专利名称：一种水蔓菁苷的分离制备方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分的提取纯化方法，具体而言，涉及一种水蔓菁苷的分离制备方法。
背景技术：
水蔓菁为玄参科细叶婆婆纳属水蔓菁linariifolia Pall. Ex Link subsp. dilatata (Nakai et Kitagawa)Hong)的干燥全草，具有清热解毒、利尿、止咳化痰的功效，临床用于治疗慢性气管炎、肺化脓症、咳吐脓血、急性肾炎、尿路感染等。近年来研究发现，水蔓菁黄酮类成分有明显的镇咳、体外促凝血和清除自由基活性。水蔓菁主要化学成分为木犀草素、芹黄素、木犀草素苷等黄酮类化合物，其中木犀草素苷以水蔓菁苷为主。目前尚未见水蔓菁苷工业提取方法的相关专利报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种水蔓菁苷的分离制备方法，采用高效液相色谱法测定产品中水蔓菁苷含量达到98%以上。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种水蔓菁苷的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤
(1)提取称取水蔓菁原药材，加入其重量6-10倍的水煎煮2-3次，每次l-2h，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏；
(2)醇沉将浸膏加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液；
(3)膜分离离心液通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；
(4)高速逆流色谱纯化以正己烷-正丁醇-甲醇-水为溶剂系统，以上相为固定相， 下相为流动相，将上述得到的粗品采用高速逆流色谱法进行分离纯化，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷。所述步骤(4)中的溶剂系统正己烷-正丁醇-甲醇-水体积比为(1-5) (3-5) (1-3) (4-8)。所述步骤(4)中的高速逆流色谱仪转速为700-900r/min，流动相流速为 1. 5-2. 5ml/min。采用上述技术方案的有益效果是
(1)本发明采用膜分离技术过滤除杂，比传统加热蒸发浓缩节能；
(2)采用高速逆流色谱法进行分离纯化，与以往技术手段相比，具有分离能力强、分离时间短、样品损失小、产品质量高等优点。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。实施例1
称取水蔓菁原药材，取^g，加入其重量6倍的水煎煮2次，每次2h，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏，加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液，通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 1:3:1:4混合，静置分层，上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为700r/min，控制流动相流速为1. 5ml/min，将粗品溶于流动相作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷，含量为98. 6%。实施例2:
称取水蔓菁原药材，取^g，加入其重量6-10倍的水煎煮2-3次，每次l-2h，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏，加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液，通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 5:5:3:8混合，静置分层，上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为900r/min，控制流动相流速为2. 5ml/min，将粗品溶于流动相作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷，含量为98. 4%。实施例3:
称取水蔓菁原药材，取3kg，加入其重量10倍的水煎煮3次，每次lh，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏，加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液，通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 3:4:3:7混合，静置分层，上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为800r/min，控制流动相流速为2ml/min，将粗品溶于流动相作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷，含量为98. 5%。实施例4:
称取水蔓菁原药材，取3kg，加入其重量8倍的水煎煮2次，每次lh，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏，加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液，通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例 2:5:3:6混合，静置分层，上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为750r/min，控制流动相流速为2ml/min，将粗品溶于流动相作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷，含量为98. 5%。实施例5:
称取水蔓菁原药材，取10kg，加入其重量8倍的水煎煮2次，每次2h，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏，加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液，通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例5: 3:1:6混合，静置分层，上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为800r/min，控制流动相流速为2. 5ml/min，将粗品溶于流动相作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷，含量为98. 3%。
权利要求
1.一种水蔓菁苷的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取称取水蔓菁原药材，加入其重量6-10倍的水煎煮2-3次，每次l-2h，过滤，合并提取液，浓缩至浸膏；(2)醇沉将浸膏加入乙醇使乙醇浓度达到60%，静置，上清液浓缩，再加乙醇使乙醇浓达到80%，静置，过滤，滤液回收乙醇，离心得到离心液；(3)膜分离离心液通过截留分子量1000-3000中空纤维素膜分离设备分离，收集透过液，浓缩干燥得到粗品；(4)高速逆流色谱纯化以正己烷-正丁醇-甲醇-水为溶剂系统，以上相为固定相， 下相为流动相，将上述得到的粗品采用高速逆流色谱法进行分离纯化，HPLC检测，收集目标流分，浓缩，冷冻干燥得到水蔓菁苷。
2.如权利要求1所述的一种水蔓菁苷的分离制备方法，其特征在于所述步骤(4)中的溶剂系统正己烷-正丁醇-甲醇-水体积比为(1-5) (3-5) (1-3) (4-8)。
3.如权利要求1所述的一种水蔓菁苷的分离制备方法，其特征在于所述步骤(4)中的高速逆流色谱仪转速为700-900r/min，流动相流速为1. 5-2. 5ml/min。
全文摘要
本发明涉及天然药物的分离，具体地说是一种水蔓菁苷的分离制备方法，包括提取、醇沉、膜分离、高速逆流色谱纯化等步骤进行分离制备得到水蔓菁苷。本发明产品纯度高、制备量大，工艺稳定可靠。本发明特别适用于水蔓菁中分离制备大量的高纯度的水蔓菁苷。
文档编号C07H1/08GK102268051SQ201110226568
公开日2011年12月7日 申请日期2011年8月9日 优先权日2011年8月9日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司