本发明属于中药有效成分的提取方法，具体涉及从构树叶中提取芹菜素葡萄糖醛酸苷的方法。
背景技术：
构树为桑科植物，全年均可采叶，鲜用或晒干。味淡；性凉；有清热解毒；祛风止痒；敛疮止血之功能。主治痢疾；神经性皮炎；疥癣；疖肿；刀伤出血。从20世纪80年代开始，人们即开始对构树的化学和药理进行研究，从构树的整株植物中分离得到了多个黄酮类化合物。其中芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的分子式为C21H18O11，结构式为：
芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷可以抑制血栓形成、预防老年痴呆，对于治疗冠心病和心肌梗塞也有好的疗效，如果能够简单方便的从构树叶中提取纯度高的芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷，这对于医药行业大有益处。在专利文献201310179358.0中，也公开了从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，但是与本发明采用的技术方案不同，在该专利文献中采用的是超滤膜过滤，以及用高速逆流色谱纯化。
技术实现要素：
本发明需要解决的技术问题是提供一种简单、方便、纯度高的从构树叶中制备芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法。
本发明所采用的技术方案是：
一种从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，包括以下步骤：
A、提取：称取构树叶，向构树叶中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，在40-60℃条件下减压浓缩得到浓缩液Ⅰ；
B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入3-6倍量去离子水，4-10℃冷藏，离心过滤，滤液备用；
C、大孔吸附树脂纯化：将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂纯化，然后减压浓缩得到浓缩液Ⅱ；
D、聚酰胺树脂纯化：将步骤C所得浓缩液Ⅱ经聚酰胺树脂纯化，然后减压浓缩得到浓缩液Ⅲ；
E、酸沉：将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值，放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用酸水洗涤；
F、工业制备色谱纯化：将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40-70%甲醇溶解，用工业制备色谱纯化，然后按照色谱峰收集目标化合物，然后减压浓缩、冷冻干燥即得。
所述大孔吸附树脂为HZ816大孔吸附树脂；所述聚酰胺为30-40目。
所述大孔吸附树脂纯化步骤如下：按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5-4.0条件下，将滤液上样，上样药液生药浓度为0.17g/ml，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4-6BV/h，洗脱用量为4-6BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6-8BV/h，洗脱用量为6-8BV，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2-0.5g/ml浓缩液Ⅱ。
所述聚酰胺树脂纯化步骤如下：聚酰胺树脂与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1h，先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脱，再用10-12BV20%乙醇以流速4-6BV/h洗脱，除去杂质，然后再用14-16BV的80%乙醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到浓度为3.0-4.0g/ml浓缩液Ⅲ。
所述酸沉步骤中PH值为2.0-2.5，在4-10℃放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用PH为2.0-2.5酸水洗涤3次。
所述高压制备色谱纯化步骤如下：高压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化1次，流动相为45:55的甲醇：1‰甲酸，流速50ml/min，按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。
作为优选，从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法包括以下步骤：
A、提取：称取构树叶，向构树叶中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.8-1.2g/ml的浓缩液Ⅰ；
B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入3-6倍量去离子水，4-10℃冷藏，离心过滤，调节滤液生药浓度为0.17g/ml；
C、大孔吸附树脂纯化：将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5-4.0条件下，将滤液上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4-6BV/h，洗脱用量为4-6BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6-8BV/h，洗脱用量为6-8BV，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2-0.5g/ml浓缩液Ⅱ；
D、聚酰胺树脂纯化：选用30-40目聚酰胺树脂，聚酰胺树脂与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1h，先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脱，再用10-12BV20%乙醇以流速4-6BV/h洗脱，除去杂质，然后再用14-16BV的80%乙醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为3.0-4.0g/ml浓缩液Ⅲ；
E、酸沉：将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.0-2.5，在4-10℃放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用PH为2.0-2.5酸水洗涤3次；
F、工业制备色谱纯化：将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40-70%甲醇溶解，用工业制备色谱纯化，工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化1次，流动相为45:55的甲醇：1‰甲酸，流速50ml/min，按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。
该方法还优选为
A、提取：称取构树叶，向构树叶中加13倍量60%乙醇浸泡1小时，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为1g/ml的浓缩液Ⅰ；
B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入5倍量去离子水，4-10℃冷藏24小时，离心过滤，调节滤液生药浓度为0.17g/ml；
C、大孔吸附树脂纯化：将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5-4.0条件下，将滤液上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4BV/h，洗脱用量为6BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6BV/h，洗脱用量为8BV，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2g/ml浓缩液Ⅱ；
D、聚酰胺树脂纯化：选用30-40目聚酰胺树脂，聚酰胺树脂与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和1h，先用16BV水以流速4BV/h洗脱，再用12BV20%乙醇以流速4BV/h洗脱，除去杂质，然后再用16BV的80%乙醇以流速6BV/h洗脱，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为4.0g/ml浓缩液Ⅲ；
E、酸沉：将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.0-2.5，在4-10℃放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用PH为2.0-2.5酸水洗涤3次；
F、工业制备色谱纯化：将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40-70%甲醇溶解，用工业制备色谱纯化，工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化1次，流动相为45:55的甲醇：1‰甲酸，流速50ml/min，按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。
通常将树脂装于圆筒形的树脂柱中，溶液连续地通过，树脂柱内装载树脂的体积称为床容积(bedvolume)，简写为BV，这是树脂柱的基本单位，它工作时的各种物料量都以BV为单位。例如溶液通过树脂柱的流量速度为2～4BV/h，即每小时通过溶液的体积为树脂床容积的2～4倍。树脂的处理能力亦常以BV为单位计算。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
本发明采用的制备方法，操作简单，与现有技术相比，本申请除了提取过滤、聚酰胺树脂纯化外，还有大孔吸附树脂纯化和酸沉这些步骤，通过这些步骤，能进一步洗去杂质，得到的目标物纯度高均在90%以上，经过这些一系列步骤，产品的收率也很高，达到80%以上，与现有技术相比，本发明用的是工业制备色谱，采用动态轴向压缩柱，不用于高速逆流色谱，所采用的色谱条件、流动相均不同，同时本发明避免使用氯仿等毒性大并对人体及环境危害较大的试剂，更有利于环保及工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明：
实施例1
从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法包括以下步骤：
A、提取：称取构树叶5kg，向构树叶中加13倍量60%乙醇浸泡1小时，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为1g/ml的浓缩液Ⅰ；
B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入5倍量去离子水，4℃冷藏24小时，离心过滤，调节滤液生药浓度为0.17g/ml；
C、大孔吸附树脂纯化：将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化，按照树脂与构树叶生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5条件下，将滤液上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3.5的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4BV/h，洗脱用量为6BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6BV/h，洗脱用量为8BV，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2g/ml浓缩液Ⅱ；
D、聚酰胺树脂纯化：选用30目聚酰胺树脂，聚酰胺树脂与生药质量比为1：6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和1h，先用16BV水以流速4BV/h洗脱，再用12BV20%乙醇以流速4BV/h洗脱，除去杂质，然后再用16BV的80%乙醇以流速6BV/h洗脱，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为4.0g/ml浓缩液Ⅲ；
E、酸沉：将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.5，在7℃放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用PH为2.0酸水洗涤3次；
F、工业制备色谱纯化：将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用60%甲醇溶解，用工业制备色谱纯化，工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化1次，流动相为45:55的甲醇：1‰甲酸，流速50ml/min，按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷16.9g。得到收率为83.6%，纯度为95.3%。
实施例2
从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法包括以下步骤：
A、提取：称取构树叶5kg，向构树叶中加10倍量40%乙醇浸泡3小时，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，在40℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.8g/ml的浓缩液Ⅰ；
B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入3倍量去离子水，10℃冷藏，离心过滤，调节滤液生药浓度为0.17g/ml；
C、大孔吸附树脂纯化：将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH4.0条件下，将滤液上样，上样流速为4BV/h，上样后饱和1小时；再用PH4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4BV/h，洗脱用量为4BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速8BV/h，洗脱用量为6BV，收集洗脱液，在40℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.5g/ml浓缩液Ⅱ；
D、聚酰胺树脂纯化：选用30-40目聚酰胺树脂，聚酰胺树脂与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为4BV/h，上样后饱和1h，先用14BV水以流速6BV/h洗脱，再用10BV20%乙醇以流速6BV/h洗脱，除去杂质，然后再用14BV的80%乙醇以流速8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40℃条件下减压浓缩得到生药浓度为3.0g/ml浓缩液Ⅲ；
E、酸沉：将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.0，在10℃放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用PH为2.0酸水洗涤3次；
F、工业制备色谱纯化：将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40%甲醇溶解，用工业制备色谱纯化，工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化1次，流动相为45:55的甲醇：1‰甲酸，流速50ml/min，按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷17.7g，得到收率为89.4%，纯度为98.5%。
实施例3
从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法包括以下步骤：
A、提取：称取构树叶5kg，向构树叶中加15倍量70%乙醇浸泡2小时，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，在50℃条件下减压浓缩得到生药浓度为1.2g/ml的浓缩液Ⅰ；
B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入6倍量去离子水，8℃冷藏，离心过滤，调节滤液生药浓度为0.17g/ml；
C、大孔吸附树脂纯化：将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5条件下，将滤液上样，上样流速为3BV/h，上样后饱和1小时；再用PH4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为5BV/h，洗脱用量为5BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速7BV/h，洗脱用量为7BV，收集洗脱液，在50℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.4g/ml浓缩液Ⅱ；
D、聚酰胺树脂纯化：选用40目聚酰胺树脂，聚酰胺树脂与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为3BV/h，上样后饱和1h，先用15BV水以流速5BV/h洗脱，再用11BV20%乙醇以流速5BV/h洗脱，除去杂质，然后再用15BV的80%乙醇以流速7BV/h洗脱，收集洗脱液，在50℃条件下减压浓缩得到生药浓度为3.5g/ml浓缩液Ⅲ；
E、酸沉：将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.0，在4℃放置24小时，过滤，将过滤后所得沉淀用PH为2.0酸水洗涤3次；
F、工业制备色谱纯化（采用动态轴向压缩柱）：将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用70%甲醇溶解，用工业制备色谱纯化，工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化1次，流动相为甲醇-1‰甲酸，其比例为45:55，流速50ml/min，按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷17.1g。得到收率为84.5%，纯度为97.5%。