专利名称：四角蛤蜊糖胺聚糖的提取制备方法
技术领域：
本发明涉及用于糖胺聚糖的提取方法，特别涉及一种四角蛤蜊糖胺聚糖的提取制备方法。
背景技术：
目前糖胺聚糖的提取方法主要有三种第一非降解法，指用水或盐溶液从动、植物组织中提取糖胺聚糖的方法；第二碱提取法，基于蛋白多糖中糖肽键对碱的不稳定性，用碱提法使糖与蛋白质分开；第三酶降解法，蛋白酶将蛋白聚糖的蛋白质部分降解使糖链得到分离。三种方法中以酶降解法应用最广泛，关于贝类中的糖胺聚糖提取，已有部分文献报道，但不同贝类中的糖胺聚糖的组成、含量和功能活性不同，从其它贝类糖胺聚糖的提取制备来看，普遍存在得率和纯度较低的缺陷，为此本发明能够弥补以上缺陷。
发明内容
根据以上问题，本发明提供一种以渤海湾常见的低值贝类四角蛤蜊为原材料，提取、分离、纯化糖胺聚糖，并对其功能活性进行阐述，以期为保健品业提供优质保健品，为海珍动物养殖业提供优良的免疫增强剂。四角蛤蜊糖胺聚糖的提取制备方法，其特征在于将四角蛤蜊软体部分称重，加水制成勻浆液，水料比为3 1，在勻浆液中加入枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶酶解，枯草杆菌中性蛋白酶与胰蛋白酶比例为4 3，复合酶添加量为1%，酶解时间为3-5h，煮沸离心，得清液，清液加活性炭脱色，真空抽滤，硅藻土助滤，清液醇沉得粗糖胺聚糖，得率达1.3%以上，配制3%糖液，离心除去酸性、中性蛋白质，上清液经透析后醇沉，配制糖液，加入5% CTAB，离心，将沉淀溶于KCI溶液中，得解离液，再醇沉，透析，醇沉，获得高纯度糖胺聚糖。该方法反应条件温和、得率及纯度高，在提取糖胺聚糖的同时还可大量回收蛋白质，有利于四角蛤蜊的综合利用，提取的物质对于清除自由基、抗氧化性及抗凝血具有重要作用，粗糖胺聚糖得率达1.3%以上，糖胺聚糖纯度达95%以上。
具体实施例方式实施例1将贝类的软体部分加入3倍体积的蒸馏水勻浆，向勻浆液中加入稀HCL溶液调pH 至7. 0 7. 5，加枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶混合双酶，45°C水浴条件下酶解，酶解液煮沸 10min，10000r/min离心lOmin，取上清液，加(w/v)活性炭(预先在65°C下活化浊)，不断搅拌吸附30min，硅藻土助滤，除去活性炭及其吸附的蛋白质、色素等杂质，得清液，醇沉， 得粗糖胺聚糖，配成3%糖液，用HCI调pH至2. 0，离心除去沉淀，再用NaOH调pH至7. 0，离心除去沉淀，清液注入透析袋，于30倍蒸馏水中，透析4 (每他换一次蒸馏水)，透析结束后，收集透析液，加入乙醇一乙酸钠试剂(乙醇与5%乙酸钠混合，醇量80%，v/v)，使醇量达60% (ν/ν)，于4°C下静置Mh，移去上清液，离心回收多糖，将多糖溶于蒸馏水，配成1 % 糖液，加入3倍体积的5% CTAB，40°C下沉淀l_2h，12000r/min离心15min，收集沉淀，40°C下将沉淀溶于4mol/LKCI溶液，使GAG-CTAB络合物解离，过滤得解离液，加入乙醇，使醇量达60%，lOOOOr/min，离心15min收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水，透析48h，透析液加入乙醇一乙酸钠试剂，使醇量达60%，回收多糖，将沉淀物冷冻干燥即制得四角蛤蜊糖胺聚糖。本发明提取的四角蛤蜊糖胺聚糖质量纯度高达95%以上。
权利要求
1. 一种四角蛤蜊糖胺聚糖的提取制备方法，其特征在于将四角蛤蜊软体部分称重，加水制成勻浆液，水料比为3 1，在勻浆液中加入枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶酶解，枯草杆菌中性蛋白酶与胰蛋白酶比例为4 3，复合酶添加量为1%，酶解时间为3- ，将酶解液煮沸，离心，清液加活性炭脱色，真空抽滤，硅藻土助滤，得清液，醇沉，得粗糖胺聚糖，得率达1. 3%以上，配成3%糖液，离心除去酸性、中性蛋白质，上清液经透析后醇沉，配制1 %糖液，加入5% CTAB，离心，将沉淀溶于KCI溶液中，得解离液，再醇沉，透析，醇沉获得高纯度糖胺聚糖。
全文摘要
本发明提供一种四角蛤蜊糖胺聚糖的提取制备方法，其特征在于将四角蛤蜊软体部分称重，加水制成匀浆液，水料比为3∶1，在匀浆液中加入枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶酶解，枯草杆菌中性蛋白酶与胰蛋白酶比例为4∶3，复合酶添加量为1％，酶解时间为3-5h，将酶解液煮沸离心得清液，加活性炭脱色，真空抽滤，硅藻土助滤，醇沉得粗糖胺聚糖，得率达1.3％以上，配制3％糖液，离心除去酸性、中性蛋白质，上清液经透析后醇沉，配制1％糖液，加入5％CTAB，离心，将沉淀溶于KCI溶液中，得解离液，再醇沉，透析，醇沉获得高纯度糖胺聚糖。该方法反应条件温和、得率及纯度高，在提取糖胺聚糖的同时还可大量回收蛋白质，提取的物质对于清除自由基、抗氧化性及抗凝血具有重要作用，粗糖胺聚糖得率达1.3％以上，糖胺聚糖纯度达95％以上。
文档编号C08B37/00GK102372788SQ20101026145
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月25日 优先权日2010年8月25日
发明者孙晓鹏, 崔青曼, 袁春营 申请人:天津科技大学