一种可用于包装大量外源蛋白的重组质粒及构建方法和应用与流程

技术特征：

1.一种可用于包装大量外源蛋白的重组质粒，所述的重组质粒为pFastBac Dual质粒的P_p10启动子下插入SEQ ID NO.2所示氨基酸对应的核苷酸序列；同时P_PH启动子下插入SEQ ID NO.4所示氨基酸对应的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组质粒，SEQ ID NO.2对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示；SEQ ID NO.4对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

3.权利要求2所述的重组质粒的构建方法包括：

1）AcMNPV polyhedrin基因的5’端的450 bp和3’端285 bp的获得：

AcMNPV基因组DNA为模板，5’端片段的引物为PHNF：CTAGCTAGCATGCCGGATTATTCATACCGTC和PHN¹⁵⁰R：ACATGCATGCTTAATGAGGTACATAGTCGGGGTCG；3’端片段的引物为PHC⁹⁵F：GGAATTCATGGCTAAGCGCAAGAAGGACGTGATTAGGATCGTCGAGC和PHCR：GCTCTAGAAGATCCACCTCCACCATACGCCGGACCAGTGAAC；

2）构建重组质粒

分别利用NheI/SphI酶切5’端和3’端片段，回收后的片段分别命名为PhN¹⁵⁰和PhC⁹⁵；PhN¹⁵⁰和PhC⁹⁵分别连接插入到pFastBac Dual质粒P_p10启动子和P_PH启动子下，酶切验证正确的载体命名为pD-PhN¹⁵⁰-PhC⁹⁵，即得。

4.权利要求1所述的重组质粒在表达外源蛋白中的应用。

5.权利要求1所述的重组质粒在在提高杀虫效率中的应用。

6.利用权利要求1所述的重组质粒制备的昆虫病毒杀虫剂。