无定形形式的硫代秋水仙碱衍生物的制作方法

具有下面式(I)结构的IDN 5404为N-脱乙酰基硫代秋水仙碱衍生物：

IDN 5404作为血管破坏剂，是一类能够导致血管结构快速瓦解和坏死的化合物。因为肿瘤内皮细胞是不成熟的，所以它们对于血管破坏剂的作用较正常组织的内皮细胞更为敏感。IDN 5404可以用于治疗实体瘤，特别是如果与其它细胞毒类药物组合使用时。

IDN 5404公开于EP 1263719中。根据EP 1263719的实施例2中所述方法，产物(Tiocol 54)首先在EtOAc中结晶(作为EtOAc溶剂化物)，然后通过柱色谱进一步纯化(洗脱液：乙酸乙酯/己烷，或者可以选择CH₂Cl₂/EtOH)。该专利没有说明产物最终自溶液中回收的方法以及终产物的形式。通常，经过柱色谱纯化后的产物通过将溶剂蒸发至干而简单回收。该方法通常可以获得无定形物。由于IDN 5404的高不溶性以及与溶剂产生共结晶的趋势，当自两种报道的洗脱系统浓缩时，IDN 5404以结晶形式的EtOAc溶剂化物或EtOH溶剂化物获得。

通过该方法获得的晶型可能含有残留的合成过程中使用的有毒溶剂，例如二氯甲烷和己烷，其溶解度非常低。

本发明的目的是无定形的式(I)化合物：

其具有如图1所示的XRPD图谱。

上面所定义的无定形化合物可以通过下面的特征之一进一步表征：

-DSC图谱，其特征在于起始于186.9℃并且结束于194.5℃的玻璃转化温度，采用10℃/min的线性升温速率记录；

-TG/DTA图谱，其特征在于吸热信号范围为185.4℃至195.4℃，采用10℃/min的线性升温速率记录。

本发明的无定形化合物可以通过包括下列步骤的方法获得：

(a)将式(I)化合物粗品溶于DMSO；

(b)通过将溶液于65℃、真空中加热，尽可能除去源自合成过程中的残留溶剂；

(c)通过于20－25℃、搅拌下将步骤b)中获得的溶液滴加至水中，使得无定形的式(I)化合物沉淀。

在步骤a)中，对于1Kg的IDN 5404，优选采用1L－8L的DMSO。

在步骤c)中，对于1Kg的IDN 5404，优选采用8L－64L的水。

上面所定义的无定形的式(I)化合物较其它结晶形式更易溶于水，其在化学和物理方面均是稳定的。这些特征使其能够制备包含本发明化合物的固体形式。

此外，通过上述方法制备的化合物不含合成过程中使用的任何毒性溶剂，例如二氯甲烷和己烷。

该无定形物中存在的唯一残留溶剂是DMSO，其为三类溶剂(低毒性)。

上面定义的无定形形式不是溶剂化物形式，不同于通过多晶型筛选鉴定的均为溶剂化物形式的结晶形式。

无定形形式的IDN 5404在药用组合物的制备中具有有益的特性，例如溶解度增加、生物利用度提高、化学处理容易和/或药物制剂容易。

因此，本发明的另一个目的是药用组合物，其包含上面所定义的无定形的式(I)化合物以及可药用的稀释剂和/或载体。

可药用的稀释剂或载体根据预期的给药途径和标准制药实践选择。本发明的药物制剂优选口服给药或胃肠外给药。

本文中使用的术语“胃肠外”包括皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射或输注技术。

本发明的无定形形式可以配制成常规的剂型，例如片剂、丸剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶囊和注射剂。

用于本发明化合物的优选剂型为注射剂。上面定义的式(I)化合物可以单独使用，或者与细胞毒类药物组合使用，用于治疗实体瘤。

实施例1

将粗品IDN 5404(1kg)溶于DMSO(8L)。将溶液于65℃加热并真空保持2小时以完全除去源自合成过程的溶剂。于20－25℃、搅拌下，将溶液滴加至水(64L)中，使得IDN 5404沉淀为无定形固体。将获得的产物过滤并真空干燥，获得定量收率的IDN 5404。

无定形形式的表征：

X-射线粉末衍射(X-RPD)

用Bruker D2-Phaser衍射仪记录X-RPD图谱。x-射线发生器以30kV和10mA运行，采用CuKα线作为射线源。将样品填塞到适当的狭缝中，照射长度为10mm。收集2至50°2-θ之间的数据，步幅为0.02°2-θ，计数时间为每步3秒。无定形的x-射线粉末衍射图谱(图1)显示不存在无定形样品的典型的衍射峰和宽噪音峰。

差示扫描量热法(DSC)

该分析采用Mettler DSC1系统进行。在氮气流为50ml/min下，采用线性升温速率(10℃/min)，自30至300℃记录热量流动。在有小孔的密闭铝坩埚(40μl体积)中，使用约5mg粉末用于测定。

DSC图谱(图2)特征在于由于水分的释放而产生的宽吸热信号峰，最大出现在约100℃，玻璃转化温度起始于186.9℃，终止于194.5℃。

傅里叶变换红外光谱(FTIR)

采用配备Specac ATR Golden Gate配件的傅里叶变换光谱仪Perkin Elmer Spectrum One，以衰减全反射(ATR)模式记录红外光谱。该光谱是在4000-550cm-1光谱区、在re下、16共-增扫描(co-added scans)捕获和变换的结果。

FTIR-ATR光谱如图3所示(光谱范围4000－550cm^-1)。其显示吸收频率为3286、2936、2836、1669、1606、1535、1484、1403、1347、1320、1283、1235、1194、1135、1093、1019、983、922、841、795、777、575cm^-1±2cm^-1。

热重量分析法(TG)和差热分析(DTA)

采用Seiko TG/DTA7200同步系统(simultaneous system)进行该分析，使用开口铝平底锅(40μl体积)。在200ml/min氮气流下，采用线性升温速率(10℃/min)，自30至300℃记录TG/DT信号。采用约10mg粉末用于测定。

TG/DTA图谱(图4)特征在于由于残留水分的释放而产生的宽吸热峰，最大出现在约60℃(100℃时失重＝1.55％)，归因于玻璃转化的185.4℃至195.4℃之间的吸热信号紧随着放热降解。

实施例2(比较)

粗品IDN 5404(500mg)通过快速色谱纯化，采用AcOEt-己烷7:3作为洗脱液。收集含有IDN 5404的组分，除去溶剂直到干燥。获得具有下列特征的IDN 5404(310mg)，为黄色固体结晶。

产物通过GC分析以测定残留的有机溶剂：AcOEt含量为11.1％(22ppm的己烷)，推断该产物可能是AcOEt溶剂化物。

TG/DTA和XRPD分析根据实施例1相同的条件进行。

IDN5404(AcOEt溶剂化物)的TG/DTA图谱如图5所示。

分析显示DT图谱的特征在于两个非常强的并且没有完全分离的吸热峰，起始于约208℃，两个最高点分别为221.3℃和231.2℃。

由于熔融后结晶溶剂的释放而产生的这些峰与200℃－240℃之间的5.94％的失重有关。

TG图谱也显示30－200℃之间约3.1％的渐进性失重，然后是与第一个吸热峰相对应的快速失重。

30℃－240℃之间的总失重为9.0％。

IDN5404(AcOEt溶剂化物)的XRPD衍射图谱如图6所示。

该衍射图谱特征在于强衍射峰和尖锐的峰形，其说明高结晶度；XRPD图谱显示独特反射(distinctive reflections)，表示为2-θ度值，于：5.6-10.2-10.5-11.1-13.3-14.4-14.7-17.5-17.9-18.5-18.9-19.4-20.0-20.8-21.6-22.2-22.4-22.6-23.4-25.2-25.5-25.9-26.7-27.8-28.5-29.1-29.7-30.8-31.2-32.1。

实施例3(比较)

粗品IDN 5404(500mg)通过快速色谱纯化，采用CH₂Cl₂－EtOH 95:5作为洗脱液。收集含有IDN 5404的组分，除去溶剂直到干燥。获得具有下列特征的IDN 5404(315mg)，为黄色固体结晶：

产物通过GC分析以测定残留的有机溶剂：EtOH含量为10.7％(269ppm的CH₂Cl₂)，推断该产物可能是EtOH溶剂化物。

TG/DTA和XRPD分析根据实施例1相同的条件进行。

IDN5404(EtOH溶剂化物)的TG/DTA图谱如图7所示。

分析显示DT图谱的特征在于起始于约198℃并且最大值为210.6℃的吸热峰。

由于伴有结晶溶剂释放的熔融而产生的该峰与195℃－230℃之间的5.34％的失重有关。

TG图谱也显示30－195℃之间约6.7％的渐进性失重。

30℃－230℃之间的总失重为12.1％。

IDN5404(EtOH溶剂化物)的XRPD衍射图谱如图8所示。

该衍射图谱特征在于强衍射峰和尖锐的峰形，其说明高结晶度；XRPD图谱显示独特反射(distinctive reflections)，表示为2-θ度值，于：6.3-10.4-10.6-11.2-12.5-13.3-14.4-14.8-16.9-17.8-18.8-19.3-19.7-20.3-20.9-21.8-22.5-23.0-23.3-24.9-25.5-26.0-27.1-27.9-28.9-29.4-29.7-32.2。

稳定性数据

已经发现，无定形形式的化合物(I)在25±2℃/60±5％的相对湿度下可以化学稳定至少三年，在40±2℃/75±5％的相对湿度下可以化学稳定至少6个月，自其最初的T₀值没有杂质出现。该分析通过HPLC进行。

还发现，无定形形式的化合物(I)在25±2℃/60±5％的相对湿度下可以物理稳定至少三年，在40±2℃/75±5％的相对湿度下可以物理稳定至少6个月，其维持了图1－4中所示的性能特点。

实施例2中获得的结晶IDN 5404在40±2℃/75±5％的相对湿度下放置1个月显示化学成分有7％的变化。

实施例3中获得的结晶IDN 5404在40±2℃/75±5％的相对湿度下放置1个月显示化学成分有4.1％的变化。