专利名称：一种替考拉宁单组份的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种工业微生物技术领域中药品原料的制备方法，尤其是一种从发酵培养物中分离纯化替考拉宁单组份的制备方法。
背景技术：
替考拉宁(Teicoplanin),为游动放线菌属iActinoplanes teichomyceticus)发酵产生的一种糖肽类抗生素。它是由Teicoplanin A2(TA2)五种结构相似的糖肽类化合物(TA2_rTA2_5)和去酰基葡糖胺Teicoplanin A3(TA3)组成的混合物。替考拉宁是继万古霉素后开发的另一种抗耐药菌糖肽类抗生素，它主要对革兰氏阳性需氧菌和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别对MRSA引起的感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的仍具有对多重耐药性金黄色葡萄球菌和肠球菌有活性的药物之一。与当前国际上公认的抗耐药菌抗生素 万古霉素相比，替考拉宁具有与之相似的抗菌活性，相同的作用机理，相近或更优的临床疗效，但毒性更低，特别是更低的肾毒性，不会发生使用万古霉素后引发的“红人综合症”。替考拉宁具有比万古霉素更方便、快捷的给药途径，可以通过静注或肌注给药，应用更方便。此外，它与￠-内酰胺类、氨基糖苷类和碳青霉烯类抗生素联用对绝大多数革兰氏阳性菌有协同杀菌作用。因此，对替考拉宁的研究与开发具有重要的经济价值和应用前景。由于替考拉宁是两性化合物且结构中含有多个羟基，故易溶于水。另外，它易溶于二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙二醇，可溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，不溶于无机酸和非极性溶剂。国内外对其分离纯化方法进行了大量的研究，归纳起来主要有溶媒萃取法、吸附法、离子交换法和色谱法。替考拉宁单组份的结构式为
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权利要求
1.一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤， 步骤I)预处理在常温条件下，在替考拉宁发酵液中加入碱溶液，调节PH至11. (T13. O ;将发酵液固液分离，所得滤液用酸溶液调节PH至7. (T7. 5，得到替考拉宁滤液； 步骤2)脱色将替考拉宁滤液导入大孔脱色树脂进行脱色，得到替考拉宁脱色液； 步骤3)吸附将替考拉宁脱色液导入大孔吸附树脂进行吸附，再用溶剂解吸，所得替考拉宁解吸液，经浓缩、结晶、干燥，得到替考拉宁的粗提物； 步骤4)层析将替考拉宁粗提物用水溶解，注入聚合物微球层析柱进行层析，然后用不同浓度的洗脱溶剂梯度洗脱，分别收集各段洗脱液，得到含有TA”、TA2_2、TA2_3、TA2_4、TA2_5和TAp1六种单组份的替考拉宁单组份洗脱液； 步骤5)将六种替考拉宁单组份洗脱液分别浓缩、结晶、干燥，得到替考拉宁的单组份精粉。
2.根据权利要求I所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于所述步骤I)中碱溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；酸溶液为盐酸、硫酸或有机酸溶液的其中一种。
3.根据权利要求I所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于所述步骤2)中大孔脱色树脂为LX-98、LSA-700B、DMl30或D303树脂的其中一种。
4.根据权利要求I所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于所述步骤3)中大孔吸附树脂为HZ816、HZ801、DlOl或D312树脂的其中一种；所述溶剂为甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一种，溶剂浓度为40% 50%。
5.根据权利要求I所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于所述步骤4)中层析介质为聚合物微球PS25-300、PS30RPC-300或PSA30-300的其中一种；所述洗脱溶剂为甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一种，洗脱溶剂浓度为25%飞0%。
6.根据权利要求1 5任一项所述的一种替考拉宁单组份的制备方法，其特征在于所述步骤4)中包括如下步骤， 步骤A)将替考拉宁粗提物用蒸馏水溶解，注入聚合物微球层析柱进行层析，然后依次使用从低浓度到高浓度的洗脱溶剂梯度洗脱； 步骤B)根据HPLC对替考拉宁中各单组份的检测结果，分别收集TA3YTAh和TA2_2的洗脱液；得到TA3+ TA2^1和TA2_2三种替考拉宁单组份洗脱液； 步骤C)根据HPLC对替考拉宁中各单组份的检测结果，分别收集TA2_2与TA2_3的HPLC峰面积百分比为I :2的混合液，TA2_4与TA2_5峰面积百分比为I :1的混合液； 步骤D)将步骤C)中得到的两种混合液浓缩至混合液浓度为100g/L，再次注入聚合物微球层析柱进行层析分离，然后依次使用从低浓度到高浓度的洗脱溶剂梯度洗脱，根据HPLC检测结果，分别收集TA2_3、TA2_4和TA2_5的洗脱液，得到TA2_3、TA2_4和TA2_5三种替考拉宁单组份洗脱液。
全文摘要
本发明涉及一种替考拉宁单组份的制备方法，属于微生物原料药品的制备领域。该方法包括将替考拉宁发酵液通过大孔脱色树脂脱色后，再用大孔吸附树脂吸附、解吸，浓缩后得到含有TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5和TA3-1六种组份的替考拉宁粗提物；粗提物用水溶解后借助聚合物微球进行层析分离，得到高纯度的替考拉宁TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5和TA3-1六个单组份。本发明使用新型层析介质—聚合物微球，可以从替考拉宁粗提物中同时分离得到六种单组份；该方法工艺简洁，样品处理量大，溶剂消耗少，可以规模化制备替考拉宁单组份，为替考拉宁单组份的病理学、毒理学等深入研究提供样品。
文档编号C07K1/22GK102718843SQ20121022163
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月30日 优先权日2012年6月30日
发明者任风芝, 张志江, 张雪霞, 成晓迅, 朱秀良, 李丽红, 李宁, 李晓露, 林毅, 段宝玲, 王海燕, 董爱华, 蒋沁, 陈书红 申请人:华北制药集团新药研究开发有限责任公司