专利名称：一种古登堡菊素的提纯方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及ー种应用超临界萃取法提纯古登堡菊素的方法。
背景技术：
古登堡菊素是从菊科植物心叶古登堡菊Gutenbergia cordifolia Benth. exOliver叶中提取分离得到的ー种12，6_桉烷内酯类化合物，分子量为C17H18O5，分子量为302. 33。现代研究表明，古登堡菊素具有抗菌作用和细胞毒作用，能抑制白血病细胞L-5178Y 的生长，IC50 为 O. 13μ g/ml。
目前，尚未发现采用超高压提取和柱层析技术从天然植物中提取古登堡菊素的研究报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供ー种古登堡菊素的提纯方法，该方法操作简单，制备量大。本发明是通过以下技术方案实现的
ー种古登堡菊素的提纯方法，其特征在于包含以下步骤
1)超高压提取将心叶古登堡菊叶粉碎，加入こ醇溶液后采用超高压法进行提取，控制粒径为60目，こ醇浓度为65%，固液体积比为1:10-1:18，压カ为400MPa，保压3_5min，重复2-3次，提取液浓缩干燥得到粗提物；
2)石油醚脱脂向上述粗提物中加入3-4倍量石油醚回流提取2-4次，离心分离固液，得脱脂物；
3)柱层析将上述脱脂物进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱，高效液相监测，收集相应流分，浓缩干燥得到古登堡菊素。所述步骤3)中的硅胶粒度为100-300目，氯仿-甲醇体积比为2_16 :5。本发明的积极效果是
(1)本发明采用超高压提取技木，不仅提取过程用时短，而且节省能源，生产成本低，操作简便，提高了经济效益和社会效益；
(2)本发明采用柱层析法精制古登堡菊素，该法能快速的去处杂质，得到纯度高的古登堡菊素，エ艺简单，成本低，效率高。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :
取心叶古登堡菊叶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入こ醇溶液后采用超高压法进行提取，控制粒径为60目，こ醇浓度为65%，固液体积比为1:18，压カ为400MPa，保压3min，重复3次，提取液浓缩干燥得到粗提物，加入350ml石油醚回流提取4次，离心除去液体得脱脂物；
将脱脂物用甲醇溶解和等量硅胶混合均匀，上硅胶(200目)柱层析，用氯仿-甲醇按体积比3:5、7:5、10:5、15:5梯度洗脱，用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到古登堡菊素I. 7g，含量为61. 4%。实施例2
取心叶古登堡菊叶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入こ醇溶液后采用超高压法进行提取，控制粒径为60目，こ醇浓度为65%，固液体积比为1:15，压カ为400MPa，保压4min，重复2次，提取液浓缩干燥得到粗提物，加入300ml石油醚回流提取2次，离心除去液体得脱脂物；
将脱脂物用甲醇溶解和等量硅胶混合均匀，上硅胶(100目)柱层析，用氯仿-甲醇按体积比2:5、5:5、10:5、16:5梯度洗脱，用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收 试剂，得到古登堡菊素I. 7g，含量为62. 2%。实施例3:
取心叶古登堡菊叶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入こ醇溶液后采用超高压法进行提取，控制粒径为60目，こ醇浓度为65%，固液体积比为1:16，压カ为400MPa，保压4min，重复3次，提取液浓缩干燥得到粗提物，加入300ml石油醚回流提取4次，离心除去液体得脱脂物；
将脱脂物用甲醇溶解和等量硅胶混合均匀，上硅胶(300目)柱层析，用氯仿-甲醇按体积比2:5、5:5、9:5、16:5梯度洗脱，用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试齐U，得到古登堡菊素I. 5g，含量为62. 5%。实施例4:
取心叶古登堡菊叶干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入こ醇溶液后采用超高压法进行提取，控制粒径为60目，こ醇浓度为65%，固液体积比为1:10，压カ为400MPa，保压5min，重复2次，提取液浓缩干燥得到粗提物，加入400ml石油醚回流提取3次，离心除去液体得脱脂物；
将脱脂物用甲醇溶解和等量硅胶混合均匀，上硅胶(100目)柱层析，用氯仿-甲醇按体积比2:5、6:5、10:5、14:5梯度洗脱，用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到古登堡菊素I. 2g，含量为59. 4%。
权利要求
1.ー种古登堡菊素的提纯方法，其特征在于包含以下步骤 1)超高压提取将心叶古登堡菊叶粉碎，加入こ醇溶液后采用超高压法进行提取，控制粒径为60目，こ醇浓度为65%，固液体积比为1:10-1:18，压カ为400MPa，保压3_5min，重复2-3次，提取液浓缩干燥得到粗提物； 2)石油醚脱脂向上述粗提物中加入3-4倍量石油醚回流提取2-4次，离心分离固液，得脱脂物； 3)柱层析将上述脱脂物进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱，高效液相监测，收集相应流分，浓缩干燥得到古登堡菊素。
2.如权利要求所述的ー种古登堡菊素的提纯方法，其特征在于所述步骤3)中的硅胶粒度为100-300目，氣仿-甲醇体积比为2-16 5o
全文摘要
本发明涉及了一种古登堡菊素的提纯方法，尤其是涉及一种应用超高压提取法提纯古登堡菊素的方法，方法步骤包括取心叶古登堡菊叶粉碎，加入乙醇溶液后采用超高压法进行提取，得到粗提物，用石油醚回流脱除脂溶性杂质，再采用硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，分离精制得古登堡菊素。本发明工艺流程简单、消耗低、效率高、简单易操作，可实现大量制备。
文档编号C07D307/92GK102827121SQ201210368329
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司