专利名称：一种水杨苷对照品的制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及对照品的制备领域，确切地说是指一种水杨苷对照品的制备工艺。
背景技术：
水杨苷为白色结晶；味苦；熔点199 202°C，比旋光度α厍-45. 6° (O. 6克/100厘米3无水乙醇)；可溶于水，易溶于沸水，难溶于乙醇(1:90)，不溶于醚或氯仿，但能溶于碱溶液、吡啶或冰醋酸中，其水溶液呈中性反应，分子中无游离酚羟基，属于酚苷类化合物；经稀酸或苦杏仁酶水解，可生成葡萄糖和水杨醇。水杨醇的分子式为C7H802 ;为斜方无色针晶；熔点86 87°C;热至100°C升华；可溶于水、苯，易溶于乙醇、醚、氯仿；遇硫酸呈红色。目前，现有技术的水杨苷对照品的制备工艺存在一定缺陷，需要改进，以更好地符合中药标准品的要求。
发明内容
针对上述缺陷，本发明解决的技术问题在于提供一种水杨苷对照品的制备工艺，能够很好地符合中药标准品的要求。为了解决以上的技术问题，本发明提供的水杨苷对照品的制备工艺，包括如下步骤(I)杨树花中水杨苷提取取杨树花4kg，剪碎，加15倍量水煎煮提取两次，每次
I.2-1. 8h，合并两液，过滤，滤液静置过夜，取上层澄清提取液A，备用；(2)大孔树脂初步分离水杨苷，包括以下步骤(21)和步骤(22)(21)大孔树脂的预处理取大孔树脂D-1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡10-14小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加92%-98%乙醇冲洗后，加蒸馏水28-32L浸泡，用4%-6%盐酸4-6L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6_7，用4%-6%NaOH4-6L冲洗树脂，后用蒸馏水冲洗至pH至6_7，加92%_98%乙醇浸泡过夜，放出乙醇，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用；(22)吸附和解吸附将步骤(I)中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附24h以上，吸附速率为10-16L/h，用水洗至流出液变为浅黄色后，用15%-25%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集15%-25%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B，保存备用；(3)正丁醇萃取取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次6-10L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C ;(4)正相硅胶法分离纯化水杨苷取200目-300目的硅胶I. 2-1. 8kg，加2-4L氯仿-甲醇=8 1溶液混合均匀，装柱；取样品粗品C，加甲醇溶解，加硅胶150-250g拌样，旋转蒸发回收溶剂后，上样，依次采用氯仿-甲醇比例依次为7 :1、4 :1、3 1的溶液及纯甲醇梯度洗脱，分段收集各流份；洗脱产品分别以TLC检测，合并含水杨苷且杂质干扰小的洗脱液，回收适量溶剂，待析出晶体后，用少量甲醇润洗，过滤，得水杨苷粗品D，备用；(5)水杨苷的重结晶取水杨苷粗品D，加适量甲醇热溶，室温冷却结晶，待析出晶体后，过滤，收集结晶，如此重复操作至滤液无色，收集结晶，至真空干燥箱中干燥，得水杨苷标准品。优选地，在步骤(I)中，取上层澄清提取液A的体积为90L-100L。优选地，在步骤(2)中(21)大孔树脂的预处理取大孔树脂D-1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡12小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加95%乙醇冲洗后，加蒸馏水30L浸泡，用5%盐酸5L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6-7，用5%Na0H5L冲洗树脂，后用蒸懼水冲洗至pH至6-7,加95%乙醇浸泡过夜,放出乙醇，用蒸懼水冲洗至无醇味，备用；(22)吸附和解吸附将步骤(I)中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附24h以上，吸附速率14L/h，用水洗至流出液变为浅黄色后，用20%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集20%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B，保存备用。
优选地，在步骤(3)中取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次8L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C。优选地，在步骤(4)中取200目-300目的硅胶I. 5kg，加3L氯仿-甲醇=8 1溶液混合均勻，装柱，装柱规格为7. 5cmX IlOcm ;取样品粗品C,加甲醇溶解,加娃胶200g拌样，硅胶为100目-200目，比例为样品硅胶=1:2，旋转蒸发回收溶剂后，上样，依次采用氯仿-甲醇比例依次为7 :1、4 :1、3 1的溶液及纯甲醇梯度洗脱，分段收集各流份，每种比例洗脱液约30L，每段收集5L ;洗脱产品分别以TLC检测，合并含水杨苷且杂质干扰小的洗脱液，回收适量溶剂，待析出晶体后，用少量甲醇润洗，过滤，得水杨苷粗品D，备用。优选地，在步骤(6)中取水杨苷粗品D，加适量600ml甲醇热溶，室温冷却结晶，待析出晶体后，过滤，收集结晶，如此重复操作至滤液无色，收集结晶，至真空干燥箱中干燥，得水杨苷标准品。与现有技术相比，本发明提供的水杨苷对照品的制备工艺，水杨苷对照品的制备工艺，能够很好地符合中药标准品的要求。
具体实施例方式为了本领域的技术人员能够更好地理解本发明所提供的技术方案，下面结合具体实施例进行阐述。本发明实施例提供的水杨苷对照品的制备工艺，包括如下步骤( I)杨树花中水杨苷提取取杨树花4kg，剪碎，加15倍量水煎煮提取两次，每次
I.5h，合并两液，过滤，滤液静置过夜，取上层澄清提取液A，(约95L)，备用；(2)大孔树脂初步分离水杨苷，包括以下步骤(21)和步骤(22)(21)大孔树脂的预处理取大孔树脂D_1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡12小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加95%乙醇冲洗后，加蒸馏水30L浸泡，用5%盐酸5L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6-7，用5%Na0H5L冲洗树脂，后用蒸懼水冲洗至pH至6-7,加95%乙醇浸泡过夜,放出乙醇,用蒸懼水冲洗至无醇味,备用；(22)吸附和解吸附将步骤(I)中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附(速率14L/h) 24h以上，用水洗至流出液变为浅黄色后，用20%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集20%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B (约13L)，保存备用；
(3)正丁醇萃取取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次8L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C (约142. 6g)(4)正相硅胶法分离纯化水杨苷取200目-300目的硅胶I. 5kg，加3L氯仿-甲醇=8 :1溶液混合均匀，装柱(7. 5CmX110Cm);取样品粗品C，加甲醇溶解，加硅胶200g拌样(100目-200目，比例为样品硅胶=1:2)，旋转蒸发回收溶剂后，上样，依次采用氯仿-甲醇比例依次为7 :1、4 :1、3 1的溶液及纯甲醇梯度洗脱，分段收集各流份(每种比例洗脱液约30L，每段收集5L);洗脱产品分别以TLC检测，合并含水杨苷且杂质干扰小的洗脱液，回收适量溶剂，待析出晶体后，用少量甲醇润洗，过滤，得水杨苷粗品D (9.5g)，备用；(5)水杨苷的重结晶取水杨苷粗品D，加适量甲醇(约600ml)热溶，室温冷却结晶，待析出晶体后，过滤，收集结晶，如此重复操作至滤液无色，收集结晶，至真空干燥箱中干燥，得水杨苷标准品(编号SYG-5021，3. 725g)。确证水杨苷结构的相关资料本研究主要通过对制备得到的水杨苷(编号SYG_5021)进行熔点测定、比旋度测定、元素分析、红外光谱、质谱、核磁共振谱鉴别(1H-NMRj3C-NMR)等研究，对其结构进行确证，具体研究内容如下。水杨苷简介分子式=C13H18O7;分子量286. 29 ；CAS 登录号=138-52-3 ;英文名称=Salicin ;结
构式如下
权利要求
1.一种水杨苷对照品的制备工艺，其特征在于，包括如下步骤 (O杨树花中水杨苷提取取杨树花4kg，剪碎，加15倍量水煎煮提取两次，每次I. 2-1. 8h，合并两液，过滤， 滤液静置过夜，取上层澄清提取液A，备用； (2)大孔树脂初步分离水杨苷，包括以下步骤(21)和步骤(22): (21)大孔树脂的预处理取大孔树脂D-1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡10-14小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加92%-98%乙醇冲洗后，加蒸馏水28-32L浸泡，用4%-6%盐酸4-6L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6_7，用4%-6%NaOH4_6L冲洗树脂，后用蒸馏水冲洗至pH至6-7，加92%-98%乙醇浸泡过夜，放出乙醇，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用； (22)吸附和解吸附将步骤(I)中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附24h以上，吸附速率为10_16L/h，用水洗至流出液变为浅黄色后，用15%-25%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集15%-25%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B，保存备用； (3)正丁醇萃取取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次6-10L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C ; (4)正相硅胶法分离纯化水杨苷取200目-300目的硅胶I.2-1. 8kg，加2-4L氯仿-甲醇=8 :1溶液混合均匀，装柱；取样品粗品C，加甲醇溶解，加硅胶150-250g拌样，旋转蒸发回收溶剂后，上样，依次采用氯仿-甲醇比例依次为7 :1、4 :1、3 1的溶液及纯甲醇梯度洗脱，分段收集各流份；洗脱产品分别以TLC检测，合并含水杨苷且杂质干扰小的洗脱液，回收适量溶剂，待析出晶体后，用少量甲醇润洗，过滤，得水杨苷粗品D，备用； (5)水杨苷的重结晶取水杨苷粗品D，加适量甲醇热溶，室温冷却结晶，待析出晶体后，过滤，收集结晶，如此重复操作至滤液无色，收集结晶，至真空干燥箱中干燥，得水杨苷标准品。
2.根据权利要求I所述的水杨苷对照品的制备工艺，其特征在于，在步骤(I)中，取上层澄清提取液A的体积为90L-100L。
3.根据权利要求I所述的水杨苷对照品的制备工艺，其特征在于，在步骤(2)中 (21)大孔树脂的预处理取大孔树脂D-1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡12小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加95%乙醇冲洗后，加蒸馏水30L浸泡，用5%盐酸5L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6-7，用5%NaOH5L冲洗树脂，后用蒸馏水冲洗至pH至6-7,加95%乙醇浸泡过夜,放出乙醇,用蒸懼水冲洗至无醇味,备用； (22)吸附和解吸附将步骤(I)中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附24h以上，吸附速率14L/h，用水洗至流出液变为浅黄色后，用20%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集20%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B，保存备用。
4.根据权利要求I所述的水杨苷对照品的制备工艺，其特征在于，在步骤(3)中取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次8L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C。
5.根据权利要求I所述的水杨苷对照品的制备工艺，其特征在于，在步骤(4)中取200目-300目的硅胶I. 5kg，加3L氯仿-甲醇=8 :1溶液混合均匀，装柱，装柱规格为·7.5cmX IlOcm;取样品粗品C，加甲醇溶解，加硅胶200g拌样，硅胶为100目-200目，比例为样品硅胶=1:2，旋转蒸发回收溶剂后，上样，依次采用氯仿-甲醇比例依次为7 :1、4 `1、3 :1的溶液及纯甲醇梯度洗脱，分段收集各流份，每种比例洗脱液约30L，每段收集5L ;洗脱产品分别以TLC检测，合并含水杨苷且杂质干扰小的洗脱液，回收适量溶剂，待析出晶体后，用少量甲醇润洗，过滤，得水杨苷粗品D，备用。
6.根据权利要求I所述的水杨苷对照品的制备工艺，其特征在于，在步骤(6)中取水杨苷粗品D，加适量600ml甲醇热溶，室温冷却结晶，待析出晶体后，过滤，收集结晶，如此重复操作至滤液无色，收集结晶，至真空干燥箱中干燥，得水杨苷标准品。
全文摘要
本发明公开一种水杨苷对照品的制备工艺，包括如下步骤(1)杨树花中水杨苷提取；(2)大孔树脂初步分离水杨苷；(3)正丁醇萃取；(4)正相硅胶法分离纯化水杨苷；(5)水杨苷的重结晶。与现有技术相比，本发明提供的水杨苷对照品的制备工艺，能够很好地符合中药标准品的要求。
文档编号C07H1/08GK102863483SQ20121038846
公开日2013年1月9日 申请日期2012年10月12日 优先权日2012年10月12日
发明者房春林, 吴学渊, 李超, 杨海涵, 李犹平 申请人:成都乾坤动物药业有限公司