专利名称：一种紫丁香苷的提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种紫丁香苷的提取工艺。 本发明产品具有抗炎镇痛、抗癌活性及保肝作用，本发明产品适合工业化生产。
背景技术：
暴马丁香(Syringa Reticulata)又名暴马子、白丁香，为木犀科丁香属植物。味 苦，性微寒。主要分布在小兴安岭以南各山区，大兴安岭只有零星分布；此外，我国吉林、 辽宁、华北、西北、华中以及朝鲜，俄罗斯的远东地区，日本也有分布。树姿美观，花香浓郁， 可做蜜源植物和提取芳香油0. 05%，，种子含脂肪油观.6%，可榨取供工业用，叶含单宁 19. 50%，树皮含单宁5. 72%，可作烤胶原料，木材材质坚实致密，结构均一，具有特殊清香 气味，可供建筑、器具、家具及细木工用材，尤宜做锄把、碗橱、茶杯、茶叶筒、烟盒、食具等， 有特异清香气味且不变形。暴马丁香花序大，花期长，香味浓，又是公园、庭院及行道较好的 绿化观赏树种。全株可入药，其嫩叶、嫩枝、花可调制保健茶叶，具有清热解毒，镇咳祛痰的 作用。可治疗支气管癌、肉瘤、白血病、高血压、心脏病、浮肿、动脉硬化等疾病。经现代药理 实验证明暴马丁香具有清肺祛痰、止咳、消炎、平喘、利尿等功效[1_8]。目前国内外关于暴马 丁香中化学成分的研究报道并不多见，徐东铭等[9]从树皮中分离得到羟乙基_3，4-二 羟基苯；梁文藻等_从暴马子中分离出暴马醛酸甲酯；Masao Kikuchi等研究小组[11_14] 对暴马丁香叶进行了系统的研究，一共分离出40余种成分，大部分为苷类成分。徐国兴[15] 从暴马丁香枝中分离得到6个单体化合物，其中有紫丁香苷，且紫丁香苷为暴马丁香枝的 主要活性成分之一。据文献报道紫丁香苷具有抗炎镇痛、抗高血糖、抗抑郁、抗癌活性及保 肝作用[15_19]。近几年来，利用暴马丁香树皮中提取的紫丁香苷生产的芩暴红止咳片在市场 上非常畅销，可见暴马丁香是个综合利用价值非常高的树种，具有广阔的市场前景。但是生 产紫丁香苷的原料主要靠野生资源的暴马丁香树皮，原本暴马丁香的数量就不多，又每年 有大量暴马丁香被剥皮而死亡，野生资源陆续减少，可利用资源已近枯竭，因此已被政府列 为保护树种，从而导致市场原料更加短缺，收购价格一涨再涨，偷砍盗伐野生暴马丁香资源 更加严重。唯一的解决方法人工栽培营造大面积暴马丁香药用原料林，这样一来既保护天 然暴马丁香林，又能维持，扩大生产暴马丁香产品的产业化发展，满足市场，还能为种植户 农民带来非常好的经济回报。但在其种植过程中，每年有大量的暴马丁香枝条被修剪下来， 造成了资源的严重浪费，如能对暴马丁香枝条加以充分研究和利用，对缓解暴马丁香资源 紧张的局面及其可持续发展具有重大的意义。以暴马丁香枝条中紫丁香苷的含量为指标， 优选出合理的暴马丁香枝条中紫丁香苷的超声提取条件，使暴马丁香枝条资源得到充分利 用，并为进一步开发其相关产品提供理论依据。
发明内容
1、一种紫丁香苷的提取工艺，其特征在于该提取工艺包括以下过程步骤(一)取暴马丁香枝条粉碎为40目，加入暴马丁香枝条17 21倍的 60%乙醇浸泡1- 后，超声提取1次，超声提取时间为80-90min，超声功率为80w，温度为 30°C，过滤，得到乙醇提取液和残渣；步骤(二)将(一)中残渣再重复超声提取2次，得到乙醇提取液；步骤(三)将(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶剂，得到浓缩液；步骤(四)向(三)中浓缩液加水稀释，过滤得上清液；步骤(五)将(四)中的上清液上D皿大孔吸附树脂柱吸附，分别用蒸馏水、10% 浓度乙醇洗脱，得到10%浓度乙醇洗脱液；步骤(六)将(五)中的10%浓度乙醇洗脱液，上JTY-I反向树脂柱层析，收集 洗脱液，回收溶剂得粗结晶，以甲醇溶剂重结晶得到紫丁香苷。根据本发明，本发明中的“ ％，，是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的涉及一种紫丁香苷的提取工艺包括以下实施例，下面的实施例可进 一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1 步骤(一)取暴马丁香枝条粉碎为40目，加入暴马丁香枝条17倍的乙醇浸 泡1- 后，超声提取1次，超声提取时间为80min，超声功率为80w，温度为30°C，过滤，得到 乙醇提取液和残渣；步骤(二)将(一)中残渣再重复超声提取2次，得到乙醇提取液；步骤(三)将(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶剂，得到浓缩液；步骤(四)向(三)中浓缩液加水稀释，过滤得上清液；步骤(五)将(四)中的上清液上D皿大孔吸附树脂柱吸附，分别用蒸馏水、10% 浓度乙醇洗脱，得到10%浓度乙醇洗脱液；步骤(六)将(五)中的10%浓度乙醇洗脱液，上JTY-I反向树脂柱层析，收集 洗脱液，回收溶剂得粗结晶，以甲醇溶剂重结晶得到紫丁香苷。实施例2:步骤(一)取暴马丁香枝条粉碎为40目，加入暴马丁香枝条21倍的60%乙醇浸 泡后，超声提取1次，超声提取时间为80-90min，超声功率为80w，温度为30°C，过滤，得 到乙醇提取液和残渣；步骤(二)将(一)中残渣再重复超声提取2次，得到乙醇提取液；步骤(三)将(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶剂，得到浓缩液；步骤(四)向(三)中浓缩液加水稀释，过滤得上清液；步骤(五)将(四)中的上清液上D皿大孔吸附树脂柱吸附，分别用蒸馏水、10% 浓度乙醇洗脱，得到10%浓度乙醇洗脱液；步骤(六)将(五)中的10%浓度乙醇洗脱液，上JTY-I反向树脂柱层析，收集 洗脱液，回收溶剂得粗结晶，以甲醇溶剂重结晶得到紫丁香苷。药理实验暴马丁香枝条中紫丁香苷提取工艺的实验1材料与方法
1. 1主要试验材料、试药与仪器暴马丁香树枝条采集于吉林省临江市老岭基地，由吉林农业大学园艺学院胡全德 教授鉴定为暴马丁香 Syringa Amurensis (Rupr. et Maxim.)枝条。乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；甲醇(色谱纯，美国进口)；双蒸水(经微孔滤 膜滤过)；乙醇(分析纯，北京化工厂)。紫丁香苷(本实验室自制)白色针晶，mp 190 192°C (甲醇)，三氯化铁-铁氰化钾显色反应呈阳性，示存在酚羟基；Molish反应阳性，示 存在糖基。主要质谱峰m/z 395. 2，由于糖苷类化合物在正离子谱中主要以和Na+形成加和 离子峰[M+Na]+的形式出现，由此我们可以断定化合物的分子量372，与文献报道紫丁香苷 的分子量相吻合。m/z 364为[395-CH30], m/z 232. 2为[395-glc]，这与紫丁香苷(紫丁 香β-葡萄糖苷)的结构完全符合。与对照品紫丁香苷同板3种不同展开剂(A、B、C)共薄 层，二者的Rf值、颜色均一致。且与对照品混合熔点不下降。因此，化合物鉴定为紫丁香苷 (syringin)，纯度为 98. 9%。ALLTECH高效液相色谱仪；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限 公司)；电子大平(500g/0.001g金羊天平仪器厂)；百灵LA114型电子天平(110g/0. OOOlg 常熟市百灵天平仪器有限公司)；101-2型数显电热鼓风干燥箱(上海锦屏仪器仪表有限公 司)。1. 2试验方法1. 2. 1紫丁香苷含量测定方法的建立1.2. 1.1色谱条件色谱柱0DS-C18G. 6謹Χ250_，5μπι)；流动相乙腈水 (12 88)；体积流量1. OmL · mirT1 ；柱温:25°C ；检测波长265nm ；进样量10 μ L。1. 2. 1. 2供试品溶液的制备取干燥至恒重的暴马丁香枝条粗粉约0. 5g，精密称 定，置于锥形瓶中，精密加入体积分数90%的乙醇30mL，密封称重，记录重量，浸泡过夜，超 声提取，静置至室温，补足重量，提取液过滤，用孔径为0. 45 μ m滤膜滤过，即得。1. 2. 1. 3对照品溶液的制备精确称取紫丁香苷对照品10. OOOOmg,置于IOmL容量 瓶中，用甲醇溶解定容，制成浓度为1. Omg · mL—1的紫丁香苷对照品溶液。1. 2. 1. 4标准曲线的绘制吸取上述对照品溶液，分别进样2、4、8、10、12 μ L，按上 述色谱条件进行HPLC分析，以峰面积和进样质量进行线性回归，紫丁香苷线性方程为Y = 603105Χ+74303. 3(R2 = 0. 9993，η = 5)，结果表明紫丁香苷在0. 8 4. 8 μ g与峰面积具有 良好的线性关系。1. 2. 1. 5精密度试验精密吸取紫丁香苷对照品溶液(1. Omg · mL—1) 10 μ L，重复进 样5次，测定紫丁香苷峰面积，得其RSD为1. 06%。1. 2. 1. 6稳定性试验取暴马丁香枝条样品，制备供试品溶液，进样10 μ L，每隔池 测定1次，结果表明样品在他内稳定，样品中紫丁香苷峰面积的RSD为1. 48% (n = 5)。1. 2. 1. 7重现性试验取暴马丁香枝条样品，重复制备5份供试品溶液，分别测定， 结果紫丁香苷质量分数的RSD为1. 85%。1. 2. 1. 8回收率试验采取加样回收法。精密称取暴马丁香枝条样品0. 5000g，平 行5份，加入一定量的紫丁香苷对照品，制备供试品溶液，进行测定，计算得紫丁香苷平均 回收率分别为100. 08%和98. 65%,RSD分别为1. 53%和1. 36% (n = 5)，表明结果准确可
Mho
1. 2. 1. 9样品测定将样品供试液在选定的色谱条件下进行分析，将其峰面积代入 相应的回归方程，并按以下公式计算紫丁香苷的提取率。紫丁香苷提取率(Y)=提取液中紫丁香苷质量/药材质量X 100%。1. 2. 2试验选择提取因素及相关水平1. 2. 2. 1乙醇体积分数范围的选择通过文献查阅[13]，当每次提取90min，加10倍 量的溶剂，比较0 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇对指标值的影响，结果显示以水为溶剂对紫 丁香苷的提取率偏低，以体积分数大于30%的乙醇为溶剂对指标值能达到较好的提取效 果，所以选择乙醇体积分数的下限为30%，上限为90%。1. 2. 2. 2提取时间范围的选择本试验采用超声提取的方法，一般提取时间为 30min左右。本试验将提取时间范围确定为10 90min以确定佳提取时间。1. 2. 2. 3提取次数和溶媒比范围的选择提取次数根据经验选择为3次。在中药提 取中，溶媒比一般为15倍左右，如果溶剂量太少，浸泡过夜后被药材吸收，导致无法过滤， 而溶剂量太大，试剂消耗过大，则需要更大的经济投入，所以溶媒比选择为12 30倍。2结果与分析2. 1星点设计与结果各因素水平设计见表1，按星点设计方法安排试验，共17组(表幻，分别标号 为S1-S17。取干燥至恒重的暴马丁香枝条粗粉约0. 5g，精密称定，平行17份，于锥形瓶中 按表2处理，提取3次，合并备用，溶液用孔径为0. 45 μ m滤膜滤过。为了精确考察最佳因素水平值，选取乙醇体积分数(X1)、提取时间(X2)和溶媒比 (X3)为自变量，以紫丁香苷提取率(Y)为因变量，采用星点设计-效应面方法设计试验，并 用SAS9. 2软件包对实验数据进行RSREG分析，RSREG过程(二次响应面回归过程)用于拟 合完全二次响应曲面的回归模型te]。通过分析研究，拟合出曲面形状的最佳响应的因子水 平或范围。这里，Y为响应变量，W X3为因子变量，二次响应曲面回归模型为Y = b0+b1X1+b2X2+b3X3+b4X1X2+b5X1X3+b6X2X3+b7X12+b8X22+b9X32+ εRSREG过程具有一下功能，(1)模型拟合及对参数估计做方差分析。( 为了调查 预测响应曲面的形状而进行典型性相关分析。( 为了寻找最佳响应的范围而进行岭嵴分 析，由此可以精确得出最佳响应值时各因子的取值，同时，还可以以指标值为纵坐标，固定3 个自变量之一为所估计的最佳值上，其它两个自变量为横坐标，用Origins. 0绘制三维效 应面(response surface)图。由图中的指标值选取最佳自变量值，最后用效应面法得出的 最佳工艺条件提取药材，并依据模型进行预测分析，进行验证试验，最终得到优化的提取工 艺条件。实验设计与结果见表1、2。表1星点设计因素与水平Table 1 Factors and levels of central composite design
因素水平X1 (乙醇体积分数)/%X2 (提取时问)/minX,(溶媒比)/倍--1,68230.0010,0012.00--142.2026,2215.65060.0050—0021.00177.8073.7826.351.68290.0090.0030.00 2星点试验设计与结果
权利要求
1. 一种紫丁香苷的提取工艺，其特征在于该提取工艺包括以下过程 步骤(一)取暴马丁香枝条粉碎为40目，加入暴马丁香枝条17 21倍的 60 % 乙醇浸泡1- 后，超声提取1次，超声提取时间为80-90min，超声功率为80w，温度为30°C， 过滤，得到乙醇提取液和残渣；步骤(二)将(一)中残渣再重复超声提取2次，得到乙醇提取液； 步骤(三)将(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶剂，得到浓缩液； 步骤(四)将(三)中浓缩液加水稀释，过滤得上清液；步骤(五)将(四)中的上清液上Dltll大孔吸附树脂柱吸附，分别用蒸馏水、10%浓度 乙醇洗脱，得到10%浓度乙醇洗脱液；步骤(六)将(五)中的10%浓度乙醇洗脱液，上JTY-I反向树脂柱层析，收集洗脱 液，回收溶剂得粗结晶，以甲醇溶剂重结晶得到紫丁香苷纯品。
全文摘要
本发明属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种紫丁香苷的提取工艺，取暴马丁香枝条粉碎为40目，加入暴马丁香枝条17～21倍的54％～60％乙醇浸泡1-2h后，超声提取，提取时间为80-90min，超声功率为80w，温度为30℃，过滤，得到乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到浓缩液，将浓缩液加水稀释，过滤得上清液，将上清液上D101大孔吸附树脂柱吸附，分别用蒸馏水、10％浓度乙醇洗脱，得到10％浓度乙醇洗脱液，将10％浓度乙醇洗脱液，上JTY-1反向树脂柱层析，收集洗脱液，回收溶剂得粗结晶，以甲醇溶剂重结晶得到紫丁香苷。本发明产品具有抗炎镇痛、抗癌活性及保肝作用，本发明产品适合工业化生产。
文档编号C07H1/08GK102093443SQ20111006007
公开日2011年6月15日 申请日期2011年3月8日 优先权日2011年3月8日
发明者张崇禧, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校