本发明涉及能高灵敏度地测定进行从刃天青至试卤灵的还原而产生的荧光强度或吸光度的荧光或者吸光度的检测方法、背景抑制方法、ADP的测定方法、简便并且高灵敏度地测定激酶等ADP生成酶或者糖基转移酶的活性的方法、使用所述方法的糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的活性调节剂的筛选方法、以及用于所述方法的测定试剂盒。本申请主张基于2013年11月21日在日本提出的专利申请特愿2013-240926号的优先权，在此援用其内容。
背景技术：
：糖基转移酶是催化从含有糖基的供体(G)向受体(A)转移糖基而产生G-A的反应的酶的总称(非专利文献1)。在动物中，9种糖核苷酸(GDP-岩藻糖、GDP-甘露糖、UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、UDP-葡萄糖醛酸、UDP-木糖、UDP-N-乙酰氨基葡萄糖、UDP-N-乙酰氨基半乳糖、CMP-唾液酸)为主要的供体分子(非专利文献2)。使糖基从这些供体分子转移的糖基转移酶分别称作岩藻糖基转移酶、甘露糖基转移酶、葡萄糖基转移酶、半乳糖基转移酶、葡萄糖醛酸基转移酶、木糖基转移酶、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶、N-乙酰氨基半乳糖基转移酶、唾液酸转移酶。GDP是鸟苷5’-二磷酸的略称，UDP是尿苷5’-二磷酸的略称，CMP是胞苷5’-单磷酸的略称。作为受体分子，可举例单糖、寡糖、蛋白质、脂质、糖蛋白质、糖脂质等。已知在生物分子的功能表达中，糖链发挥重要的作用，已明确糖基转移酶的活性异常与癌症、传染病、免疫疾病、炎症、神经疾病等疾病相关(非专利文献3)。因此，期待糖基转移酶的活性调节剂(抑制剂或活性化剂)成为所述疾病的新的治疗药物。对于探索糖基转移酶的活性调节剂而言，必须测定糖基转移酶的活性。作为测定糖基转移酶的活性的方法，以往，采用使用放射性标识、荧光标识的糖分子进行分析的方法、使用非标识糖分子在反应后通过LC-MS(液相色谱-质谱分析机)等仪器分析进行分离定量的方法等(非专利文献4)。但是，上述方法需要标识糖供体的化学合成，测定需要特殊的装置(液体闪烁器、LC-MS)，并且难以进行简单的分析，尤其是难以使用微孔板进行大量的数量分析(高通量筛选)。另外，在费用上是耗费成本的方法。另一方面，已知有使用市售的分析试剂盒(贝尔布鲁克实验室(BellbrookLabs)公司制造的Transcreener(注册商标)GDPAssay、UDP2Assay、AMP2/GMP2Assay)通过荧光偏光法对通过糖基转移酶反应生成的核苷酸进行定量的方法、通过酶偶联反应获得NADH的吸光度进行测定的方法(非专利文献5、6)、或者使磷酸游离而通过孔雀绿的发色进行定量的方法(非专利文献7)，但是检测灵敏度都较低。另外，还已知有通过酶偶联诱导荧光素酶的化学发光进行测定的方法(专利文献1)，但是操作繁杂，灵敏度不明确。另外，最近，报告了使用荧光偏光法对通过荧光标识的糖的转移进行高速的分析的方法(非专利文献8)，但只能使用于高分子性的底物，并非能应用于所有的糖基转移酶。如此地，现有的方法难以使用微孔板简便且高灵敏度地分析所有的糖基转移酶，难以进行糖基转移酶活性调节剂的高通量筛选。另一方面，激酶是将ATP(腺苷5’-三磷酸)等核苷三磷酸的末端磷酸基转移至除水以外的化合物，催化生成磷酸化合物的反应的酶的总称，被分类为EC2.7组的磷酸转移酶(非专利文献9)。作为被磷酸化的底物分子，可举例糖、有机酸、脂质、蛋白质等。激酶是与生物体内的信号传达有关的重要的酶分子。已知在某种癌细胞中，激酶活性亢进，激酶的抑制剂作为所谓的分子靶向药物被用于癌症的治疗。另外，已知激酶与炎症、免疫反应、糖尿病等也有关。因此，激酶是针对癌症、炎症、自身免疫疾病、糖尿病等疾病的治疗药物开发的合适的靶分子，正在广泛进行其新抑制剂的探索研究(非专利文献10)。在对激酶活性调节剂(抑制剂或者活性化剂)的探索中，必须测定激酶的活性。作为激酶活性的测定方法，作为主要的方法可举例对被磷酸化的生成物进行定量的方法、测定ATP的减少量的方法、对从ATP生成的ADP(腺苷5’-二磷酸)进行定量的方法。作为对被磷酸化的生成物进行定量的方法，可举例通过放射能计数测定从放射性ATP生成的放射性生成物的方法、通过薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)对被磷酸化的生成物进行定量的方法、用抗体检测被磷酸化的生成物并通过时间分解荧光法等进行分光学定量的方法(例如，卡纳生物科学(CarnaBiosciences)公司制造的QSSAssist(商标)TR-FRET分析试剂盒)等。作为测定ATP的减少量的方法，可举例使用荧光素酶通过化学发光对激酶反应液中的残存ATP量进行定量的方法(例如，东洋比网公司(東洋ビーネット社)制造的《细胞的》ATP测定试剂(『細胞の』ATP測定試薬，商标))。作为对从ATP生成的ADP进行定量的方法，可举例：1)再变换为ATP与荧光素酶反应，通过化学发光进行定量的方法(例如，普洛麦格(Promega)公司制造的ADP-Glo(商标)激酶分析(KinaseAssay))；2)使用抗ADP抗体通过时间分解荧光法或荧光偏光法进行分光学定量的方法(例如，贝尔布鲁克实验室(BellBrookLabs)公司制造的Transcreener(注册商标)ADPTR-FRETAssay、Transcreener(注册商标)ADPAssay)；3)使磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸激酶、丙酮酸氧化酶作用于ADP，进一步使10-乙酰基-3,7-二羟基吩恶嗪和过氧化物酶作用于生成的过氧化氢，进行荧光测定的方法(例如，DiscoveRx公司制造的ADPHunter(商标)HSAssay)；4)使葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(以下，称为G-6-P脱氢酶)作用于ADP，生成NADPH(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)，通过NADPH的吸光度或荧光进行定量的方法(专利文献2～3)；5)使葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、NADP、心肌黄酶、刃天青作用于ADP，通过生成的试卤灵的荧光进行定量的方法(专利文献4)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2005-46029号公报；专利文献2：日本特开平9-234098号公报；专利文献3：日本特开2011-103825号公报；专利文献4：美国专利第7338775号公报说明书。非专利文献非专利文献1：《生化学辞典》，第4版，p.931，東京化学同人，2007年(《生物化学辞典》，第4版，p.931，东京化学同人，2007年)；非专利文献2：EssentialsofGlycobiology、2ndedition，PartI，Chapter4，ColdSpringHarborLaboratoryPress，2009年(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1929/)；非专利文献3：《きちんとわかる糖鎖工学》，産業技術総合研究所，白日社，2008年(《明确了解糖链工学》，产业技术综合研究所，白日社，2008年)；非专利文献4：ChemBioChem，Vol.11，No.14，pp.1939-1949，2010年；非专利文献5：Anal.Biochem.，Vol.102，No.2，pp.441-449，1980年；非专利文献6：Anal.Biochem.、Vol.220，No.1，pp.441-449，1994年；非专利文献7：Glycobiology，Vol.21，No.6，pp.727-733，2011年；非专利文献8：Angew.Chem.Int.Ed.Vol.50，No.52，pp.12534-12537，2011年；非专利文献9：《生化学辞典》，第4版，p.340，東京化学同人，2007年(《生物化学辞典》，第4版，p.340，东京化学同人，2007年)；非专利文献10：《分子標的薬開発への新たなる挑戦有力な分子標的薬の創薬物語と新薬開発動向から次世代創薬テクノロジーまで》，岡野栄之、岩坪威、佐谷秀行編，実験医学増刊，Vol.27，No.5，羊土社，2009年(《向分子靶向药物开发的新挑战从有力的分子靶向药物的药物开发故事与新药开发动向至下一代药物开发技术》，冈野荣之，岩坪威，佐谷秀行编，实验医学增刊，Vol.27，No.5，羊土社，2009年)。技术实现要素：发明要解决的课题如此地，作为测定激酶的活性的方法，已知各种方法，但由于操作繁杂，须要特别的装置、设施，试剂价格高昂，灵敏度不足等理由，在用于分析大量的筛选样品的高通量筛选时存在难点。另外，所述4)的使用葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶通过酶偶联将ADP生成NADPH，通过NADPH的吸光度或者荧光度进行定量的方法，不仅检测灵敏度低，而且来自筛选样品化合物的340nm波长附近的紫外、可见区域吸收、自身荧光影响测定值，因此存在不能进行正确的测定的问题。另外，在所述5)的使葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、NADP、心肌黄酶、刃天青作用于ADP，通过生成物试卤灵的荧光进行测定的方法的情况下，如果在反应液中含有二硫苏糖醇(DTT)等还原剂，则进行从刃天青至试卤灵的还原，荧光的背景上升，因此存在不能进行正确的测定的问题。为了抑制化合物的非特异性吸附、作为酶等试剂的稳定化剂等，将还原剂加入至反应体系的情况并不少。本发明是基于上述问题而完成的，提供能高灵敏度地测定进行从刃天青至试卤灵的还原而产生的荧光强度或吸光度的荧光或者吸光度的检测方法、背景抑制方法、ADP的测定方法、生成ADP的酶的活性测定方法、能简便并且高灵敏度地测定靶酶的活性的糖基转移酶的活性测定方法、ADP的测试用试剂盒、生成ADP的酶的活性测定试剂盒、以及糖基转移酶活性测定试剂盒。解决课题的方法本发明人等对高灵敏度地测定进行从刃天青至试卤灵的还原而产生的荧光强度或者吸光度的方法进行了各种研究，其结果是发现，在SH试剂以及NADH或者NADPH的存在下，能够高灵敏度地测定通过心肌黄酶(NAD(P)H脱氢酶)将刃天青还原至试卤灵而产生的荧光强度或者吸光度。另外，本发明人等对简便并且高灵敏度地测定糖基转移酶的活性的方法进行了各种研究，其结果是发现，在ATP的存在下，使通过糖基转移酶生成的GDP、UDP、或者CMP与NDP激酶(核苷5’-二磷酸激酶)或者CMP激酶(胞嘧啶5’-单磷酸激酶)反应，从而生成ADP，通过对所述ADP进行使用葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氧酶(G-6-P脱氢酶)、心肌黄酶、NADP、以及刃天青的酶偶联，能够简便、高灵敏度、且定量地在微孔板上通过荧光对几乎全部的糖基转移酶的活性进行定量；在通过该酶偶联对ADP进行荧光定量的方法中，如果反应液中存在DTT等还原剂，则荧光发色的背景变高，ADP的正确定量变得困难，但是酶偶联反应的反应液中，如果共存有SH试剂，则背景下降，另一方面，对ADP的酶偶联反应本身没有影响，因此能高精度地测定ADP；该SH试剂存在下的ADP荧光定量法可以用于广泛的激酶的活性定量。本发明是基于上述发现，进行了进一步的反复研究，作为荧光或吸光度的检测方法、糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的简便并且高灵敏度的活性方法而完成的。也即，本发明提供具有下述特征的荧光或吸光度的检测方法、背景抑制方法、ADP的测定方法、生成ADP的酶的活性测定方法、糖基转移酶的活性测定方法、ADP的测定用试剂盒、生成ADP的酶的活性测定试剂盒、糖基转移酶的活性测定试剂盒。(1)一种荧光或者吸光度的检测方法，其特征在于，在SH试剂以及NADH的存在下或者在SH试剂以及NADPH的存在下，通过心肌黄酶将刃天青还原为试卤灵，测定产生的荧光强度或者吸光度。(2)如上述(1)所述的荧光或者吸光度的检测方法，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1表示氢原子、羟基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷氧基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基、或者具有取代基或不具有取代基的碳原子数为6～10的芳基；R2表示氢原子、羟基、卤原子、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷氧基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基、或者具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基；n表示R2的数量，为0或者1。(3)一种背景抑制方法，其特征在于，在还原剂的共存下，在测定使NADH、刃天青、以及心肌黄酶反应而产生的荧光强度或者吸光度时或者在测定使NADPH、刃天青、以及心肌黄酶反应而产生的荧光强度或者吸光度时，在SH试剂的存在下进行前述反应。(4)如上述(3)所述的背景抑制方法，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(5)一种ADP的测定方法，其特征在于，其具有：第2-1工序，该工序使ADP以及ADP依赖性己糖激酶作用于葡萄糖，生成葡萄糖-6-磷酸；第2-2工序，该工序使NAD和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶或者NADP和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于通过前述第2-1工序得到的葡萄糖-6-磷酸，生成NADH或者NADPH；以及，第2-3工序，该工序在SH试剂存在下，使通过前述第2-2工序得到的NADH或者NADPH、以及心肌黄酶作用于刃天青，测定产生的荧光强度或者吸光度。(6)如上述(5)所述的ADP的测定方法，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(7)如上述(5)或(6)所述的ADP的测定方法，其中，用所述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物是N-乙基马来酰亚胺、马来酰亚胺、或者N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺。(8)一种生成ADP的酶的活性测定方法，其特征在于，其具有：第1-1工序，该工序在ATP的存在下，使生成ADP的酶作用于底物，使ATP变换为ADP；第2-1工序，该工序使通过前述第1-1工序得到的ADP以及ADP依赖性己糖激酶作用于葡萄糖，生成葡萄糖-6-磷酸；第2-2工序，该工序使NAD和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶或者NADP和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于通过前述第2-1工序得到的葡萄糖-6-磷酸，生成NADH或者NADPH；以及，第2-3工序，该工序在SH试剂的存在下，使通过前述第2-2工序得到的NADH或者NADPH、以及心肌黄酶作用于刃天青，测定生成的荧光强度或者吸光度。(9)如上述(8)所述的生成ADP的酶的活性测定方法，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(10)如上述(8)或(9)所述的生成ADP的酶的活性测定方法，其中，用所述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物是N-乙基马来酰亚胺、马来酰亚胺、或者N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺。(11)如上述(8)～(10)中任一项所述的生成ADP的酶的活性测定方法，其中，所述生成ADP的酶是从由激酶、ATP酶、固氮酶、四氢叶酸合成酶、乙酰-CoA羧化酶、丙酮酸羧化酶、谷胱甘肽合成酶所组成的组中选出的至少一种。(12)一种糖基转移酶的活性测定方法，其特征在于，其具有：第1工序，该工序在ATP存在下使通过糖基转移酶反应生成的GDP或者UDP与NDP激酶反应，或者在ATP存在下，使通过糖基转移酶反应生成的CMP与NMP激酶或者CMP激酶反应，从而生成与GDP、UDP、或者CMP的量相应的ADP；第2-1工序，该工序使通过前述第1工序得到的ADP、以及ADP依赖性己糖激酶作用于葡萄糖，生成葡萄糖-6-磷酸；第2-2工序，该工序使NAD和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶或者NADP和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于通过前述第2-1工序得到的葡萄糖-6-磷酸，生成NADH或者NADPH；以及，第2-3工序，该工序在SH试剂的存在下，使通过前述第2-2工序得到的NADH或者NADPH、以及心肌黄酶作用，测定产生的荧光强度或者吸光度。(13)如上述(12)所述的糖基转移酶的活性测定方法，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(14)如上述(12)或(13)所述的糖基转移酶的活性测定方法，其中，用所述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物是N-乙基马来酰亚胺、马来酰亚胺、或者N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺。(15)如上述(12)～(14)中任一项所述的糖基转移酶的活性测定方法，其中，所述糖基转移酶是从由岩藻糖基转移酶、甘露糖基转移酶、葡萄糖基转移酶、半乳糖基转移酶、葡萄糖醛酸基转移酶、木糖基转移酶、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶、N-乙酰氨基半乳糖基转移酶、以及唾液酸转移酶所组成的组中选出的至少一种。(16)一种ADP的测定用试剂盒，其特征在于，其含有：葡萄糖；ADP依赖性己糖激酶；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；心肌黄酶；NAD以及/或者NADP；刃天青；以及SH试剂。(17)如上述(16)所述的ADP的测定用试剂盒，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(18)如上述(16)或(17)所述的ADP的测定用试剂盒，其中，用所述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物是N-乙基马来酰亚胺、马来酰亚胺或者N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺。(19)一种生成ADP的酶的活性测定试剂盒，其特征在于，其含有：葡萄糖；ADP依赖性己糖激酶；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；心肌黄酶；NAD以及/或者NADP；刃天青；以及SH试剂。(20)如上述(19)所述的生成ADP的酶的活性测定试剂盒，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(21)如上述(20)所述的生成ADP的酶的活性测定试剂盒，其中，用所述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物是N-乙基马来酰亚胺、马来酰亚胺或者N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺。(22)一种糖基转移酶的活性测定试剂盒，其特征在于，其包含：第1液，该第1液含有ATP以及NMP激酶、NDP激酶或者CMP激酶，以及，第2液，该第2液含有葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NAD以及/或者NADP、刃天青、以及SH试剂。(23)如上述(22)所述的糖基转移酶的活性测定试剂盒，其中，所述第1液还含有还原剂。(24)如上述(22)或者(23)所述的糖基转移酶的活性测定试剂盒，其中，所述SH试剂是用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1、R2、以及n表示与上述相同的含义。(25)如上述(24)所述的糖基转移酶的活性测定试剂盒，其中，用所述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物是N-乙基马来酰亚胺、马来酰亚胺或者N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺。发明的效果基于本发明，能高灵敏度地测定从刃天青至试卤灵的还原而产生的荧光强度或吸光度。基于本发明，能提供简便并且高灵敏度地测定糖基转移酶、或者激酶等ADP生成酶的活性的方法。本发明适用于使用微孔板的分析，因此，根据本发明，能够实现糖基转移酶、或者激酶等ADP生成酶的活性调节剂的高通量筛选。附图说明图1是表示本发明的方法的原理的反应路径。图2是实施例中的GDP和UDP的校准曲线。图3是实施例中的CMP的校准曲线。图4是表示实施例中的在测量GDP、UDP、CMP时的荧光发色的稳定性的图。图5是实施例中的测定岩藻糖基转移酶(人FUT7)的活性的结果。图6是实施例中的测定半乳糖基转移酶(人B4GalT1)的活性的结果。图7是实施例中的测定唾液酸转移酶(人ST6Gal1)的活性的结果。图8是实施例中的测定没食子酸(gallicacid)对人FUT7的抑制活性的结果。与使用HPLC测定的情况进行比较表示。图9是实施例中的ADP的校准曲线。对在酶偶联反应时N-乙基马来酰亚胺存在的情况和不存在的情况进行比较表示。图10是表示实施例中的在对ADP进行定量时的荧光发色的稳定性的图。图11是实施例中的含有2mM的DTT的ADP溶液的校准曲线。对在酶偶联反应液中N-乙基马来酰亚胺(NEM)存在的情况和不存在的情况进行比较表示。图12是在含有/不含有DTT的ADP的校准曲线测定中，对实施例中的在酶偶联反应液中碘乙酰胺(IAA)存在的情况和不存在的情况进行比较的结果。图13是表示实施例中的人CMP激酶1(CMPK1)的活性的DTT依赖性的结果。图14是表示实施例中的对在存在和不存在N-乙基马来酰亚胺的情况下进行酶偶联反应时测定在2mM的DTT存在下的CMPK1的酶活性进行比较的结果。图15是表示实施例中的测定人CMPK1的激酶活性的结果。图16是实施例中的Ap5A(P1、P5-二(腺苷-5')五磷酸盐)对CMPK1的活性抑制的测定结果。与使用HPLC进行测定的情况进行比较表示。图17A是用HPLC测定市售的激酶(UMP激酶：UMPK)中夹杂的ATP酶活性的结果。图17B是实施例中的测定市售的激酶(UMP激酶：UMPK)中夹杂的ATP酶活性的结果。与使用HPLC测定的结果进行比较表示。图18A是实施例中的使用市售的化合物库(ライブラリー)(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司制造的LOPAC1280(商标))对半乳糖基转移酶(人B4GalT1)抑制剂进行筛选的结果。对化合物使用10μM进行分析。对B4GalT1反应的抑制率测定结果表示于图18A。各图中横轴表示1280个化合物。图18B是实施例中的使用市售的化合物库(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司制造的LOPAC1280(商标))对半乳糖基转移酶(人B4GalT1)抑制剂进行筛选的结果。对化合物使用10μM进行分析。对本分析系统自身的抑制作用测定结果表示于图18B。各图中横轴表示1280个化合物。图18C是实施例中的使用市售的化合物库(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司制造的LOPAC1280(商标))对半乳糖基转移酶(人B4GalT1)抑制剂进行筛选的结果。对化合物使用10μM进行分析。将考虑从前者的抑制率中减去后者的抑制率的实际的B4GalT1抑制活性的抑制率表示于图18C。各图中横轴表示1280个化合物。图19A是实施例中的对在马来酰亚胺类或者碘乙酰胺存在下的ADP进行定量的结果。图19B是实施例中的对在马来酰亚胺类或者碘乙酰胺存在下的ADP进行定量的结果。图19C是实施例中的对在马来酰亚胺类或者碘乙酰胺存在下的ADP进行定量的结果。图20A是实施例中的对在还原剂DTT、2-巯基乙醇、或者TCEP存在下的ADP进行定量的结果。图20B是实施例中的对在还原剂DTT、2-巯基乙醇、或者TCEP存在下的ADP进行定量的结果。图20C是实施例中的对在还原剂DTT、2-巯基乙醇、或者TCEP存在下的ADP进行定量的结果。具体实施方式下面，对本发明的优选的实例进行说明，但本发明不受以下的实例的限制。在不脱离本发明的主旨的范围内，可以对构成部分进行添加、省略、替换以及其他变更。＜荧光或者吸光度的检测方法＞以下，参照图1对本发明的糖基转移酶的活性测定方法的优选实施方式进行说明。图1是关于本发明的荧光或者吸光度的检测方法的反应路径的一个实例，是在进行糖基转移酶的活性测定的情况下的反应路径。如图1中的作为第2-3工序所示，本发明的荧光或者吸光度的检测方法，在SH试剂以及NADH或者NADPH的存在下，通过心肌黄酶将刃天青还原至试卤灵，测定产生的荧光强度或者吸光度。荧光强度或者吸光度的测定，例如，通过得到SH试剂、NADH或者NADPH、心肌黄酶、以及刃天青的混合液(以下，称为第2-3工序用混合液)，进行酶偶联反应，由此，将NADH或者NADPH传导至试卤灵的荧光发光，对此进行荧光定量。在得到第2-3工序用混合液时，可以分别单独地添加用于为了所述测定进行的酶偶联反应的SH试剂、NADH或者NADPH、心肌黄酶、以及刃天青，也可以添加预先混合有一部分的上述物质的混合物。在第2-3工序中使用的心肌黄酶可以使用起源于动植物的心肌黄酶、起源于微生物的心肌黄酶、通过基因重组技术制备的心肌黄酶中的任一种，但优选纯化的物质。优选使用的添加后的各成分的浓度为心肌黄酶0.2～20μg/ml、NADH或者NADPH1～500μM、10～500μM、刃天青5～250μM。通常优选使用的SH试剂的浓度为1μM～100mM，优选与第2-3工序用混合液中存在的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。作为使用的缓冲液，可举例三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为7～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类；0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。第2-3工序的酶偶联反应的反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。作为在还原剂的存在下进行第2-3工序时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。优选添加1μM～5mM的还原剂。在第2-3工序用混合液中，添加SH试剂进行第2-3工序的反应。例如，如果在反应液中存在还原剂的情况下进行第2-3工序的反应，则通过还原剂的作用，进行从刃天青至试卤灵的还原，荧光的背景变高。通过在第2-3工序用混合液中添加SH试剂，可以使还原剂失活，能抑制荧光的背景的上升。SH试剂为与硫醇基反应的试剂，是用于蛋白质中的半胱氨酸残基的定量、化学改性的化合物。可举例1)5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、2,2’(4,4’)-二吡啶基二硫化物、连四硫酸、2,6-二氯酚靛酚(DCIP)、氧化型谷胱甘肽等的氧化剂、2)p-汞苯甲酸(PMB)、p-汞苯磺酸(PMBS)等硫醇盐形成剂、3)碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺(NEM)等烷基化剂(参考《生化学辞典》，第4版，p.173，東京化学同人，2007年(《生物化学辞典》，第4版，p.173，东京化学同人，2007年))。作为本发明中使用的SH试剂，只要是在中性pH区域附近、与还原剂有反应性、并且不影响在酶偶联反应中使用的酶的活性的物质即可。例如，可举例，碘乙酰胺等的α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺、N-苯基马来酰亚胺、N-(2-氯苯基)马来酰亚胺、N-(4-羧基-3-羟基苯基)马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物(马来酰亚胺化合物)、甲基乙烯基砜等烯丙基磺酸衍生物等，特别优选碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物(马来酰亚胺化合物)。作为在本发明的荧光或者吸光度的检测方法中使用的SH试剂，优选用下述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。在通式[1]中，R1表示氢原子、羟基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷氧基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基、或者具有取代基或不具有取代基的碳原子数为6～10的芳基。R2表示氢原子、羟基、卤原子、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷氧基、具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基、或者具有取代基或不具有取代基的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基。n表示R2的数量，为0或者1。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基，可举例，甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、异丁基、sec-丁基、tert-丁基、戊基、异戊基、新戊基、n-己基、异己基等。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷氧基，可举例，甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、异-丙氧基、n-丁氧基、tert-丁氧基、n-己氧基等。R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基为至少一个氢原子被独立选择的羟基取代的烷基。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基的烷基，可举例与所述R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基中示例的烷基相同的烷基。R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基为至少一个氢原子被独立选择的磺基取代的烷基。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基的烷基，可举例与所述R1以及R2的碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基中示例的烷基相同的烷基。作为R1的所述碳原子数为6～10的芳基，可举例，苯基、萘基等。R2的所述卤原子为F、Cl、Br、I等属于周期表中第17族的元素。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基，优选碳原子数为1～4，更优选碳原子数为1～3。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷氧基，优选碳原子数为1～4，更优选碳原子数为1～3。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的羟基烷基，优选碳原子数为1～4，更优选碳原子数为1～3。作为R1以及R2的所述碳原子数为1～6的直链状或者支链状的磺基烷基，优选碳原子数为1～4，更优选碳原子数为1～3。R1以及R2的烷基、烷氧基、羟基烷基、或者磺基烷基的可以具有的取代基，为取代烃基中的氢原子(H)的基团，作为取代基，可举例卤原子、羟基、氨基等。R1的芳基的可以具有取代基为取代芳基中的氢原子(H)的基团，作为取代基，可举例，碳原子数为1～6的直链状或者支链状的烷基、羧基、卤原子、羟基、氨基、硝基等。＜背景抑制方法＞以下，参考图1对本发明的背景抑制方法的优选实施方式进行说明。图1是关于本发明的反应路径的一个实例，是进行糖基转移酶的活性测定的情况下的反应路径。如图1中的作为第2-3工序所示，本发明的背景抑制方法在还原剂的共存下使NADH或者NADPH、刃天青以及心肌黄酶反应，测定通过所述反应产生的荧光强度或者吸光度时，可以在SH试剂的存在下进行所述反应。如果在还原剂存在的情况下进行第2-3工序的反应，则通过还原剂的作用进行从刃天青至试卤灵的还原，荧光的背景变高。通过预先将SH试剂添加至第2-3工序用混合液，能使还原剂失活，能抑制荧光的背景的上升。作为背景抑制的对象的反应系统，例如，可举例，在SH试剂、NADH或者NADPH、心肌黄酶、以及刃天青的混合液(以下，称为第2-3工序用混合液)中添加有还原剂的混合液。在得到第2-3工序用混合液中添加有还原剂的混合液时，可以分别单独地添加用于为了所述测定进行的酶偶联反应的SH试剂、NADH或者NADPH、心肌黄酶、以及刃天青，也可以添加预先混合有一部分的上述物质的混合物。在所述混合液中，通过进行作为第2-3工序所示的反应，在NADH或者NADPH上产生试卤灵的荧光发光。在此，由于在所述混合液中添加有SH试剂，定量所述荧光发光的时候，能抑制除了应该作为被检测对象的信号以外的背景的信号的上升。在第2-3工序中使用的心肌黄酶优选为起源于动植物的心肌黄酶、起源于微生物的心肌黄酶、通过基因重组技术制备的心肌黄酶中的任一种，但优选纯化的物质。优选使用的添加后的各成分的浓度为还原剂1μM～5mM、心肌黄酶0.2～20μg/ml、NADH或者NADPH1～500μM、10～500μM、刃天青5～250μM。通常优选使用的SH试剂的浓度为1μM～100mM，优选与第2-3工序用混合液中存在的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。作为使用的缓冲液，可举例三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为7～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。第2-3工序的酶偶联反应的反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。作为在还原剂的存在下进行第2-3工序时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。优选添加1μM～5mM的还原剂。作为本发明的背景抑制方法中使用的SH试剂，只要是在中性pH区域附近、与还原剂有反应性、并且不影响在酶偶联反应中使用的酶的活性的物质即可。例如，可举例，碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物、甲基乙烯基砜等烯丙基磺酸衍生物等，特别优选碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物。作为本发明中使用的SH试剂，优选用上述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。＜ADP的测定方法＞以下，参考图1对本发明的ADP的测定法方的优选实施方式进行说明。图1是关于本发明的ADP的测定方法的反应路径的一个实例，是进行通过糖基转移酶的酶反应而生成的ADP的测定时的反应路径。如图1中作为由第2-1工序、第2-2工序、以及第2-3工序组成的第2工序所示，本发明的ADP的测定方法，具有：使ADP以及ADP依赖性己糖激酶作用于葡萄糖，生成葡萄糖-6-磷酸的第2-1工序；使NAD或者NADP以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于通过所述第2-1工序得到的葡萄糖-6-磷酸，生成NADH或者NADPH的第2-2工序；以及，在SH试剂存在下，使通过所述第2-2工序得到的NADH或者NADPH、以及心肌黄酶作用于刃天青，测定产生的荧光强度或者吸光度的第2-3工序。ADP的测定，例如，通过得到在用于为了定量ADP而进行的酶偶联反应的葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶、NAD或者NADP、以及刃天青的混合液(以下，称为第2工序用混合液)中添加有ADP的混合液，进行酶偶联反应，从而将ADP传导至试卤灵的荧光发光，对此进行荧光定量。在得到第2工序用混合液时，可以分别单独地添加用于为了所述测定进行的酶偶联反应的葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶、NAD或者NADP、以及刃天青，也可以添加预先混合有一部分的上述物质的混合物。优选使用的添加后的各成分的浓度为葡萄糖0.1～10mM、ADP依赖性己糖激酶5～500μg/ml、G-6-P脱氢酶1～100μg/ml、心肌黄酶0.2～20μg/ml、NAD或者NADP1～500μM、10～500μM、刃天青5～250μM。通常优选使用的SH试剂的浓度为1μM～100mM，优选与第2-3工序用混合液中存在的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。作为使用的缓冲液，可举例三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为7～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。第2-3工序的酶偶联反应的反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。作为在还原剂的存在下进行第2-3工序时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。优选添加1μM～5mM的还原剂。另外，在第2工序中使用的ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶优选为起源于动植物的物质、起源于微生物的物质、通过基因重组技术制备的物质中的任一种，但优选纯化的物质。在本发明的ADP的测定方法中，向第2工序用混合液添加SH试剂，进行第2工序的反应。例如，如果在还原剂的存在下进行第2工序的酶偶联反应，则通过还原剂的作用进行从刃天青至试卤灵的还原，荧光的背景变高。通过预先将SH试剂添加至第2工序的酶偶联用混合液，能使还原剂失活，能抑制荧光的背景的上升。作为在还原剂的存在下进行本发明的ADP的测定方法时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。优选添加1μM～5mM的还原剂。作为本发明的ADP的测定方法中使用的SH试剂，只要是在中性pH区域附近、与还原剂有反应性、并且不影响在酶偶联反应中使用的酶的活性的物质即可。例如，可举例，碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物、甲基乙烯基砜等烯丙基磺酸衍生物等，特别优选碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物。作为本发明中使用的SH试剂，优选用上述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。本发明的ADP的测定方法，在ADP之外，也可以作为通过反应生成ADP的酶的广泛范围的活性测定方法使用。＜生成ADP的酶的活性测定方法＞另一方面，本发明的上述第2工序的ADP的定量方法也可以作为激酶等通过反应生成ADP的酶的广泛的活性测定法使用。即，本发明的生成ADP的酶的活性测定方法，通过在SH试剂的存在下使葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NADP、以及刃天青作用于通过生成ADP的酶反应产生的ADP，通过生成的试卤灵的荧光进行测定。本发明的生成ADP的酶的活性测定方法，如图1中作为第1-1工序、以及由第2-1工序、第2-2工序、以及第2-3工序组成的第2工序所示，其具有：在ATP的存在下，使生成ADP的酶作用于底物，使ATP变换为ADP的第1-1工序；使通过所述第1-1工序得到的ADP以及ADP依赖性己糖激酶作用于葡萄糖，生成葡萄糖-6-磷酸的第2-1工序；使NAD或者NADP以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于通过所述第2-1工序得到的葡萄糖-6-磷酸，生成NADH或者NADPH的第2-2工序；以及，在SH试剂的存在下，使通过所述第2-2工序得到的NADH或者NADPH以及心肌黄酶作用于刃天青，测定生成的荧光强度或者吸光度的第2-3工序。以下，以激酶为例对本发明的优选实施方式进行说明。作为测定对象的激酶，可以是从动植物组织、细胞提取的物质、起源于微生物的物质、通过基因重组技术制备的物质中的任一种，但优选提纯的物质。作为所述激酶，可举例，例如，蛋白激酶A、蛋白激酶C、钙调蛋白激酶、酪蛋白激酶等。在本发明中，要测定酶活性的激酶反应，是在缓冲液中混合激酶、磷酸供体分子(通常为ATP)以及磷酸受体分子(与激酶相应的底物分子)而进行。添加浓度分别为，激酶优选添加使酶反应速率为1～50％左右的浓度，磷酸供体分子(主要为ATP)优选添加10～1000μM，磷酸受体分子优选添加5～500μM。作为用于激酶反应的缓冲液，可举例，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。缓冲液浓度优选为10～200mM，pH优选为7～9。根据需要，也可将作为添加物添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～20mM的MgCl2、1～20mM的MnCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。另外，在对要测定的激酶有还原剂要求性的情况下，作为用于提高酶活性(使活性化、活化)的活性化剂(活化剂)，或者作为用于抑制筛选时的化合物的非特异性吸附的酶等试剂的稳定剂，优选添加DTT、2-巯基乙醇、或者TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)等还原剂进行反应。DTT、2-巯基乙醇、或者TCEP的添加浓度根据要测定的激酶的还原剂要求性等不同而不同，但优选在0.1～10mM的范围内。反应温度优选为20～37℃，反应时间优选为10分钟～3小时。激酶反应后的反应液中的ADP的浓度优选为在0.1～50μM的范围内，更优选为在0.5～25μM的范围内。在与此相比反应液更浓的情况下，优选稀释，使浓度落入所述范围内。添加葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶、NADP、以及刃天青使酶偶联，从而通过试卤灵的荧光来对通过激酶反应生成的ADP进行定量。能分别地添加上述物质，也可以预先混合(以下，称为酶偶联用混合液，组成与前述第2工序用混合液相同)，一次加入至激酶反应后的反应液中。向激酶反应后的反应液添加时的这些成分的最终浓度，优选以葡萄糖0.5～5mM、ADP依赖性己糖激酶5～100μg/ml、G-6-P脱氢酶0.5～10μg/ml、心肌黄酶0.2～20μg/ml、0.5～10μg/ml、NADP20～400μm、刃天青5～250μM、10～200μM来进行制备。通常优选使用的SH试剂的浓度为1μM～100mM，优选与在酶偶联用混合液中存在的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。作为用于添加的缓冲液，可使用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为7～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的MnCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。酶偶联反应的反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。作为在还原剂的存在下进行第2-3工序时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。优选添加1μM～5mM的还原剂。在多数的激酶中，对于酶活性的发挥而言，有必要添加还原剂，但如果在还原剂存在的情况下进行ADP定量的酶偶联反应，则通过还原剂的作用进行从刃天青至试卤灵的还原，荧光的背景变高。在本发明中，通过向酶偶联用混合液添加上述SH试剂，从而使还原剂失活，能够实现抑制背景的上升的测定。作为酶活性的测定中使用的SH试剂，只要是在中性pH区域附近、与还原剂有反应性、并且不影响在酶偶联反应中使用的酶的活性的物质即可。例如，可举例，碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物等。作为向酶偶联反应添加的量，优选与用于激酶反应的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。作为本发明中使用的SH试剂，优选用上述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。本发明的ADP定量法除了激酶以外，还可以用于生成ADP的酶的活性的测定。作为除了激酶以外的生成ADP的酶，可举例，ATP酶、固氮酶、四氢叶酸合成酶、乙酰-CoA羧化酶、丙酮酸羧化酶、谷胱甘肽合成酶等。作为用于糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的活性测定的容器，只要能进行反应即可，没有特别的限制，但优选微孔板。作为微孔板，有96孔、384孔、1536孔等种类，可以使用任意一种。使用微孔板，首先进行糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的反应，在糖基转移酶的情况下，向所述反应液添加第1工序用混合液，进行第1工序的反应，然后添加第2工序用混合液，进行第2工序的反应后，使用微孔板分析仪测定生成物(试卤灵)的荧光。在激酶的情况下，向激酶反应液添加酶偶联用混合液，进行反应后，用微孔板分析仪同样地测定试卤灵的荧光。优选对试卤灵进行荧光测定时的激发波长为530～570nm，荧光波长为580～610nm。在本发明的方法中，使ADP荧光发色的反应在反应温度为25℃的情况下，在30分钟基本完成，为了保持荧光值的稳定性，在之后的约2小时，荧光测定时没必要进行使反应停止的操作。＜糖基转移酶的活性测定方法＞以下，参考图1对本发明的糖基转移酶的活性测定方法的优选实施方式进行说明。图1表示本发明的糖基转移酶的活性测定方法的原理的反应路径。如图1所示，本发明的糖基转移酶的活性测定方法，其具有：在ATP存在下使通过糖基转移酶反应生成的GDP或者UDP与NDP激酶反应，或者在ATP存在下，使通过糖基转移酶反应生成的CMP与CMP激酶反应，从而生成与GDP、UDP、或者CMP的量相应的ADP的第1工序；以及，使用葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NADP、以及刃天青采用酶偶联反应通过荧光对所述ADP进行定量的第2工序。即，本发明的糖基转移酶的活性测定方法，其具有：在ATP存在下使通过糖基转移酶反应生成的GDP或者UDP与NDP激酶反应，或者在ATP存在下，使通过糖基转移酶反应生成的CMP与NMP激酶或者CMP激酶反应，从而生成与GDP、UDP、或者CMP的量相应的ADP的第1工序；以及使通过所述第1工序得到的ADP、以及ADP依赖性己糖激酶作用于葡萄糖，生成葡萄糖-6-磷酸的第2-1工序；使NAD或者NADP以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用于通过所述第2-1工序得到的葡萄糖-6-磷酸，生成NADH或者NADPH的第2-2工序；以及，在SH试剂的存在下，使通过所述第2-2工序得到的NADH或者NADPH以及心肌黄酶作用，测定产生的荧光强度或者吸光度的第2-3工序。作为测定对象的糖基转移酶，可以使用来自动植物的物质、来自微生物的物质、来自生物体的物质、通过基因重组技术制备的物质中的任一种，但优选纯化的物质。作为测定对象的糖基转移酶，优选为从由岩藻糖基转移酶、甘露糖基转移酶、葡萄糖基转移酶、半乳糖基转移酶、葡萄糖醛酸基转移酶、木糖基转移酶、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶、N-乙酰氨基半乳糖基转移酶、以及唾液酸转移酶所组成的组中的至少一种。另外，在第1工序以及第2工序中使用的NDP激酶、CMP激酶、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶可以使用起源于动植物的物质、起源于微生物的物质、通过基因重组技术制备的物质中的任一种，但优选纯化的物质。通过糖基转移酶的作用，从GDP-岩藻糖、GDP-甘露糖、UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、UDP-葡萄糖醛酸、UDP-木糖、UDP-N-乙酰氨基葡萄糖、UDP-N-乙酰氨基半乳糖、CMP-唾液酸等糖供体分子将糖(分别为岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、木糖、N-乙酰氨基葡萄糖、N-乙酰氨基半乳糖、唾液酸)转移至糖受体分子时，核苷酸(GDP、UDP、CMP)从糖供体分子游离。本发明使用酶偶联反应通过荧光对所述GDP、UDP、或者CMP进行定量，从而测定糖基转移酶活性。现有技术中，GDP、UDP、或者CMP的高灵敏度并且简便的定量是困难的，而在本发明中，通过由下述的2个工序形成的酶偶联反应，能够实现GDP、UDP、或者CMP的高灵敏度并且简便的测定。第1工序：在糖转移反应中，由糖供体分子生成的核苷酸为GDP或者UDP时，在ATP存在下，在糖转移反应后的反应液中使NDP激酶作用，使GDP或者UDP分别转化为GTP或者UTP，同时定量地产生ADP。在糖转移反应中，由糖供体分子生成的核苷酸为CMP时，在ATP存在下，在糖转移反应后的反应液中使CMP激酶作用，使CMP转化为CDP，同时定量地产生ADP。第2工序：通过使用葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶、NADP或者NAD、以及刃天青的酶偶联反应，将第1工序产生的ADP传导至荧光性的试卤灵的荧光发色，用荧光对此进行定量。在本发明中，要测定酶活性的糖转移反应，通过在缓冲液中混合糖基转移酶、糖供体分子、以及糖受体分子进行。糖基转移酶优选添加使酶反应率为1～50％左右的浓度，糖供体分子优选添加10～500μM，糖受体分子优选添加10～5000μM。作为用于糖转移反应的缓冲液，可举例三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为6～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的MnCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。糖转移反应后的反应液中的游离核苷酸浓度优选为在0.1～100μM的范围内，更优选为在0.5～50μM的范围内。在反应液比100μM更浓的情况下，优选稀释，使浓度落入所述范围内。糖转移反应的结果是：为了定量从糖供体分子游离的核苷酸(GDP、UDP、CMP)，在第1工序中，向糖转移反应后的反应液添加ATP、以及NDP激酶或者CMP激酶，进行磷酸交换反应，生成ADP。NDP激酶是在ATP存在下将GDP或者UDP磷酸化，分别转化为GTP或者UTP，同时生成与GTP或者UTP等摩尔量的ADP的酶。CMP激酶是在ATP存在下将CMP磷酸化，转化为CDP，同时生成与CDP等摩尔量的ADP的酶。在本发明中，如果是在ATP存在下，将CMP磷酸化，转化为CDP，同时生成与CDP等摩尔量的ADP的酶，则可作为CMP激酶使用，例如，称为NMP激酶(核苷5’-单磷酸激酶)的酶也具有所述酶活性，因此能作为CMP激酶使用。可以分别单独添加在第1工序中添加的ATP与NDP激酶或者CMP激酶，或者也可以作为混合液添加。在任何情况下，都优选添加ATP的浓度为在糖转移反应液中存在的游离核苷酸的2倍摩尔浓度以上并且1mM左右以内的浓度。NDP激酶或者CMP激酶优选0.2～20μg/ml的添加量。作为用于这些的添加的缓冲液，可举例三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为7～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。此外，由于CMP激酶通过添加还原剂提高酶活性，在第1工序中，在使用CMP激酶的情况下，优选同时添加还原剂，在还原剂的存在下生成ADP。此外，除了对要测定的激酶有还原剂要求性的情况以外，作为用于提高酶活性(使活性化、活化)的活性化剂(活化剂)，或者作为用于抑制筛选时的化合物的非特异性吸附的酶等试剂的稳定剂，优选添加还原剂反应。作为还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。添加量优选为1μM～5mM，更优选为0.1～5mM。在第2工序中，向通过第1工序得到的反应液添加葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶、NADP、以及刃天青，进行酶偶联反应，由此，将ADP传导至试卤灵的荧光发光，通过荧光对此进行定量。可以分别单独添加在用于定量ADP的酶偶联反应中使用的葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、G-6-P脱氢酶、心肌黄酶、NADP或者NAD、以及刃天青，也可以预先将其混合(以下，称为第2工序用混合液)，一次添加。优选使用的添加后的各成分的浓度为葡萄糖0.1～10mM、ADP依赖性己糖激酶5～500μg/ml、G-6-P脱氢酶1～100μg/ml、心肌黄酶0.2～20μg/ml、NADP10～500μM、刃天青5～250μM。通常优选使用的SH试剂的浓度为1μM～100mM，优选与酶偶联用混合液中存在的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。作为使用的缓冲液，可举例三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TRIS-HClBuffersolution)、HEPES缓冲液等两性离子缓冲液(Good’s缓冲液)、磷酸缓冲液等。优选缓冲液浓度为10～200mM、pH为7～9。作为添加物，也可以添加10～200mM的NaCl、10～200mM的KCl、5～40mM的NaF、1～40mM的MgCl2、1～20mM的CaCl2、100～500μM的Na3VO4等盐类、0.01～1％的曲拉通X-100(TritonX-100)等界面活性剂、0.01～1％的白蛋白等蛋白质。第2工序的酶偶联反应的反应温度优选为20～37℃、反应时间优选为10分钟～3小时。作为在还原剂的存在下进行第2-3工序时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。优选添加1μM～5mM的还原剂。另外，在第1工序中添加还原剂的情况下，优选向第2工序用混合液添加SH试剂，进行第2工序的反应。如果在还原剂的存在下进行第2工序的酶偶联反应，则通过还原剂的作用进行从刃天青至试卤灵的还原，荧光的背景变高。通过预先将SH试剂添加至第2工序的酶偶联用混合液，能使还原剂失活，能抑制荧光的背景的上升。SH试剂为与硫醇基反应的试剂，是用于蛋白质中的半胱氨酸残基的定量、化学改性的化合物。可举例1)5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、2,2’(4,4’)-二吡啶基二硫化物、连四硫酸、2,6-二氯酚靛酚(DCIP)、氧化型谷胱甘肽等的氧化剂、2)p-汞苯甲酸(PMB)、p-汞苯磺酸(PMBS)等硫醇盐形成剂、3)碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺(NEM)等烷基化剂(参考《生化学辞典》，第4版，p.173，東京化学同人，2007年(《生物化学辞典》，第4版，p.173，东京化学同人，2007年))。作为本发明中使用的SH试剂，只要是在中性pH区域附近、与还原剂有反应性、并且不影响在酶偶联反应中使用的酶的活性的物质即可。例如，可举例，碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物、甲基乙烯基砜等烯丙基磺酸衍生物等，特别优选碘乙酰胺等α-卤代羰基化合物、N-乙基马来酰亚胺等马来酰亚胺衍生物。作为本发明中使用的SH试剂，优选用上述通式[1]表示的马来酰亚胺化合物或者2-碘乙酰胺。作为第2工序的酶偶联反应中添加的量，优选与第1工序的反应中使用的还原剂等价的量或者至所述量的20倍左右的量。第1工序与第2工序的反应也可以同时进行。在测定GDP或者UDP的情况下可以同时地进行。在测定CMP的情况下，由于还原剂的添加与使其失活的操作是必须的，不优选同时进行第1工序与第2工序。＜酶活性调节剂的筛选方法＞通过使用上述的本发明的酶的活性测定方法，对于筛选糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的活性调节剂而言，优选使用微孔板向各孔中添加被检测化合物，在被检测化合物的存在下，以及在作为对照组而不存在的情况下，进行糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的反应后，通过如上所述地进行酶偶联反应，进行荧光测定，从而定量糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的活性。根据被检测化合物的有无对所得到的糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的活性进行比较，从而能够求出被检测化合物对于糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的活性调节作用。另外，不进行糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶的反应，在被检测化合物的存在下只进行酶偶联反应，从而能得知被检测化合物对酶偶联反应是否产生影响，能确定被检测化合物的活性是否作用于糖基转移酶或者激酶等ADP生成酶。本发明的酶偶联反应中产生的荧光，激发波长在540nm附近，荧光波长在590nm附近，因此，在相关波长域，具有不易受被检测化合物的紫外、可见部分吸收、自身荧光的影响的优点。作为酶活性调节剂的筛选方法的一个实施方式的糖基转移酶活性调节剂的筛选方法，其具有：在被检测化合物存在下或者在被检测化合物不存在下进行糖基转移酶反应的糖基转移酶反应工序；在ATP存在下使通过所述糖基转移酶反应生成的GDP或者UDP与NDP激酶反应，或者在ATP存在下，使通过糖基转移酶反应生成的CMP与CMP激酶反应，从而生成与GDP、UDP、或者CMP的量相对应的ADP的第1工序；使用葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NADP、以及刃天青采用酶偶联反应通过荧光对所述ADP进行定量的第2工序；以及，对由于所述被检测化合物的有无导致的糖基转移酶的活性进行比较，从而求出所述被检测化合物对糖基转移酶的活性调节作用的比较工序。作为酶活性调节剂的筛选方法的一个实施方式的糖基转移酶活性调节剂的筛选方法，优选为：所述第1工序是在ATP以及还原剂存在下使通过糖基转移酶反应产生的CMP与CMP激酶反应，从而生成与GDP、UDP、或者CMP的量相对应的ADP的工序，所述第2工序是在SH试剂的存在下，通过酶偶联反应，采用荧光进行定量的工序。作为酶活性调节剂的筛选方法的一个实施方式的糖基转移酶活性调节剂的筛选方法，优选为：所述糖基转移酶是从由岩藻糖基转移酶、甘露糖基转移酶、葡萄糖基转移酶、半乳糖基转移酶、葡萄糖醛酸基转移酶、木糖基转移酶、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶、N-乙酰氨基半乳糖基转移酶、以及唾液酸转移酶所组成的组中选出的至少一种。作为酶活性调节剂的筛选方法的一个实施方式的生成ADP的酶的活性调节剂的筛选方法，其中，在被检测化合物存在下或者在被检测化合物不存在下进行生成ADP的酶反应，然后，通过在SH试剂的存在下使葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NADP、以及刃天青作用于通过生成ADP的酶反应而生成的ADP，通过生成的试卤灵的荧光进行测定，对由于所述被检测化合物的有无导致的活性进行比较，从而求出被检测化合物对生成ADP的酶的活性调节作用。作为酶活性调节剂的筛选方法的一个实施方式的生成ADP的酶的活性调节剂的筛选方法，优选为：所述生成ADP的酶是从由激酶、ATP酶、固氮酶、四氢叶酸合成酶、乙酰-CoA羧化酶、丙酮酸羧化酶、以及谷胱甘肽合成酶所组成的组中选出的至少一种。作为酶活性调节剂的筛选方法的一个实施方式的生成ADP的酶的活性调节剂的筛选方法，优选为：所述SH试剂为N-乙基马来酰亚胺或者碘乙酰胺。＜ADP的测定用试剂盒＞本发明提供一种ADP的测试用试剂盒，其含有：葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NAD以及/或者NADP、刃天青以及SH试剂。作为本发明的ADP的测定用试剂盒中含有的SH试剂，可举例与在上述ADP的测定方法中说明的试剂相同的试剂，因此省略说明。根据本发明的ADP的测定用试剂盒，能够简便地测定样品中的ADP。所述ADP测定用试剂盒也可以含有还原剂，在还原剂存在下，作为进行本发明的ADP的测定方法时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。＜生成ADP的酶的活性测定试剂盒＞本发明提供一种生成ADP的酶的活性测定试剂盒，其含有：葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NAD以及/或者NADP、刃天青以及SH试剂。作为本发明的生成ADP的酶的活性测定试剂盒中含有的SH试剂，可举例与在上述生成ADP的酶的活性测定方法中说明的试剂相同的试剂，因此省略说明。根据本发明的生成ADP的酶的活性测定试剂盒，能够简便地测定生成ADP的酶的活性。所述生成ADP的酶的活性试剂盒，也可以含有还原剂，作为在还原剂存在下进行本发明的生成ADP的酶的活性测定方法时的还原剂，优选二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇或者TCEP。＜糖基转移酶的活性测定试剂盒＞本发明提供一种转移酶的活性测定试剂盒，其中，其包含第1液和第2液，所述第1液含有ATP以及NMP激酶、NDP激酶或者CMP激酶，所述第2液含有葡萄糖、ADP依赖性己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、心肌黄酶、NAD以及/或者NADP、刃天青、以及SH试剂。作为一个实施方式，本发明的糖基转移酶的活性测定试剂盒，优选为：所述第1液还含有还原剂。例如，CMP激酶等某种酶通过还原剂的添加提高酶活性，从而通过在所述第1液中进一步含有还原剂，从而能提高CMP激酶的酶活性。并且，由于本发明的转移酶的活性测定试剂盒在所述第2液中含有SH试剂，能使还原剂失活，从而抑制从刃天青向试卤灵的还原，能抑制荧光的背景的上升。作为本发明的糖基转移酶的活性测定试剂盒中含有的SH试剂，可举例与在上述糖基转移酶的活性测定方法中说明的试剂相同的试剂，因此省略说明。根据本发明的糖基转移酶的活性测定试剂盒，能简便地测定糖基转移酶的活性。[实施例]以下，示出实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明不受以下的实施例的限制。[实施例1]使用本发明的方法的GDP、UDP的校准曲线使用本发明的第1工序、第2工序的反应作成GDP、UDP的校准曲线。作为材料，使用了GDP(和光纯药工业公司商品目录编号078-04741)、UDP(和光纯药工业公司商品目录编号212-00861)、ATP(和光纯药工业公司商品目录编号18-16911)、来自面包酵母的NDP激酶(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司商品目录编号N0379)、葡萄糖(和光纯药工业公司商品目录编号045-31162)、ADP依赖性己糖激酶(旭化成制药公司(旭化成ファーマ社)商品目录编号T-93，来自嗜热高温球菌(Thermococcuslitoralis))、G-6-P脱氢酶(东方酵母工业公司(オリエンタル酵母工业社)商品目录编号46857003)、心肌黄酶(尤尼吉可公司(ユニチカ社)商品目录编号B1D111)、NADP(东方酵母工业公司(オリエンタル酵母工业社)商品目录编号44290000)、刃天青(和光纯药工业公司商品目录编号191-07581)。将GDP、UDP溶解于缓冲液C(100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2)制备0～50μM的溶液。通过以下的组成制备酶偶联用混合液。第1工序用混合液AATP200μMNDP激酶2μg/ml缓冲液组成C第2工序用混合液B向384孔微孔板(少容量、非结合型、葛莱娜(Greiner)公司商品目录编号784900)中添加4μl的0～50μM的GDP或者UDP溶液和4μl的第1工序用混合液A，在25℃培养1小时。向其添加8μl的第2工序用混合液B，在25℃培养1小时。使用BMG实验室技术(BMGLabtech)公司制造的孔板分析仪PHERAstar在540nm的激发波长、590nm的荧光波长下对其进行荧光测定。结果表示于图2。由此，确认GDP、UDP的相应于浓度的荧光强度，确定了通过本发明的方法能定量这两种核苷酸。[实施例2]使用本发明的方法的CMP的校准曲线使用本发明的第1工序、第2工序的反应作成CMP的校准曲线。作为材料，使用了CMP(和光纯药工业公司商品目录编号034-05361)、CMP激酶(人CMPK1，艾美捷公司(Prospec)商品目录编号PKA-002)、DTT(和光纯药工业公司商品目录编号040-29223)、N-乙基马来酰亚胺(和光纯药工业公司商品目录编号054-02061)。将CMP溶解于缓冲液F(100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH9)、13.5mM的MgCl2、150mM的KCl、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))制备0～40μM的溶液。按照以下的组成制备酶偶联用混合液。由于CMP激酶有还原剂要求性，在第1工序中作为还原剂使用了DTT，在第2工序中，作为SH试剂使用了N-乙基马来酰亚胺用于使其失活。第1工序用混合液D第2工序用混合液E通过与实施例1相同的操作使用上述混合液对CMP溶液进行第1工序和第2工序的反应，进行荧光测定，得到CMP的校准曲线。结果表示于图3。观测相应于CMP浓度的荧光强度，确认了通过本发明的方法能定量CMP。[实施例3]荧光发色的随时间的变化使用40μM的GDP或者UDP，与实施例1相同地进行反应后，仅在第2工序反应时每隔一段时间取出孔板进行荧光测定。并且，使用40μM的CMP，与实施例2相同地进行反应，仅在第2工序反应时每隔一段时间取出孔板进行荧光测定。结果表示于图4。由此可知，在定量GDP或者UDP的情况下，第2工序的反应在25分钟以内结束，荧光值稳定地保持至之后的至少120分钟，在定量CDP的情况下，第2工序的反应在25分钟基本结束，在60分钟以后至少120分钟为止，荧光值几乎没有变化。因此，在定量GDP或者UDP的情况下，在第2工序开始后25分钟～120分钟测定荧光，在定量CMP的情况下，在第2工序开始后60分钟～120分钟测定荧光，由此，能够得到稳定的测定结果。[实施例4]糖基转移酶活性的测定(1)通过本发明的方法测定作为糖基转移酶的岩藻糖基转移酶的活性。作为岩藻糖基转移酶，使用了人FUT7(R&D系统(R&DSystems)公司商品目录编号6409-GT)，作为底物使用了GDP-岩藻糖(山佐酱油公司(ヤマサ醤油社)商品目录编号7229)和胎球蛋白(来自胎牛血清，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司商品目录编号F3004)。向384孔微孔板添加2.5μl的100μMGDP-岩藻糖、6mg/ml胎球蛋白、以及2.5μl的0～4μg/ml的FUT7(缓冲液为50mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2、10mM的MnCl2、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))，用孔板密封(亚斯旺公司(アズワン社)商品目录编号1-6774-01)封盖，在37℃培养1小时。自然冷却至室温后，向其添加5μl的第1工序用混合液A，在25℃培养1小时。向其添加10μl的第2工序用混合液B，在25℃培养30分钟。与实施例1相同地对其进行荧光测定。结果表示于图5。确认了与酶浓度相应的荧光值。[实施例5]糖基转移酶活性的测定(2)通过本发明的方法测定作为糖基转移酶的半乳糖基转移酶的活性。作为半乳糖基转移酶，使用了人B4GalT1(R&D系统公司(R&DSystems)商品目录编号3609-GT)，作为底物，使用了UDP-半乳糖(MP生物医药(MPBiomedicals)公司商品目录编号195905)和N-乙酰基-D-氨基葡萄糖(和光纯药工业公司商品目录编号013-12181)。向384孔微孔板添加2.5μl的100μM的UDP-半乳糖、10mMN-乙酰基-D-氨基葡萄糖、以及2.5μl的0～0.3μg/ml的B4GalT1(缓冲液为50mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2、10mM的MnCl2、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))，用孔板密封进行封盖，在37℃培养1小时。自然冷却至室温后，向其添加5μl的第1工序用混合液A和10μl的第2工序用混合液B的混合液15μl，在25℃培养1小时。与实施例1相同地对其进行荧光测定。结果表示于图6。确认了与酶浓度相应的荧光值，表示能实现同时进行第1工序与第2工序的测定。[实施例6]糖基转移酶活性的测定(3)通过本发明的方法测定作为糖基转移酶的唾液酸转移酶的活性。作为唾液酸转移酶，使用了人ST6Gal1(R&D系统公司(R&DSystems)商品目录编号5924-GT)，作为底物，使用了CMP-唾液酸(卡尔生物化学(Calbiochem)公司商品目录编号233264)和N-乙酰-D-氨基半乳糖(N-アセチル-D-ラクトサミン)(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司商品目录编号A7791)。向384孔的微孔板添加2.5μl的100μM的CMP-唾液酸、500μM的N-乙酰-D-氨基半乳糖(N-アセチル-D-ラクトサミン)和2.5μl的0～10μg/ml的ST6Gal1(缓冲液为25mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2、5mM的MnCl2、150mM的NaCl、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))，用孔板密封进行封盖，在37℃培养1小时。自然冷却至室温后，向其添加5μl的第1工序用混合液D，用孔板密封进行封盖，在37℃培养1小时。自然冷却至室温后，向其添加10μl的第2工序用混合液E，在25℃培养1小时。与实施例1相同地对其进行荧光测定。结果表示于图7。确认了与酶浓度相应的荧光值。[实施例7]糖基转移酶抑制活性的测定通过本发明的方法测定没食子酸(gallicacid)对人FUT7的酶抑制活性。没食子酸是已报道了相对于人FUT7具有抑制活性的化合物(参考Arch.Biochem.Biophys.,Vol.425,No.1,PP.51-57,2004年)。通过实施例4所示的方法进行FUT7的酶活性的测定时，在没食子酸存在下进行FUT7(糖转移反应液中的浓度为1μg/ml)的反应，其他与实施例4相同地进行操作，检查没食子酸对FUT7的抑制作用。将不含有没食子酸的组作为抑制率0％的对照，将不含有FUT7的组作为抑制率100％的对照，算出各浓度的没食子酸对FUT7的抑制率。另外，使用50μM的GDP代替100μM的GDP-岩藻糖进行同样的操作，并检查没食子酸对酶偶联自身的影响。另外，使用一部分FUT7酶反应后的反应液，通过HPLC分析并对生成的GDP量进行定量，并通过HPLC法也求出抑制活性。HPLC的条件为：柱子：YMC-TriartC18(YMC公司(ワイエムシー社)制造，粒径5μm，直径4.6mm×长度150mm)，洗脱液：50mMKH2PO4-K2HPO4(10:1)，流速：1ml/分钟，检测：UV260nm。将这些测试结果表示于图8。可知通过本发明的方法测定的没食子酸的抑制活性与通过HPLC测定的抑制活性一致(IC50值为约10μM)。此外，没食子酸对于酶偶联反应自身完全没有抑制，并确认了通过酶偶联测定的抑制活性是抑制FUT7导致的。另外，在Arch.Biochem.Biophys.,Vol.425,No.1,PP.51-57,2004中，报告了没食子酸对人FUT7的IC50值为5.4μM，确认了在实施例7中测定的IC50值与上述文献值相近。如上所示，通过本发明的方法能实现糖基转移酶抑制活性的正确测定。[实施例8]糖基转移酶活性测定试剂盒(1)通过以下的组成，制作岩藻糖基转移酶、甘露糖基转移酶、葡萄糖基转移酶、半乳糖基转移酶、葡萄糖醛酸基转移酶、木糖基转移酶、N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶、或者N-乙酰氨基半乳糖基转移酶用活性测定试剂盒第1工序用混合液ATP200μMNDP激酶2μg/ml缓冲液组成100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mMMgCl2第2工序用混合液[实施例9]糖基转移酶活性测定试剂盒(2)通过以下的组成制作唾液酸转移酶用活性测定试剂盒。第1工序用混合液第2工序用混合液[实施例10]采用本发明的方法的ADP的校准曲线将ADP(东方酵母工业公司(オリエンタル酵母工业社)商品目录编号45120000)溶解于缓冲液C(100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2)，制备0～37.5μM的溶液。通过以下的组成制备酶偶联用混合液，在添加N-乙基马来酰亚胺的情况下，以20mM添加至该酶偶联用混合液。酶偶联混合液组成向384孔微孔板(少容量、非结合型、葛莱娜(Greiner)公司商品目录编号784900)添加7.5μl的0～37.5μMADP溶液(缓冲液组成为C)和7.5μl的酶偶联用混合液，在25℃在暗处培养1小时。然后，使用BMG实验室技术(BMGLabtech)公司制造的微孔板分析仪PHERAstar在540nm的激发波长、590nm的荧光波长处测定荧光强度。结果表示于图9。确认ADP浓度依存的荧光強度，可知直至ADP浓度为25μM都能得到良好的直线性。另外，即使N-乙基马来酰亚胺存在，在荧光值上也几乎看不见变化。如上所示，通过本发明的SH试剂存在下的酶偶联反应，能实现ADP的荧光定量。[实施例11]ADP的酶偶联引起的荧光発色的稳定性的讨论使用25μM的ADP，与实施例10同样地进行反应。但是，酶偶联反应时，每隔一段时间取出微孔板进行荧光测定。结果表示于图10。由此可知，ADP定量的酶偶联反应经过10～20分钟完成，之后的2小时，荧光值稳定。[实施例12]还原剂DTT存在下的ADP的校准曲线与实施例10同样地测定在DTT存在下的ADP的校准曲线。结果表示于图11。确认了DTT的存在导致荧光的背景上升，但如果向酶偶联用混合液预先混合20mM的N-乙基马来酰亚胺(NEM)，则背景的上升被抑制，ADP的定量性良好。如果用作为分析系统的检测灵敏度的特异性指标的信号/背景的计数比率(S/B比，该值越大灵敏度越高)表示，则在20μM的ADP的定量中，如果DTT不存在，则S/B比表示为较高的值57.4，如果存在2mM的DTT，则S/B比为1/10以下的4.2。但是，通过添加20mM的N-乙基马来酰亚胺，则S/B比为36.7，与未添加相比改善约9倍。[实施例13]碘乙酰胺存在下的ADP的校准曲线在实施例12中，使用8mM的碘乙酰胺(IAA)代替20mM的N-乙基马来酰亚胺，其他与实施例12同样地进行ADP的校准曲线的测定。结果表示于图12。在20μM的ADP的定量中，如果存在2mM的DTT，则S/B比为3.7，而在使用8mM的碘乙酰胺的情况下为18.6，改善约5倍。由此可确定，通过向酶偶联用混合液预先混合碘乙酰胺，测定的特异性会得到改善。[实施例14]激酶活性的测定作为还原剂要求性的激酶，使用了人CMPK1(CMP激酶1，艾美捷公司(Prospec)商品目录编号PKa-002-b)，最初对CMPK1的DTT依赖性进行检查。向1.5ml容量微型离心管添加10μl的400μM的ATP、80μM的CMP(缓冲液组成为100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH9)、13.5mM的MgCl2、150mM的KCl、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))和5μl的0～8mM的DTT水溶液以及5μl的4μg/ml的CMPK1(缓冲液组成为100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH9)、13.5mM的MgCl2、150mM的KCl、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))，在37℃培养1小时，通过将15μl的所述反应液注入HPLC，从而定量通过CMPK1酶反应生成的CDP(胞嘧啶5’-二磷酸)和ADP。HPLC的条件为：柱子：YMC-TriartC18(YMC公司(ワイエムシー社)制造，粒径5μm，直径4.6mm×长度150mm)，洗脱液：50mMKH2PO4-K2HPO4(10:1)，流速：1ml/分钟，检测：UV265nm。将这些测试结果表示于图13。确认了CMPK1的酶活性依存于DTT浓度，生成等摩尔量的CDP和ADP。由此可知，如果DTT浓度为1mM以上，则CMPK1表示出充分的活性。然后，通过本发明的方法测定DTT存在下的CMPK1的酶活性。向384孔微孔板添加2.5μl的0或者40μM的CMP和2.5μl的200μM的ATP、0～3μg/ml的CMPK1、4mM的DTT(缓冲液组成为100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH9)、13.5mM的MgCl2、150mM的KCl、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))，用孔板密封(亚斯旺(アズワン社)公司商品目录编号1-6774-01)封盖，在37℃培养1小时。自然冷却至室温后，向其添加5μl的酶偶联用混合液(组成与实施例10相同)，在25℃培养。培养开始，在开始后0分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟，共计5次进行荧光测定，与实施例12相同地求出S/B比。将CMPK1浓度为3μg/ml时的S/B比的测定结果表示于图14。在没有N-甲基马来酰亚胺的条件下进行酶偶联反应时，S/B比为3～4，与此相对，使N-乙基马来酰亚胺存在并进行分析时，S/B比为13～14，表示通过在SH试剂存在下进行酶偶联，激酶活性的定量性大幅提高。另外，将在N-乙基马来酰亚胺存在下，在60分钟的荧光测定时间中的CMPK1的浓度依赖性定量结果表示于图15。确定了相应于CMPK1酶浓度的激酶活性。[实施例15]激酶抑制活性的测定已报告了盘基网柄菌(Dactiosterium，Dictyosteliumdiscoideum)对CMP激酶的抑制活性(J.Biol.CheM.,Vol.265,No.11,PP.6339-6345,1990年)。使用本发明的方法测定了AP5A(P1、P5-二(腺苷-5')五磷酸盐，P1,P5-Di(adenosime-5’)pentaphosphate)对CMPK1的酶抑制活性。向384孔微孔板添加1μl的0～3mM的AP5A(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)商品目录编号D4022)溶液和2μl的50μM的CMP，向其添加2μl的200μM的ATP、3μg/ml的CMPK1、4mM的DTT(缓冲液组成为100mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH9)、13.5mM的MgCl2、150mM的KCl、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))。用孔板密封进行封盖，在37℃培养1小时后，自然冷却至室温，向其添加5μl的含有20mM的N-乙基马来酰亚胺的酶偶联用混合液，在25℃，在暗处培养60分钟后，用孔板分析仪测定荧光。将不含有AP5A的组作为抑制率0％对照组，将不含有CMPK1的组控作为抑制率100％对照组，算出各浓度的AP5A对CMPK1的抑制率。另外，使用25μM的ADP代替50μM的CMP，同样地进行操作，并检查AP5A对酶偶联自身的影响。另外，使用CMPK1的激酶反应后的一部分反应液，通过实施例14中记载的HPLC分析法测定生成的CDP量，通过HPLC法求出抑制活性。将其结果表示于图16。可知通过本发明的方法测定的AP5A对CMPK1的抑制活性与通过HPLC法测定的抑制活性一致。此外，AP5A对酶偶联反应自身完全不抑制，并确认了通过酶偶联测定的抑制活性是抑制CMPK1导致的。如上所示，通过本发明的方法能实现激酶抑制活性的正确的测定。[实施例16]激酶活性测定试剂盒通过以下的组成制作激酶活性测定试剂盒。激酶活性测定试剂盒组成[实施例17]ATP酶活性的测定通过本发明的方法测定市售激酶中夹杂的ATP酶活性。向384孔微孔板添加2.5μl的400μM的ATP和2.5μl的0～16μg/ml的人UMP激酶(拜力公司(Novocib)商品目录编号E-NOV-4)(缓冲液组成为50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2、50mM的NaCl、1mM的DTT、200μM的Na3VO4、0.1％曲拉通X-100(TritonX-100))，在30℃培育1～2小时。向其添加实施例16中记载的5μl的试剂盒液，在25℃培养1小时后，与实施例10相同地用孔板分析仪同样地测定荧光。另外，通过实施例7中使用的HPLC条件分析酶偶联前的酶反应液，直接通过HPLC定量ADP。将其结果表示于图17A以及图17B。表示在没有磷酸受体的状态下，市售的人UMP激酶(UMPK)显示ATP酶活性，从ATP生成ADP，通过本发明的方法能定量所述ATP酶活性，两者的测定结果一致。此外，由于人UMP激酶不对蛋白质进行磷酸化，没有自身磷酸化活性。考虑在此表示的ATP酶活性是在酶的纯化过程中没去除的ATP酶的残留物质。[实施例18]糖基转移酶(半乳糖基转移酶)抑制剂的筛选作为化合物库，使用由1280种已知生理活性物质构成的西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)制造的LOPAC1280(商标)库。使用微量分注机(森氏公司(Labcyte)制造的Echo555)以1张孔板320化合物每次50nl将LOPAC1280(商标)库的各化合物(以1mM的浓度溶解于二甲基亚砜(DMSO))分注至384孔微孔板。通过连续分注机(赛默飞世尔科技公司(ThermoFisherScientific)制造的Multidropcombi)向其添加2.5μl的10mM的N-乙酰基-D-氨基葡萄糖、100μM的UDP-半乳糖和2.5μl的0.05μg/ml的人B4GalT1(缓冲液为50mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、5mM的MgCl2、10mM的MnCl2、0.02％曲拉通X-100(TritonX-100))，用孔板密封进行封盖，在37℃培养1小时(反应液中的库化合物浓度为10μM)。将代替库化合物而添加DMSO的孔作为反应率100％的对照孔，将不添加酶的孔作为反应率0％的对照孔(在各孔板上各设置16个孔的该两个对照)。自然冷却至室温后，添加5μl的第1工序用混合液A，在25℃培养1小时后，添加10μl的第2工序用混合液B的10μl混合液，进一步地在25℃培养1小时，对荧光进行定量。另一方面，与上述相同地向孔板添加库化合物以及DMSO后，制作代替底物液和酶液而以每次5μl添加了20μM的UDP的孔板，同样地进行第1工序和第2工序的反应，检查对UDP定量反应自身的影响。在这种情况下，将反应率为0％的对照孔设为不添加20μM的UDP的孔。将两个分析的反应率为100％和0％的对照孔的荧光定量值、加入有库化合物的孔的荧光定量值分别作为a、b、c，通过下述数学式计算抑制率。[数学式1]抑制率(％)＝(1-(c-b)/(a-b))×100将1280个库化合物的测定结果表示于图18A～C。在进行B4GalT1反应的情况下，抑制率表示为50％以上的化合物数为24个(图18A)。另一方面，在UDP定量分析的情况下，50％以上抑制的化合物数为10个(图18B)。通过计算两个分析的抑制率的差(A-B)，能估算B4GalT1反应的净抑制率。所述差为50％以上的化合物数为12个(图18C)。因此，通过所述筛选，能从LOPAC1280(商标)库得到12个抑制人半乳糖基转移酶B4GalT1的化合物，表示本发明作为高通量筛选法是有用的。另外，现有的筛选方法中的孔单价为一个孔约100日元，与此相对，本发明的筛选方法中的孔单价为低廉的1个孔2～8日元。因此，确认了本发明的筛选方法在成本方面也非常地优越。[实施例19]在马来酰亚胺类、或者碘乙酰胺存在下的ADP的定量将ADP(和光纯药工业公司商品目录编号019-25091)溶解于纯水中至浓度为10mM，使用5M的氢氧化钠(和光纯药工业公司商品目录编号196-05375)制备pH为7的ADP溶液。用纯水制备浓度为1M的DTT(和光纯药工业公司商品目录编号040-29223)，制备DDT溶液。用缓冲液1(40mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、20mM的MgCl2、0.01％的BSA)稀释10mM的ADP溶液、10mM的ATP溶液(普洛麦格(Promega)公司V915B)、1M的DTT溶液，分别制备下述表1中所述的组成的溶液1～6[表1]作为SH试剂，用二甲基亚砜(和光纯药工业公司商品目录编号041-29351)分别制备浓度为800mM的马来酰亚胺(和光纯药工业公司商品目录编号133-13111)、N-乙基马来酰亚胺(和光纯药工业公司商品目录编号058-02061)、以及碘乙酰胺(IAA)(和光纯药工业公司商品目录编号095-02151)。用纯水制备浓度为250mM的N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺(圣克鲁斯公司(サンタクルズ社)商品目录编号SC-207907)。以下述表2中所述的组成分别制备酶偶联用混合液。在酶偶联用混合液中，在使用SH试剂的情况下，分别添加至成为40mM。[表2]如下述表3所述地向384孔微孔板(小容量、非结合型、葛莱娜(Greiner)公司商品目录编号784900)分别添加5μl的溶液1～6和5μl的溶液A～E的酶偶联用混合液，在25℃培养1小时。[表3]然后，使用迪肯(TECAN)公司制造的微孔板分析仪Safire在540nm的激发波长、590nm的荧光波长下对所述表3中记载的各溶液分别进行荧光强度测定。分别进行2次上述实验，分别求出所得的荧光强度的平均值，结果表示于图19A～C。确认了DTT的存在导致荧光的背景上升，但如果向酶偶联用混合液预先混合40mM的N-马来酰亚胺类(马来酰亚胺、N-乙基马来酰亚胺、N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺)和40mM的IAA，则背景的上升被抑制，ADP的定量性良好。如果用作为分析系统的检测灵敏度的特异性指标的信号/背景的计数比率(S/B比，该值越大灵敏度越高)表示，则在20μM的ADP的定量中，如果DTT不存在，则S/B比表示为较高的值23.3，如果存在3mM或者6mM的DTT，则S/B比分别降低为4.0、2.9。但是，通过添加40mM的马来酰亚胺类(马来酰亚胺、N-乙基马来酰亚胺、N-(2-磺基乙基)马来酰亚胺)，则改善为添加3mM的DTT时S/B比分别为23.6、23.8、24.0，添加6mM的DTT时分别为21.7、22.5、21.0。通过添加40mM的IAA，则改善为添加3mM的DTT时S/B比为18.2，添加6mM的DTT时为13.3。如上所示，马来酰亚胺类以及IAA的任一种都有荧光的背景的抑制效果，特别是马来酰亚胺类的抑制效果较高。[实施例20]还原剂DTT、2-巯基乙醇、或者TCEP存在下的ADP的定量通过与实施例19相同的方法，作为还原剂，添加6mM的DTT、6mM的2-巯基乙醇(和光纯药工业公司商品目录编号135-07522)、6mM的TCEP(和光纯药工业公司商品目录编号209-19861)，进行ADP的定量。将TCEP溶解至纯水中，使浓度为1M，使用5M的氢氧化钠(和光纯药工业公司商品目录编号196-05375)制备使pH为7，稀释至6mM使用。将ADP和ATP、各还原剂溶解至缓冲液(40mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、20mM的MgCl2、0.01％的BSA)，制备各还原剂6mM、ADP0μM或者20μM的溶液(0μM的ADP和100μM的ATP、或者20μM的ADP和80μM的ATP)。酶偶联用混合液使用与实施例19相同组成的物质，以40mM的浓度添加马来酰亚胺类(马来酰亚胺、N-乙基马来酰亚胺)或者IAA。向384孔微孔板(小容量、非结合型、葛莱娜(Greiner)公司商品目录编号784900)添加5μl的还原剂6mM、ADP0μM、20μM的溶液(ADP与ATP的总和为100μM，缓冲液为40mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)(pH7.5)、20mM的MgCl2、0.01％的BSA)和5μl的酶偶联用混合液，在25℃培养1小时。然后，使用迪肯(TECAN)公司制造的微孔板分析仪Safire在540nm的激发波长、590nm的荧光波长下测定荧光强度。分别进行3次上述实验，分别求出所得的荧光强度的平均值，结果表示于图20A～C。在20μM的ADP的定量中，在存在6mM的DTT、2-巯基乙醇、TCEP的情况下，如果不添加SH试剂，则S/B比分别为1.2、14.0、3.4，如果添加马来酰亚胺，则分别改善为16.1、19.1、19.4，如果添加N-乙基马来酰亚胺，则分别改善为18.2、19.6、19.9，如果添加IAA，则分别改善为9.0、18.8、12.1。如上所示，马来酰亚胺类、IAA产生的荧光的背景的抑制效果在添加还原剂DTT、2-巯基乙醇、TCEP的情况下是有效的，特别是马来酰亚胺类的效果较高。工业实用性本发明能够高灵敏度地测定从刃天青至试卤灵的还原而产生的荧光强度或者吸光度，因此，能够广泛地利用于化学、医药、生物化学领域等中。当前第1页1 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