专利名称：用于预防或抑制艰难梭菌感染的疗法的制作方法
用于预防或抑制艰难梭菌感染的疗法本发明涉及用于治疗或抑制艰难梭菌(Clostridium difficile)感染(CDI)的治疗物和相应的疗法。艰难梭菌感染(CDI)目前是世界范围的医院中的主要问题。该细菌导致医院的抗生素相关的疾病，该疾病自身表现为从轻度自身限制性腹泻至可能威胁生命的严重结肠炎的几种形式。中老年患者处于这些可能威胁生命的疾病的风险最大，且CDI的发病率在过去10年内急剧增高。在2007年，在英国存在50，000多例⑶I，其中有8，000多例相关的死亡。每年⑶I花费英国国民卫生服务(NHS)超过5亿英镑。各种艰难梭菌菌株可以通过大量方法来分类。最常用的方法之一是聚合酶链式反应(PCR)核糖核酸分型(ribotyping)，其中使用PCR来扩增艰难梭菌的16S-23S rRNA基因间间隔区域。来自该方法的反应产物提供了鉴定分离株的细菌核糖核酸型的特征带型。毒素分型(toxinotyping)是另一分型方法，其中使用来源于编码艰难梭菌毒素的DNA的限制 模式来鉴定菌株毒素型。在不同菌株的毒素基因之间观察到的限制模式的差异还表示艰难梭菌毒素家族内的序列变异。毒素B显示了一些区域中的序列变异。例如，毒素型0毒素B的C末端60kDa区域与毒素型III中的相同区域相比较具有大约13%的序列差异。艰难梭菌菌株产生多种毒力因子，其中值得注意的是几种蛋白毒素毒素A、毒素B和某些菌株中的二元毒素，该二元毒素与产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens) i毒素类似。毒素A是大的蛋白细胞毒素/肠毒素，其在感染的病理中起作用并可影响肠道(gut)定殖过程。已报道了毒素A阴性/毒素B阳性菌株的⑶I爆发，这表明毒素B也能够在疾病病理中起关键作用。毒素A和毒素B二者都经由多步机制来发挥它们的作用机制，所述多步机制包括与细胞表面的受体结合，内化，随后易位并将效应器结构域释放到细胞胞质溶胶中以及最终的胞内作用。对于毒素A和毒素B 二者，这涉及Rho家族的小GTP酶的失活。对于该失活，每种毒素催化葡萄糖部分(来自UDP-葡萄糖)转移至Rho蛋白的氨基残基。毒素A和毒素B二者还均含有半胱氨酸蛋白酶形式的第二种酶活性，该第二种酶活性似乎在易位之后效应器结构域释放到胞质溶胶中起作用。艰难梭菌二元毒素通过涉及将ADP-核糖部分从NAD转移至其靶蛋白的机制修饰细胞肌动蛋白。艰难梭菌感染的治疗目前依赖于抗生素，其中特别包括甲硝唑和万古霉素。然而，这些抗生素不是在所有情况下都有效，并且20-30%的患者会遭受疾病复发。最受关注的是在英国出现了毒力更强的菌株，该菌株于2002年首次在加拿大被鉴定。这些菌株，其包括属于PCR核糖核酸型027，毒素型III的那些，导致具有比之前观察到的CDI高3倍的直接归因死亡率的⑶I。因此现在尤其急迫地需要新型治疗物，因为目前的抗生素的效力似乎在降低。因此，本领域中存在对于能够特别地解决艰难梭菌感染(CDI)的新型疗法/治疗物的需要。该需要由本发明所解决，本发明解决了上述问题的一个或多个。更详细地，本发明的第一方面提供了用于预防或治疗CDI中的口服施用的羊抗体。所述口服治疗提供了具有非预期的效力和/或降低的副作用的CDI的简单治疗/预防/抑制。在另一方面，本发明提供了包括适用于预防或治疗CDI中的口服施用形式的羊抗体的抗体组合物。在一个实施方案中，所述羊抗体是多克隆抗体。使用时，本发明的抗体与艰难梭菌毒素或其片段结合，优选地中和毒素或其片段的生物活性。因此，本发明的抗体能够预防或治疗⑶I，和/或优选地还预防患者复发。本发明的抗体疗法提供了超越其他疗法的明显优势，因为其能够抑制艰难梭菌的一种或多种毒素的生物作用，同时对患者具有极小的或低的免疫原作用。并且，本发明的抗体可以非常高的毒素中和效价来产生。因此，羊抗体可容易地获得并且可以保护患者免于艰难梭菌产生的病理作用而具有极小的副作用或无副作用。本发明的抗体还可预防性地防止⑶I的发作。本发明的首要靶标是艰难梭菌毒素或其片段。本发明的抗体可以结合和/或中和的适宜的艰难梭菌毒素包括导致CDI或其症状或与CDI或其症状相关的任何艰难梭菌毒素。在又一实施方案中，本发明的抗体结合和/或中和选自以下的一种或多种类型的艰难梭菌毒素艰难梭菌毒素A或其片段、艰难梭菌毒素B或其片段、以及艰难梭菌二元毒素或其片段。 因此，在一个实施方案中，本发明的抗体组合物包括结合和/或中和艰难梭菌毒素A(或其片段)的羊抗体。在另一实施方案中，本发明的抗体组合物包括结合和/或中和艰难梭菌毒素B(或其片段)的羊抗体。在又一实施方案中，本发明的抗体组合物包括结合和/或中和艰难梭菌二元毒素(或其片段)的羊抗体。在另一实施方案中，本发明的抗体组合物包括结合和/或中和艰难梭菌毒素A (或其片段)和艰难梭菌毒素B(或其片段)的羊抗体。在另一实施方案中，本发明的抗体组合物包括结合和/或中和艰难梭菌毒素A(或其片段)和艰难梭菌二元毒素(或其片段)的羊抗体。在又一实施方案中，本发明的抗体组合物包括结合和/或中和艰难梭菌毒素B(或其片段)和艰难梭菌二元毒素(或其片段)的羊抗体。本发明的抗体组合物还可包括结合和/或中和艰难梭菌毒素A(或其片段)、艰难梭菌毒素B (或其片段)和艰难梭菌二元毒素(或其片段)的羊抗体。本发明的抗体与毒素的特定表位相互作用。例如，抗体可结合艰难梭菌毒素A的N末端结构域(例如，氨基酸1-957之间)或中间区域结构域(例如,氨基酸958-1831之间)或C末端重复结构域(例如，氨基酸1832-2710之间)中的表位。例如，抗体可与艰难梭菌毒素A的氨基酸1832-2710中的表位结合。类似地，抗体可结合毒素B的N末端结构域(例如，氨基酸1-955之间)或中间区域结构域(例如，氨基酸956-1831之间)或C末端重复结构域(例如，氨基酸1832-2366之间)中的表位。例如，抗体可结合毒素B的氨基酸1832-2366中的表位。在二元毒素的情况下，抗体可结合催化结构域(片段A)或受体结合结构域，受体结合结构域位于片段B的C末端部分(大约残基400-870);和/或结合片段B的N末端半侧(大约残基1-400)，其参与片段A的结合和向细胞中的易位。在一个实施方案中，艰难梭菌毒素选自毒素型0至XV中的一种。优选的毒素型(加上示例核糖核酸型和菌株)列在下面的表中。所列的毒素型纯粹是示例，并不旨在限制本发明。
权利要求
1.一种抗体组合物，所述抗体组合物包括羊抗体，用于预防或治疗艰难梭菌(c. difficile)感染，其中所述抗体与艰难梭菌毒素结合，且其中所述预防或治疗通过口服递送所述抗体组合物来进行。
2.根据权利要求I所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述抗体是多克隆抗体。
3.根据任一前述权利要求所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述抗体与选自由以下组成的组的艰难梭菌毒素结合艰难梭菌毒素A、艰难梭菌毒素B和艰难梭菌二元毒素。
4.根据任一权利要求3所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述抗体与艰难梭菌毒素A结合和与艰难梭菌毒素B结合。、
5.根据任一权利要求3所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述抗体与艰难梭菌毒素A结合和与艰难梭菌毒素二元毒素结合。
6.根据任一权利要求3所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述抗体与艰难梭菌毒素B结合和与艰难梭菌毒素二元毒素结合。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述艰难梭菌毒素是选自以下的组的毒素A :毒素型O、毒素型III和毒素型V。
8.根据权利要求1-4或权利要求6中任一项所述的用于预防或治疗的抗体组合物，其中所述艰难梭菌毒素是选自以下的组的毒素B :毒素型O、毒素型III、毒素型V和毒素型VIIK例如，来自艰难梭菌核糖核酸型017)。
9.一种用于口服递送的药物组合物，所述药物组合物包括如权利要求1-8中任一项中定义的抗体组合物，以及用于保护所述抗体组合物免于胰蛋白酶和/或糜蛋白酶和/或胃酸的一种或多种剂。
10.根据权利要求9所述的用于口服递送的药物组合物，其中所述用于保护所述抗体组合物免于胰蛋白酶和/或糜蛋白酶和/或胃酸的一种或多种剂选自 (a)与胰蛋白酶和/或糜蛋白酶特异性地结合并抑制或灭活胰蛋白酶和/或糜蛋白酶的蛋白水解活性的多肽；和/或 (b)与胰蛋白酶和/或糜蛋白酶结合并抑制或灭活所述胰蛋白酶和/或糜蛋白酶的蛋白酶活性的抗体；和/或 (c)选自脂质体、微粒体(microsome)、纳米体(nanosome)、丸、粒状基质、珠、微球体、纳米颗粒制剂或水溶液的递送运载体；和/或 (d)解酸剂分子；和/或 (e)与所述抗体的一个或多个共价连接的聚乙二醇化部分。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的用于口服递送的药物组合物，其中所述组合物包括解酸剂分子和 (a)与胰蛋白酶和/或糜蛋白酶特异性地结合并抑制或灭活胰蛋白酶和/或糜蛋白酶的蛋白水解活性的多肽；或 (b)与胰蛋白酶和/或糜蛋白酶结合并灭活所述胰蛋白酶和/或糜蛋白酶的蛋白水解活性的抗体。
12.一种用于预防或治疗艰难梭菌感染的方法，所述方法包括口服施用根据权利要求1-8中任一项所述的抗体组合物或根据权利要求9-11中任一项所述的药物组合物。
13.根据权利要求9-11中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于预防或治疗艰难梭菌感染。
14.一种产生羊抗体的方法，所述羊抗体用于根据权利要求1-8中任一项所述的口服抗体组合物，或用于根据权利要求9-11中任一项所述的药物组合物，其中所述羊抗体通过绵羊响应于包括艰难梭菌毒素或其片段的免疫原而引发。
15.—种产生用于权利要求12所述的方法的羊抗体的方法，所述方法包括(i)将包括艰难梭菌毒素或其片段的免疫原施用于绵羊，(ii)允许有足够的时间在所述绵羊中产生抗体，和(iii)从所述绵羊中获得所述抗体。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的方法，其中所述免疫原是艰难梭菌类毒素。
17.根据权利要求12所述的方法或根据权利要求13所述的用于预防或治疗的药物组合物，其中所述一种或多种胰蛋白酶和/或糜蛋白酶抑制剂和/或解酸剂分子在所述抗体组合物的施用之前、同时或之后施用。
18.根据权利要求1-8中任一项所述的用于预防或治疗的抗体组合物或根据权利要求13所述的用于预防或治疗的药物组合物，其中所述口服施用在第二羊抗体组合物的非口服施用之前、同时或之后进行，其中所述第二羊抗体组合物包括如权利要求1-8中任一项中所定义的羊抗体； 优选地，其中所述非口服(例如，系统的)施用在所述口服施用之前进行。
19.根据权利要求12所述的方法，其中所述口服施用在第二羊抗体组合物的非口服施用之前、同时或之后进行，其中所述第二羊抗体组合物包括如权利要求1-8中任一项中所定义的羊抗体； 优选地，其中所述非口服(例如，系统的)施用在所述口服施用之前进行。
20.根据权利要求1-8或18中任一项所述的用于预防或治疗的抗体组合物或根据权利要求13或权利要求18所述的用于预防或治疗的药物组合物，或根据权利要求12或权利要求20所述的方法，其中待治疗或保护的对象是以下类别中的一种或多种中的对象住院者；超过65或70岁者；接受广谱抗生素者；具有先前的CDI病史/感染者；与有症状的CDI患者非常接近者；具有轻到中度疾病严重度者；表现为无症状但被认为处于复发的高风险者(例如，由于一个或多个复发事件) ’与CDI爆发区域或患者非常接近者。、
21 略
全文摘要
本发明提供用于预防或治疗艰难梭菌(C.difficile)感染的包括羊抗体的抗体组合物，其中所述抗体与艰难梭菌毒素结合，且其中所述预防或治疗通过抗体组合物的口服递送来进行。还提供的是用于口服递送的羊抗体的药物组合物，其还包括用于保护抗体免于胰蛋白酶和/或糜蛋白酶和/或胃酸的一种或多种剂(means)。
文档编号C07K16/12GK102740889SQ201080053778
公开日2012年10月17日 申请日期2010年12月6日 优先权日2009年12月4日
发明者克利福德·肖恩, 埃普丽尔·罗伯茨, 约翰·兰登 申请人:卫生防护机构, 麦克罗弗姆有限公司