专利名称：一种生产制备奥利司他的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种生产制备奥利司他的方法，具体涉及一种提 取纯化奥利司他的新方法。
背景技术：
奥利司他是长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，通过与胃和小肠腔内胃脂 肪酶和胰脂肪酶的活性丝氨酸部位形成共价键使酶失活而发挥治疗作用，主要用于治疗和 预防与肥胖相关的病症。其化学名为(S)-2-甲酰氨基-4-甲基-戊酸酯(S)-1-[[(2S， 3S) -3-己基-4-氧-2-氧杂环丁烷基]甲基]_十二烷基酯，结构式如下奥利司他可以通过全合成方法以及发酵法生产。本专利涉及的奥利司他的生产方 法为发酵法生产，是链霉菌属毒三素链霉菌经过发酵后产生的尼泊司他汀经氢化后的衍生 物。随着时代的发展，公众对药品质量的要求也越来越高。发酵法生产的奥利司他中 间体尼泊司他汀属于胞外胞内均有的脂溶性次级代谢产物，而且代谢副产物又多，本身给 产品的分离纯化带来了不小的困难。中国专利《一制胰菌素的提纯方法》(公开号CN1266058A)公开的提纯方法为发 酵产生的尼泊司他汀用庚烷以及含水乙酸等强极性溶剂进行双流萃取，对尼泊司他汀的纯 度要求高，工艺路线比较复杂。中国专利《一种奥利司他的提纯方法》(公开号CN1763021A)公开的提纯方法为先 用中极性溶剂溶解过滤、除杂、结晶奥利司他，后用非极性溶剂奥利司他结晶，不能有效地 去除与奥利司他结构类似的杂质，得到高纯度的奥利司他产品。美国专利US4598089提到通过发酵液预处理，离心得到菌丝体，甲醇/乙醇浸泡菌 丝体，硅胶柱层析(己烷甲醇水；己烷乙酸乙酯体系)其工艺繁琐，柱层析条件不能 有效地去除杂质，得到高品质的产品。
发明内容
本发明克服了现有技术工艺步骤复杂、较难获得高纯度的奥利司他的缺陷，通过 大孔吸附树脂去除极性大的杂质，通过硅胶柱层析去除奥利司他结构类似的杂质，提供了 可以将奥利司他制备成高纯度的医药产品并适用于工业化生产的方法。
本发明公开了一种纯化奥利司他的方法，具体步骤包括1)吸附树脂纯化奥利司他中间体尼泊司他汀发酵液，用丙酮浸提，浸提后过滤 菌体，丙酮浸提液用0. Ium钛棒过滤器过滤后，用草酸调节PH至3. 0 4. 5，上大孔吸附树 脂吸附，吸附量为30 50克/升树脂。吸附速率为0. 5 0. 8柱体积/小时，吸附完后用 80%的丙酮溶液解析洗脱。洗脱速度0. 8 1柱体积/小时，洗脱体积3 4个柱体积， 直到TLC检测无尼泊司他汀析出为止。2)洗脱液的萃取、氢化含有尼泊司他汀的洗脱液加水调节丙酮浓度至50 65%，后用庚烷萃取，得到含有尼泊司他汀的庚烷萃取相。尼泊司他汀庚烷萃取相浓缩后氢 化合成奥利司他；3)氢化后奥利司他的硅胶柱层析尼泊司他汀氢化得到奥利司他后，过滤去除 钯碳催化剂，后浓缩氢化液至奥利司他浓度到10%左右，上硅胶柱。硅胶柱高径比8 10 1，硅胶目数为80 100目，上样量为80 100克/升，流动相为庚烷乙酸乙酯= 4 1。洗脱速度为0.5 0.8柱体积/小时。TLC检测收集，直到无奥利司他出现为止。4)浓缩、结晶奥利司他收集硅胶柱层析液浓缩后庚烷溶解，结晶，30°C真空干燥 后，得到单一杂质小于0. 1 %，含量在99%以上的奥利司他产品。步骤1)中用草酸调节发酵浸提液的PH至3.0 4. 5，目的是更容易去除极性大的 部分杂质，PH太大太小均达不到去杂的目的。步骤1)中所用丙酮量为1 2倍发酵液体积，太少给过滤带来困难，同时收率变 低，太大则容易带来更多的杂质，优选丙酮量为1. 5倍发酵液体积。步骤1)中所用大孔吸附树脂型号为HZ818或HZ820型，吸附树脂的尼泊司他汀的 吸附量为30 50克/升树脂。吸附尼泊司他汀的速率为0. 5 0. 8柱体积/小时，太快 导致容易穿柱，太慢则影响吸附量。吸附完以后洗脱用的洗脱剂为80%丙酮，洗脱剂的流速 为0. 8 1柱体积/小时，洗脱相的用量为约3 4个柱体积。步骤2)中树脂吸附洗脱液加水调节丙酮浓度优选60%，奥利司他硅胶柱层析所 用的硅胶目数为80 100目，太细容易导致产品脱尾，分离效果变差。上样量为80 100 克奥利司他/升硅胶，上样量太小溶剂使用量太大，上样量太大则影响分离效果。步骤2)中硅胶柱层析的流动相为庚烷乙酸乙酯=4 1，洗脱速度为0.5 0.8 柱体积/小时。洗脱速度控制太快导致分离困难，太慢导致产品拖尾严重，影响分离效率。步骤1)、步骤3)中所述的TLC展开剂为庚烷乙酸乙酯=6:1。本发明的有益效果在于通过大孔吸附树脂去除了奥利司他中间体中部分极性较 大的杂质，通过硅胶柱层析，去除与奥利司他结构类似的杂质，本方法公开的奥利司他的纯 化方法比较容易得到高品质的奥利司他，获得的产品含量高于99%，单一杂质低于0. 1%, 适合于工业化生产。
具体实施例方式下面通过一些实施例对本发明作一些说明。应理解这些实施例仅用于例证的目 的，并不限制本发明的范围，同时，本领域技术人员对本发明作出的显而易见的改变和修饰 也包含在本发明范围之内。实施例1
奥利司他中间体尼泊司他汀发酵液100升(发酵单位7克/升)加入100升丙酮， 搅拌浸提1小时后，板框压滤，得到190升丙酮浸提液，用0. Ium钛棒过滤器过滤，过滤后用 草酸调节PH至3. 0，20升HZ820型大孔吸附树脂装柱经过预处理后吸附丙酮浸提液，吸附 速度为10升/小时。吸附完毕后用60升80%的丙酮溶液洗脱，洗脱速度为16升/小时， TLC检测收集含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。洗脱完毕后得到60升含尼泊司他汀的丙酮洗脱 液。60升丙酮洗脱液加入20升水，调节丙酮浓度约60%，加入20升庚烷萃取，萃取1 小时后，静止分层，含有尼泊司他汀的庚烷萃取相浓缩，得到1公斤尼泊司他汀粗品，其中 尼泊司他汀浓度为60%。1公斤尼泊司他汀粗品加入15升庚烷和40克5%钯碳，25°C、0. 3MPa氢化10小时 以后，得到奥利司他。奥利司他氢化液过滤去除钯碳，用旋转蒸发器浓缩氢化液至6升，准 备上硅胶柱。7升80 100目硅胶经活化后湿法装柱，柱高径比为10 1。装柱用庚烷平衡好 以后开始上柱。控制上柱速度为3.5升/小时。上柱结束以后用庚烷乙酸乙酯=4 1 流动相洗脱。控制洗脱速度为4升/小时，TLC检测，收集含有奥利司他的组分，直至检测 不到奥利司他为止。结束后得到洗脱相22升。浓缩后得到560克奥利司他浓缩物，奥利司 他含量为89%，最大杂质为0. 25%。560克奥利司他浓缩物加入庚烷11升，结晶后抽滤，得到类白色结晶，最大杂质为 0.15%。再加入11升庚烷溶解后结晶，抽滤后得到类白色结晶，最大杂质为0.09%。结晶 30°C真空干燥30小时后，得到420克类白色产品。最大杂质为0. 09%，产品含量为99%。实施例2尼泊司他汀发酵液500升(发酵单位7. 2克/升)用750升丙酮搅拌浸提1小时 后，板框压滤，得到1200升丙酮浸提液，之后用0. Ium钛棒过滤器过滤，过滤后用草酸调节 PH至4. 0,90升HZ820型大孔吸附树脂装柱经过预处理后吸附丙酮浸提液，吸附速度为50 升/小时。吸附完后用350升80%的丙酮溶液洗脱，洗脱速度为90升/小时，TLC检测收 集含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。洗脱后得到350升含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。340升丙酮洗脱液加入118升水，调节丙酮浓度约65%左右，加入120升庚烷萃 取1小时，静止分层，庚烷萃取相浓缩得到4. 25公斤尼泊司他汀粗品，尼泊司他汀浓度为 65%。4. 25公斤尼泊司他汀粗品加入200克5%钯碳和60升庚烷，25°C、0. 3MPa氢化10 小时以后，过滤去除钯碳。旋转蒸发器浓缩氢化液至30升，准备上硅胶柱。30升80 100目硅胶经活化后湿法装柱，柱高径比为9 1。用庚烷平衡好以后 开始上柱，上柱速度为15升/小时。上柱结束以后用庚烷乙酸乙酯4 1流动相洗脱。 控制洗脱速度为20升/小时，TLC检测，收集含有奥利司他的组分，直至检测不到奥利司 他为止。结束后得到洗脱相95升，浓缩得到2. 5公斤奥利司他粗品，其中奥利司他含量为 88%，最大杂质为0. 22%。2. 5公斤奥利司他粗品加入庚烷50升，结晶后抽滤，得到类白色结晶，最大杂质为 0.13%。再加入50升庚烷结晶，抽滤后得白色结晶，最大杂质为0.07%。结晶30°C真空干 燥30小时，得到1.76公斤白色产品。最大杂质为0.07%，产品含量为99. 1%。
实施例3尼泊司他汀发酵液1000升(发酵单位6. 6克/升)加入1400升丙酮搅拌浸提1 小时后，压滤得到2200升丙酮浸提液，用0. Ium钛棒过滤器过滤，过滤后用草酸调节PH至 4. 5，160升HZ818型大孔吸附树脂装柱经过预处理后吸附丙酮浸提液，速度为80升/小时， 吸附后用640升80%的丙酮溶液洗脱，洗脱速度为160升/小时，TLC检测收集含尼泊司他 汀的丙酮洗脱液。洗脱完毕后得到640升含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。640升丙酮洗脱液加入210升水，调节丙酮浓度约60%，加入220升庚烷萃取1小 时后，静止分层，庚烷萃取相浓缩，得到8. 95公斤尼泊司他汀粗品，其中尼泊司他汀浓度为 58%。8. 95公斤尼泊司他汀粗品加入130升庚烷和350克5%钯碳，25°C、0. 3MPa氢化 10小时以后，过滤去除钯碳。旋转蒸发器浓缩氢化液至50升，准备上硅胶柱。70升80 100目硅胶经活化后湿法装柱，柱高径比为8 1。用庚烷平衡好以后 开始上柱，控制速度为35升/小时，上柱结束以后用庚烷乙酸乙酯=4 1流动相洗脱， 控制洗脱速度为56升/小时，TLC检测，收集含有奥利司他的组分，直至检测不到奥利司他 为止。结束后得到洗脱相220升，浓缩后得到4. 97公斤奥利司他浓缩物，奥利司他含量为 85%，最大杂质为0. 28%。4. 97公斤奥利司他浓缩物加入庚烷90升，结晶后抽滤，得到类白色结晶，最大杂 质为0. 16%。再加入90升庚烷结晶，抽滤后得到类白色结晶，最大杂质为0. 06%，结晶30°C 真空干燥30小时，得到3. 48公斤类白色产品。最大杂质为0. 06%，产品含量为99. 2%。
权利要求
一种生产制备奥利司他的方法，包括以下步骤1)吸附树脂纯化奥利司他中间体尼泊司他汀发酵液用丙酮浸提，浸提后过滤菌体，丙酮浸提液经过滤后用草酸调节PH至3.0～4.5，上大孔吸附树脂吸附，吸附完后丙酮水溶液洗脱直到TLC检测无尼泊司他汀析出为止；2)洗脱液的萃取、氢化树脂吸附后洗脱液加水调节丙酮浓度，然后用庚烷萃取。含有尼泊司他汀的庚烷萃取液浓缩后氢化合成奥利司他；3)奥利司他的硅胶柱层析将步骤2)氢化得到的奥利司他液，浓缩，上硅胶柱，流动相为庚烷 乙酸乙酯，检测收集，直到TLC无产品出现为止；4)浓缩、结晶收集硅胶柱层析液浓缩后1～2次庚烷结晶，30℃真空干燥后，得到纯度为99％以上的奥利司他产品。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中用丙酮浸提发酵液，丙酮与发酵液 的体积比为1 2 1。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中丙酮发酵浸提液用大孔吸附树脂层 析，大孔吸附树脂的型号为HZ818或HZ820型。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中大孔吸附树脂层析的吸附量为 30 50克/升树脂。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)中大孔吸附树脂洗脱液丙酮水溶液的 浓度为80%。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)中树脂吸附洗脱液加水调节丙酮浓度 至50 65%。
7.如权利要求8所述的方法，其特征在于树脂吸附洗脱液加水调节丙酮浓度至60%。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)、步骤3)中用到的TLC展开剂为庚 烷乙酸乙酯=6 1。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)中奥利司他柱层析的流动相为庚烷 乙酸乙酯=4 1。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)中奥利司他柱层析的上样量为80 100克/升。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种发酵法生产减肥药物奥利司他的制备新方法。本发明制备方法包括发酵液浸提过滤、大孔吸附树脂层析除杂、氢化后奥利司他的硅胶柱层析等步骤。通过发酵浸提液的大孔吸附树脂层析以及奥利司他的硅胶柱层析等方法，达到良好的除杂、纯化产品的效果。
文档编号C07D305/12GK101948450SQ20101050517
公开日2011年1月19日 申请日期2010年10月13日 优先权日2010年10月13日
发明者刘茂田, 赵志全 申请人:鲁南制药集团股份有限公司