专利名称：一种华北白前苷a的提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于中药化学领域，涉及ー种华北白前苷A的提取エ艺。
背景技术：
华北白前hancockianum(}Aa,rim. )A1. Iljinski 系萝蘑科鹅绒藤属多年生草本植物，又名牛心朴、对叶草等。广泛分布于我国的西北各省区，以内蒙西部居多。该植物药用全草，具有活血、止痛、消炎之功效，用于治疗关节痛、牙痛、秃疮等。民间用此药驱杀蚊虫和治疗肿瘤。华北白前主 要化学成分为留体皂苷、生物碱、三萜、单萜及其苷元等。其中华北白前苷A是华北白前的主要活性成分之一，分子式为C44H62O18，分子量为878. 96，娄红祥通过药理实验发现华北白前苷A具有一定的内毒素作用，另有体外抑瘤实验表明，华北白前苷A可以拮抗TNF (肿瘤坏死因子)的毒副作用。有文献报道采用95%こ醇回流提取，醇提取物用0. lmol/L盐酸溶解，滤除不溶物，以氯仿萃取后，加氨水调pH9，再用氯仿萃取，萃取液浓缩，进行硅胶柱层祈，石油醚-こ醚不同比例混合溶剂洗脱，多次柱层析分离得到华北白前苷A，该方法操作繁琐，样品损失较大，成本高，不适用于エ业化生产。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中的缺陷，提供一种华北白前苷A的提取エ艺，该方法成本低、制备量大，效率高，易于放大生产。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种华北白前苷A的提取エ艺，其特征在于包括以下步骤
(1)将新鲜或干燥的华北白前根粉碎，加生物酶酶解3-5天，酶解原料加5-10倍量30-50%甲醇，采用连续逆流超声提取，在超声装置的超声波作用下，提取时间为50-150min,提取2_4次，提取温度50-60°C，过滤，得提取液；
(2)提取液经减压浓缩后加热水分散，加入大孔吸附树脂柱吸附，40-90%こ醇溶液洗脱，收集得到洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩成浸膏状，用水饱和正丁醇萃取，萃取物加丙酮至沉淀不再产生，放置沉淀，滤出沉淀物；
(4)沉淀物经高速逆流色谱法分离纯化，流出物浓缩、干燥得到华北白前苷A。步骤(I)中所述生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任ー种，用量为原料重量的 0. 05-0. 1%。步骤(I)中所述超声频率为40-50KHZ。步骤(4)中所述高速逆流色谱溶剂系统为正庚烷-こ酸こ酯-こ臆-水，其体积比为(5-10) (3-5) (6-8) (4-8)。采用上述技术方案制备华北白前苷A，操作简单、提取率高、样品损失少、产品纯度高，利于大生产操作。
具体实施例方式下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :
取华北白前根原料粉碎5kg，加2. 5g的纤维素酶混合均匀，酶解5天，酶解原料加40L45%甲醇，采用连续逆流超声提取，温度为50°C，提取时间为90min，超声频率为40KHz，提取3次，过滤，合并提取液，减压浓缩，所得浓缩液加热水分散后加入AB-8大孔树脂柱吸附，依次用水、60%こ醇洗脱，收集60%こ醇洗脱液，减压回收试剂，浓缩成浸膏，加水饱和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩后加丙酮至沉淀不再产生，放置沉淀，滤出沉淀物，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得华北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按体积比8:4:7:6置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述华北白前苷A粗品150mg溶于IOml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以2ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为820rpm，收集华北白前苷A流分，浓缩，低温干燥即得华北白前苷A，经HPLC測定，纯度为98. 7%。实施例2:·
取华北白前根原料粉碎5kg，加3. 8g的纤维素酶混合均匀，酶解4天，酶解原料加50L50%甲醇，采用连续逆流超声提取，温度为55°C，提取时间为150min，超声频率为45KHz，提取3次，过滤，合并提取液，减压浓缩，所得浓缩液加热水分散后加入DlOl大孔树脂柱吸附，依次用水、45%こ醇洗脱，收集45%こ醇洗脱液，减压回收试剂，浓缩成浸膏，加水饱和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩后加丙酮至沉淀不再产生，放置沉淀，滤出沉淀物，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得华北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按体积比10:3:6:8置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述华北白前苷A粗品IOOmg溶于IOml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以2ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为820rpm，收集华北白前苷A流分，浓缩，低温干燥即得华北白前苷A，经HPLC測定，纯度为98. 9%。实施例3:
取华北白前根原料粉碎5kg，加5g的果胶酶混合均匀，酶解4天，酶解原料加25L30%甲醇，采用连续逆流超声提取，温度为60°C，提取时间为120min，超声频率为44KHz，提取2次，过滤，合并提取液，减压浓缩，所得浓缩液加热水分散后加入AB-8大孔树脂柱吸附，依次用水、90%こ醇洗脱，收集90%こ醇洗脱液，减压回收试剂，浓缩成浸膏,加水饱和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩后加丙酮至沉淀不再产生，放置沉淀，滤出沉淀物，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得华北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按体积比5:5:8:4置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述华北白前苷A粗品200mg溶于IOml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为820rpm，收集华北白前苷A流分，浓缩，低温干燥即得华北白前苷A，经HPLC測定，纯度为98. 4%。实施例4:
取华北白前根原料粉碎5kg，加4. 2g的淀粉酶混合均匀，酶解3天，酶解原料加30L35%甲醇，采用连续逆流超声提取，温度为55°C，提取时间为60min，超声频率为50KHz，提取4次，过滤，合并提取液，减压浓縮，所得浓缩液加热水分散后加入DlOl大孔树脂柱吸附，依次用水、70%こ醇洗脱，收集70%こ醇洗脱液，减压回收试剂，浓缩成浸膏，加水饱和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩后加丙酮至沉淀不再产生，放置沉淀，滤出沉淀物，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得华北白前苷A粗品。取正庚烷、こ酸こ酷、こ腈、水按体积比7:4:6:5置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述华北白前苷A粗品250mg溶于15ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为820rpm，收集华北白前苷A流分，浓缩，低温干燥即得华北白前苷A，经HPLC測定，纯度为98.3%。
权利要求
1.I、一种华北白前苷A的提取工艺，其特征在于包括以下步骤 (O将新鲜或干燥的华北白前根粉碎，加生物酶酶解3-5天，酶解原料加5-10倍量30-50%甲醇，采用连续逆流超声提取，在超声装置的超声波作用下，提取时间为50-150min,提取2_4次，提取温度50-60°C，过滤，得提取液； (2)提取液经减压浓缩后加热水分散，加入大孔吸附树脂柱吸附，40-90%乙醇溶液洗脱，收集得到洗脱液； (3)将洗脱液浓缩成浸膏状，用水饱和正丁醇萃取，萃取物加丙酮至沉淀不再产生，放置沉淀，滤出沉淀物； (4)沉淀物经高速逆流色谱法分离纯化，流出物浓缩、干燥得到华北白前苷A。
2.2、如权利要求I所述的一种华北白前苷A的提取工艺，其特征在于步骤(I)中所述 生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的O. 05-0. 1%。
3.3、如权利要求I所述的一种华北白前苷A的提取工艺，其特征在于步骤(I)中所述超声频率为40-50KHz。
4.4、如权利要求I所述的一种华北白前苷A的提取工艺，其特征在于步骤(4)中所述高速逆流色谱溶剂系统为正庚烷-乙酸乙酯-乙腈-水，其体积比为(5-10) :(3-5) :(6-8)(4-8)。
全文摘要
本发明涉及一种华北白前苷A的提取工艺，具体包括如下步骤(1)将新鲜或干燥的华北白前根粉碎，加生物酶酶解3-5天，酶解原料加甲醇，采用连续逆流超声提取，得提取液；(2)提取液经减压浓缩后通过大孔吸附树脂柱吸附洗脱，得洗脱液；(3)将洗脱液浓缩后用水饱和正丁醇萃取，减压浓缩萃取液，加丙酮沉淀；(4)沉淀物经高速逆流色谱法分离纯化得到华北白前苷A。本发明方法成本低、制备量大，效率高，易于放大生产。
文档编号C07J17/00GK102850425SQ20121035018
公开日2013年1月2日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司