专利名称：酸模素的分离制备方法
技术领域：
本发明涉及用高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备高纯度酸模素的方法。
背景技术：
羊蹄(Rumex japonicus Houtt.)为蓼科酸模属植物，又名土大黄、金不换等，为多年生草本，资源极为丰富，广泛分布于我国华东、华中、华南等地区，生于田边、路旁、河滩、 沟边湿地。其根入药，为较常用药，始载于《神农本草经》，列为下品，味苦，性寒。有杀虫、活血止血、清热解毒等功效，用于皮肤病、疥癣、各种出血及各种炎症。原源等采用高效液相色谱法对5种酸模属植物根及3个不同产地羊蹄根中酸模素的含量进行了测定，不同基原的 “羊蹄类药材”中酸模素含量存在较大差异，5种药材中羊蹄的酸模素含量最高，可达0. 13% 以上，金不换和齿果酸模次之，具有作为抗真菌药的开发利用价值。酸模素(Musizin)，又名羊蹄根素；分子式=C13H12O3 ；分子量216. 23 ；为黄色针状结晶，mp. 1640C -165°C。药理研究表明酸模素具有抗菌、抗真菌作用。对深红色发癣菌、枯草杆菌、白色念珠菌和八迭球菌的最低抑菌浓度分别为50，25，100，100yg/ml ；可以作为抗氧化剂用于食品和化妆品；对睾丸激素还原酶有抑制作用；含有酸模素的牙粉制品可以预防和治疗牙龈炎和牙床的脓溢。中国专利申请号200610046584. 1利用羊蹄根根部所含的大黄素、酸模素等成份，抑制、杀灭红色毛癣菌、及其它致病菌，达到治愈脚气病的目的。文献报道了用硅胶柱层析方法得到酸模素的方法(郑水庆，等.中药羊蹄化学成分的研究(I).第二军医大学学报.2000，21 (10) :910-913)，采用80%乙醇室温冷浸提取多次，减压浓缩，依次用二氯甲烷等多种溶剂萃取，在二氯甲烷的提取物经硅胶柱层析分离得到酸模素，该方法操作步骤繁琐，过程中损失大，回收率低。高速逆流色谱(HSCCC)是国际上世纪80年代以来在液-液分配色谱基础上发展起来的新型分离技术，其分离原理是利用螺旋柱在高速行星运动时产生的巨大离心力，使螺旋柱中互不相溶的两相不断混合，达到稳定的流体动力学平衡态。该技术不采用固态吸附剂，是全液态的色谱方法。与其他的色谱技术相比，HSCCC是能够消除固体吸附剂所导致的样品不可逆吸附和对样品的沾染、失活、变性等影响，实现复杂混合物中各组分的高纯度分离。HSCCC的流动相、固定相为互不相溶的液体。利用螺旋管柱方向性及特定的高速流星式旋转所产生的离心场作用，使无载体支持的固定相稳定地保留在聚四氟乙烯管中，利用恒流泵连续输入流动相，随流动相进入螺旋柱的溶质再两相间持续分配，按分配系数大小依次洗脱。高速逆流色谱作为一种新型的分离技术，有许多优点是传统液-固色谱无法比拟的，因而具有广阔的应用前景。首先，它的流动相和固定相均为液体，不需固体载体，避免了不可逆吸附；其次，它的分离率高，可达几千个理论塔板数；此外，它的进样量大，可从毫克到克量级。
发明内容
本发明要解决的技术问题是客服现有技术的缺点，采用高速逆流色谱法分离制备酸模素的方法。该方法得到的酸模素含量高达98%。本发明的技术方案如下酸模素的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将羊蹄用二氯甲烷渗漉提取，回收溶剂，得粗提取干燥物；2)选择两相溶剂体系，采用高速逆流色谱仪，将步骤1)中的粗提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再将固定相泵满色谱分离柱，连接柱首端与进样阀，收集分离物，浓缩、干燥得到酸模素。所述步骤2)中的两相溶剂体系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，体积比为 (5-8) (7-10) (4-6) 0-4)，优选体积比为 6 8 4 2、8 10 6 4、 5·8·5·2ο所述高速逆流色谱法所用分离柱转速为600-900rpm，优选650-800rpm。所述高速逆流色谱法中流动相流速为0. 5-3ml/min,优选为1. 0-2. 5ml/min。本发明的有益效果由于采用了合理的溶剂体系，控制温度、转速、流动相流速等条件，本发明可得到高纯度的酸模素。且该方法简单，适于各种型号的逆流色谱仪分离纯化酸模素，条件温和、回收率高，用时短。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明的实施方式并不仅限于此。实施例1 取羊蹄根150g (南京产)，用IOOml 二氯甲烷浸润后渗漉提取，至渗漉液颜色变浅， 回收溶剂，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色谱仪，色谱仪分离溶剂体系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水组成， 体积比为6 :8:4: 2，将溶剂体系配置于分液漏斗中，充分振摇后静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取粗提干燥物1. 5g溶于30ml上层和下层的混合溶剂中，使高速逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后将柱的首端与进样阀相连接，开启速度控制器，使主机转动，转速达到700rpm，开始以2. Oml/min流速泵入流动相，再由进样阀泵入溶有1. 5g样品的溶剂，待流动相开始流出色谱柱时开始收集分离物，设定波长为2Mnm，根据检测器图谱接受目标成分，浓缩后得到酸模素92mg，其中纯度98. 5%。实施例2:取羊蹄根150g (南京产)，用IOOml 二氯甲烷浸润后渗漉提取，至渗漉液颜色变浅， 回收溶剂，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色谱仪，色谱仪分离溶剂体系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水组成， 体积比为8 10 6 4，将溶剂体系配置于分液漏斗中，充分振摇后静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取粗提干燥物2. Ig溶于40ml上层和下层的混合溶剂中，使高速逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后将柱的首端与进样阀相连接，开启速度控制器，使主机转动，转速达到650rpm，开始以1. 5ml/min流速泵入流动相，再由进样阀泵入溶有2. Ig样品的溶剂，待流动相开始流出色谱柱时开始收集分离物，设定波长为2Mnm，根据检测器图谱接受目标成分，浓缩后得到酸模素91mg，其中纯度98. 8%。实施例3 取羊蹄根150g (南京产)，用IOOml 二氯甲烷浸润后渗漉提取，至渗漉液颜色变浅， 回收溶剂，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色谱仪，色谱仪分离溶剂体系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水组成， 体积比为5 :7:5: 3，将溶剂体系配置于分液漏斗中，充分振摇后静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取粗提干燥物2. 5g溶于50ml上层和下层的混合溶剂中，使高速逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后将柱的首端与进样阀相连接，开启速度控制器，使主机转动，转速达到900rpm，开始以1. Oml/min流速泵入流动相，再由进样阀泵入溶有2. 5g样品的溶剂，待流动相开始流出色谱柱时开始收集分离物，设定波长为2Mnm，根据检测器图谱接受目标成分，浓缩后得到酸模素90mg，其中纯度98. 4%。实施例4 取羊蹄根150g (南京产)，用IOOml 二氯甲烷浸润后渗漉提取，至渗漉液颜色变浅， 回收溶剂，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色谱仪，色谱仪分离溶剂体系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水组成， 体积比为6 10 6 4，将溶剂体系配置于分液漏斗中，充分振摇后静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取粗提干燥物2. Sg溶于55ml上层和下层的混合溶剂中，使高速逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后将柱的首端与进样阀相连接，开启速度控制器，使主机转动，转速达到850rpm，开始以0. 5ml/min流速泵入流动相，再由进样阀泵入溶有2. 8g样品的溶剂，待流动相开始流出色谱柱时开始收集分离物，设定波长为254nm，根据检测器图谱接受目标成分，浓缩后得到酸模素Mmg，其中纯度98. 1%。实施例5 取羊蹄根150g (南京产)，用IOOml 二氯甲烷浸润后渗漉提取，至渗漉液颜色变浅， 回收溶剂，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色谱仪，色谱仪分离溶剂体系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水组成， 体积比为7 :9:4: 3，将溶剂体系配置于分液漏斗中，充分振摇后静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取粗提干燥物3. Og溶于60ml上层和下层的混合溶剂中，使高速逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后将柱的首端与进样阀相连接，开启速度控制器，使主机转动，转速达到750rpm，开始以2. 2ml/min流速泵入流动相，再由进样阀泵入溶有3. Og样品的溶剂，待流动相开始流出色谱柱时开始收集分离物，设定波长为254nm，根据检测器图谱接受目标成分，浓缩后得到酸模素93mg，其中纯度98. 3%。实施例6 取羊蹄根150g (南京产)，用IOOml 二氯甲烷浸润后渗漉提取，至渗漉液颜色变浅， 回收溶剂，得棕褐色粗提干燥物16. 3g。采用高速逆流色谱仪，色谱仪分离溶剂体系由石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水组成， 体积比为5 :8:5: 2，将溶剂体系配置于分液漏斗中，充分振摇后静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，取粗提干燥物3. 5g溶于70ml上层和下层的混合溶剂中，使高速逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后将柱的首端与进样阀相连接，开启速度控制器，使主机转动，转速达到800rpm，开始以1. 5ml/min流速泵入流动相，再由进样阀泵入溶有3. 5g样品的溶剂，待流动相开始流出色谱柱时开始收集分离物，设定波长为2Mnm，根据检测器图谱接受目标成分，浓缩后得到酸模素88mg，其中纯度98. 9%。
权利要求
1.酸模素的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将羊蹄用二氯甲烷渗漉提取，回收溶剂，得粗提取干燥物；2)选择两相溶剂体系，采用高速逆流色谱仪，将步骤1)中的粗提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再将固定相泵满色谱分离柱，连接柱首端与进样阀，收集分离物，浓缩、干燥得到酸模素。
2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的两相溶剂体系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，体积比为(5-8) (7-10) (4-6) 0-4)，优选体积比为 6 8 4 2、8 10 6 4、5 8 5 2。
3.按照权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述高速逆流色谱法所用分离柱转速为 600-900rpm，优选 650_800rpm。
4.按照权利要求1-3所述的制备方法，其特征在于所述高速逆流色谱法中流动相流速为 0. 5-3ml/min，优选为 1. 0-2. 5ml/min。
全文摘要
本发明公开了酸模素的分离制备方法。所述方法包括以下步骤1)将羊蹄用二氯甲烷渗漉提取，回收溶剂，得粗提取干燥物；2)选择两相溶剂体系，采用高速逆流色谱仪，将步骤1)中的粗提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再将固定相泵满色谱分离柱，连接柱首端与进样阀，收集分离物，浓缩、干燥得到酸模素。步骤2)中的两相溶剂体系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，两相中的上相为固定相，下相为流动相。按本方法得到的酸模素含量达到98％。
文档编号C07C45/79GK102476986SQ201010557828
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月25日 优先权日2010年11月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司