制剂，除普伐他汀外，还已知有许多化合物，例如阿托伐他汀、氟伐他汀、伊伐他汀等全都是通过合成制造的化合物。
另一方面，洛伐他汀和辛伐他汀虽然是与普伐他汀一样可通过发酵制造的物质，但是前两种物质可通过一段发酵生成，而普伐他汀则需通过两段发酵才能生成，在这一点上存在区别。即，普伐他汀钠如下式所示，通过将第一阶段发酵生成的前体在第二阶段进行微生物转化培养而生成。
最初进行微生物发酵时，生成了比化学反应合成多许多的没有想到的杂质。即使在各步骤进行纯化，也无法完全除去所有杂质，特别是当以工业生产为目的进行大量培养时，杂质的除去变得更为困难。
另一方面，“制造安全有效药物的一个重要因素是得到高纯度的产物。化学物质可通过下述生产方法例如由原料物质化学合成、分离或纯化由生物产生的该所述物质或者分离或纯化在利用了基因重组细胞等的生产中所产生的该所述物质等方法而获得。即使采用包括基因重组法的任何生产方法，通常也会因为原料的纯度、反应的不完全性、分离或纯化过程中的分解等原因而难于以100％的纯度获得所制造的物质。而且，在医药领域中，无法否认若诊断用药、治疗用药含有杂质，则可能对诊断或治疗产生不利影响，这显然是本发明所属技术领域中的技术常识，总之，获得尽可能高纯度的产物是重要的。”“东京高裁平成9年(换行)第302号事件(12年2月17日判决)”。
而且，HmG-CoA还原酶抑制剂为了有效降低血液中胆固醇，是需要长期服用的一种药物。为了尽量减少副作用，必须特别要求高纯度。
因此，如上所述，由两段发酵生成的普伐他汀类与由一段发酵生成的辛伐他汀和洛伐他汀相比，由于含有更多的杂质，因而纯化步骤特别重要，寻找除去杂质、分离或纯化高纯度普伐他汀的方法的研究持续至今。
本发明者们发现特别是在两段发酵生成普伐他汀时，必定生成下述化合物(I)， 而且上述化合物(I)的产量是转化培养普伐他汀时所生成杂质中最多的。不过，如上所述，虽然知道为获得高纯度普伐他汀，从在药物制造中被认为是杂质的化合物中确实除去上述化合物(I)是重要的课题，但由于上述化合物(I)是关于普伐他汀的一个不对称碳原子上的羟基的旋光异构体，因而与其它杂质相比极难除去。
从而，希望开发出一种方法，该方法不是色谱之类烦杂、不利于工业生产的方法，而是无损于工艺生产性、能以相当于色谱纯化程度的高纯度分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的方法，而且是可以除去上述化合物(I)、得到高纯度普伐他汀的简便的分离或纯化方法。
另一方面，作为HMG-CoA还原酶抑制剂的纯化方法，已知有下述各种方法。
(1)WO 92/16276号公报(特表平6-506210号公报)该公报涉及“以使用高效液相色谱法为特征的HMG-CoA还原酶抑制剂的纯化方法，以及由该纯化方法所获得的HMG-CoA还原酶抑制剂”。
该公报的纯化方法的特征在于在HMG-CoA还原酶抑制剂的纯化工艺中使用高效液相色谱法。而本发明的分离或纯化方法的特征在于通过使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂，除去普伐他汀的杂质，和/或用无机酸和/或无机碱通过分解除去杂质，可不用高效液相色谱法而得到高纯度的普伐他汀，这一点与该公报的纯化方法不同。
而且也没有关于本发明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下为特征的”分离或纯化方法的记载或暗示。
另外，由于高效液相色谱法需要大量的溶剂，而这些溶剂中含有少量不挥发性杂质，在大规模生产的情况下则更严重。在除去溶剂时，这些杂质混入试料中。而且，使用这样大量的溶剂将引起严重的环境污染、带来高额的蒸馏费用。
因此，高效液相色谱法烦杂，不利于工业生产，没法考虑将其用于工业分离或纯化普伐他汀。
在普伐他汀的工业生产中，即使采用高效液相色谱法，也难于除去作为普伐他汀旋光异构体的上述化合物(I)而得到所需高纯度的普伐他汀。
(2)WO 99/42601号公报该公报涉及“通过将HMG-CoA还原酶抑制剂的浓缩培养液用酸调节至pH4.5-7.5，然后用乙酸乙酯萃取HMG-CoA还原酶抑制剂，根据需要使其内酯化后结晶，得到纯度等于或大于99.6％的HMG-CoA还原酶抑制剂的分离或纯化方法”。
该公报的纯化方法在用有机溶剂从含有由微生物生成的普伐他汀的培养浓缩液萃取普伐他汀类的步骤中，使用乙酸乙酯，而与之相对，本发明的纯化方法使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂，就这一点而言两种分离或纯化方法是不同的。
而且，本发明的分离或纯化方法的特征在于通过用无机酸和/或无机碱分解普伐他汀的杂质，得到高纯度的普伐他汀。而该公报中没有关于用无机酸和/或无机碱分解HMG-CoA还原酶抑制剂的杂质这一步骤的记载或暗示。
另外，也没有记载或暗示本发明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下为特征”的分离或纯化方法。
确实，该公报的实施例3中记载有普伐他汀的分离或纯化方法，但该实施例中记载用乙酸乙酯萃取后的普伐他汀的纯度停留在不足70.3％，之后则采用与本发明的分离或纯化方法不同的色谱法进行纯化，而关于最终所得普伐他汀的纯度则完全没有记载。因此，不知道最终是否得到了高纯度的普伐他汀，而且也没有关于是否对其进行纯化，以将上述化合物(I)的含量降低至相对于普伐他汀为0.1％重量或以下的记载或暗示。
而且，对于该公报实施例中记载可以以99.6％或以上的高纯度获得的洛伐他汀，仅从最终产物的HPLC图(图4)来看，难以认为得到了纯度为99.6％或以上的洛伐他汀，没有可信性。
(3)WO 00/17182号公报该公报涉及“以使用顶替色谱法为特征的HMG-CoA还原酶抑制剂的纯化方法以及由该纯化方法所获得的HMG-CoA还原酶抑制剂”。
该公报的纯化方法的特征是在HMG-CoA还原酶抑制剂的纯化工艺中使用顶替色谱法。而本发明的分离或纯化方法的特征在于使用乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂除去普伐他汀的杂质，和/或通过用无机酸和/或无机碱分解除去杂质，可不用包括顶替色谱法在内的一切色谱法而得到高纯度的普伐他汀，这一点与该公报的纯化方法不同。
而且也没有关于本发明的“以除去上述式(I)化合物使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下为特征的”分离或纯化方法的记载或暗示。
由此，在普伐他汀的工业生产中，即使采用顶替色谱法，不仅烦杂，而且也难以除去作为普伐他汀旋光异构体的上述化合物(I)。
另外，除上述纯化方法外，本领域人员通常采用的分离或纯化方法还有例如分析用高压液相色谱法(HPLC)，但分析用HPLC不是作为分离或纯化普伐他汀的方法的实用手段。分析用HPLC使用直径非常细的填充柱(直径4.6mm×长度25cm)，每次分析时向高压柱中添加约10μg(1×10-2mg)试料，一次分析要大约30分钟。虽然试料会全部从柱中流出，但是是极端稀释的溶液状态，虽然可在分析系统中检测成分，但对于收集并不实用。而且，分析用HPLC上没有附属的收集系统，即使装了收集系统，在想得到固体试料的情况下也需要除去溶剂。如果将分析用HPLC用于普伐他汀的分离或纯化，则分离或纯化制作1个仅5mg片剂所需的普伐他汀，就需要500次分析和250小时，分析用HPLC对于普伐他汀的分离或纯化目的而言是一种不现实的操作，可知不利于工业生产。
并且基于前述理由，分析用HPLC也不是以工业规模分离或纯化普伐他汀的合适手段。
硅胶色层分离法虽然可根据硅胶粒子的大小大致分为柱层析和快速柱层析法，但无法期待其成为用于工业规模分离或纯化的合适手段。
实际上，曾尝试用各种色谱法分离上述化合物(I)和其它杂质，但由于上述化合物(I)是普伐他汀的立体异构体，因而无法将该化合物自普伐他汀分离。
重结晶是医药品领域广泛使用的分离或纯化操作。然而即使采用重结晶，对于从普伐他汀中选择性分离结构类似于普伐他汀的上述化合物(I)，将组合物中的普伐他汀纯度改善至所需程度而言也是没有效果的。
也考虑了气相色谱法、蒸馏等其它分离或纯化方法，但任何一种方法的基础都是以试料分子的大小差异为基准进行的分离，两者都需要加热试料。而普伐他汀具有在其熔点分离的趋势，无法将这些作为分离或纯化的方法。
即使反复进行任何前述分离或纯化方法以除去上述化合物(I)，普伐他汀的收率反而减少了。
而且，如上所述，即使将历来已知的任何分离或纯化方法组合，以将上述化合物(I)减少至0.1％或以下的量，也未成为适用于普伐他汀的工业生产的方法。
因此，至今为止根本不知道有不损害工艺生产性而得到高纯度普伐他汀，特别是通过除去作为普伐他汀类似物的具有上述通式(I)的化合物而得到高纯度普伐他汀的分离或纯化方法。
发明内容
本发明者们对含有普伐他汀的药物组合物进行了深入研究，结果发现了获得高纯度普伐他汀(优选纯度为99.5％或以上)的分离或纯化方法，进而从该药物组合物中除去包括普伐他汀类似物的上述化合物(I)的杂质的分离或纯化方法，特别是除去上述化合物(I)使其含量相对于普伐他汀为0.1％重量或以下的分离或纯化方法，从而完成了本发明。
本发明涉及(1)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，进行用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤；(2)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，进行用无机酸分解杂质的步骤；以及(3)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，进行用无机碱分解杂质的步骤；优选(4)(1)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中R为碳原子数3或4的直链或支链烷基；(5)(1)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中R为正丙基或正丁基；(6)(2)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中无机酸为磷酸；以及(7)(2)或(6)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中用无机酸进行分解的步骤中pH为2-5。
本发明进而涉及(8)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤和用无机酸分解杂质的步骤组合进行；(9)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用无机酸分解杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行；以及(10)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤、用无机酸分解杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行；优选(11)(8)或(10)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中R为碳原子数3或4的直链或支链烷基；(12)(8)或(10)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中R为正丙基或正丁基；(13)(8)-(12)中任一项所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中无机酸为磷酸；以及(14)(8)-(13)中任一项所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中用无机酸进行分解的步骤中pH为2-5。
另外，本发明涉及(15)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行；优选
(16)(15)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中R为碳原子数3或4的直链或支链烷基；以及(17)(15)中所述普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其中R为正丙基或正丁基。
本发明还涉及(18)普伐他汀钠的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀钠的工艺中，通过将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤和用无机酸分解杂质的步骤组合进行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下；(19)普伐他汀钠的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀钠的工艺中，通过将用无机酸分解杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下；以及(20)普伐他汀钠的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀钠的工艺中，通过将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤、用无机酸分解杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行，除去具有下述通式(I) 的化合物，使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下；优选(21)(18)或(20)中所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中R为碳原子数3或4的直链或支链烷基；(22)(18)或(20)中所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中R为正丙基或正丁基；(23)(18)-(22)中任一项所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中无机酸为磷酸；(24)(18)-(23)中任一项所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中用无机酸进行分解的步骤中pH为2-5；以及(25)(18)-(24)中任一项所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中普伐他汀钠的纯度为99.5％或以上。
本发明进一步涉及(26)普伐他汀钠的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀钠的工艺中，通过将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行，除去具有下述通式(I)
的化合物，使其含量相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下；优选(27)(26)中所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中R为碳原子数3或4的直链或支链烷基；(28)(26)中所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中R为正丙基或正丁基；(29)(26)-(28)中任一项所述普伐他汀钠的分离或纯化方法，其中普伐他汀钠的纯度为99.5％或以上。
本发明还涉及(30)含有可工业生产的普伐他汀钠的组合物，其特征在于含有相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下的量的具有下述通式(I) 的化合物；优选(31)(30)中所述含有可工业生产的普伐他汀钠的组合物，其中普伐他汀钠的纯度为99.5％或以上；(32)含有普伐他汀钠的组合物，其特征在于含有相对于普伐他汀钠为0.1％重量或以下的量的、由(8)-(17)中任一项所述分离或纯化方法制得的具有下述通式(I) 的化合物；(33)(32)中所述含有普伐他汀钠的组合物，其中普伐他汀钠的纯度为99.5％或以上。
本发明中，“普伐他汀类”是指具有下式(II) 的普伐他汀或其药学上可接受的盐以及具有类似于上式(II)的结构的化合物，即普伐他汀的类似物“例如上述化合物(I)”。
通常可以通过下述分离或纯化方法实现普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化。
首先，根据常规方法过滤和/或离心完成转化培养后的含有普伐他汀的培养液，分离菌体，之后浓缩得到培养浓缩液。
将所得培养浓缩液根据需要用酸调节pH后，用乙酸乙酯等与水难混合的有机溶剂萃取普伐他汀类。例如WO 99/42601号公报中，用酸将含有HMG-CoA还原酶抑制剂的培养浓缩液调节至pH4.5-7.5(优选5.5-7.5)，然后用乙酸乙酯萃取。
可根据常规方法从上述萃取液中收集由此得到的普伐他汀类。例如，将上述萃取液用水、饱和食盐水等洗涤，然后加入氢氧化钠，萃取分液，可得到作为反萃取水层的普伐他汀盐的水溶液。可根据需要使所得普伐他汀盐结晶。
根据需要所进行的结晶化可通过有机合成化学技术中普遍已知的方法“例如Ullmann’s，Encyclopedia of Industrial Chemistry，卷A24，第5版(1993)，437-505页上所记载的方法”如下进行。
作为结晶化的方法，例如可以将有机溶剂和水加入到所得普伐他汀或其药学上可接受的盐的组合物中，通过加热溶解，加入晶种，得到作为结晶体的普伐他汀。
可用于结晶化的有机溶剂有例如己烷、庚烷等脂族烃类；甲苯、二甲苯等芳香族烃类；乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸正丁酯等酯类；乙酸等有机酸类；甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、异戊醇、二甘醇、丙三醇、辛醇等醇类；丙酮、丁酮等酮类；二乙醚、二异丙醚、四氢呋喃、二烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲醚等醚类；甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、六甲替磷酰三胺等酰胺类；二甲基亚砜等亚砜类；或者水与一种或多种上述有机溶剂的混合溶剂。优选水与一种或多种上述有机溶剂的混合溶剂，更优选水与选自醇类、酯类和酮类的一种或多种有机溶剂的混合溶剂，最优选水、醇类和酯类的混合溶剂。
本发明的分离或纯化方法的特征在于如上所述根据常规方法得到培养浓缩液后，在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的步骤中，不用乙酸乙酯而是用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂进行萃取。
上式中，R的定义中“碳原子数等于或大于3的烷基”有例如正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基等基团，优选碳原子数3-6的直链或支链烷基，更优选碳原子数3或4的直链或支链烷基，最优选正丙基或正丁基。
本发明的分离或纯化方法的特征在于在上述分离或纯化普伐他汀的方法中，进行用无机酸分解普伐他汀的杂质的步骤和/或用无机碱分解杂质的步骤。
将选自用具有上式CH3CO2R的有机溶剂萃取普伐他汀的步骤、用无机酸分解普伐他汀的杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤的两个或两个以上步骤组合进行时，可以在分离或纯化方法中以不同顺序适当实施所需步骤。这样的分离或纯化方法的具体例子如下(a)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤和用无机酸分解杂质的步骤组合进行；(b)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行；(c)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用无机酸分解杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行；以及(d)普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，将用具有式CH3CO2R(式中R表示碳原子数等于或大于3的烷基)的有机溶剂萃取普伐他汀类的步骤、用无机酸分解杂质的步骤和用无机碱分解杂质的步骤组合进行。
通过无机酸分解普伐他汀或其药学上可接受的盐的杂质的步骤可在惰性溶剂的存在或不存在下(优选存在下)，将普伐他汀或其药学上可接受的盐在pH2-5的条件(优选pH3-4)下进行。
可用于杂质的无机酸分解的“无机酸”只要是可在通常的反应中用作无机酸的物质即可，对其没有特别限定，可以是例如氢溴酸、盐酸、硫酸、高氯酸、磷酸、硝酸等无机酸，优选磷酸或硫酸，最优选磷酸。
杂质的无机酸分解中的反应温度和反应时间虽然取决于pH值，但基本上是如果反应温度低则需要延长反应时间，如果反应温度高则需要缩短反应时间，例如反应温度为20℃至80℃(优选40℃至60℃)，反应时间为1分钟至6小时(优选5分钟至20分钟)。
可用于杂质的无机酸分解中的“惰性溶剂”只要是通常可用作溶剂的物质即可，对其没有特别限定，可以是例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、异戊醇、二甘醇、甘油、辛醇、环己醇、甲氧基乙醇等醇类；水；或者水与上述醇类的混合溶剂。优选水或者水与上述醇类的混合溶剂。最优选水或者水与乙醇的混合溶剂。
反应结束后，可通过常规方法从反应溶液中收集目标化合物普伐他汀。例如，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，分离含有目标化合物的有机层，用水等洗涤，馏去溶剂后得到所需物质。进一步如果需要，还可以加入活性炭脱色，过滤除去活性炭，然后加入氢氧化钠、甲醇钠、乙醇钠等形成盐的试剂，用旋转蒸发器等减压浓缩，可得到普伐他汀的盐。
通过无机碱分解普伐他汀或其药学上可接受的盐的杂质的步骤可在惰性溶剂的存在或不存在下(优选存在下)，将普伐他汀或其药学上可接受的盐在pH10-14的条件下进行。
可用于杂质的无机碱分解的“无机碱”只要是可在通常的反应中用作无机碱的物质即可，对其没有特别限定，可以是例如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等碱金属碳酸盐类；碳酸氢锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾等碱金属碳酸氢盐类；氢化锂、氢化钠、氢化钾等碱金属氢化物类；氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物类；或者甲醇锂、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾等碱金属醇盐类。优选碱金属氢氧化物类。最优选氢氧化钠。
杂质的无机碱分解中的反应温度和反应时间虽然取决于pH值，但基本上是如果反应温度低则需要延长反应时间，如果反应温度高则需要缩短反应时间，例如反应温度为-10℃至110℃，反应时间为15分钟至200小时。
可用于杂质的无机碱分解中的“惰性溶剂”只要是对本反应呈惰性的溶剂即可，对其没有特别限定，可以是例如与杂质的无机酸分解中使用的惰性溶剂相同的溶剂。
用无机碱分解含有由微生物生成的普伐他汀类的培养浓缩液中所含的杂质时的优选反应条件是pH为11-14(更优选11-12)，反应温度为40℃-110℃(更优选95℃-105℃)，反应时间为2小时-24小时(更优选2小时-5小时)。
另一方面，当用有机溶剂将含有由微生物生成的普伐他汀类的培养浓缩液在酸性条件(优选pH4-6)下萃取分液后，再用无机碱分解在碱性(优选pH8-9)条件下反萃取的水溶液中所含杂质时的优选反应条件是pH为13-14(更优选13.5-14)，反应温度为-10℃至50℃(更优选-5℃至5℃)，反应时间为2小时至180小时(更优选20小时至50小时，最优选25小时至35小时)。
反应结束后，可通过常规方法从上述反应溶液中收集目标化合物普伐他汀。例如，加入硫酸水溶液等酸的水溶液，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，分离含有目标化合物的有机层，用水等洗涤，馏去溶剂后得到所需物质。进一步如果需要，还可以加入活性炭脱色，过滤除去活性炭，然后加入甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠等形成盐的试剂，用旋转蒸发器等减压浓缩，可得到普伐他汀的盐。
进而，本发明的分离或纯化方法也可以包括将所得普伐他汀盐结晶化的步骤，结晶化的方法可以根据上述常规方法进行。
发明的效果本发明的分离或纯化方法是不使用柱色谱法等烦杂、不便于工业应用的方法而获得高纯度普伐他汀或其药学上可接受的盐(优选纯度为99.5％或以上)的方法。
通过本发明的分离或纯化方法，可以除去上述化合物(I)，使其含量相对于普伐他汀为0.1％重量或以下。
产业上的可利用性当将本发明的普伐他汀或其药学上可接受的盐用作药物时，可以将其本身或者与合适的药学上可接受的赋形剂、稀释剂等混合，制成例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂或糖浆剂等进行经口给药或者制成注射剂或栓剂等进行非经口给药。
另外，本发明的纯化度的分析可用高效液相色谱(HPLC)进行。HPLC的测定条件为A移动相20％乙腈、30％甲醇、50％TEAP缓冲液(0.3％三乙胺-H3PO4(PH3.2))；检测波长UV238nm；柱Waters公司制造的反相柱Symmetry C183.5μm，φ4.6mm×15cm；流量1ml/分钟B移动相甲醇∶水∶乙酸(100)∶三乙胺混合液(600∶400∶1∶1)；检测波长UV 238nm；柱ELMER OPTICS制造的柱ERC-ODS-1262φ6mm×10cm；柱温30℃；
流量1ml/分钟，或者C移动相甲醇∶水∶乙酸(100)∶三乙胺混合液(450∶550∶1∶1)；检测波长UV 238nm；柱BECKMAN公司制造的ULTRASPHERE ODSφ4.6mm×15cm 5μm；柱温25℃；流量1.3ml/分钟。
具体实施例方式
下面给出实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明的范围并不限于这些实施例。
实施例1 用乙酸正丁酯由培养浓缩液萃取(1a)培养液的浓缩用氢氧化钠将10L完成转化培养后的普伐他汀培养液调节至pH12后，加热至50℃搅拌30分钟。将培养液冷却至室温后，加入作为助滤剂的500gCelite 545(商标)(CELITE CORPORATION制造)过滤。向分离后的菌体中加入3L水，再次使其悬浮后过滤。将所得两份浓缩液合并，得到10L培养浓缩液。
(1b)用乙酸正丁酯萃取用25％硫酸将所得培养浓缩液调节至pH5.7后，加入5L乙酸正丁酯，搅拌，萃取普伐他汀。用75％硫酸将分离后的水层调节至pH5.7，然后加入5L乙酸正丁酯，搅拌萃取。合并所得的两份乙酸正丁酯层，向其中加入2L饱和食盐水，搅拌洗涤。分离上层，向得到的8L萃取液中加入1L水，边搅拌边加入25％氢氧化钠将其调节至pH9.5，之后分离水层，得到1L普伐他汀的钠盐水溶液。经HPLC(条件A)测定，普伐他汀钠的纯度为90％或以上。由本实施例的结果可知，通过使用乙酸正丁酯，可得到高纯度的普伐他汀钠。
实施例2 用乙酸正丙酯由培养浓缩液萃取用乙酸正丙酯代替乙酸正丁酯，与实施例1一样进行处理，得到普伐他汀的钠盐水溶液。经HPLC(条件A)测定，普伐他汀钠的纯度为85％或以上。由本实施例的结果可知，通过使用乙酸正丙酯，可得到高纯度的普伐他汀钠。
实施例3用磷酸进行杂质的分解向实施例1所得水溶液[经HPLC(条件A)测定的化合物(I)/普伐他汀钠为9.3％]中加入350ml乙醇，用磷酸将其调节至pH3.0，然后在50℃搅拌10分钟。经HPLC(条件A)测定的化合物(I)/普伐他汀钠为0.9％。由本实施例的结果可知，通过使用磷酸，可以显著除去化合物(I)。
实施例4用硫酸进行杂质的分解用硫酸代替磷酸，与实施例3一样进行处理。经HPLC(条件A)测定的化合物(I)/普伐他汀钠为3％。由本实施例的结果可知，通过使用硫酸，可以显著除去化合物(I)。
实施例5用氢氧化钠进行的杂质的分解、萃取和结晶化(5a)用氢氧化钠进行的杂质的分解将500ml普伐他汀的培养浓缩液[经HPLC(条件B)测定的化合物(I)/普伐他汀钠为12.1％]加热至100℃，然后以水溶液形式添加2当量的氢氧化钠(pH11.3)。在100℃搅拌3小时后冷却，在室温用20％硫酸水溶液调节至pH8.5，得到氢氧化钠碱处理液(普伐他汀钠含量56.6g)。经HPLC(条件B)测定的化合物(I)/普伐他汀钠为0.41％。由本实施例的结果可知，通过使用氢氧化钠，可以显著除去化合物(I)。
(5b)用氢氧化钠进行杂质分解后的萃取和结晶化用乙酸正丁酯将260g由(5a)所得的氢氧化钠碱处理液(普伐他汀钠含量19g)与实施例(1b)一样进行处理，分离水层，得到普伐他汀的钠盐水溶液。
将所得普伐他汀的钠盐水溶液减压浓缩至大约1/2量，然后加入77ml水再次减压浓缩。用水调整浓缩液的液量，使之达到普伐他汀游离形态(free form)的6倍量，冷却至0-5℃，滴加20％硫酸水溶液，在pH4.6析出普伐他汀的游离形态结晶，搅拌1晚后过滤。用冷的稀硫酸(pH4)洗涤结晶，得到普伐他汀的游离形态湿结晶。
向普伐他汀的游离形态湿产物中加入63ml乙酸乙酯，在室温下溶解后，在室温下边搅拌边用20％硫酸水溶液将其调节至pH4.5，搅拌萃取分液后，向乙酸乙酯层中加入21ml水，萃取洗涤后分液。向萃取洗涤后的乙酸乙酯层中加入25ml乙醇，然后在室温下边搅拌边用6％氢氧化钠·乙醇溶液将其调节至pH8.7，得到钠盐溶液。之后，通过常规方法结晶，得到8.95g普伐他汀钠盐的结晶。经HPLC(条件C)测定由该方法制得的普伐他汀钠盐的纯度为99.67％，化合物(I)/普伐他汀钠为0.1％重量。
由本实施例的结果可知，通过由氢氧化钠进行的杂质的分解步骤和用乙酸正丁酯进行的萃取步骤，可以显著除去化合物(I)。
实施例6用乙酸正丁酯进行的萃取、用磷酸进行的杂质的分解和结晶化向实施例3所得酸处理液中加入25％氢氧化钠将其调节至pH12，再在50℃继续搅拌30分钟。将溶液在旋转式蒸发器中减压浓缩至1L，得到含有普伐他汀钠盐的浓缩液。用硫酸将所得浓缩液调节至pH4.0，然后用0.5L乙酸乙酯萃取普伐他汀，用0.2L水洗涤萃取液。向萃取液中加入5g活性炭，放置10分钟后，用滤纸过滤，将滤液用25％氢氧化钠调节至pH8.7，之后在旋转式蒸发器中减压干燥固化，得到50g普伐他汀钠盐。用常规方法进行结晶，得到34g普伐他汀钠盐的粗结晶。将粗结晶用相同组成的溶剂重结晶，得到32g普伐他汀钠盐的纯结晶。
经HPLC(条件A)测定由该方法制得的普伐他汀钠盐的纯度为99.7％或以上，化合物(I)/普伐他汀钠为0.1％重量。
由本实施例可知，通过用乙酸正丁酯进行的萃取和用磷酸进行的杂质的分解步骤，可以除去化合物(I)使其含量为0.1％重量或以下，得到高纯度的普伐他汀钠。
而且可知，通过在用乙酸正丁酯进行的萃取步骤和用磷酸进行的杂质的分解步骤的基础上增加用氢氧化钠进行的杂质的分解步骤，可以进一步除去化合物(I)，得到高纯度普伐他汀钠。
实施例7用氢氧化钠进行的杂质的分解、用硫酸进行的分解和结晶化用乙酸乙酯与实施例(5b)一样萃取实施例(5a)所得用氢氧化钠处理的碱处理液，得到普伐他汀的钠盐水溶液。向所得水溶液中加入350ml乙醇，用硫酸将其调节至pH1.5，然后在20℃搅拌1小时。通过常规方法结晶，得到普伐他汀钠盐的纯结晶。经HPLC(条件C)测定化合物(I)/普伐他汀钠为0.1％重量或以下。
由本实施例可知，通过用硫酸进行的杂质的分解步骤和用氢氧化钠进行的杂质的分解步骤，可以除去化合物(I)使其含量达到0.1％重量或以下，得到高纯度的普伐他汀钠。
比较例1用乙酸乙酯进行的普伐他汀的萃取用乙酸乙酯代替乙酸正丁酯，与实施例(1a)一样进行处理，得到普伐他汀的钠盐水溶液。经HPLC(条件A)测定，普伐他汀钠的纯度约为70％。
当从培养浓缩液萃取普伐他汀类的有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸正丙酯和乙酸正丁酯时，普伐他汀钠的纯度(％)如下所示。由下述结果可知，用乙酸正丙酯或乙酸正丁酯进行萃取比用乙酸乙酯进行萃取更能得到高纯度的普伐他汀。
权利要求
1.普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法，其包括用无机碱分解杂质的步骤。
2.权利要求1的方法，其中所述无机碱选自碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、碱金属氢化物、碱金属氢氧化物和碱金属醇盐。
3.权利要求1的方法，其中所述无机碱是碱金属氢氧化物。
4.权利要求1的方法，其中所述无机碱是氢氧化钠。
5.权利要求1的方法，其中用无机碱进行分解的步骤中pH为10-14。
全文摘要
普伐他汀或其药学上可接受的盐的分离或纯化方法以及含有由该方法所制得的普伐他汀钠的组合物，所述分离或纯化方法的特征在于在分离或纯化普伐他汀或其药学上可接受的盐的工艺中，进行用具有式CH
文档编号C07C67/60GK1868996SQ20051007006
公开日2006年11月29日 申请日期2001年10月15日 优先权日2000年10月16日
发明者杉尾伸弼, 高松安行, 小岛俊氏, 铃木睦夫, 萩泽稔, 浜野洁 申请人:三共株式会社