专利名称：从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种齐墩果酸，尤其是涉及一种从红树植物秋茄叶片中提取纯化齐墩果酸的 方法。
背景技术：
秋茄(《amfe//aca"&/)是一种生长在热带、亚热带海岸的红树植物，属红树科秋茄属。 秋茄为灌木或小乔木，高2 3m;具支柱根；叶革质、互对生；花为腋生；树皮平滑呈红褐 色；枝粗壮，有膨大的节。秋茄主要分布于印度、泰国、越南、马来西亚、日本琉球群岛南 部；在中国，主要分布于广东、广西、福建、台湾地区。民间将秋茄作为药物使用，其皮具 有收敛、止血和抗菌作用，而且其根的乙醇提取液可以治疗风湿性关节炎。研究资料表明， 秋茄中含有多糖、鞣质、脂肪酸、甾醇、三萜和黄酮类等活性化合物，其中就包括了曾从秋 茄茎皮中分离到的齐墩果酸这种五环三萜类化合物。
齐墩果酸的分子式为C3QH4803，为白色针状结晶，无味、无臭，存在于多种植物中。研 究表明，齐墩果酸作为一种天然产物化学成分，具多种生物活性，包括护肝、解肝毒、降糖、 降脂、消炎、抗病毒、抗过氧化、抗突变及抗癌等，且毒副作用小，安全性高，已在临床上 用于治疗急性黄疸型和慢性病毒型肝炎，被认为是保肝良药和抗癌辅助药物。因齐墩果酸结 构复杂，难以人工合成获得，目前依赖于从植物中提取纯化得到。生产齐墩果酸的植物原料 主要有女贞子、雪胆、青叶胆、辽东木和云南木等，其中大部分为野生资源，采集不便，产 量不稳定，且采集根皮、茎皮等部位会破坏资源。另外，虽然目前一般采用的提纯方法可以 提取出齐Jt果酸，但存在工艺复杂、耗时长、提取率低、分离效率低，产品纯度低等缺点。
有关从植物中提取齐墩果酸的方法已有报道。
公开号为CN1045585的发明专利申请提供一种从植物中提取齐墩果酸的方法，是从含有 齐墩果酸的三萜皂甙的植物中提取齐墩果酸，它由水提、水解，酸性醇液重结晶等三个步骤 完成，采用该发明提取齐墩果酸，可节省醇，而且提高了提取率，方法简单，适合工业生产。
公开号为CN1449372的发明专利申请提供一种制备齐墩果酸和/或山楂酸及其生理上可 接受的盐的方法，包括用水和/或有机溶剂提取橄榄植物和/或在橄榄油制备过程中所形成的产 品，然后进行浓縮和/或精馏及纯化。公告号为CN1303850的发明专利提供一种生产齐墩果酸的新方法，以五加科Z.木属 Aralia植物太白.'.木Araliataibaiensisz.z.wangetH.C.zheng为原料，经70%乙醇热提取、酸沉 淀分离总皂甙、单独酸水解总皂甙、精制纯化等步聚得到齐墩果酸。采用本方法生产齐墩果 酸，其得率为目前用女贞子生产齐墩果酸得率的10倍左右。该发明降低生产难度，縮短生产 周期，大大提高产率，而且成品纯度高，解决目前生产中浓縮时起泡问题及酸水、废气污染 等问题。
公开号CN1558942的发明专利申请提供一种含有齐墩果酸和/或山楂酸的油脂组合物的 制造方法，包括使用有机溶剂或含水有机溶剂对橄榄植物和/或橄榄油制造过程中得到的副产 物进行提取处理，是在工业上高效率地制造含有齐墩果酸、山楂酸，这些的生理上容许的盐 以及这些的衍生物的油脂组合物的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种步骤简单、生产周期短、分离效率高、纯度高的从秋茄叶片中 提取齐墩果酸的方法。
本发明包括如下步骤
1) 将秋茄叶片清洗后阴干，加入二氯甲垸进行提取，过滤，得提取液，干燥，回收二氯 甲烷，得浸膏；
2) 将浸膏加入层析用硅胶吸附，研碎成粉，装柱，以石油醚/丙酮为洗脱剂，进行梯度
洗脱，按质量比，以石油醚丙酮分别为30:i， 10:i和4:i，冲i 5个柱体积，最后以
甲醇冲洗，共得18个组分，其中的第12 17组分为齐墩果酸粗品，再经硅胶柱层析，以氯 仿/甲醇为洗脱剂进行洗脱，最后以甲醇冲洗，共得4个组分，其中的第3组分即为齐墩果酸 纯品。
按质量比，秋茄叶片二氯甲垸最好为1 : (3 8)，提取液干燥的温度最好为40 50°C。
按质量比，以氯仿/甲醇为洗脱剂进行洗脱的氯仿甲醇最好为(45 60) :i。
本发明基于秋茄叶片中含有较多多酚类成分，提取液中该类成分的存在对后续分离纯化 工艺造成一定的干扰从而造成纯化工艺的复杂，提出利用多酚类物质不溶于二氯甲垸而齐墩 果酸溶于二氯甲烷的性质，以二氯甲垸作提取溶剂，通过浸提和抽滤，在第一步就将齐墩果 酸与多酚类物质有效分离开来，提高提取效率，降低了后续分离纯化工作的难度，利于纯化， 而且二氯甲垸作为有机溶剂，有消泡作用，利于浓縮且縮短浓縮时间。另外，二氯甲烷提取 液不易发霉变质，二氯甲烷还可回收利用。同时，采用硅胶柱层析分离纯化技术，可避免活 性成分的分解破坏，又可大大减少杂质干扰，显著提高齐墩果酸的分离度和富集率，提高分离纯化效率。
由此可见，本发明仅需以二氯甲烷对秋茄叶片进行提取，提取物经两次硅胶柱层析即可 得到齐墩果酸，纯度在90%以上。与传统的齐墩果酸提纯方法相比较，本发明方法具有步骤 简单、生产周期短、分离效率高及纯度高等优点。
具体实施例方式
实施例l:将新鲜的秋茄叶片用自来水冲洗，在阴凉通风处阴干。取400g，置于干净的 玻璃缸中，加入二氯甲垸进行提取，秋茄叶片二氯甲垸为1 : 8。提取24h后，将提取液以 定量滤纸过滤，在45'C下减压干燥，得到浸膏23.8g。将此浸膏进行硅胶柱层析。在硅胶柱 层析的过程时，将经薄层层析检验相同的洗脱液馏分合并为一个组分。首先以石油醚丙酮
为洗脱剂，进行梯度洗脱，石油醚丙酮分别为30 : i， io : i和4 : i，每个比例冲3个柱
体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分。其中第15个组分为齐墩果酸粗品，将其再经硅胶
柱层析，以55 : i的氯仿甲醇为洗脱剂，最后以甲醇冲洗，共得4个组分.其中第3个组分
即为齐墩果酸纯品。 -
实施例2:将新鲜的秋茄叶片用自来水冲洗，在阴凉通风处阴千。取400g，置于干净的
玻璃缸中，加入二氯甲垸进行提取，秋茄叶片二氯甲烷为i : 3。提取24h后，将提取液以
定量滤纸过滤，在40'C下减压干燥，得到浸膏19.4g。将此浸膏进行硅胶柱层析。在硅胶柱
层析的过程时，将经薄层层析检验相同的洗脱液馏分合并为一个组分。首先以石油醚丙酮
为洗脱剂，进行梯度洗脱，石油醚丙酮的比例分别为30 : i， io : i和4 : i，每个比例冲3
个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分。其中第14个组分为齐墩果酸粗品，将其再经
硅胶柱层析，以45 : i的氯仿甲醇为洗脱剂，最后以甲醇冲洗，共得4个组分.其中第3个
组分即为齐墩果酸纯品。
实施例3:将新鲜的秋茄叶片用自来水冲洗，在阴凉通风处阴干。取400g，置于干净的
玻璃缸中，加入二氯甲垸进行提取，秋茄叶片二氯甲烷为i : 4。提取24h后，将提取液以
定量滤纸过滤，在42'C下减压干燥，得到浸膏20.3g。将此浸膏进行硅胶柱层析。在硅胶柱
层析的过程时，将经薄层层析检验相同的洗脱液馏分合并为一个组分。首先以石油醚丙酮
为洗脱剂，进行梯度洗脱，石油醚丙酮的比例分别为30 : l， io.: l和4 : l，每个比例冲3
个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分。其中第17个组分为齐墩果酸粗品，将其再经
硅胶柱层析，以47 : i的氯仿甲醇为洗脱剂，最后以甲醇冲洗，共得4个组分.其中第3个
组分即为齐墩果酸纯品。
实施例4:将新鲜的秋茄叶片用自来水冲洗，在阴凉通风处阴干。取400g，置于干净的
5玻璃缸中，加入二氯甲烷进行提取，秋茄叶片二氯甲烷为i : 5。提取24h后，将提取液以
定量滤纸过滤，在44'C下减压干燥，得到浸膏21.5g。将此浸膏进行硅胶柱层析。在硅胶柱
为洗脱剂，进行梯度洗脱，石油醚丙酮的比例分别为30 : l, io : i和4 : l，每个比例冲3 个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分。其中第13个组分为齐墩果酸粗品，将其再经 硅胶柱层析，以50:i的氯仿甲醇为洗脱剂，最后以甲醇冲洗，共得4个组分.其中第3个 组分即为齐墩果酸纯品。
实施例5:将新鲜的秋茄叶片用自来水冲洗，在阴凉通风处阴干。取400g,置于干净的
玻璃缸中，加入二氯甲烷进行提取，秋茄叶片二氯甲烷为l : 6。提取24h后，将提取液以
定量滤纸过滤，在46'C下减压干燥，得到浸膏21.9g。将此浸膏进行硅胶柱层析。在硅胶柱 层析的过程时，将经薄层层析检验相同的洗脱液馏分合并为一个组分。首先以石油醚丙酮
为洗脱剂，进行梯度洗脱，石油醚丙酮的比例分别为30 : i, io : i和4 : i，每个比例冲3
个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分。其中第12个组分为齐墩果酸粗品，将其再经
硅胶柱层析，以53 : i的氯仿甲醇为洗脱剂，最后以甲醇冲洗，共得4个组分.其中第3个
组分即为齐墩果酸纯品。
实施例6:将新鲜的秋茄叶片用自来水冲洗，在阴凉通风处阴干。取400g，置于干净的
玻璃缸中，加入二氯甲垸进行提取，秋茄叶片二氯甲垸为i : 7。提取24h后，将提取液以
定量滤纸过滤，在48。C下减压干燥，得到浸膏22.6g。将此浸膏进行硅胶柱层析。在硅胶柱 层析的过程时，将经薄层层析检验相同的洗脱液馏分合并为一个组分。首先以石油醚丙酮
为洗脱剂，进行梯度洗脱，石油醚丙酮的比例分别为30 : i， io : l和4 : l，每个比例冲3
个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分。其中第16个组分为齐墩果酸粗品，将其再经
硅胶柱层析，以60:i的氯仿甲醇为洗脱剂，最后以甲醇冲洗，共得4个组分.其中第3个
组分即为齐墩果酸纯品。
实验表明，秋茄叶片中齐墩果酸的含量较高，达0.3%左右，与目前常用来生产齐墩果酸
的青叶胆等植物中齐墩果酸含量相当，可见秋茄叶片是值得开发利用的植物资源。而秋茄在 我国南方海岸资源丰富，既有天然林，也有人工林，尤其是人工秋茄林区近年来发展迅速， 这是因为目前我国正积极开展红树林恢复性造林工程，而秋茄正是一种主要恢复种类，并且， 秋茄叶片的采集简便易行，不会破坏资源。这些都为利用秋茄叶片生产齐墩果酸提供了稳定 的原料来源。另一方面，本发明使秋茄叶片变废为宝，生产高价值的药物产品，使秋茄叶片 的药用价值被充分利用，提升了红树植物秋茄的综合经济价值，将促进红树林的恢复工作。
权利要求
1. 从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法，其特征在于包括如下步骤1)将秋茄叶片清洗后阴干，加入二氯甲烷进行提取，过滤，得提取液，干燥，回收二氯甲烷，得浸膏；2)将浸膏加入层析用硅胶吸附，研碎成粉，装柱，以石油醚/丙酮为洗脱剂，进行梯度洗脱，按质量比，以石油醚丙酮分别为30∶1，10∶1和4∶1，冲1～5个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分，其中的第12～17组分为齐墩果酸粗品，再经硅胶柱层析，以氯仿/甲醇为洗脱剂进行洗脱，最后以甲醇冲洗，共得4个组分，其中的第3组分即为齐墩果酸纯品。
2. 如权利要求l所述的从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法，其特征在于按质量比，秋茄叶片二氯甲烷为i : 3 8。
3. 如权利要求l所述的从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法，其特征在于提取液干燥的温 度为40 50°C。
4. 如权利要求l所述的从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法，其特征在于按质量比，以氯仿/甲醇为洗脱剂进行洗脱的氯仿甲醇为45 60 : i。
全文摘要
从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法，涉及一种齐墩果酸，尤其是涉及一种从红树植物秋茄叶片中提取纯化齐墩果酸的方法。提供一种步骤简单、生产周期短、分离效率高、纯度高的从秋茄叶片中提取齐墩果酸的方法。将秋茄叶片清洗后阴干，加入二氯甲烷提取，过滤得提取液，干燥，得浸膏；将浸膏加入层析用硅胶吸附，研碎成粉，装柱，以石油醚/丙酮为洗脱剂，进行梯度洗脱，按质量比，以石油醚∶丙酮分别为30∶1，10∶1和4∶1，冲1～5个柱体积，最后以甲醇冲洗，共得18个组分，其中的第12～17组分为齐墩果酸粗品，再经硅胶柱层析，以氯仿/甲醇为洗脱剂进行洗脱，最后以甲醇冲洗，共得4个组分，其中的第3组分即为齐墩果酸纯品。
文档编号C07J63/00GK101450962SQ200810189179
公开日2009年6月10日 申请日期2008年12月30日 优先权日2008年12月30日
发明者冯丹青, 卢昌义, 成 向, 柯才焕 申请人:厦门大学