一种从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法与流程

文档序号:14685720发布日期:2018-06-14 20:51阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种从构树叶中提取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法,其特征在于包括以下步骤:

A、提取:称取构树叶,向构树叶中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时,回流提取三次,每次2小时,合并提取液,在40-60℃条件下减压浓缩得到浓缩液Ⅰ;

B、水沉:向浓缩液Ⅰ中加入3-6倍量去离子水,4-10℃冷藏,离心过滤,滤液备用;

C、大孔吸附树脂纯化:将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂纯化,然后减压浓缩得到浓缩液Ⅱ;

D、聚酰胺树脂纯化:将步骤C所得浓缩液Ⅱ经聚酰胺树脂纯化,然后减压浓缩得到浓缩液Ⅲ;

E、酸沉:将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值,放置24小时,过滤,将过滤后所得沉淀用酸水洗涤;

F、工业制备色谱纯化:将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40-70%甲醇溶解,用工业制备色谱纯化,然后按照色谱峰收集目标化合物,然后减压浓缩、冷冻干燥即得。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述大孔吸附树脂为HZ816大孔吸附树脂;所述聚酰胺树脂为30-40目。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述大孔吸附树脂纯化步骤如下:按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂,湿树脂装柱,在PH3.5-4.0条件下,将滤液上样,上样流速为2-4BV/h,上样后饱和1小时;再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质,洗脱流速为4-6BV/h,洗脱用量为4-6BV;再用60%乙醇洗脱,洗脱流速6-8BV/h,洗脱用量为6-8BV,收集洗脱液,在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2-0.5g/ml浓缩液Ⅱ。

4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述聚酰胺树脂纯化步骤如下:聚酰胺树脂与生药质量比为1:6,将浓缩液Ⅱ上样,上样流速为2-4BV/h,上样后饱和1h,先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脱,再用10-12BV20%乙醇以流速4-6BV/h洗脱,除去杂质,然后再用14-16BV的80%乙醇以流速6-8BV/h洗脱,收集洗脱液,在40-60℃条件下减压浓缩得到浓度为3.0-4.0g/ml浓缩液Ⅲ。

5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述酸沉步骤中PH值为2.0-2.5,在4-10℃放置24小时,过滤,将过滤后所得沉淀用PH为2.0-2.5酸水洗涤3次。

6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述工业制备色谱纯化步骤如下:工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3,纯化1次,流动相为45:55的甲醇:1‰甲酸,流速50ml/min,按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液,然后减压浓缩,冷冻干燥,即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。

7.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:

A、提取:称取构树叶,向构树叶中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时,回流提取三次,每次2小时,合并提取液,在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.8-1.2g/ml的浓缩液Ⅰ;

B、水沉:向浓缩液Ⅰ中加入3-6倍量去离子水,4-10℃冷藏,离心过滤,调节滤液生药浓度为0.17g/ml;

C、大孔吸附树脂纯化:将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化,按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂,湿树脂装柱,在PH3.5-4.0条件下,将滤液上样,上样流速为2-4BV/h,上样后饱和1小时;再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质,洗脱流速为4-6BV/h,洗脱用量为4-6BV;再用60%乙醇洗脱,洗脱流速6-8BV/h,洗脱用量为6-8BV,收集洗脱液,在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2-0.5g/ml浓缩液Ⅱ;

D、聚酰胺树脂纯化:选用30-40目聚酰胺树脂,聚酰胺树脂与生药质量比为1:6,将浓缩液Ⅱ上样,上样流速为2-4BV/h,上样后饱和1h,先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脱,再用10-12BV20%乙醇以流速4-6BV/h洗脱,除去杂质,然后再用14-16BV的80%乙醇以流速6-8BV/h洗脱,收集洗脱液,在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为3.0-4.0g/ml浓缩液Ⅲ;

E、酸沉:将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.0-2.5,在4-10℃放置24小时,过滤,将过滤后所得沉淀用PH为2.0-2.5酸水洗涤3次;

F、工业制备色谱纯化:将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40-70%甲醇溶解,用工业制备色谱纯化,工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3,纯化1次,流动相为45:55的甲醇:1‰甲酸,流速50ml/min,按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液,然后减压浓缩,冷冻干燥,即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。

8.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于包括以下步骤:

A、提取:称取构树叶,向构树叶中加13倍量60%乙醇浸泡1小时,回流提取三次,每次2小时,合并提取液,在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为1g/ml的浓缩液Ⅰ;

B、水沉:向浓缩液Ⅰ中加入5倍量去离子水,4-10℃冷藏24小时,离心过滤,调节滤液生药浓度为0.17g/ml;

C、大孔吸附树脂纯化:将B步骤中所得滤液经过HZ816大孔吸附树脂纯化,按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取大孔吸附树脂,湿树脂装柱,在PH3.5-4.0条件下,将滤液上样,上样流速为2BV/h,上样后饱和1小时;再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质,洗脱流速为4BV/h,洗脱用量为6BV;再用60%乙醇洗脱,洗脱流速6BV/h,洗脱用量为8BV,收集洗脱液,在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.2g/ml浓缩液Ⅱ;

D、聚酰胺树脂纯化:选用30-40目聚酰胺树脂,聚酰胺树脂与生药质量比为1:6,将浓缩液Ⅱ上样,上样流速为2BV/h,上样后饱和1h,先用16BV水以流速4BV/h洗脱,再用12BV20%乙醇以流速4BV/h洗脱,除去杂质,然后再用16BV的80%乙醇以流速6BV/h洗脱,收集洗脱液,在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为4.0g/ml浓缩液Ⅲ;

E、酸沉:将步骤D所得浓缩液Ⅲ用盐酸调PH值为2.0-2.5,在4-10℃放置24小时,过滤,将过滤后所得沉淀用PH为2.0-2.5酸水洗涤3次;

F、工业制备色谱纯化:将步骤E用酸水洗涤过的沉淀用40-70%甲醇溶解,用工业制备色谱纯化,工业制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3,纯化1次,流动相为45:55的甲醇:1‰甲酸,流速50ml/min,按照色谱峰收集芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液,然后减压浓缩,冷冻干燥,即得芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。

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