专利名称：纤调蛋白肽的制作方法
技术领域：
本发明大体上涉及纤调蛋白和其肽以及其制备和使用方法。
背景技术：
纤调蛋白(Fibromodulin，FM0D)是富含亮氨酸的小分子蛋白聚糖(small leucine rich proteoglycan, SLRP)家族的成员。纤调蛋白是一种胞浆分泌蛋白，表达模式主要局限于软骨、骨骼、结缔组织和富含胶原蛋白的组织(海尼嘉德(Heinegard)，拉森(Larsson)等人，1986)。纤调蛋白涉及原纤维生成、细胞粘着和细胞因子活性调节(山口(Yamaguchi)， 曼恩(Mann)等人，1990 ；海德布兰德(Hildebrand)，罗玛瑞斯(Romaris)等人，1994)。先前的研究显示,FMOD可以与转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β同功异型物(isoforms)和胶原蛋白组合(赫伯姆(Hedbom)和海尼嘉德(Heinegard) 1989 ；海德布兰德(Hildebrand)，罗玛瑞斯(Romaris)等人，1994)以调节细胞外基质。TGF-β是一种促纤维化因子，可以增加成纤维细胞增殖，刺激结缔组织合成和沉积、并抑制结缔组织分解(盖拉伊-克曼尼(Gharaee-Kermani)JJ^ (Hu)等人，2009)。卡拉玛斯基(Kalamajski)和奥德伯格(Oldberg)曾报导，FMOD经由位于蛋白质C末端富含亮氨酸重复单位11中的glu_353 和lys-355结合I型胶原蛋白(卡拉玛斯基和奥德伯格，2007)。斯文森(Svensson)等人曾报导，FMOD在结缔组织中的胶原蛋白网络组装中起作用，并且缺乏功能性纤调蛋白基因的小鼠的尾腱因具有较少且异常的胶原蛋白纤维束而呈现改变的形态表型(斯文森，阿佐迪(Aszodi)等人，1999)。本发明一个目的是产生一种结合TGF- β并在体外调节TGF- β活性的FM0D-P。本发明另一目的是提供一种通过调节TGF- β活性和/或胶原蛋白组装来治疗、预防或改善身体病况的组合物。
发明内容
根据本发明一个方面，提供一种纤调蛋白(FMOD)肽(FMOD-P)，其包含至少一个能够结合β-组织生长因子(TGF-β)的位点。在一些实施例中，FMOD-P的氨基酸序列可选自(但不限于)由以下序列组成的群组SEQ ID NO 13,SEQ ID NO 14,SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、 SEQ ID NO22,SEQ ID NO23,SEQ ID NO 24,SEQ ID NO25,SEQ ID NO26,SEQ ID N0: 27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、 SEQ ID NO45,SEQ ID NO46,SEQ ID NO 47,SEQ ID NO48,SEQ ID NO49,SEQ ID N0: 50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :58、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO 62 和 SEQ ID NO :63。
根据本发明另一方面，提供一种组合物。所述组合物包含有效量的以下任一成分a) FMOD-P ；b) FMOD-P 的组合；c) FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d) FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e) FMOD 和 FM0D-P 或 FM0D-P 的组合；以及f) (a)到(e)的任一组合，其中所述组合物可有效调节TGF-β活性和/或胶原蛋白组装。在一些实施例中，FMOD-P的氨基酸序列可选自(但不限于)由以下序列组成的群组SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO 18, SEQ ID N0:19、SEQ ID NO :20、SEQ ID N0:21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24, SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、 SEQ ID NO :30, SEQ ID N0:31、SEQ ID NO :32, SEQ ID NO :33, SEQ ID NO :34, SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40, SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、 SEQ ID NO :53,SEQ ID NO :54,SEQ ID NO :55,SEQ ID NO :56,SEQ ID NO :57,SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO :59, SEQ ID NO :60, SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :62 禾口 SEQ ID NO :63。在一些实施例中，TGF-β同功异型物可以是TGF-β l、TGF-0 2和TGF-0 3中的一种。在其它一些实施例中，所述组合物进一步包含赋形剂。在某一实施例中，赋形剂是药学上可接受的载体或皮肤学上可接受的载体。本文中揭示的组合物可配制用于全身或局部(local)递送。在一些实施例中，局部(local)递送是局部(topical)递送、透皮递送、皮内递送、微针递送、以医疗装置(例如心血管支架、乳房植入物)上的涂层形式递送，或通过浸渍或涂覆于各种架构装置(例如同种异体移植皮肤、英特格拉antegra)皮肤再生模板)上来递送。在其它一些实施例中，全身递送是注射、口服、经鼻递送或吸入。根据本发明另一方面，提供一种制备FMOD-P的方法。所述方法包含设计具有FMOD功能和至少一个FMOD结合位点的FM0D-P，以及制备FM0D-P。在一些实施例中，制备包含在一个或一个以上所选位点剪接FMOD以产生FM0D-P。在一些实施例中，制备包含在重组系统中表达FM0D-P，例如在细菌、酵母、哺乳动物或植物细胞中表达FM0D-P。在一些实施例中，制备包含使用肽合成仪机器合成FM0D-P。在一些实施例中，设计包含对FMOD的一级或二级结构进行疏水性分析。根据本发明另一方面，提供一种制备组合物的方法。所述方法包含提供选自以下任一种的成分a) FMOD-P ；b) FMOD-P 的组合；
c) FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d) FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e) FMOD 和 FM0D-P 或 FM0D-P 的组合；以及f) (a)到(e)的任一组合，以及形成包含成分(a)到(f)中任一种的组合物。在一些实施例中，所述形成步骤进一步包含提供赋形剂，并形成包含所述成分和赋形剂的制剂。根据本发明另一方面，提供一种治疗、预防或改善身体病况的方法。所述方法包含给予受试者本文中揭示的FMOD-P ；本文中揭示的组合物；或本文中揭示的制剂。在一些实施例中，所述身体病况可以是与高TGF-β表达有关的过度纤维化或瘢痕形成、肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩、放射性纤维化，以及除皮肤外其它器官系统的纤维化病况。 在一些实施例中，所述纤维化病况包括肺纤维化或者肝、肾、角膜、腹腔内、胃肠、泌尿道、神经或心血管病况。
图1显示质粒pLZZFOl。图2显示通过SDS-PAGE(A)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting) (B)鉴别重组 FMOD。图3显示FMOD与TGF- β 1结合的ELISA分析。图4显示从牛组织提取的二聚核心蛋白聚糖，结晶型-2 (Ixec)。图5显示人FMOD(查询)与模板(lxeC_A)之间的结构比对。ACCI值表明模板各残基的相对溶剂可及性，从低到高为:*，1、2、3、4、5、6、7、8、9 ；SS和SS QP分别表示已知的模板二级结构和预测的FMOD的二级结构；H 螺旋(helix) ；E 折叠(sheet)；和C 卷曲 (coil)ο图6显示预测的重组人FMOD (AA 71-375)的3D结构。黄色折叠；红色螺旋；蓝色和白色卷曲。图7显示预测的重组人FMOD (AA 71-375)的3D结构。红色半胱氨酸可构造二硫键结合。图8显示根据康纳利方法(Conolley Method)利用分子表面预测来预测的重组人 FMOD(AA 71-375)的3D结构。黄色N-糖苷点。图9显示利用疏水性预测的重组人FMOD (AA 71-375)的3D结构。从蓝色到红色， 疏水性增加。图10显示根据克鲁姆博方法(Coulomb method)利用静电势预测的重组人 FMOD(AA 71-375)的3D结构。红色带负电荷；蓝色带正电荷。图11显示人FMOD的一级结构。C 构造二硫键结合的半胱氨酸；N =N-糖苷点；L 富含亮氨酸重复单位(leucine-rich repeat, LRR)。一些本发明FMOD肽是依据人FMOD的一级结构而设计。图12显示一些与TGF- β 1结合的 SUMO融合FMOD肽片段的ELISA分析。图13显示TGF- β 1与FMOD和/或FM0D-P的结合活性。图14显示TGF- β 2与FMOD和/或FM0D-P的结合活性。图15显示TGF- β 3与FMOD和/或FM0D-P的结合活性。图16显示TGF- β组合FMOD对细胞增殖的作用。图17Α和图17Β显示TGF- β组合F07-C40对细胞增殖的作用。图17C显示TGF- β组合F06-C40对细胞增殖的作用。图18Α到图18D显示有关FMOD和/或TGF- β对细胞迁移的作用的数个测试实例的结果。图19Α到图19D显示在24小时处理后使用DAPI核染色定量的在200 X放大倍率下基质胶(Matrigel)中细胞迁移/侵袭的测试结果。图20Α到图20Ε显示在24小时处理后使用DAPI核染色定量的在100Χ放大倍率下基质胶中细胞迁移/侵袭的测试结果。 图21Α到图21D显示有关FMOD和TGF- β或FMOD肽和TGF- β对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)表达和细胞聚集的作用的测试结果。图22显示在FMOD、TGF- β 1或FMOD和TGF- β 1处理后Rat_2细胞H&E形态学的结果。图23A到图23E显示有关FMOD单独或组合TGF- β的对CTGF表达的作用的测试结果。图23Α显示由2天的对照处理得到的结果。图23Β显示由2天的FMOD单药处理得到的结果。图23C显示由2天的TGF-β单药处理得到的结果。图23D显示由2天的FMOD+TGF-β 1组合处理得到的结果。图23Ε显示分别比较图30Α到图30D的结果的图。图24显示TGF- β 1处理增加CTGF的表达(绿色荧光)，而相对于TGF- β 1单药处理，TGF-β 1/FM260D组合处理明显增加CTGF的表达(绿色荧光)。图25Α到图2OT显示有关FMOD和TGF- β或FMOD肽和TGF- β对α -平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, α-SMA)表达的作用的测试的结果。图25A显示由对照测试得到的结果，其显示最小α-SMA染色。图25Β显示由200nM FMOD处理得到的结果，其显示最小α-SMA染色。图25C显示由IOOpM TGF-β 1处理得到的结果，其显示中等α-SMA 染色。图25D显示由IOOpM TGF-β 1+200ηΜ FMOD处理得到的结果，其显示伴随细胞密度/ 细胞聚集增加的α -SMA染色明显增加。图26Α到图26Β显示有关利用FMOD-P实现愈合的测试的结果。
具体实施例方式根据本发明一个方面，提供一种纤调蛋白(FMOD)肽(FMOD-P)，其包含至少一个能够结合转化生长因子-β (TGF-β)的位点。在一些实施例中，FMOD-P的氨基酸序列选自 (但不限于)由以下序列组成的群组SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、 SEQ ID NO22,SEQ ID NO 23,SEQ ID NO24,SEQ ID NO 25,SEQ ID NO26,SEQ ID NO:27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、 SEQ ID NO45,SEQ ID NO46,SEQ ID NO 47,SEQ ID NO48,SEQ ID NO49,SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :58、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO 62 和 SEQ ID NO :63。根据本发明另一方面，提供一种组合物。所述组合物包含有效量的以下任一成分a) FMOD-P ；b) FMOD-P 的组合；c) FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d) FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e) FMOD 和 FM0D-P 或 FM0D-P 的组合；以及f) (a)到(e)的任一组合，其中所述组合物可有效调节TGF-β活性和/或胶原蛋白组装。在一些实施例中，FMOD-P的氨基酸序列选自(但不限于)由以下序列组成的群组 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24, SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、 SEQ ID NO :36,SEQ ID NO :37,SEQ ID NO :38,SEQ ID NO :39,SEQ ID NO :40,SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50, SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53, SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :58、 SEQ ID NO :59, SEQ ID NO :60, SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :62 禾口 SEQ ID NO :63。在其它一些实施例中，TGF-β同功异型物是TGF-β 1 (SEQ ID NO 64)、 TGF- β 2 (SEQ ID NO :65)禾口 TGF_3 3(SEQ ID NO :66)中的一种。在其它一些实施方案中，所述组合物进一步包含赋形剂。在某些实施例中，赋形剂是药学上可接受的载体或皮肤学上可接受的载体。本文中揭示的组合物可配制用于全身或局部(local)递送。在一些实施例中，局部(local)递送是局部(topical)递送、透皮递送、皮内递送、微针递送、以医疗装置(例如心血管支架、乳房植入物)上的涂层形式递送，或通过浸渍或涂覆于各种架构装置(例如同种异体移植皮肤、英特格拉(integra)皮肤再生模板)上来递送。在其它一些实施例中，全身递送是注射、口服、经鼻递送或吸入。根据本发明另一方面，提供一种制备FMOD-P的方法。所述方法包含设计具有FMOD功能和至少一个FMOD结合位点的FM0D-P，以及制备FM0D-P。在一些实施例中，制备包含在一个或一个以上所选位点剪接FMOD以产生FM0D-P。在一些实施例中，制备包含在重组系统中表达FM0D-P，例如在细菌、酵母、哺乳动物或植物细胞中表达FMOD-P，或在无细胞系统(例如无细胞翻译系统)中产生所述肽。在一些实施例中，制备包含使用肽合成仪机器合成FM0D-P。
在一些实施例中，设 计包含对FMOD的一级或二级结构进行疏水性分析。根据本发明另一方面，提供一种制备组合物的方法。所述方法包含提供选自以下任一种的成分a) FMOD-P ；b) FMOD-P 的组合； c) FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d) FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e) FMOD 和 FM0D-P 或 FM0D-P 的组合；以及f) (a)到(e)的任一组合，以及形成包含成分(a)到(f)中任一种的组合物。在一些实施例中，所述形成步骤进一步包含提供赋形剂，并形成包含所述成分和赋形剂的制剂。根据本发明另一方面，提供一种治疗、预防或改善身体病况的方法。所述方法包含给予受试者本文中揭示的FMOD-P ；本文中揭示的组合物；或本文中揭示的制剂。所述身体病况可以是需要在超微结构、显微结构和宏观结构水平上调节TGF-β 活性和/或胶原蛋白组装的任何病况，例如，所述病况可以是调节TGF-β活性和/或胶原蛋白组装可提供有益作用的病况。所述身体病况的实例可以是例如过度纤维化或瘢痕形成等与高TGF-β表达有关的疾病、肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩、放射性纤维化，除皮肤病况外的其它器官系统的纤维化病况，例如(但不限于)肺(肺纤维化)(盖拉伊_克曼尼 (Gharaee-Kermani)，胡(Hu)等人，2009)、肝、肾、角膜、腹腔内、胃肠、泌尿道、神经或心血管病况。FMOD-P或其组合物可通过适合的递送模式，例如通过局部施用、注射、局部递送 (例如经由药物洗脱支架、球囊或导管递送)或通过吸入器递送施用于患者。尺寸较小的新颖FMOD肽可以使通过吸入技术进行的肺递送比较大的FMOD全蛋白更可行。本文中使用的术语“纤调蛋白(FMOD)，，(SEQ ID NO 1 ；基因库(Genebank) ΝΜ_002023)是指本领域技术中一般已知的纤调蛋白分子。FMOD分子的实例揭示于(海尼嘉德(Heinegard)，拉森(Larsson)等人，1986)如 SEQ ID NO 1 和 SEQ ID NO :2(基因库 BC035381)、SEQ ID NO :3 (基因库 U05291)、SEQ ID NO :4 (基因库 ΑΚ303866)、SEQ ID NO: 5(基因库 AK172740)、SEQ ID NO :6 (基因库 AK092999)、SEQ ID NO :7 (基因库 AK027694)、 SEQ ID NO :8(基因库 DQ892112)、SEQ ID NO :9 (基因库 X72913)、SEQ ID N0:10(基因库 S75546)、SEQ ID NO :11 (基因库 AY890642)、SEQ ID NO :12 (基因库 AY893119)所示。有关这些序列的信息为SEQ ID NO 1 :NH2-ffTSLLLLAGLFSLSQAQYEDDPHWWFHYLRSQQSTYYDPYDPYPYETYEPYPY GVDEGPAYTYGSPSPPDPRDCPQECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNATGLLwialhgnqitsdkvgrkvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqisrvpnnaleglenltalylqh neiqevgssmrglrslilldlsynhlrkvpdglpsaleqlymehnnvytvpdsyfrgapkllyvrlshnsltnngla sntfnssslleldlsynqlqkippvntnlenlylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsampad aplclrlasliei-c00hseq id no 2 :nh2-mqwtsllllaglfslsqaqyeddphwwfhylrsqqstyydpydpypyetyepy pygvdegpaytygspsppdprdcpqecdcppnfptamycdnrnlkylpfvpsrmkyvyfqnnqitsiqegvfdnatg llwialhgnqitsdkvgrkvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqisrvpnnaleglenltalyl qhneiqevgssmrglrslilldlsynhlrkvpdglpsaleqlymehnnvytvpdsyfrgapkllyvrlshnsltnng lasntfnssslleldlsynqlqkippvntnlenlylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsamp adaplclrlasliei-c00hseq id no 3 :nh2-ylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsampadaplclrla sliei-c00hseq id no 4 :nh2-qwtsllllaglfslsqaqyeddphwwfhylrsqqstyydpydpypyetyepyp ygvdegpaytygspsppdprdcpqecdcppnfpfvpsrmkyvyfqnnqitsiqegvfdnatgllwialhgnqitsdk vgrkvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqisrvpnnaleglenltalylqhneiqevgssmrgl rslilldlsynhlrkvpdglpsaleqlymehnnvytvpdsyfrgapkllyvrlshnsltnnglasntfnssslleld lsynqlqkippvntnlenlylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsampadaplclrlasliei -coohseq id no :5 :nh2-mkmtliggsttsaassppttipmtltrmrptsltpmgwmkgqptptalhldhn
qisrvpnnaleglenltamycdnrnlkylpfvpsrmkyvyfqnnqitsiqegvfdnatgllffialhgnqitsdkvgr kvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqipataprnatahptsprpctsntmrsrkwavp-coohseq id no :6 :nh2-mkmtliggsttsaassppttipmtltrmrptsltpmgwmkgqptptalhplqi pataprkvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqisrvpnnaleglenltalylqhneiqevgssm rglrslilldlsynhlrkvpdglpsaleqlymehnnvytvpdsyfrgapkllyvrlshnsltnnglasntfnsssll eldlsynqlqkippvntnlenlylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsampadaplclrlasl iei-coohseq id no 7 :nh2-mqwtsllllaglfslsqaqyeddphwwfhylrsqqstyydpydpypyetyepy pygvdegpaytygspsppdprdcpqecdcppnfptamycdnrnlkylpfvpsrmkyvyfqnnqitsiqegvfdnatg llwialhgnqitsdkvgrkvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqisrvpnnaleglenltalyl qhneiqevgssmrglrslilldlsynhlrkvpdglpsaleqlymehnnvytvpdsyfrgapkllyvrlshnsltnng lasntfnssslleldlsynqlqkippvntnlenlylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsamp adaplclrlasliei-c00hseq id no 8 :nh2-mqwtsllllaglfslsqaqyeddphwwfhylrsqqstyydpydpypyetyepy pygvdegpaytygspsppdprdcpqecdcppnfptamycdnrnlkylpfvpsrmkyvyfqnnqitsiqegvfdnatg llwialhgnqitsdkvgrkvfsklrhlerlyldhnnltrmpgplprslrelhldhnqisrvpnnaleglenltalyl qhneiqevgssmrglrslilldlsynhlrkvpdglpsaleqlymehnnvytvpdsyfrgapkllyvrlshnsltnng lasntfnssslleldlsynqlqkippvntnlenlylqgnrinefsissfctvvdvvnfsklqvlrldgneikrsamp adaplclrlasliei-coohseq id no :9 :nh2-mqwtsllllaglfslsqaqyeddphwwfhylrsqqstyydpydpypyetyepyPYGVDEGPAYTYGSPSPPDPRDCPQECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNATG LLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTALYL QHNEIQEVGSSMRGLRSLYLLDLSYNHLRKVPDGLPSALEQLYMEHNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNNG LASNTFNSSSLLELDLSYNQLQKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFCTVVDVVNFSQLQVVRLDGNEMKRSAMP AEAPLCLRLASLIEI-COOHSEQ ID NO 10 :NH2-MQWASLLLLAGLFSLSQAQYEDDPHWWFHYLRSQQSTYYDPYDPYPYETYEP YPYGVDEGPAYTYGSPSPPDPRDCPQECDCPPNFLTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNAT GLLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTALY LQHDEIQEVGSSMRGLRSLILLDLSYNHLRKVPDGLPSALEQLYMEHNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNN GLASNTFNSSSLELDLSYNQLQKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFCTVVDVVNFSKLQVVRLDGNEIKRSAMP ADAPLCLRLASLIEI-COOHSEQ ID NO 11 :NH2-M QWTSLLLLAGLFSLSQAQYEDDPHWWFHYLRSQQSTYYDPYDPYPYETYEP YPYGVDEGPAYTYGSPSPPDPRDCP QECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNA TGLLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTAL YLQHNEIQEVGSSMRGLRSLILLDLSYNHLRKVPDGLPSALEQLYMEHNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTN NGLASNTFNSSSLLELDLSYNQLQKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFCTVVDVVNFSKLQVLRLDGNEIKRSA MPADAPLCLRLASLIGI-COOHSEQ ID NO 12 :NH2-MQWTSLLLLAGLFSLSQAQYEDDPHWWFHYLRSQQSTYYDPYDPYPYETYEP YPYGVDEGPAYTYGSPSPPDPRDCPQECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNAT GLLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTALY LQHNEIQEVGSSMRGLRSLILLDLSYNHLRKVPDGLPSALEQLYMEHNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNN GLASNTFNSSSLLELDLSYNQLQKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFCTVVDVVNFSKLQVLRLDGNEIKRSAM PADAPLCLRLASLIEIL-COOH 。本文中使用的术语TGF-β同功异型物是指具有比TGF-β短的氨基酸序列但保留TGF-β的功能和TGF-β的结合位点。在一些实施例中，术语TGF-β同功异型物可以与术语TGF-β肽互换使用。所述TGF-β同功异型物的实例是TGF-β 1 (SEQ ID NO :64)、 TGF- β 2 (SEQ ID NO 65)和 TGF-β 3 (SEQ ID NO :66)。有关这些序列的信息为SEQ ID NO 64 :NH2-ALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGffKWIHEPKGYHANFCLGPCPYIff SLDTQYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLS匪IVRSCKCS-C00HSEQ ID NO 65 =NH2-QDNCCLRPLYIDFKRDLGffKffIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHRVLSL YNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLS匪IVKSCKCS-C00HSEQ ID NO 66 :NH2-NCCVRPLYIDFRQDLGWKWVHEPKGYYANFCSGPCPYLRSADTTHSTVLGLY NTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPKVEQLSNMVVKSCKCS-C00H。本文中使用的术语“有益作用”是指所属领域一般或专业技术人员易于根据所述 “有益作用”确定的身体病况的生物学显著改良。举例来说，如果“有益作用”是瘢痕外观的改良，那么一般技术人员可以确定有益作用。但如果所述“有益作用”是胆道支架狭窄减轻， 或冠状血管支架狭窄减轻，或腹腔内粘着减少，那么需要专业技术人员来确定有益作用。纤调蛋白肽本文中使用的术语纤调蛋白肽(FMOD-P)是指具有比FMOD短的氨基酸序列，但保留纤调蛋白(FMOD)的某些功能和结合位点或者可能具有FMOD中通常未暴露的新颖功能和结合位点的FMOD同功异型物。在一些实施例中，FMOD-P可以与术语FMOD同功异型物互换使用。在本申请文件中，FMOD-P有时被描述为FMOD肽、本发明FMOD-P或本发明FMOD肽。在一些实施例中，术语FMOD-P涵盖本发明FMOD-P的功能或结构衍生物。这些衍生物可通过借助例如化学修饰或物理修饰等确立的方法使本发明FMOD-P衍生化来得到。化学修饰包括例如使用酸、碱、酯化、聚乙二醇化(PEGylation)或用短链烷基进行的烷基化。 物理修饰包括例如加热、湿处理、光处理、机械碰撞等。FMOD-P的实例包括(但不限于)具有以下序列的肽=SEQ ID NO :13、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、 SEQ ID NO32,SEQ ID NO33,SEQ ID NO 34,SEQ ID NO35,SEQ ID NO36,SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :54、 SEQ ID NO55,SEQ ID NO56,SEQ ID NO 57,SEQ ID NO58,SEQ ID NO59,SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO :61, SEQ ID NO :62 禾口 SEQ ID NO :63。有关某些氨基酸序列的序列信息如下所列SEQ ID NO 13 :NH2-NRNLKYKPFVPSRMK-C00HSEQ ID NO 14 =NH2-FQNNQITSIQEGVFDNATGLL-C00HSEQ ID NO 15 :NH2-NRNLKYKPFVPSRMK-C00HSEQ ID NO 16 NH2_YLRSQQSTYYDPYDPYPYETYEPYPYGVDEGPAYTYGSP SPPDPRDCPQECDCPPNFPTAMYCD-COOHSEQ ID NO :17 :NH2-PYGVDEGPAYTYGSP SPPDPRDCPQECDCPPNFPTAMYD-COOHSEQ ID NO :18 :NH2-SRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNATGLLWIALHGNQITS-COOHSEQ ID NO 19 :NH2-NRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNATGLLWIALHGNQITS-C 00HSEQ ID NO 20 :NH2-DKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQI-COOHSEQ ID NO 21 :NH2-SRVPNNALEGLENLTALYLQHNEIQEVGSSMRGLRSLILLDLSYNHLRKVPD GLPSALEQLYMEHNNV-C00HSEQ ID NO 22 :NH2-YTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNNGLASNTFNSSSLLELDLSYNQLQKI PPVNTNLENLYLQGNRI-COOHSEQ ID NO 23 :NH2-NEFSISSFCTVVDVVNFSKLQVLRLDGNEIKRSAMPADAPLCLRLASLIEI-C00HSEQ ID NO 24 :NH2-QWTSLLLLAGLFSLSQAQYEDDPHWWFHYLRSQQSTYYDP-COOHSEQ ID NO 25 :NH2-DDPHWWFHYLRSQQSTYYDPYDPYPYETYEPYPYGVDEGP-COOHSEQ ID NO 26 NH2-D P RD C P Q E CD C P P NFP T AM Y CD N RN L K Y L P F V P SRMKYVYFQNNQITSIQ-C00HSEQ ID NO :27 :NH2-YGSPSPPDPRDCPQECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNN-COOHSEQID NO :28 :NH2-FPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQITSIQEGVFDNATGLLWIA-C OOHSEQID NO 29 =NH2-LLffIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELH LDHNQI-COOHSEQID NO 30 :NH2-AYTYGSPSPPDPR DCPQECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVY_C OOHSEQID NO 31 NH2-SRVPNNALEGLENLTALYLQHNEIQEVGSSMRGLRSLILLDLSYNHL-COOHSEQID NO 32 :NH2-RKVPDGLPSALEQLYMEHNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLT-COOHSEQID NO 33 :NH2-NNGLASNTFNSSSLLELDLSYNQLQKIPPVNTNLENLYLQGNRI_COOHSEQID NO 34 =NH2-TSIQEGVFDNATGLLffIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNL-C OOHSEQID NO 35 NH2-TRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTALYLQHNEIQE-COOHSEQID NO 36 :NH2-VGSSMRGLRSLILLDLSYNHLRKVPDGLPSALEQLYMEHNNV-COOHSEQID NO 37 :NH2-YTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNNGLASNTFNSSSLLELDLSYNQL-CO OHSEQID NO 38 :NH2-QKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFCTVVDVVNFSKLQVLRLDGNEI-C OOHSEQID NO 39 :NH2-DKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNA LEGLEN-COOHSEQID NO 40 :NH2-NATGLLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNN-COOHSEQID NO 41 :NH2-NATGLLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSL RELHLDHNQISRVPNNALEGLEN-COOHSEQID NO 42 :NH2-NLTALYLQHNEIQEVGSSMRGLRSLILLDLSYNHLRKVPDGLPSALEQLYME HNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNNGLASNTFN-COOHSEQID NO 43 :NH2-TRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTALYLQHNEIQEVGSSM RGLRSLILLDLSYNHL-COOHSEQID NO 44 :NH2-RKVPDGLPSALEQLYMEHNNVYTVPDSYFRGAPKLLYVRLSHNSLTNNGLAS
ntfn-coohSEQID NO :45 :NH2-NSSSLLELDLSYNQLQKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFC_COOHSEQID NO 46 :NH2-CTVVDVVNFSKLQVLRLDGNEIKRSAMPADAPLC-COOHSEQID NO 47 :NH2-QKIPPVNTNLENLYLQGNRINEFSISSFCTVVDVVNFSKLQVLRLDGNEIKR SAMPADAPLC-COOHSEQID NO :48 :NH2-CPQECDCPPNFPTAMYCDNRNLKYLPFVPSRMKYVYFQNNQI-COOHSEQID NO 49 :NH2-ATGLLWIALHGNQITSDKVGRKVFSKLRHLERLYLDHNNLTRMPGPLPRSLR ELHLDHNQIS-COOHSEQID NO 50 :NH2-NLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLENLTALYLQHNEIQE-CO OHSEQID NO 51 :NH2-NLTRMPGPLPRSLRELHLDHNQISRVPNNALEGLEN_COOH
SEQIDNO 52=NH2-
SEQIDNO 53=NH2-
SEQIDNO 54=NH2-
SEQIDNO 55=NH2-
SEQIDNO56=NH2-OH
SEQIDNO 57=NH2-
SEQIDNO58=NH2-OOH
SEQIDNO 59=NH2-
SEQIDNO 60=NH2-
SEQIDNO 61=NH2-
SEQIDNO62=NH2-COOH
SEQIDNO 63=NH2-
本文中揭示的FM0D_
设计具有比FMOD短
可通过一种方法制备，所述方法包含 R基酸序列但保留FMOD的功能和结合位点或可能具有FMOD 通常未暴露的新颖功能和结合位点的肽；以及制备所述肽。在一些实施例中，设计操作可包括对FMOD的一级结构或二级结构进行疏水性分析以及发现FMOD的结合位点的步骤。在一些实施例中，制备操作包含在一个或一个以上特定位点剪接FMOD以形成所定义的肽。在一个或一个以上位点剪接蛋白质以形成肽是已被充分确立的实验室技术，这些技术易于由所属领域一般技术人员实行。在其它一些实施例中，制备肽的操作包括在重组系统中表达肽，或在无细胞系统 (例如无细胞翻译系统)中产生肽。所述重组系统可以是所属领域一般技术人员易于操作的细菌、酵母、哺乳动物细胞或植物细胞。在其它一些实施例中，制备包含使用肽合成仪机器合成FM0D-P。组合物本文中揭示的组合物可包括以下任一种a) FMOD-P ；b) FMOD-P 的组合；c) FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d) FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e) FMOD 和 FM0D-P 或 FM0D-P 的组合；以及f) (a)到(e)的任一组合。在一些实施例中，TGF-β同功异型物可以是任何TGF-β肽，例如TGF-βΙ、 TGF- β 2、TGF- β 3，或 TGF- β 1、TGF- β 2 禾口 TGF- β 3 的组合，例如(TGF- β 1+TGF- β 2)、 (TGF- β 1+TGF- β 3)或(TGF- β 2+TGF- β 3)。在上述组合物中，FMOD-P如上文所定义。在一些实施例中，组合物包括有效量的上述(a)到(e)成分中的任一种。本文所述组合物可配制成 任何所需的制剂。所述组合物可包括用以实现所需制剂的物质和载体。举例来说，组合物可以包括可在放置处预定时间段内安置的可注射或可塑 (moIdabIe)的物质。所述预定时间段可以是例如10分钟、30分钟、1小时、2小时等。在一些实施例中，组合物可包括化学凝胶，其包括因pH值、离子环境和溶剂浓度改变而形成的主价键。所述化学凝胶的实例可以是(但不限于)多糖，例如壳聚糖；壳聚糖加离子盐，例如β “甘油磷酸盐、海藻酸盐加Ba2+、Sr2+、Ca2+、Mg2+ ；胶原蛋白；纤维蛋白；血浆；或其组合。在一些实施例中，组合物可包括物理凝胶，其包括因温度改变而形成的次价键。 所述物理凝胶的实例可以是(但不限于)海藻酸盐、聚(乙二醇)_聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚(乙二醇)(PEG-PLGA-PEG)三嵌段共聚物、琼脂糖和纤维素。在一些实施例中，可用于本文所述组合物的物理凝胶可包括在高剪切力下呈液态、但在低剪切力下胶凝为固体的物理凝胶。所述物理凝胶的实例包括(但不限于)透明质酸或聚氧化乙烯。物理凝胶可包含具有预定尺寸和形状的预成型物质。在一些实施例中，本文所述组合物可包括对刺激物反应而降解或释放活性剂的物质。所述刺激物的一些实例是机械刺激、光、温度改变、PH值改变、离子强度改变或电磁场。这些物质是本领域技术中已知的。所述物质的一些实例是壳聚糖、海藻酸盐、普朗尼克 (pluronics)、甲基纤维素、透明质酸和聚氧化乙烯。其它实例如布兰德F (Brandl F)，索姆 F (Sommer F)，格普费奇A. (Goepferich A.)，“用于组织工程的水凝胶的合理设计物理因素对细胞行为的影响(Rational design of hydrogels for tissue engineering :Impact of physical factors on cell behavior)，，，生物材料(Biomaterials.)电子版，2006 年 9 月29日中所述。在一些实施例中，本文所述组合物可包括含有羟磷灰石、磷灰石、磷酸三钙、磷酸钙、生物活性玻璃、人同种异体移植骨骼和软骨、牛骨骼和软骨，或其混合物中任一种的凝胶。在一些实施例中，包括上文所述任一凝胶的本文所述组合物可进一步包括交联齐U，以进一步调节降解动力学和控制释放。或者，在一些实施例中，本文所述组合物可包 舌互穿才目复合物(interpenetrating phase composite)或]！[穿网 各(interpenetrating network, IPN)，其包括上述任一凝胶。交联剂的一些实例包括(但不限于)常用交联剂 {聚氧化炼(polyalkylene oxide)、二甲基丙炼酸乙二酉旨(ethylene dimethacrylate)、 N, N ‘-亚甲基双丙烯酰胺(N，N ‘ -methylenebisacrylamide)、亚甲基双(4-苯异氰酸酯)[methylenebis(4-phenyl isocyanate) ]、二甲基丙烯酸乙二酯、二乙烯基苯 (divinylbenzene)、甲基丙烯酸烯丙酯、羰基二咪唑(carbodiimidazole)、磺酰氯、氯代碳酸酉旨(chlorocarbonates)、n_ 轻基玻 白酉先亚月安酉旨(n_hydroxysuccinimide ester)、 琥珀酰亚胺酯(succinimidyl ester)、环氧化物、芳基卤化物、磺基琥珀酰亚胺酯 (sulfasuccinimidyl ester)和顺丁烯二酰亚胺(maleimides)}；基于 PEG 的交联剂(例如 MAL-dPEGx-NHS- S旨、MAL_dPEGx酸、Bis-MAL_dPEGx等)和光活化交联剂、基于N-羟基琥珀酰亚胺的交联剂、二赖氨酸、三赖氨酸和四赖氨酸。本文所述组合物可包括载体。载体可以是聚合物载体或非聚合物载体。在一些实施例中，载体可以是生物可降解的，例如可通过酶促机制或水解机制降解。载体的实例包括 (但不限于)合成的可吸收聚合物，例如(但不限于)聚(α-羟基酸)，例如聚(L-丙交酯) (PLLA)、聚(D，L-丙交酯)(PDLLA)、聚乙交酯(polyglycolide，PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯(PLGA)、聚(-己内酯)、聚(碳酸三亚甲酯)[poly(trimethylene carbonate)]、聚(对二氧杂环己酮)[poly (p-dioxanone)]、聚(-己内酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯-共-碳酸三亚甲酯)、聚(D，L-丙交酯-共-碳酸三亚甲酯)、聚芳酯(polyarylates)、聚羟基丁酸酯(p0lyhydr0Xybutyrate，PHB)、聚酸酐、聚(酸酐-共-酰亚胺)、丙烯-共-反丁烯二酸酯(propylene-co-fumarates)、聚内酯、聚酯、聚碳酸酯、聚阴离子型聚合物、聚酸酐、聚酯-酰胺、聚(氨基酸)、同聚多肽、聚(膦腈)[poly (phosphazenes) ]、poly (glaxanone)、 多糖和聚(原酸酯)[polykrthoesters)]、羟乙酸乳酸聚酯(polyglactin)、聚乳酸羟基乙酸补片(polyglactic acid)、聚糖醛酸(polyaldonic acid)、聚丙烯酸、聚烷酸酯(polyalkanoates)；其共聚物和混合物，以及任何衍生物和修饰。参见例如美国专利 4，563，489和PCT国际申请W0/030M316，都以引用的方式并入本文。载体的其它实例包括纤维素聚合物，例如(但不限于)烷基纤维素、羟基烷基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素和其阳离子盐。载体的其它实例包括合成和天然生物陶瓷，例如(但不限于)碳酸钙、磷酸钙、磷灰石、生物活性玻璃物质和衍生自珊瑚的磷灰石。参见例如美国专利申请US2002187104 ；PCT国际申请 W0/9731661 ；和PCT国际申请W0/0071083，都以引用的方式并入本文。在一个实施例中，载体可进一步用组合物涂覆，包括衍生自溶胶-凝胶技术或浸渍技术的生物玻璃和/或磷灰石，例如(但不限于)钙和磷酸盐的模拟体液，其浓度是天然血清浓度的约1. 5-7倍且在约15摄氏度到65摄氏度温度下借助各种方式PH值调到约 2.8-7.8。参见例如美国专利6,426，114和6，013，591 ；以及PCT国际申请W0/9117965，都以引用的方式并入本文。载体的其它实例包括胶原蛋白(例如科勒斯塔(Collastat)、赫利斯塔 (Helistat)胶原蛋白海绵)、透明质烷(hyaluronan)、纤维蛋白、壳聚糖、海藻酸盐和明胶。 参见例如PCT国际申请W0/9505846 ；W0/02085422，都以引用的方式并入本文。在一个实施例中，载体可包括肝素-结合剂；包括(但不限于)类肝素聚合物， 例如硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、硫酸肝素、聚海藻糖(fucan)、海藻酸盐或其衍生物；以及具有增加肝素亲和力的氨基酸修饰的肽片段。参见例如，生物化学杂志(Journal of Biological Chemistry) (2003)，278 (44)，第 43229-43235 页，以引用的方式并入本文。在一个实施例中，组合物可呈液体、固体或凝胶形式。在一个实施例中，基质可包括呈可流动凝胶形式的载体。所选凝胶应能例如通过注射器注射到需要形成软骨的部位。 凝胶可以是化学凝胶，其可为借助主价键形成并通过PH值、离子基团和/或溶剂浓度控制的化学凝胶。凝胶也可以是物理凝胶，其可通过次价键形成并通过温度和粘度控制。凝胶的实例包括(但不限于)普朗尼克、明胶、透明质烷、胶原蛋白、聚丙交酯-聚乙二醇溶液和结合物、壳聚糖、壳聚糖和b-甘油磷酸盐(BST凝胶)、海藻酸盐、琼脂糖、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚氧化乙烯、溶于N-甲基-2-吡咯烷酮中的聚丙交酯/乙交酯。参见例如，解剖学记录学(Anatomical Record) (2001)，沈3 (4)，342-349，以引用的方式并入本文。在一个实施例中，载体可以是光可聚合的，例如通过用至少约250nm波长的电磁辐射来进行。光可聚合的聚合物的实例包括聚乙二醇(PEG)丙烯酸酯衍生物、PEG甲基丙烯酸酯衍生物、反丁烯二酸丙二酯-共-乙二醇、聚乙烯醇衍生物、PEG-共-聚(_羟基酸)二丙烯酸酯(PEG-co-poly (-hydroxy acid) diacrylate)大分子单体，和改性多糖，例如透明质酸衍生物和甲基丙烯酸葡聚糖(dextran methacrylate)。参见例如美国专利5，410，016， 以引用的方式并入本文。 在一个实施例中，组合物可包括温度敏感性载体。实例包括由N-异丙基丙烯酰胺 (N-i sopropylacryIamide，NiPAM)或修饰的NiPAM制成的载体，所述改性NiPAM具有较低临界溶解温度(lower critical solution temperature, LCST)且通过并入甲基丙烯酸乙酯和N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺；或例如甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸己酯和甲基丙烯酸十二烷酯等甲基丙烯酸烷酯而增强的肽(例如NELL1)结合。PCT国际申请W0/2001070288;美国专利5，124，151，以引用的方式并入本文。在一个实施例中，载体分子可具有经修饰和/或固定化的表面，所述固定化是利用可促进细胞基质通过受体介导机制附着的细胞粘着分子、粘着肽和粘着肽类似物，和/ 或可促进通过非受体介导的结合机制粘着的分子部分进行，所述分子部分为例如(但不限于)聚阳离子性聚氨基酸肽(例如聚赖氨酸)、聚阴离子性聚氨基酸肽、Mefp类粘着分子和其它富含DOPA的肽(例如聚赖氨酸-D0PA)、多糖和蛋白聚糖。参见例如PCT国际申请 W0/2004005421 ；W0/2003008376 ；W0/9734016，都以引用的方式并入本文。在一个实施例中，载体可包括各种天然存在的基质或其组分，例如衍生化软骨基质、去除矿物质的骨骼基质，或来源于同种异体移植物、异种移植物的其它组分，或者来源于原核生物界(Monera)、原生生物界(Protista)、真菌界(Fungi)、植物界(Plantae)或动物界(Animalia)的任何其它天然存在的物质。在一个实施例中，载体可包括一种或一种以上络溶剂(sequestering agents)，例如(但不限于)胶原蛋白、明胶、透明质酸、海藻酸盐、聚(乙二醇)、烷基纤维素(包括羟烷基纤维素，包括甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羧甲基纤维素、血液、纤维蛋白、聚氧化乙烯(polyoxyethylene oxide)、半水合硫酸钙、 磷灰石、羧基乙烯基聚合物和聚(乙烯醇)。参见例如美国专利6，620，406，以引用的方式并入本文。在一个实施例中，载体可包括用以促进载体物质内？1 0- 、 1 )0和/或16 -3同功异型物的稳定性和/或分布的表面活性剂，例如(但不限于)聚氧基酯(polyoxyester) (例如聚山梨酸酯(polysorbate)80、聚山梨酸酯20或普朗尼克F-68 (Pluronic F-68))。在一个实施例中，载体可包括缓冲剂，例如(但不限于)甘氨酸、盐酸谷氨酸、氯化钠、胍、肝素、盐酸谷氨酸、乙酸、琥珀酸、聚山梨醇酯、硫酸葡聚糖、蔗糖和氨基酸。参见例如美国专利5，385，887，以引用的方式并入本文中。在一个实施例中，载体可包括例如上文所列物质等物质的组合。举例来说，载体可以是PLGA/胶原蛋白载体膜。所述膜可以浸泡于包括FM0D-P、FMOD和/或TGF- β同功异型物的溶液中。植入物可包括成型为支架、网丝、钉、螺杆、薄片或人工关节形状的基质 (substrate)。植入物可包括可吸收的基质，例如包括胶原蛋白的基质。FMOD-P, FMOD和/或TGF- β同功异型物肽可与可接受的载体组合形成药物组合物。可接受的载体可以含有生理学上可接受的化合物，其用于例如使组合物稳定或者增加或减少药剂的吸收。生理学上可接受的化合物可包括例如碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质；减少抗有丝分裂剂的清除率或水解的组合物；或者赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲剂。其它生理学上可接受的化合物包括润湿剂、乳化剂、分散剂，或特别适用于防止微生物生长或起作用的防腐剂。众所周知各种防腐剂，并且包括例如苯酚和抗坏血酸。所属领域技术人员应理解，载体(包括生理学上可接受的化合物)的选择视例如给药途径而定。视给药方法而定，组合物可以用多种单位剂型施用。举例来说，适合的单位剂型可包括散剂，或者可注射或可塑糊剂(moldable pastes)或悬浮液。本发明的组合物可包含溶解于药学上可接受的载体(例如用于水溶性肽的水性载体)中的FMOD-P、FMOD和/或TGF-β同功异型物的溶液。可以使用多种载体，例如缓冲生理盐水等。这些溶液是无菌的，而且一般不含不需要的物质。这些组合物可以借助众所周知的常规灭菌技术灭菌。组合物可含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，例如PH值调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些制剂中FM0D-P、FM0D和/或TGF- β同功异型物的浓度可变化极大，并且主要根据所选特定给药模式和患者的需要，基于流体体积、粘度、体重等进行选择。给药方案将由所涉及的临床症状以及各种患者变量(例如体重、年龄、性别)和临床表现(例如损伤程度、损伤部位等)决定。然而，适用于本发明中的？1 0寸、 1 )0和/或16 -0同功异型物的治疗有效量是通过检测药剂具有的针对身体病况的有益作用的能力所测量的对患者产生积极临床作用或在细胞中具有所需作用的剂量。每一肽或药剂的治疗有效量可经过调节以实现所需临床作用，同时使不利副作用减到最少。用于个别患者的肽或药剂的剂量可根据给药途径、疾病的严重程度、患者的年龄和体重、患者服用的其它药物以及主治医师在确定适于特定患者的个别方案和剂量水平时通常考虑的其它因素来选择。剂量FM0D-P、FM0D和/或TGF- β同功异型物的剂量可根据本领域技术中已知的方法， 基于药剂类型、疾病和例如年龄和性别等其它因素来确定。在一个实施例中，在特定载体或架构(scaffold)存在或不存在下，FMOD-P, FMOD 和/或TGF-β同功异型物的剂量一般在0. 001pg/mm2到lpg/mm2，或更优选0. 001ng/mm2 到 lng/mm2，或更优选 0. 001 μ g/mm2 到 1 μ g/mm2,或更优选 0. 001mg/mm2 到 lmg/mm2，或更优选0.001g/mm2到lg/mm2的范围内。在另一实施例中，在特定载体或架构存在或不存在下， FMOD-P, FMOD和/或TGF-β同功异型物的剂量一般在0. 001pg/ml到lpg/ml，或更优选 0. 001ng/ml 到 lng/ml，或更优选 0. 001 μ g/ml 到 1 μ g/ml，或更优选 0. 001mg/ml 到 lmg/ ml，或更优选0. 001 g/ml到100g/ml的范围内。在又一实施例中，在特定载体或架构存在或不存在下，FMOD-P、FMOD和/或的剂量一般在0. OOlpg/kg到lpg/kg，或更优选0. OOlng/kg 到lng/kg，或更优选0. 001 μ g/kg到1 μ g/kg，或更优选0. 001mg/kg到lmg/kg,或更优选 0.001gm/kg到lgm/kg，更优选在0.001kg/kg到lkg/kg的范围内。此外，应了解，所有剂量可连续给予或分成数个剂量在每一指定时间范围给予。时间范围的实例包括(但不限于) 每1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、48小时或72小时，或者每周、2 周、4周，或者每个月、2个月、4个月等。
剂型剂型中包括的药剂的治疗有效量可通过考虑所选药剂的类型和给药给药途径来选择。剂型可包括某一药剂与其它惰性成分的组合，所述惰性成分包括如制药领域的技术人员所知的有助于将剂量给予患者的佐剂(adjutant)和药学上可接受的载体。在一个实施例中，本发明可包括治疗、预防或改善(改良)身体病况的方法，其包含在所选时间间隔里对患者施用治疗有效量的呈有效剂型形式的FMOD-P、FMOD和/或，以改良身体病况。使用方法另一方面，本发明提供一种使用本文中揭示的FMOD-P或组合物治疗、预防或改善身体病况的方法。所述方法包含将本文中揭示的FMOD-P或组合物施用于患有此身体病况的患者。所述身体病况可以是调节TGF-β活性可提供针对身体病况的有益作用的任何病况，例如，如过度纤维化或瘢痕形成等与高TGF-β表达有关的疾病、肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩、放射性纤维化，除皮肤病况外其它器官系统的纤维化病况，例如(但不限于)肺(肺纤维化)(盖拉伊-克曼尼(Gharaee-Kermani), (Hu)等人，2009)、肝、肾、角膜、腹腔内、胃肠、泌尿道、神经或心血管病况。此外，还可以是通过用本文中揭示的FMOD-P或组合物调节细胞增殖、细胞迁移、结缔组织生长因子(CTGF)表达和细胞聚集、α-SMA表达和细胞外基质(ECM)组织来调节TGF-β活性，从而提供针对身体病况的有益作用的其它病况。本文中揭示的FMOD-P或组合物也可有效调节胶原蛋白组装。已经证实，FMOD也是适合的皮肤胶原蛋白构造所需的，并且不含FMOD的动物在胶原蛋白超微结构上(如通过穿透式电子显微镜评估)和在胶原蛋白构造(如通过共聚焦激光扫描显微镜和光学显微镜评估)上呈现明显改变(克拉萨尼(Khorasani)，郑(Sieng)等人，2010)。^M下文陈述的实例将说明本发明的实施例。所有参数和数据都不限制本发明实施例的范围。实例1.有关TGF- β上FMOD的结合位点调控过程的研究重组FMOD的产生借助PCR扩增由人FMOD的cDNA获得编码人FMOD (SEQ ID NO 1)的DNA片段，并插入市售载体pSecTag2A(英杰公司Qnvitrogen))中，得到质粒pUZFOl (图1)。编码FMOD 的基因处于CMV启动子控制下，并且其N末端与Ig κ信号肽融合，且C末端与c-Myc表位和6xHis标签融合。将质粒pLZZFOl转化到中国仓鼠卵巢细胞系CHO-Kl中。在含有10% 胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)和 300 μ g/ml 佐奥辛(Zeocin)的 F12-K 培养基中培养经过稳定转染的细胞系。利用ftObond纯化系统(英杰公司)分离FMOD重组蛋白，并溶解于IX PBS缓冲液中。借助SDS-PAGE和蛋白质印迹法(Western blotting)，用抗FMOD抗体鉴别重组FMOD (图2)。研究发现，从CH0-K1获得的重组FMOD以及天然提取物牛FMOD在ELISA分析法中能够与TGF- β 1结合(图3)(海德布兰德(Hildebrand)，罗玛瑞斯(Romaris)等人，1994)。 使用牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)作为阴性对照。FMOD的三维(3D)结构预测采用3D-JigSaW服务器预测FMOD的3D结构。使用从牛组织提取的二聚核心蛋白聚糖结晶型-2的A 链(lxeC_A，图4)(斯科特(Scott)，麦克艾文(McEwan)等人，2004)作为模板。图5提供了人FMOD与模板(即从牛组织提取的二聚核心蛋白聚糖结晶型_2的A 链；lxec_A)的结构比对。图6提供了预测的人FMOD蛋白(AA 71-375)的3D结构。由于具有低结构同源性， 故发现模板不能预测N末端片段的3-D结构。图7突出了构造二硫键结合的半胱氨酸。图 8中显示了使用市售软件Vector NTI 9.0，根据康纳利(Connolly)方法(康纳利，1993)预测的分子表面。在此结构(图8)中也突出了 N-糖苷点(普拉斯(Plaas)，尼姆斯(Neams) 等人，1990)。还利用Vector NTI分析FMOD的疏水性(图9)。同时，借助Spdbv，使用克鲁姆博 (Coulomb)方法预测FMOD的静电势(图10)(艾蓓耶(Abagyen)，托曲夫(Totrov)等人， 2004)。构建带有不同FMOD片段的质粒图11中显示了人FMOD的第一结构。采用PCR法，将编码人FMOD不同部分的DNA 片段插入市售载体pET_SUM0 (英杰公司)中，得到各种质粒pLZZF01-pLZZF040。例如分别为pLZZF09 (带有人 FMOD 的 LRR5、LRR6 和 LRR7)、pLZZFlO (带有人 FMOD 的 LRR8、LRR9 禾口 LRR10)和pLZZFl 1 (带有人FMOD的C末端，包括LRRl 1)。将目标肽与N末端SUMO和G_6xHis 标签融合。 将融合的目标肽-SUMO质粒(例如pLZZF09)以及对照质粒pET_SUM0/CAT转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)菌株中。在含有IOOmM IPTG的LB培养基中培养重组细菌，产生SUMO-融合蛋白。利用Probond纯化系统(英杰公司)纯化融合蛋白，并溶解于IXPBS缓冲液中。实例2.有关FMOD-P的结合研究结合TGF- β 1与SUMO融合的FMOD片段采用ELISA方法，发现一些与SUMO融合的FMOD肽片段能够与TGF-β 1 (SEQ ID NO: 20)结合(图12)(海德布兰德(Hildebrand)，罗玛瑞斯(Romaris)等人，1994)。使用来自带有对照质粒pET_SUM0/CAT的重组细菌的SUMO-CAT作为阴性对照。据发明人所知，尚未报导FMOD内的TGF结合位点。实例3.有关本发明FMOD肽F06和F07对不同TGF- β同功异型物的相对结合亲和力的研究FMOD和FMOD肽与TGF-β同功异型物的结合将FM0D(全蛋白)(SEQ ID NO :1)、FM0D肽和对照蛋白BSA生物素化。同时，将生物素化的蛋白质和肽结合于市售Piece单体抗生素蛋白UltraLink树脂(Piece Monomeric Avidin UltraLink Resin;皮斯公司)。每一测试的肽/蛋白质的量比TGF-β s分别为 1 UlO UlOO 1和1000 1。洗掉未结合的残余物后，在4°C下将适量TGF-β (根据初次测试分析法)添加到树脂中。过夜结合后，收集未结合的TGF-β s，随后进行过滤灭菌。 接着，在DEME-0. 5 % FBS中将TGF- β s残余物稀释100倍，以确保浓度在TGF- β对MvlLu 增殖抑制的线性区域中，如上一次所显示的一样。将稀释过的TGF- β s添加到过夜血清-缺乏(serum-starved)的MvlLu中，并添加新鲜TGF- β s,再保持24小时，之后进行MTT分析。采用不添加TGF- β s的样品作为对照物。从MvlLu生长抑制的结果得到的TGF-β 1 (SEQ ID NO 64)的结合比率显示于图13中。结果显示，对照BSA显示最小TGF-β 1结合，但极高比率(1000 lmol/mol)时除夕卜。FMOD蛋白所显示的TGF-βΙ结合在较高FMOD蛋白比率下也增加。出乎预料的是，在某些测试比率下，一些FMOD肽所显示的TGF- β 1结合明显高于FM0D。如果FMOD肽的纯度相对较低，那么这一结果的显著性甚至更明显。预期利用纯度较高的FMOD肽将获得甚至更强的TGF-β 1结合。
TGF- β 2 (SEQ ID NO 65)的结合活性显示于图14中。与TGF-β 1类似，对照BSA显示最小TGF-β 2结合。FMOD蛋白所显示的TGF-β 2 结合在较高FMOD蛋白比率下也如预期般增加，但未达到TGF-βΙ的程度。出乎预料的是， 在某些测试比率下，一些FMOD肽所显示的TGF- β 2结合明显高于FM0D。如果FMOD肽的纯度相对较低，那么这些结果的显著性甚至更明显。预期利用纯度较高的FMOD肽将获得甚至更强的TGF-0 2结合。另外，意外的是，肽？1 0呼06义40不结合16 -0 2。这表明，F06-C40 可选择性结合TGF-β 1，并且不结合TGF-β 2。TGF- β 3 (SEQ ID NO 66)的结合活性显示于图15中。在图15中，BSA甚至在较高比率下也不结合于TGF-β 3。FMOD蛋白所显示的 TGF- β 3结合在高达1 100的较高FMOD蛋白比率下也如预期般增加，但程度不如TGF- β 1 或TGF- β 2显著(即，FMOD结合TGF- β 1 > TGF- β 2 > TGF- β 3)。出乎预料的是，在某些测试比率下，一些新颖的FMOD肽所显示的TGF-β 3结合明显高于FM0D。总的说来，这些新颖数据显示，研究人员已经创造出可比FMOD全蛋白更有效地结合全部三种TGF- β同功异型物(TGF- β 1、TGF- β 2和TGF- β 3)的新颖FMOD肽F07禾口 F07-C40。研究人员还创造出可比FMOD全蛋白更有效地选择性结合TGF- β 1和TGF- β 3的新颖FMOD肽。FMOD相关性肽F06-C40与F07/F07-C40对不同TGF- β同功异型物的不同结合特征表明，FMOD具有至少两个TGF- β结合位点，且FMOD的这两个结合位点对TGF- β同功异型物具有不同结合亲和力。其还表明，FMOD的两个不同的TGF-β结合位点可能具有不同的作用或与TGF-β配体相互作用。总体来说，这些数据表明，FMOD肽可呈现不同的与TGF-β 配体的相互作用，而这些不同的相互作用是先前时候在FMOD全蛋白上无法区分的。从临床的角度看，这些结果表明，新颖FMOD肽可按比FMOD全蛋白新颖的方式调节 TGF-β活性。实例4.有关TGF-β组合FMOD或FMOD肽的组合的研究引言已经描述了单独TGF-β同功异型物或单独FMOD对细胞增殖的作用。然而，还未描述过使用FMOD和TGF-β同功异型物调节细胞增殖的新观念。此外，也未描述过使用FMOD 肽和TGF-β同功异型物调节细胞增殖的新观念。TGF-β与FMOD或FMOD肽的组合对细胞增殖的作用 将第18代(passage 18) Rat-2 (大鼠成纤维细胞细胞系)细胞按2000个细胞/孔接种于含有200μ1 DMEM-10 % FBS的96孔板中，培养6小时，之后用200 μ 1 DMEM-0. 5% FBS使其血清缺乏(serum starving)过夜。将200 μ 1处理培养基，即带有不同浓度FMOD (SEQ ID NO :1)、FM0D-F07-C40 肽且存在 / 不存在 IOOpM TGF-β 1 (SEQ ID NO 64)的 DMEM-0. 5% FBS添加到孔中，并于第二日进行补充。48小时处理后，借助Click_iT 微量板分析法(Irwitrogen)评价Rat-2细胞的增殖情况。使用FM0D(全蛋白)得到的结果显示于图16中。
出乎预料的是，FMOD与TGF-β 1的组合使成纤维细胞增殖明显增加。这一新颖发现可应用于慢性创伤(例如糖尿病性足溃疡)以加速愈合。使用F07-C40得到的结果显示于图17A中，且重复结果显示于图17B中。甚至更出乎预料的是，F07-C40与TGF- β 1的组合在低F07-C40剂量下使成纤维细胞增殖增加，但明显不同于FMOD全蛋白，F07-C40在偏高的剂量下明显抑制成纤维细胞增殖，并在高剂量下降低细胞活力。这是一个新颖发现F07-C40和TGF-βΙ的组合可被调节，从而将低F07-C40剂量用于需要增加细胞增殖的情形(例如慢性创伤)，并将偏高的 F07-C40剂量用于需要降低细胞增殖的情形(例如肥厚性瘢痕)，而将高F07-C40剂量用于需要降低细胞活力的情形(例如瘢痕疙瘩)。另一方面，另一肽F06-C40也呈现诱导成纤维细胞增殖的能力(图17C)。从临床的角度看，这些结果表明，FMOD与TGF-β的组合可有效诱导细胞增殖。因此，其可用于治疗众多损伤的或有缺陷的创伤愈合病况。相比之下，新颖FMOD肽与TGF-β 的组合可在低FMOD肽剂量下促进细胞增殖，并在偏高的FMOD肽剂量下抑制细胞增殖，且在高FMOD肽剂量下降低细胞活力。在例如肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩等伴随过度细胞增殖的某些病况中，抑制细胞增殖和促进细胞活力降低特别合乎需要(利姆(Lim)，法恩(Phan)等人，2006)。TGF-β与FMOD或FMOD肽的组合对细胞迁移的作用引言众所周知单独TGF-β同功异型物对细胞迁移/趋化性、血管生成以及细胞外基质产生和重塑的作用[评述于(罗伯特(Roberts)和斯普恩(Sporn) 1996) ]。FMOD与TGF-β 同功异型物的组合对细胞迁移的作用尚未予以描述。FMOD肽与TGF-β同功异型物的组合对细胞迁移的作用也未得到描述。FMOD (全蛋白)图18Α显示有关FMOD (SEQ ID NO :1)和/或TGF-β对细胞迁移的作用的数个测试实例的结果。将Rat-2细胞按1 X IO6个细胞/孔接种于含有3ml DMEM-10 % FBS的6孔板中。6小时粘着后，更换新鲜的DMEM-0. 5% FBS培养基，以血清缺乏过夜。用预先温热的 DMEM冲洗后，采用Iml针尖将每一处理组刮擦出四个创口(各Imm宽；两个水平和两个垂直)。用DMEM冲洗细胞3次，随后用处理培养基[含有IOOpM(2. 5ng/ml) TGF- β 1 (SEQ ID NO 64)或 TGF-β 3 (SEQ ID NO 66)且存在 / 不存在 200nM(ll. 2 μ g/ml)FM0D(SEQ ID NO: 1)的DMEM-0. 5FBS]培育24小时。刮擦后，在0小时和24小时时拍照片。测量未闭合的距离，并定量为平均间隙(A)和迁移指数(B)。类似结果在4个独立实验中得以再现。(A)中的比例尺等于100 μ m。(B)中的星号表示P < 0.05。这些结果显示，单独FMOD诱导Rat_2最小迁移，而意外的是，FMOD与TGF- β 1的组合诱导显著迁移(图18Β)。相比之下，TGF-β 3抑制迁移，而FMOD与TGF-β 3的组合减小TGF- β 3介导的迁移抑制作用。
24小时处理后，在200X放大倍率下记录基质胶(Matrigel)中的细胞迁移/侵袭，并使用DAPI核染色进行定量(结果显示于图19A中，且重复结果显示于图26B和26C 中；DAPI图片显示于图19D中)。单独FMOD诱导Rat-2适度迁移，而意外的是，FMOD与 TGF-β 1的组合也诱导明显迁移。相比之下，TGF-β 3抑制迁移，而FMOD与TGF-β 3的组合减小TGF-β 3介导的迁移抑制作用。这些结果表明，FMOD增大TGF- β 1的细胞迁移作用，而FMOD降低TGF- β 3的细胞迁移抑制作用。FMOD 肽 与FMOD(全蛋白)类似，也利用刮擦法评价FMOD肽和/或TGF-β对细胞迁移的作用(图18C和图25D)。同时，24小时处理后，在100Χ放大倍率下记录基质胶中的细胞迁移/侵袭，并使用DAPI核染色进行定量(使用100Χ而非200 X放大倍率是因为一个组的侵袭相当少)(参看图20Α的结果以及图20Β中的DAPI图片)。使用第18代Rat_2细胞 (20，000 个细胞 / 孔)，通过在含有 IOOpM TGF- β 1 (SEQ ID NO :64) / β 3 (SEQ ID NO 66)以及存在/不存在200nM FM0D-F07-40C的DMEM-0. 5% FBS中处理来进行测试。单独F07-C40不显著诱导Rat_2迁移，而完全出乎意料的是，F07-C40与TGF-β 1 的组合显著抑制TGF-β 1介导的基质胶迁移。F07-C40的这一活性与增加TGF-β 1的细胞迁移作用的FMOD全蛋白完全相反。很明显，TGF- β 3也如预期一般抑制迁移，而F07-C40与 TGF- β 3的组合增加TGF- β 3介导的迁移抑制作用。F07-C40的这一活性也与降低TGF- β 3 的细胞迁移作用的FMOD全蛋白完全相反。使用第18代Rat-2细胞(20，000个细胞/孔)，通过在含有IOOpM TGF- β 1/ β 3 以及存在/不存在200nM FM0D-F06-40C的DMEM-0. 5% FBS中处理来进行测试(图20C)。 重复结果显示于图20D和图27Ε中。意外的是，不管TGF-β 1是否存在，FM0D-F06-40C都将促进成纤维细胞迁移。然而，FM0D-F06-40C不能消除TGF- β 3对成纤维细胞迁移的抑制作用。这些数据证实，当与TGF-β组合时，FMOD肽可呈现与FMOD全蛋白完全不同的生物作用。这一差异可用来调控细胞迁移。从临床的角度看，F07-C40抑制基质胶中TGF-β 1介导的细胞迁移证实，F07-C40 在具有高基础TGF-β 1情况下可用于防止肿瘤细胞迁移/转移(migration/metastasis) (村冈(Muraoka)，杜蒙特(Dumont)等人，2002;杨(Yang)，度卡安那(Dukhanina)等人， 2002)。或者，使用F07-C40与TGF-β 3的组合甚至能更有效地抑制细胞迁移。此外，还可以添加FMOD来促进在高TGF-β 3抑制细胞迁移的情况下发生的细胞迁移。 实例5.有关FMOD和TGF- β或FMOD肽和TGF- β对CTGF表达和细胞聚集的作用的研究引言TGF-β 1是例如成纤维细胞和内皮细胞等细胞中结缔组织生长因子(CTGF)表达的有效刺激剂。CTGF的生物作用与TGF-β 1类似，并且已经显示出CTGF可充当TGF-β 1 必需的下游介体[评述于(宋(Song)，艾斯沃德(Aswad)等人，2007)]。尽管已经描述了 TGF- β 1对诱导CTGF表达的作用，但还未描述使用FMOD和TGF- β同功异型物来调节CTGF 表达。此外，也未描述使用FMOD肽和TGF- β同功异型物来调节CTGF表达。而且，单独FMOD或FMOD肽、FMOD与TGF- β，或FMOD肽与TGF- β对细胞形态的影响也未作描述。有关单独FMOD和FMOD-P或其与TGF- β的组合中每一种对CTGF表达的作用的示范性测试的结果显示于图28Α到图28D中。在这些测试中，在8孔腔室载玻片(8_we ll chamber slices)中，将第18代Rat_2细胞按4，000个细胞/孔接种于含有10% FBS的 DMEM培养基中。6小时粘着后，采用含0. 5% FBS的新鲜DMEM培养基进行血清缺乏过夜，随后添加处理培养基。24小时后更换处理培养基。48小时时，固定细胞并染色。使用共聚焦显微镜，在630X放大倍率下拍照片。在这些图中，将细胞染色以标记CTGF(结缔组织生长因子，即一种细胞增殖、迁移和基质产生中所涉及到的因子)或DAPI(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(4'，6-diamidin0-2-phenylind0le)，一种强烈结合于DNA以用于核染色的荧光染色剂)。显示CTGF与DAPI染色的合并图像也显示于图中。对照测试的结果显示于图21A中。对照组中存在最少CTGF表达。由200nM FMOD(SEQ ID NO 1)处理得到的结果显示于图21B中。FMOD处理的样品中存在最少CTGF表达。与对照组相比较，FMOD处理的Rat-2细胞看起来更平坦且更铺展。因此，单独FMOD可抑制细胞聚集。由IOOpM TGF-β 1 (SEQ ID NO 64)处理得到的结果显示于图21C中。数据显示， 在TGF-β 1处理的样品中存在适度的CTGF表达。由IOOpM TGF-β 1+200ηΜ FMOD处理得到的结果显示于图21D中。图2IA到图2ID显示，出乎预料地在FMOD和TGF-β 1处理的样品中存在明显较高的CTGF表达。这也是通过显著细胞聚集实现的。FMOD, TGF- β 1FM0D 和 TGF- β 1 处理后 Rat_2 细胞的 H&E 形态进行示范性测试以更好地描绘细胞形态。图22显示了由FMOD(SEQ ID NO 1) (0、 200nM)与TGF-β (SEQ ID NO 20) (OUOOnM)的组合进行处理得到的结果。图22显示，相对于对照组而言，200nM FMOD处理产生平坦、铺展的Rat_2细胞形态，以及低的细胞聚集/密度。同时，IOOpM TGF-β 1处理使Rat-2细胞密度略有增加，并且诱导小结节样细胞聚集/凝集，这种情形很罕见(在8孔腔室载玻片中每孔不到1个结节)。出乎预料的是，IOOpM TGF-β 1和200nM FMOD组合处理使细胞密度明显增加，同时还增加结节尺寸和结节数量(8孔腔室载玻片中每孔约4个结节)。这些数据证实，FMOD可影响细胞密度、聚集和形态。其它研究在更多其它测试中，重复测试单独FMOD或FMOD与TGF- β的组合对CTTO表达的作用。结果显示于图23Α到图23Ε中。图23Α显示由2天的对照处理得到的结果。图23Β显示由2天的FMOD (SEQ ID NO 1)单药处理得到的结果。图23Β显示由2天的TGF-β 1 (SEQ ID NO 64)单药处理得到的结果。图23D显示由2天的FM0D+TGF- β 1组合处理得到的结果。图23Ε显示分别比较图30Α到图30D的结果的图。在另一组类似研究中，研究人员发现，TGF-β 1处理增加CTGF的表达(绿色荧光)，而相对于TGF- β 1单药处理，TGF- β 1/FM0D组合处理明显增加CTGF的表达(绿色荧光)(图24)。从细胞形态的角度看，可以发现，TGF-β 1/FM0D组合处理产生更紧密群集的聚集的细胞并伴随相当高的结节形成程度(黄色箭头)。随后，获取Z轴系列连续图像(Z-axes series sequential image)以确定图24 中所示结节的相对高度。从图24中可以看出，在对照或单药处理条件(单独TGF- β 1或FM0D)下，Rat_2成纤维细胞保持单层细胞形态(未观察到超过8 μ m高度的信号)。但对于用FMOD和TGF- β 1 处理所形成的结节(黄色箭头)，细胞按一个在另一个上的方式堆叠达到约48 μ m的高度。 有趣的是，在结节基部观察到的CTGF表达比在结节顶部观察到的多。
从临床的角度看，控制细胞聚集和密度的能力对于例如软骨或骨骼形成(宋 (Song)，艾斯沃德(Aswad)等人，2007)和创伤愈合等许多过程至关重要。举例来说，FMOD 和TGF-β 1可用于促进间叶细胞凝集以供软骨再生。实例6.有关FMOD和TGF- β或FMOD肽和TGF- β对α -SMA表达的作用的研究引言TGF-β促纤维化生长因子(profibrotic growth factor)可调控成纤维细胞增殖、肌成纤维细胞分化，并在纤维化期间使胶原蛋白沉积增加(盖拉伊_克曼尼 (Gharaee-Kermani)，胡(Hu)等人，2009)。肌成纤维细胞是在创伤愈合期间以及其发挥显著收缩活性的多种纤维收缩疾病(fibrocontractive diseas)中出现的特有的成纤维细胞；肌成纤维细胞以良好发育的微丝束为特征，这些微丝束类似于培养中的成纤维细胞的应力纤维(stress fibers)[评述于(海因兹(Hinz)，杜格纳(Dugina)等人，2003)中]。相比之下，驻留的组织成纤维细胞不呈现此种收缩性器官(apparatus)。在用TGF-β刺激时， 肌成纤维细胞重新表达α-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin，α-SMA)；并与ECM 形成特有的粘着结构，这些结构在体内称为纤维融合膜(fibronexus)或在体外称为“超成熟”粘着斑(focal adhesion, FA)[评述于(海因兹(Hinz)，杜格纳(Dugina)等人，2003) 中]。尽管α-SMA表达是原型肌成纤维细胞的特征(艾登(Eyden)，班尼杰(Banerjee)等人，2009)，并且与收缩力的产生有关(汤姆斯克(Tomasek)，麦克雷(McRae)等人，2005)，但有证据证实，不存在α-SMA会引起较强纤维化反应(武二(Takeji)，森山(Moriyama)等人，2006)。具体说来，已经显示，α -SMA的存在可减少肾组织纤维化，并抑制细胞增殖、前胶原蛋白合成、细胞迁移和FA蛋白(武二，森山等人，2006)。因此，增加α-SMA表达的疗法在早期可抑制细胞增殖、前胶原蛋白合成、细胞迁移和FA蛋白，从而使得纤维化总体减少。 尽管已经描述了 TGF- β 1对诱导α -SMA表达的作用，但还未描述使用FMOD和TGF- β同功异型物来调节α-SMA表达的新观念。此外，也未描述过使用FMOD肽ILTGF-β同功异型物调节α -SMA表达的新观念。进行了有关FMOD和TGF- β或FMOD肽和TGF- β对α -SMA表达的作用的示范性测试并显示于图25Α到图25D中。测量作为成纤维细胞向肌成纤维细胞转变的标记物的 α -SMA的表达水平，并在这些图中以染色方式呈现。图25Α显示由对照测试得到的结果，其显示最小α -SMA染色。图25Β显示由200nM FMOD (SEQ ID NO 1)处理得到的结果，其显示最小α -SMA染色。图25C显示由IOOpM TGF-β 1 (SEQ ID NO :64)处理得到的结果，其显示适度的 α -SMA染色。
图25D显示由 IOOpM TGF-β 1+200ηΜ纤调蛋白处理得到的结果，其显示伴随细胞密度/细胞聚集增加出现的α-SMA染色明显增加。总的说来，这些研究证实，FMOD (或FMOD肽)和TGF- β可显著促进α -SMA的表达。视FMOD (或FMOD肽)和TGF-β应用的时间范围而定，其可用于抑制细胞增殖、前胶原蛋白合成、细胞迁移和FA蛋白(较早应用)或促进收缩(较晚应用)。从临床的角度看，可以较早应用FMOD (或FMOD肽)和TGF- β来减少纤维化，同时可以较晚应用FMOD (或FMOD肽)和TGF- β来促进收缩，从而减小开放性创口的尺寸。实例7.有关FMOD肽对ECM组织化的作用的研究引言瘢痕形成是通过纤维组织形成而非再生修复的成体型组织(adult-type tissue) 引起的不合需要的后遗症。辐射诱发的纤维化或瘢痕形成是头颈癌治疗辐射后常见的后遗症。瘢痕包含胶原蛋白和其它间杂皮肤细胞的ECM组分(主要是成纤维细胞、肌成纤维细胞)构成的无序集合。研究人员创造出新颖的FMOD肽，通过定性和定量分析发现，这些 FMOD肽可对胶原蛋白微纤维生成(fibrillogenesis)和ECM组织化(organization)呈现显著作用。因此，可以使用新颖的FMOD肽来减少纤维化，并促进ECM在例如创伤愈合、辐射纤维化和硬皮病等情况下产生更有组织的结构。收集损伤后达4周的猪的皮肤组织(630X)。样品A是对照物，其为未受伤的皮肤组织。样品B是另一对照物，其为受伤但未经过处理的皮肤组织。样品C是利用0.5mg/ml 浓度的FMOD-P处理的受伤组织。样品D是利用2. Omg/ml浓度的FMOD-P处理的受伤组织。观察到第一期创伤愈合。结果显示于图26A到图26B中。图26B显示对照组织和经处理组织的分形维数(fractal dimension) 0分形维数(较高Fd)提供物体如何完全填充间隙并随结构复杂性增加而增加值的量度(史密斯(Smith)，朗格(Lange)等人，1996)。 其具有介于1与2之间的值。缺项(Lacimarity，L)是结构不一致性(不均勻性)的量度或物体结构变动的程度(史密斯，朗格等人，1996)。因此，低缺项的物体是均质的，因为所有空隙尺寸都相同，而高缺项的物体是不均勻的。缺项的值在0与1之间，其中最小值0对应于绝对均勻的物体。在本研究中，已经显示，与编织成篮状(basket weaved)且随机组织化的正常组织相比较，瘢痕组织中的胶原蛋白束明显较致密(较高Fd)且结构明显较均勻(较低L)。还显示，与正常组织相比较，瘢痕组织中的个别胶原蛋白小纤维具有小得多的直径和窄得多的尺寸分布。相比之下，FMOD-P处理的样品具有胶原蛋白/ECM结构，其更接近于未受伤的组织，且Fd和L测量值与未受伤的组织并无明显不同。这些结果表明，FMOD肽可优化胶原蛋白微纤维生成和ECM结构，尤其是在闭合性创 口(closed wounds) (Ε-创口)中。在 Fd 和 L 分析中，在 0. 5mg/ml 处理与 2. 0mg/ml 处理之间无显著性。这表明FMOD肽在整个广泛剂量范围内都有效。从临床的角度看，FMOD肽可用于减少例如(但不限于)肺、肝、肾、皮肤和心脏等不同器官系统中的纤维化。尽管已经显示和描述本发明的特定实施例，但在不偏离本发明的广泛方面的情况下进行改变和修改对于所属领域技术人员是显而易见的。因此，所附权利要求书的范围内拟涵盖在本发明的真实精神和范围内的所有这些改变和修改。
参考 文献艾蓓耳口 R. (Abagyan, R. ), M.托曲夫(M. Totrov)，D.库兹佐夫(D. Kuznetsov). (2004)“有关蛋白质模型化和设计的IM-A新方法适用于由扭曲的天然构型预测对接和结构(IM-A new method for protein modeling and design !application to docking and structure prediction from the distorted native conformation.)“计算化学杂 ；ife (Journal of Computational Chemistry)15(5) :488_506。康纳利M.L. (Connolly, M. L. ) (1993)“分子表面包装(The molecular surface package)“分子图示法杂志(.Tournal of Molecular Graphics) 11 (2) : 139-141。艾登B. (Eyden，B. )，S. S.班尼杰(S. S. Banerjee)等人(2009). 〃 肌成纤维细胞和其肿瘤(The myofibroblast and its tumours).“临床病理学杂志(.T Clin Pathol)62(3) :236_49。盖拉伊-克曼尼Μ. (Gharaee-Kermani，Μ. )，B.胡(B. Hu)等人(2009).“分子目标和特发性肺纤维化治疗的近期进展集中于TGFii信号传导和肌成纤维细胞(Recent Advances in Molecular Targets and Treatment of Idiopathic Pulmonary Fibrosis Focus on TGFbeta Signaling and the Myofibroblast).“当今医药化学(Curr Med Chem)16(11) :1400_17。赫伯姆Ε. (Hedbom，E.)和 D.海尼嘉德(D. Heinegard) (1989). “ 59kDa 结缔组织基质蛋白与胶原蛋白I和胶原蛋白II的相互作用(Interaction of a 59-kDa connective tissue matrix protein with collagen I and collagen II)“生物化学杂志(The Tournal of Biological Chemistry)264(12) :6898_6905。海尼嘉德D. (Heinegard，D. )，Τ.拉森(Τ. Larsson)等人(1986).“从关节软骨分离的两种新颖基质蛋白在结缔组织中显示广泛分布(Two novel matrix proteins isolated from articular cartilage show wide distributions among connective tissues).“生物化学杂志(J Biol Chem) 261 (29) :13866_72。海德布兰德A.(Hildebrand，A. )，Μ.罗玛瑞斯(Μ. Romaris)等人(1994).“小间质蛋白聚糖二聚糖、核心蛋白聚糖和纤调蛋白与转化生长因子β的相互作用(Interaction of the small interstitial proteoglycans biglycan,decorin and fibromodulin with transforming growth factor beta).“生物化学杂志(Biochem J) 302 (Pt 2) :527_34。海德布兰德Α.，Μ.罗玛瑞斯等人(1994).“小间质蛋白聚糖二聚糖、核心蛋白聚糖和纤调蛋白与转化生长因子β的相互作用.“生物化学杂志(Biochem. J.) 302: 527-534。海因兹B. (Hinz, B. )，V.杜格纳(V. Dugina)等人(2003). ‘‘ α-平滑肌肌动蛋白对于肌成纤维细胞中的粘着斑成熟至关重要(Alpha-smooth muscle actin is crucial for focal adhesion maturation in myofibroblasts).“细胞分子生物学(Mol Biol Cell)14(6) :2508-19。卡拉玛斯基S. (Kalamajski，S.)和 Α.奥德伯格(A. Oldberg) (2007).“纤调蛋白通过富含亮氨酸重复11中的glu-353和lys-355结合I型胶原蛋白(Fibromodulin binds collagen type I via glu-353 and lys-355 in leucine-rich repeat 11·)·“生物化学杂志(Journal of BioloRical Chemistry) 282 (37) :26740_26745。
克拉萨尼H. (Khorasani，H. )，Ζ·郑(Ζ. Zheng)等人(2010).“瘢痕分析的定量方法(A quantitative approach to scar analysis).“系统递交(In Submission)。 利姆C. P. (Lim, C. P. )，Τ. Τ.法恩(Τ. Τ. Phan)等人(2006). “ Stat3 通过促进胶原蛋白产生、细胞增殖和迁移来引起瘢痕疙瘩发病(Stat3 contributes to keloid pathogenesis via promoting collagen production, cell proliferation and migration).“癌基因(Oncogene) 25 (39) :5416_25。村冈R. S. (Muraoka, R. S. )，N.杜蒙特(N. Dumont)等人(2002).“阻断 TGF-β 可抑制乳房肿瘤细胞活力、迁移和转移(Blockade of TGF-beta inhibits mammary tumor cell viability,migration, and metastases).“临床石开究杂志(.丁 Clin Invest) 109 (12) 1551-9。普拉斯A. H. K. (Plaas, A. H. K. ), P. J.尼姆斯(P. J. Neams)等人(1990) ·“牛纤调蛋白上硫酸角质素附着位点的鉴别(Identification of the keratan sulfate attachment sites on bovine fibromodulin).“生物化学杂志 The Journal of Biological Chemistry 265(33) 20634-20640 罗伯特Α. B. (Roberts, Α. B.)和 Μ. B.斯普恩(Μ. B. Sporn) (1996) ·转化生长因子_ β (Transforming growth factor-beta) ·创伤修复的分子和细胞牛物学(The Molecular and Cellular Biology of Wound Repair) · R. A. F.克拉克(R. A. F. Clark) ·纽约(New York)，派拉蒙出版社(Plenum Press) :275_308。史密斯Τ. G.，Jr (Smith, Τ. G.，Jr)，G. D.朗格(G. D. Lange)等人(1996). 〃 细胞形态的分形方法和结果-尺寸、缺项和多标度分形(Fractal methods and results in cellular morphology__dimensions, lacunarity and multifractals).“神经禾斗学方法杂志(J Neurosci Methods)69(2) 123-36。宋J. J. (Song, J. J. )，R.艾斯沃德(R. Aswad)等人(2007).“结缔组织生长因子(CTGF)充当TGF-β 1诱导间叶细胞凝集的下游介体(Connective tissue growth factor (CTGF) acts as a downstream mediator of TGF-beta1 to induce mesenchymal cell condensation).“细胞生理学杂志(J Cell Physiol) 210 (2) :398_410。斯文森L. (Svensson, L. )，Α.阿佐迪(Α. Aszodi)等人(1999).“缺乏纤调蛋白的小鼠腱中具有异常胶原蛋白小纤维、组织的组织化和改变的基膜聚糖沉积 (Fibromodulin-null mice have abnormal collagen fibrils, tissue organization, and altered lumican deposition in tendon).“生物化学杂志(J Biol Chem)274(14) 9636-47。武二M. (Take ji, M.), Τ.森山(Τ. Moriyama)等人(2006).“肌成纤维细胞中缺乏平滑肌α -肌动蛋白导致肾组织纤维化增加(Smooth muscle alpha-actin deficiency in myofibroblasts leads to enhanced renal tissue fibrosis).“生物化学杂志(J Biol Chem)281 (52) 40193-200.汤姆斯克J. J. (Tomasek，J. J. )，J.麦克雷(J. McRae)等人(2005).“肉芽组织肌成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白表达的调控视内含的CArG元件和转化生长因子-β 1 控制兀件而定(Regulation of alpha-smooth muscle actin expression in granulation tissue myofibroblasts is dependent on the intronic CArG element andthe transforming growth factor-betal control element).“美国病理学杂志(Am J Pathol)166(5) 1343-51。Lij Π Y. (Yamaguchi, Y.), D. Μ.曼恩(D.M.Mann)等人(1990).“借助蛋白聚糖核心蛋白聚糖负调控转化生长因子-β (Negative regulation of transforming growth factor-beta by the proteoglycan decorin). 〃 自然(Nature) 346 (6281) :281_4。杨Y. A. (Yang, Y. A. )，0.度卡安那(0. Dukhanina)等人(2002).“终身暴露于可溶性TGF-β拮抗剂将保护小鼠免于经历转移和不良副作用(Lifetime exposure to a soluble TGF—beta antagonist protects mice against metastasis without adverse side effects).“临床研究杂志(.T Clin Invest) 109(12) :1607_15。
权利要求
1.一种纤调蛋白(FMOD)肽(FMOD-P)，其包含至少一个能够结合β-组织生长因子 (TGF-β)的位点。
2.根据权利要求1所述的FM0D-P，其具有选自由以下序列组成的群组的氨基酸序列 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24, SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、 SEQ ID NO :36,SEQ ID NO :37,SEQ ID NO :38,SEQ ID NO :39,SEQ ID NO :40,SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50, SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53, SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :58、 SEQ ID NO :59, SEQ ID NO :60, SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :62 禾口 SEQ ID NO :63。
3.根据权利要求1所述的FM0D-P，其中所述TGF-β选自由TGF-β1、TGF-β 2和 TGF-β 3组成的群组。
4.一种组合物，其包含有效量的以下任一成分a)FMOD-P；b)FMOD-P的组合；c)FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d)FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e)FMOD和FMOD-P或FMOD-P的组合；以及f)(a)到(e)的任一组合，其中所述组合物可有效调节TGF-β活性和/或胶原蛋白组装。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述FMOD-P具有选自由以下序列组成的群组的氨基酸序列SEQ ID NO :13,SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15,SEQ ID NO 16,SEQ ID NO :17、 SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 20, SEQ ID N0:21、SEQ ID NO 22, SEQ ID N0: 23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、 SEQ ID NO41,SEQ ID NO42,SEQ ID NO 43,SEQ ID NO44、SEQ ID NO45,SEQ ID N0: 46、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO 58,SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :62 禾口 SEQ ID NO :63。
6.根据权利要求4所述的组合物，其中所述TGF-β同功异型物选自由TGF-βΙ、 TGF- β 2和TGF- β 3组成的群组。
7.根据权利要求4所述的组合物，其进一步包含赋形剂。
8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述赋形剂是药学上可接受的载体或皮肤学上可接受的载体。
9.一种制剂，其包含根据权利要求4所述的组合物和赋形剂，其中所述制剂是用于全身或局部递送。
10.根据权利要求9所述的制剂，其中所述局部递送是局部递送、透皮递送、皮内递送、 微针递送、以医疗装置上的涂层形式递送或通过浸渍或涂覆于架构装置上来递送，且其中所述全身递送是注射、口服、经鼻递送或吸入。
11.一种制备纤调蛋白(FMOD)肽(FMOD-P)的方法，其包含设计具有功能和至少一个 FMOD结合位点的FM0D-P，以及制备所述FM0D-P。
12.根据权利要求11所述的方法，其中制备包含在一个或一个以上所选位点剪接FMOD 以产生所述FMOD-P。
13.根据权利要求11所述的方法，其中制备包含在重组系统中表达所述FM0D-P，或在其它一些实施例中，所述制备所述肽的操作包括在重组系统中表达所述肽或在无细胞翻译系统中产生所述肽。
14.根据权利要求11所述的方法，其中制备包含在细菌、酵母、哺乳动物或植物细胞中表达所述FMOD-P。
15.根据权利要求11所述的方法，其中设计是通过对FMOD的一级或二级结构进行疏水性分析来实现。
16.一种方法，其包含提供选自以下任一种的成分a)FMOD-P；b)FMOD-P的组合；c)FMOD-P或FMOD-P的组合和至少一种TGF- β同功异型物；d)FMOD和至少一种TGF- β同功异型物；e)FMOD和FMOD-P或FMOD-P的组合；以及f)(a)到(e)的任一组合，形成包含成分(a)到(f)中任一种的组合物。
17.根据权利要求16所述的方法，其中形成进一步包含提供赋形剂；和形成包含所述成分和所述赋形剂的制剂。
18.一种用于治疗、预防或改善身体病况的方法，其包含施予受试者根据权利要求1至3中任一权利要求所述的纤调蛋白(FMOD)肽(FMOD-P)；根据权利要求4至8中任一权利要求所述的组合物；或根据权利要求9和10中任一权利要求所述的制剂。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述身体病况选自由以下病况组成的群组与高TGF-β表达有关的过度纤维化或瘢痕形成、肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩、放射性纤维化，以及除皮肤外其它器官系统的纤维化病况。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述身体病况是肺纤维化，或者肝、肾、角膜、腹腔内、胃肠、泌尿道、神经或心血管病况。
全文摘要
发明的实施例提供纤调蛋白(FMOD)肽(FMOD-P)、包含FMOD-P与任选存在TGF-β同功异型物或包含FMOD与TGF-β同功异型物的组合物和制剂。本发明还提供制备和使用所述FMOD-P、组合物或制剂的方法。
文档编号C07K14/435GK102448983SQ201080023050
公开日2012年5月9日 申请日期2010年5月26日 优先权日2009年5月26日
发明者B·嘉·苏, 中·郑, 康·汀 申请人:加州大学董事会