一种半枝莲中野黄芩苷提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种半枝莲中野黄芩苷提取方法，属于中药领域，由提取、纯化步骤构成，本发明的方法泄漏率低，洗脱率高。
【专利说明】一种半枝莲中野黄芩苷提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及半枝莲中成分的纯化方法。
【背景技术】
[0002] 半枝莲别名并头草、牙刷草等，主要产自我国华北、中南、华东、华南、西南等地，为 唇形科黄苳属植物半枝莲Aarate D. Don)的干燥全草。该药味辛、苦、性 寒，具有清热解毒、散瘀止血、定痛等功效。用于治疗癌症、肝炎、咽喉肿痛、肺脓疡、尿道炎、 痢疾和毒蛇咬伤等疾病。
[0003] 半枝莲中黄酮类成分为其主要活性部位，具有多种生理活性，如可以抑制子宫肌 瘤细胞增殖，抑制葡萄球细菌，抑制肺癌细胞增生作用等。近几年来有文献报道采用大孔吸 附树脂法对半枝莲提取物进行纯化富集的研究，但是还不够深入，缺少实际生产需要的径 高比等参数，也没有解决其纯化部位出膏率较高和颜色较深的问题。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种纯度高的半枝莲的野黄芩苷提取方法。
[0005] 本发明所采用的技术方案是： 一种半枝莲中野黄芩苷提取方法，由以下步骤构成： A、 提取：取半枝莲药材，加入70-90%乙醇，然后加热回流提取3次，每次1小时，回收乙 醇，向提取液中缓缓加入1%盐酸溶液，调节PH为3. 0-3. 3,然后离心，再浓缩得到生药浓度 为0. 15-0. 2g ? mL-1的浓缩液； B、 纯化：按照生药质量与树脂体积比为1:2称取AB-8大孔吸附树脂，AB-8树脂径高 比为1:5,将浓缩液上样，上样流速为2 BV/h，水洗体积为3. 5-4. 5 BV，洗脱溶剂为40-70% 乙醇，洗脱体积为4. 5-5. 5 BV，洗脱流速为2-4 BV/h，收集洗脱液，回收乙醇，减压干燥得到 野黄芩苷。
[0006] 优选的，步骤A中的离心具体步骤如下：先将提取液离心，得到上清液I和沉淀， 然后将沉淀用1倍药材量水洗涤，再离心分离，得到上清液II，将两次上清液合并再浓缩。
[0007] 优选的,步骤A中加入的乙醇量为半枝莲药材的14倍。
[0008] 优选的，步骤B中水洗体积为4. 5 BV，洗脱溶剂为40%乙醇，洗脱体积为5. 5 BV， 洗脱流速为4 BV/h。
[0009] 优选的，步骤B中上样体积为75-150ml。
[0010] 作为优选方式，所述方法由以下步骤构成： A、 提取：取半枝莲药材，加入14倍量70-90%乙醇，然后加热回流提取3次，每次1小 时，回收乙醇，得到提取液，向提取液中缓缓加入1%盐酸溶液，调节PH为3. 0-3. 3,然后离 心，得到上清液I和沉淀，然后将沉淀用1倍药材量水洗涤，再离心分离，得到上清液II，将 两次上清液合并，再浓缩得到生药浓度为〇. 15-0. 2g .ml/1的浓缩液； B、 纯化：上样体积为75-150ml，按照生药质量与树脂体积比为1:2称取AB-8大孔吸附 树脂，AB-8大孔树脂径高比为1:5,将浓缩液上样，上样流速为2 BV/h，水洗体积为4.5 BV， 洗脱溶剂为40%乙醇，洗脱体积为5. 5 BV，洗脱流速为4 BV/h，收集洗脱液，回收乙醇，减压 干燥得到野黄芩苷。
[0011] 为了说明本实验的可行性，做了如下的实验。
[0012] 1仪器与试剂 e2695 2988 型 Waters Alliance HPLC;色谱柱 Agilent Zorbax SB-C18;电子天平 AB135-S型分析天平(梅特勒-托利多科技有限公司）;AB-8型大孔树脂(河北沧州宝恩化工 有限公司）；野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110842-200605);半枝莲 药材(产地：江苏；由安国路路通药材有限公司提供；批号：120103);甲醇(色谱纯，Burdick & Jackson公司）；95%乙醇(分析纯，北京化工厂） 2方法与结果： 2. 1野黄芩苷含量测定方法 2. I. 1野黄芩苷含量测定方法：参照2010版中国药典(一部)半枝莲[野黄芩苷]项下 方法进行： 色谱条件：色谱柱Agilent Zorbax SB-C18 250X4. 6 mm，5 柱温：30°C;检测波长： 335 nm;流动相：甲醇：水：醋酸（27:68. 5:4. 5);流速：1 mL ? miiT1 ;进样量：10 iiL。 2. 1. 2野黄芩苷对照品溶液制备 精密称取野黄芩苷对照品10. 46 mg，置于50 mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀。 精密量取该溶液2 mL置于5 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，过0.22 iim微孔滤膜，制 成83. 68 ii g ? ml/1的野黄芩苷对照品溶液。
[0013] 2. 2.提取液沉淀脱色工艺的考察 半枝莲上样液pH值为2-3时，AB-8大孔吸附树脂对半枝莲中总黄酮吸附最好。当半 枝莲提取液加酸后，沉淀明显增多，药液颜色明显降低。为了降低制剂的色泽，提取浓缩液 在上大孔树脂前需进行酸沉淀脱色处理。
[0014] 取实施例1步骤A中半枝莲提取液四份，每份200 mL，分别缓缓加入1%盐酸溶液， 调节pH值为2. 8、3. 0、3. 3及3. 5。边加入边搅拌，静置，离心分离，得沉淀及离心上清液I ; 沉淀用1倍药材量水洗涤，离心分离，得离心上清液II，分别测定两次离心上清液中野黄芩 苷的含量，计算两次离心上清液中野黄芩苷的转移率。合并两次离心上清液，采用澄清度检 查法进行检查，离心上清液与等量的浊度标准液进行比较，观察其澄清度。
[0015] 表1取液沉淀脱色工艺的考察结果
【权利要求】
1. 一种半枝莲中野黄芩苷提取方法，其特征在于所述方法由以下步骤构成： A、 提取：取半枝莲药材，加入70-90%乙醇，然后加热回流提取3次，每次1小时，回收乙 醇，得到提取液，向提取液中缓缓加入1%盐酸溶液，调节PH为3. 0-3. 3,然后离心，再浓缩得 到生药浓度为0. 15-0. 2g . ml/1的浓缩液； B、 纯化：按照生药质量与树脂体积比为1:2量取AB-8大孔吸附树脂，AB-8大孔树 脂径高比为1:5,将浓缩液上样，上样流速为2 BV/h，水洗体积为3. 5-4. 5 BV，洗脱溶剂为 40-70%乙醇，洗脱体积为4. 5-5. 5 BV，洗脱流速为2-4 BV/h，收集洗脱液，回收乙醇，减压干 燥得到野黄芩苷。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤A中的离心具体步骤如下：先将提取 液离心，得到上清液I和沉淀，然后将沉淀用1倍药材量水洗涤，再离心分离，得到上清液 II，将两次上清液合并再浓缩。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤A中加入的乙醇量为半枝莲药材的14 倍。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤B中水洗体积为4.5 BV，洗脱溶剂为 40%乙醇，洗脱体积为5. 5 BV，洗脱流速为4 BV/h。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤B中上样体积为75-150ml。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法由以下步骤构成： A、 提取：取半枝莲药材，加入14倍量70-90%乙醇，然后加热回流提取3次，每次1小 时，回收乙醇，得到提取液，向提取液中缓缓加入1%盐酸溶液，调节PH为3. 0-3. 3,然后离 心，得到上清液I和沉淀，然后将沉淀用1倍药材量水洗涤，再离心分离，得到上清液II，将 两次上清液合并，再浓缩得到生药浓度为〇. 15-0. 2g . ml/1的浓缩液； B、 纯化：上样体积为75-150ml，按照生药质量与树脂体积比为1:2称取AB-8大孔吸附 树脂，AB-8大孔树脂径高比为1:5,将浓缩液上样，上样流速为2 BV/h，水洗体积为4.5 BV， 洗脱溶剂为40%乙醇，洗脱体积为5. 5 BV，洗脱流速为4 BV/h，收集洗脱液，回收乙醇，减压 干燥得到野黄芩苷。
【文档编号】C07H17/07GK104277086SQ201310292221
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月12日 优先权日:2013年7月12日
【发明者】刘丹, 郭珊珊, 王曙宾 申请人:河北以岭医药研究院有限公司