一种制备木蝴蝶苷a的方法
【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】，公开了一种制备木蝴蝶苷A的简便方法。该方法是以黄岑苷为起始原料，利用一锅两步法合成木蝴蝶苷A，该方法所用试剂为实验室常用试剂，且反应中关键步骤的还原反应在室温条件下即可进行，因此，本发明所需材料易得、成本低廉，且反应操作简单，易于处理，可以大量获得木蝴蝶苷A，以供医药研发的使用。
【专利说明】一种制备木蝴蝶苷A的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种制备木蝴蝶苷A的方法。
【背景技术】
[0002]黄酮类化合物广泛分布于蔬菜、水果和草本药材中，并具有极高的药用价值，如可抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节等，开发意义重大。除了一些常见的黄酮醇苷，如槲皮素苷和山柰酚甙已被证明具有良好的生物活性，近年来，黄酮苷也得到了广泛的研究。例如，一些黄酮苷具有较好的抗肿瘤、消炎、抗疟原虫或抗锥虫等作用。
[0003]从自然植物中提取黄酮苷是其主要来源，但也使其生产成本较高，成为限制其进一步应用的一大障碍。为了解决这个问题，蛋白质工程、代谢工程和合成生物学已被应用于提高黄酮苷的有效生产率。尽管酶工程、基因工程可以提高产量，但是在实际应用中存在种种困难，例如周期长、效率低，副反应多、分离纯化难等。
[0004]木蝴蝶(Oroxylum indicum)属紫葳科,始载于《滇南本草》,原名千张纸,是一种常用中药。其味苦、甘，性凉，入肺、肝、胃经，有清肺、利咽、止咳、舒肝、和胃等功效，主治咽痛喉痹、声音撕哑、咳嗽、肝胃气痛、疮疡久溃不敛、浸淫疮等。木蝴蝶中的化学成分主要为黄酮类化合物，如黄岑素(Baicalein),白杨素(Chrysin),木蝴蝶苷A (Oroxin A),木蝴蝶苷B (Oroxin B),木蝴蝶定(Oroxindin),千层纸苷(Tetuin),黄岑苷(Baicalin)等。近年来,木蝴蝶苷的药用价值受到了越来越多的关注,其中OroxinA, Oroxin B和Oroxylin A7-0-glucuronide具有抗氧化、抗炎、免疫调节等功能以及抗金黄色葡萄球菌感染等生理活性。但是由于从木蝴蝶中分离纯化Oroxin A, Oroxin B较困难,因此其价格相当昂贵,例如Ig纯度为97%的Oroxin A需要$1500,严重影响了该类化合物在体内体外药效评价研究等领域的应用。
[0005]目前，国内外科研人员已采用多种方法来获得Oroxin系列化合物，如Liu等人采用高速逆流色谱法从天然的木蝴蝶中分离纯化得到纯度为99.1%的Oroxin A,但是这种方法成本很高，不适用于大量提纯(Journal of separat1n science 2010, 33,1058-1063)。Sohng等人通过构建具有尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-葡萄糖)途径和糖基转移酶的大肠杆菌菌株，开发了一种可以从黄酮苷元一黄芩素生物转化为黄芩素-7-0-葡萄糖苷(Oroxin A)的生物合成方法，但是该方法容易产生非常复杂的副产物，给分离纯化带来了诸多困难(Process B1chemistry 2013, 48, 1744-1748)。因此，是否能通过化学合成从根本上解决这些问题，开发一种简洁的合成路线来大量合成Oroxin A，成为当前亟待解决的问题。
[0006] 根据黄酮苷的生源途径，我们发现黄芩苷(Baicalin)和Oroxin A几乎具有相同的结构，Baicalin是黄岑素-7-0-匍萄糖醒酸昔,而Oroxin A是黄岑素-7-0-匍萄糖昔。黄芩苷是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，是黄芩的主要有效成分，含量占10%以上，因此，其来源非常丰富，价格便宜，以baicalin作为起始原料用来合成Oroxin A，可有效解决Oroxin A原料不足的难题，同时也可为其他同类化合物的合成提供新的解决思路和方案。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种制备木蝴蝶苷A的方法，针对现有各种方法制备和提取木蝴蝶苷A较困难，例如收率低，提取成本高等缺点，我们进行了本发明。本发明的目的在于提供一种半合成制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于极大地提高了收率，降低了生产成本。
[0008]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种制备木蝴蝶苷A的方法，是以黄岑苷为起始原料，经一锅两步法获得所述木蝴蝶苷A。
[0009]包括以下步骤:
1)将黄岑苷于有机醇中溶解，0°c下加入无机酸作为催化剂，混匀后加热回流反应2-4小时，溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；
2)(TC下，在步骤I)得到的黄色液体中分批加入还原试剂，再置于室温下反应1-4小时；
3)步骤2)反应结束后加入乙酸乙酯或丙酮，继续反应10-60分钟，再将反应液旋干，加入乙酸乙酯和体积分数为10%的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A ；
4)将粗产物用有机溶剂进行重结晶后，抽滤得到高纯度的木蝴蝶苷A。
[0010]步骤I)所述有机醇为实验室常用醇溶液，包括甲醇、乙醇、异丙醇；所述无机酸为实验室常用无机酸，包括浓盐酸、浓硫酸、浓硝酸、浓磷酸。
[0011]步骤2)所述还原试剂为硼氢化钠、硼氢化钾、硼氢化锂，或硼氢化钠与氯化锂按摩尔比1:1混合所得。
[0012]步骤4)所述有机溶剂为甲醇或乙醇。
[0013]本发明的显著优点在于:针对现有方法制备和提取木蝴蝶苷A出现的收率低、提取成本高等问题，本发明提供了一种半合成制备木蝴蝶苷A的方法，是以黄岑苷为起始原料，利用一锅两步法合成木蝴蝶苷A，该方法所用试剂为实验室常用试剂，且反应中关键步骤的还原反应在室温条件下即可进行，因此，本发明所需材料易得、成本低廉，反应操作简单，易于处理，且提取率较高，可以大量获得木蝴蝶苷A，以供医药研发的使用。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1为本发明的合成路线。
【具体实施方式】
[0015]为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0016]实施例1
一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤:1)在10mL烧瓶中加入0.9g黄芩苷和50mL乙醇，(TC下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应2小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；
2)0°C下，在步骤I)的黄色液体中分批加入380mg还原试剂硼氢化钠，置于室温下反应I小时；
3)步骤2)反应结束后加入5mL乙酸乙酯，室温继续反应20分钟，将反应液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL体积分数为10%的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A ；
4)将粗产物用1mL甲醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒0.65g，收率为75.2%。
[0017]实施例2
一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤:
1)在10mL烧瓶中加入0.9g黄芩苷和50mL甲醇，(TC下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应3小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；
2)0°C下，在步骤I)的黄色液体中分批加入380mg还原试剂硼氢化钠，置于室温下反应2小时； 3)步骤2)反应结束后加入5mL乙酸乙酯，室温继续反应10分钟，将反应液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL体积分数为10%的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A ；
4)将粗产物用1mL乙醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒0.54g，收率为62.5%。
[0018]实施例3
一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤:
1)在10mL烧瓶中加入0.9g黄芩苷和50mL甲醇，(TC下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应2小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；
2)0°C下，在步骤I)的黄色液体中分批加入540mg还原试剂硼氢化钾，置于室温下反应3小时；
3)步骤2)反应结束后加入5mL乙酸乙酯，室温继续反应30分钟，将反应液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL体积分数为10%的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A ；
4)将粗产物用1mL甲醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒0.60g，收率为
69.4%。
[0019]实施例4
一种制备木蝴蝶苷A的方法，包括以下步骤:1)在10mL烧瓶中加入0.9g黄芩苷和50mL甲醇，(TC下滴入催化量的浓硫酸，将反应瓶置于油浴中，加热回流反应4小时；溶液颜色开始变黄后点TLC板确定反应程度，待确定反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温；2)0°C下，在步骤I)的黄色液体中分批加入380mg硼氢化钠和420mg氯化锂，置于室温下反应I小时；
3)步骤2)反应结束后加入5mL乙酸乙酯，室温继续反应60分钟，将反应液旋干，再加入5mL乙酸乙酯和5mL体积分数为10%的醋酸水溶液，搅拌后得到大量黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A ；
4)将粗产物用1mL甲醇进行重结晶后，抽滤得到淡黄色固体颗粒0.62g，收率为71.8%。
[0020]将实施例中所得的淡黄色固体进行氢谱1H-NMK碳谱13C_NMR、高分辨率质谱及高效液相色谱HPLC测定，确定为木蝴蝶苷A，其含量均大于99%，相关测定数据如下:
1H-NMR (400 MHz,DMS0-1/6):12.57 (s, 1H)，8.59 (s, 1H)，8.08 (d, 2H, / = 8.0Hz), 7.57-7.63 (m, 3H)，7.04 (d, 2H, J = 16.0 Hz), 5.42 (d, 1H, / = 4.0 Hz)，5.16 (d, 1H, / = 4.0 Hz)，5.11 (d, 1H, / = 4.0 Hz)，5.02 (d, 1H, / = 8.0 Hz)，4.68 (t, I H, / = 4.0 Hz)，3.74-3.78 (m, 1H)，3.48-3.52 (m, 2H)，3.18-3.24 (m,1H)。
[0021]13C-NMR (100 MHz，DMSO-J6):183.1，164.0, 152.1，149.7，147.0, 132.5，131.3， 131.1， 129.6， 126.9， 106.6， 105.2， 101.5， 94.8, 77.8, 76.4, 73.7,
70.2，61.2.。
[0022]HRMS (ESI) calcd for C21H19O10:431.0984 (Μ-Η), found 431.0973。
[0023]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【权利要求】
1.一种制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:以黄岑苷为起始原料，经一锅两步法获得所述木蝴蝶苷A。
2.根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:包括以下步骤: 将黄岑苷于有机醇中溶解，0°C下加入无机酸作为催化剂，混匀后加热回流反应2-4小时，待反应结束后将得到的黄色液体冷却至室温； 2)0°C下，在步骤I)得到的黄色液体中分批加入还原试剂，再置于室温下反应1-4小时； 3)步骤2)反应结束后加入乙酸乙酯或丙酮，继续反应10-60分钟，再将反应液旋干，加入乙酸乙酯和体积分数为10%的醋酸水溶液，搅拌后得到黄色固体，抽滤得到粗产物木蝴蝶苷A ; 4)将粗产物用有机溶剂进行重结晶后，抽滤得到高纯度的木蝴蝶苷A。
3.根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步骤I)所述有机醇为实验室常用醇溶液，包括甲醇、乙醇、异丙醇。
4.根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步骤I)所述无机酸为实验室常用无机酸，包括浓盐酸、浓硫酸、浓硝酸、浓磷酸。
5.根据权利要求 1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步骤2)所述还原试剂为硼氢化钠、硼氢化钾、硼氢化锂，或硼氢化钠与氯化锂按摩尔比1:1混合所得。
6.根据权利要求1所述制备木蝴蝶苷A的方法，其特征在于:步骤4)所述有机溶剂为甲醇或乙醇。
【文档编号】C07H1/00GK104072557SQ201410329611
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年7月11日 优先权日:2014年7月11日
【发明者】陈海军, 何桂华, 李财龙, 董龙嵘, 谢晓波, 王旋旋, 高瑜 申请人:福州大学