作为BET溴结构域抑制剂的9H嘧啶并[4，5‑B]吲哚和相关类似物的制作方法
![作为BET溴结构域抑制剂的9H嘧啶并[4，5‑B]吲哚和相关类似物的制造方法与工艺](http://img.xjishu.com/img/zl/2017/10/171310405114697.gif)
本发明在由国立卫生研究院授予的ca111275和ca069568下通过政府支持进行。政府对本发明具有一定的权利。
本发明提供bet溴结构域抑制剂和治疗病况和疾病的治疗方法，其中一个或多个bet溴结构域的抑制提供有益效果。
背景技术：
真核生物的基因组在细胞的细胞核内高度组织化。双螺旋dna的长链缠绕组蛋白的八聚体(通常包括组蛋白h2a、h2b、h3和h4的两个拷贝)以形成核小体，其然后被进一步压缩，以形成高度浓缩的染色质结构。不同的浓缩状态范围是可能的，而且这种结构的紧密度在细胞周期期间变化。染色质结构在调节基因转录方面发挥关键作用，所述基因转录不能从高度浓缩的染色质有效地发生。染色质结构由对组蛋白(特别是组蛋白h3和h4)的一系列翻译后修饰控制。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和sumo化。
组蛋白乙酰化通常与基因转录的激活相关联，因为修饰通过改变静电松开dna和组蛋白八聚体的相互作用。除了该物理变化，特定的蛋白质结合至组蛋白内的乙酰化赖氨酸残基以读取表观遗传编码。通常但不排他地在组蛋白的情况下，溴结构域是蛋白质内的结合于乙酰化赖氨酸残基的小的(大约110个氨基酸)独特的结构域。已知存在含有溴结构域的具有约50种蛋白质的家族，其在细胞内具有一系列的功能。
含溴结构域蛋白(“bet溴结构域”)的bet家族包括四种蛋白质，即brd2、brd3、brd4和brd-t，其含有能够结合两个非常靠近的乙酰化赖氨酸残基的串联溴结构域，从而增加相互作用的特异性。brd2和brd3沿着转录活跃的基因与组蛋白关联，并且可以参与促进转录延伸，而brd4可能参与ptef-β复合体招募到诱导性基因，导致rna聚合酶的磷酸化和增加的转录输出。brd4或brd3还可以与nut融合(睾丸中的核蛋白)以形成新的融合致癌基因，brd4-nut或brd3-nut，以上皮瘤的一种高度恶性形式。数据表明，brd-nut融合蛋白有助于癌变。brd-t在睾丸和卵巢中独特地表达。所有家族成员已经被报道具有在控制或执行细胞周期方面的一些功能，并且已经显示在细胞分裂期间保持与染色体复合，这表明在维持表观遗传记忆中的作用。此外，一些病毒利用这些蛋白质将它们的基因组系栓到宿主细胞染色质作为病毒复制过程的一部分。
bet蛋白质的讨论可以在wo2012/075456、wo2012/075383和wo2011/054864中找到。bet溴结构域抑制剂例如i-bet-151和i-bet-762的讨论可以在delmoreetal.,cell146:904-917(2011)和sealetal.,bioorg.med.chem.lett.22:2968-2972(2012)中发现。bet溴结构域的小分子抑制剂对于其中bet溴结构域具有一定作用的许多疾病和病况的治疗具有治疗潜力，所述疾病和病况包括癌症。bet溴结构域抑制剂公开于以下美国专利中：us8044042、us8476260、us8114995、us8557984和us8580957；以下美国专利申请公开：us20120059002、us20120208800、us2012202799、us2012252781、us20130252331、us20140011862、us20130184264、us2013079335、us20140011862、us20140005169、us20130331382、us20130281450、us20130281399、us20120157428和us20100286127；和下面的国际申请：wo1998011111、wo2006129623、wo2008092231、wo2009084693、wo2009158404、wo2010123975、wo2011054843、wo2011054844、wo2011054845、wo2011054846、wo2011054848、wo2011143651、wo2011143660、wo2011143669、wo2011161031、wo2012075383、wo2012116170、wo2012151512、wo2012174487、wo2013024104、wo2013027168、wo2013030150、wo2013033268和wo2013097601。
患有转移性去势难治性前列腺癌(crpc)的男性总是屈从于这种疾病。雄激素消融治疗之后crpc的发生和发展过程主要由未经调节的雄激素受体(ar)信号传导驱动(taylor,b.s.etal.,cancercell18:11-22(2010)；chen,c.d.etal.,natmed10:33-39(2004)；visakorpi,t.etal.,natgenet9:401-406(1995))。尽管最近批准的针对ar信号传导的疗法如阿比特龙(stein,m.n.,goodin,s.anddipaola,r.s.,clincancerres18:1848-1854(2012)；reid,a.h.etal.jclinoncol28:1489-1495(2010)；debono,j.s.etal.,nengljmed364:1995-2005(2011))和第二代抗雄激素mdv3100(恩杂鲁胺)(mukherji,d.etal.expertopininvestigdrugs21:227-233(2012)；scher,h.i.etal.,nengljmed367:1187-1197(2012))的成功，持久反应是有限的，大概是由于获得性耐药。最近，jq1和i-bet，靶向brd4的氨基末端溴结构域的两种选择性小分子抑制剂，已经证明在一系列的恶性肿瘤中显示抗增殖作用(lockwood,w.w.etal.,procnatlacadsciusa109:19408-19413(2012)；dawson,m.a.etal.,nature478:529-533(2011)；delmore,j.e.etal.cell146:904-917(2011)；puissant,a.etal.cancerdiscov3:308-323(2013))。brd4与ar的n-末端结构域物理地相互作用，并且可以通过jq1中断(delmore,j.e.etal.cell146:904-917(2011)；puissant,a.etal.cancerdiscov3:308-323(2013)；filippakopoulos,p.etal.nature468:1067-1073(2010))。
ar转录信号的共激活因子和介体的识别和治疗靶向不应被视为治疗crpc的替代策略(attard,g.etal.,clincancerres17:1649-1657(2011))。brd4是包括brd2/3和brdt的染色质读出器的溴结构域和额外终端(bet)家族的保守成员。brd4在通过rnapolii的转录中发挥关键作用，通过促进积极转录延伸因子p-tefb的招募(jang,m.k.etal.,molcell19:523-534(2005)；yang,z.etal.,molcell19:535-545(2005))。类似于其他bet家族蛋白，brd4包含两个保守的溴结构域，bd1和bd2。jq1或i-bet到溴结构域口袋的竞争性结合导致从活性染色质取代brd4以及随后从靶基因去除rnapolii(dawson,m.a.etal.,nature478:529-533(2011)；delmore,j.e.etal.,cell146:904-917(2011)；puissant,a.etal.,cancerdiscov3:308-323(2013)；filippakopoulos,p.etal.,nature468:1067-1073(2010)；loven,j.etal.,153:320-334(2013))。虽然大多数癌细胞表达bet家族蛋白，但是不清楚为什么只有来自不同癌症的细胞系的一个子集响应bet抑制剂((lockwood,w.w.etal.procnatlacadsciusa109:19408-19413(2012)；mertz,j.a.etal.,procnatlacadsciusa108:16669-16674(2011))。最近，brd4显示出以基因特异性方式与序列特异性结合dna的转录因子相互作用(wu,s.y.etal.,molcell49:843-857(2013))。由于基因和表观遗传景观在不同的肿瘤类型之间不同，可能的是与brd4相关的不同转录调节器可能影响bet抑制剂的作用。
乳腺癌占全球女性的所有癌症的20％以上。雄激素受体(ar)的表达在er(雌激素受体)-阳性和er-阴性乳腺癌中广泛存在。在利用er拮抗剂它莫西芬或阻止雄激素转化为雌激素的芳香化酶抑制剂(ais)的er阳性乳腺癌辅助疗法中，已经显示出可有效地抑制疾病的发展。另外，直接的ar拮抗剂恩杂鲁胺(mdv3100)最近被提出作为ar阳性乳腺癌的治疗方式。
尽管针对bet溴结构域和bet溴结构域抑制剂研究，bet溴结构域的有效的非肽抑制剂的设计仍然是现代药物开发的一个重大挑战。因此，本领域仍然需要具有这样的物理和药理性质的bet溴结构域抑制剂，所述物理和药理性质允许该抑制剂使用在治疗应用中，特别是在人类中。本发明提供结合到bet溴结构域并抑制bet溴结构域活性的化合物。
技术实现要素：
在一个方面，本发明提供9h-嘧啶并[4,5b]吲哚、5h-吡啶并[4,3-b]吲哚和由下面的式i-vi和ixxvii表示的相关类似物，以及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，在本文中统称为“本发明的化合物”。本发明的化合物是可结合于bet溴结构域并充当bet溴结构域的强效拮抗剂的bet溴结构域的强效的和特异性的抑制剂。因此，本发明的化合物可用于治疗其中bet溴结构域例如brd2、brd3、brd4、brd-t或它们的同种型或突变体的抑制提供有益效果的疾病或病况。
在另一个方面，本发明通过对有需要的个体例如人类施用治疗有效量的本发明的化合物来提供治疗病况或疾病的方法。通过bet溴结构域的抑制，所关注的疾病或病况是可治疗的，例如癌症、慢性自身免疫性疾病、炎性病况、增生性疾病、败血症或病毒感染。还提供了防止不需要的增殖细胞如癌症在受试者中增殖的方法，该方法包括对具有发展以不需要的增殖细胞为特征的病况的风险的受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。在一些实施方案中，本发明的化合物通过在这些细胞中诱导凋亡而减少不需要的细胞的增殖。
在另一个方面，本发明提供了在个体中抑制bet溴结构域的方法，其包括对个体施用有效量的至少一种本发明的化合物。
在另一个方面，本发明提供了包含本发明的化合物和赋形剂和/或药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了包含本发明的化合物和赋形剂和/或药学上可接受的载体的组合物，其用于治疗其中bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病或病况，例如癌症。
在另一个方面，本发明提供了一种组合物，其包括：(a)本发明的化合物；(b)第二治疗活性剂；和(c)任选地赋形剂和/或药学上可接受的载体。
在另一个方面，本发明提供本发明的化合物，其用于治疗所关注的疾病或病况，例如癌症。
在另一个方面，本发明提供本发明的化合物，其用于治疗具有活性雄激素受体(ar)信号传导的乳腺癌。
在另一个方面，本发明提供本发明的化合物，其用于治疗具有活性ar信号传导的前列腺癌，例如去势难治性前列腺癌。
在另一个方面，本发明提供了本发明的化合物用于制备治疗所关注的疾病或病况例如癌症的药物中的用途。
在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的化合物，以及任选地包含用于治疗所关注的疾病或病况的第二治疗剂的包装的组合物，和包装插页，所述包装插页包含用于治疗疾病或病况例如癌症的说明书。
在另一个方面，本发明提供作为合成中间体可用于制备本发明的化合物的化合物。
在另一个方面，本发明提供制备本发明的化合物的方法。
本发明的另外的实施方案和优点将部分地在下面的描述中阐述，并将来自该描述，或者可以通过本发明的实践而得知。本发明的实施例和优点可以通过所附权利要求中特别指出的要素和组合来实现和获得。
应该理解的是，前面的概述和下面的详细描述都只是示例和解释性的，并且并不限制所请求保护的本发明。
附图说明
图1是示出所列出的各细胞系对jq1的ic50的表格。
图2是示出由jq1诱导vcap前列腺癌细胞的细胞凋亡的图。切割的parp(cparp)免疫印迹分析。gapdh充当上样对照。
图3是示出前列腺细胞系的集落形成测定的柱形图。在存在或不存在100和500nmjq1的情况下培养细胞12天，随后进行染色和定量。
图4是示出用不同浓度的jq1处理24小时的vcap中的指定基因的qrt-pcr分析的柱形图。
图5是示出用jq1处理的vcap中的ar、psa和erg水平的免疫印迹分析的图。
图6是示出vcap、lncap、22rv1和du145细胞中的ar靶基因签名的gsea的四个图。ns，不显著，*p≤0.05，**p≤0.005通过t检验。
图7是示出在superose-6柱上分级的vcap核提取物和ar、brd4和rnapolii通过免疫印迹分析的图。
图8是示出ar和brd2/3/4的内源性关联的两个图。vcap和lncap核提取物进行使用抗ar抗体的免疫沉淀。通过免疫印迹分析免疫沉淀物中brd2/3/4的存在(上图)。剥离免疫印迹并重新探测ar(下图)。5％的总裂解物用作输入对照。
图9是用于免疫共沉淀实验的brd4和ar构建体的示意图(bd1，溴结构域1；bd2，溴结构域2；et，额外末端(etraterminal)结构域；ctd，c-末端结构域；ntd，n-末端结构域；dbd，dna结合结构域；以及lbd，配体结合结构域)。
图10是示出brd4的n-末端结构域与ar相互作用的图。来自与不同的his-标签-brd4缺失和halo-标签-ar构建体共转染的293t细胞的蛋白质经受用halo-珠的免疫沉淀，随后用his-标签抗体免疫印迹。输入在底图中示出。
图11是如图10所示的图，但具有指定的盐浓度。
图12是通过显示直接相互作用的octetred生物膜层干涉法显示ar：brd4(bd1-bd2)的代表传感图的图。通过在超级链霉亲和素生物传感器上固定生物素化的ar蛋白以及随后的与不同浓度的brd4(bd1-bd2)蛋白质的相互作用测定实时结合。该图显示相对于从原始结合数据导出的蛋白质浓度曲线的响应。右，解离常数(kd)代表产生与ar的半最大结合的brd4(bd1-bd2)浓度。蛋白rnf2用作阴性对照。
图13是显示ar与brd4的指定结构域的体外结合分析的图。将等量的体外翻译的全长halo-标签-ar蛋白和gst-标签-brd4结构域组合并使用halo珠进行免疫沉淀，随后用抗gst抗体进行免疫印迹分析。
图14是显示ar的ntd结构域与brd4的bd1相互作用的图。如图8，用halo-ar的不同的结构域免疫沉淀，随后用抗gst抗体免疫印迹分析。
图15是显示ar的ntd结构域与brd4的bd1相互作用的图。如图8，用halo-ar的不同的结构域免疫沉淀，随后用抗gst抗体免疫印迹分析。
图16是显示jq1干扰ar-bd1相互作用的图。在免疫沉淀随后进行免疫印迹分析之前，将jq1的不同浓度孵育至ar-bd1、ntd1b-bd1和ar-bd2复合体。
图17是显示用载体dht(10nm)，dht+jq1(500nm)，dht+mdv3100(10μm)或dht+比卡鲁胺(25μm)处理12h的vcap细胞中的archip-seq的图。显示了不同治疗组中跨arb(ar结合位点)的ar富集(平均覆盖度)的总结图。
图18是示出dht处理的样品中ar和brd4富集峰的重叠的venn图。
图19是示出ar-brd4重叠(2031)区域的ar和brd4富集的图示。
图20是示出ar-brd4重叠(2031)区域的ar和brd4富集的图示。
图21是示出ar调节的bmpr1b基因的推定的“超级增强子”上的ar、brd4和rnapolii结合事件的基因组浏览器(genomebrowser)表示的图示。y轴代表每碱基对每百万读段数(rpm/bp)。x轴以右上方的比例尺表示基因组位置。用左上方的黑条描绘富含ar、brd4和rnapolii的假定超级增强子区域。
图22是jq1和mdv3100处理对体外vcap细胞生存力影响的线图比较。用mdv3100或jq1处理vcap细胞8天，并用cell-titerglo测定生存力。
图23是jq1和mdv3100vcap的线图比较。细胞在小鼠皮下植入并生长直到肿瘤达到大约100mm3的尺寸。异种移植的小鼠随机化并随后5天/周按所示接受载体或50mg/kg的jq1或10mg/kg的mdv3100。每两周进行卡尺测量。显示平均肿瘤体积±sem。
图24是来自不同处理组的个体肿瘤体积和重量的图示，示出了p值。
图25是来自不同处理组的个体肿瘤体积和重量的图示，示出了p值。
图26是示出vcapcrpc小鼠异种移植实验设计(顶图)的示意图。携带vcapcrpc异种移植物的去势小鼠5天/周按所示接受载体或50mg/kg的jq1(底图)。
图27示意性地描绘了阻断crpc中的ar-信号传导的不同机制。1)阿比特龙通过阻断酶cyp17a1抑制雄激素的生物合成。2)mdv3100竞争性拮抗雄激素结合到ar，防止核转位和招募到目标基因位点。3)jq1(或bet-抑制剂)阻断ar和brd2/3/4相互作用并共招募到目标基因位点以及ets和myc的功能活性和/或表达。
具体实施方式
本发明的化合物是bet溴结构域蛋白的抑制剂。鉴于这一特性，本发明的化合物可用于治疗响应于bet溴结构域抑制的病况或病症。
在一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，
其中：
b1是-n＝或-c(r1b)-；
b2是-n＝或-c(r1c)-；
y1选自由-c(r2a)＝和-n＝组成的组；
y2选自由-c(r2b)＝和-n＝组成的组；
y3选自由-c(r2c)＝和-n＝组成的组；
g选自由卤素、羟基、氰基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基、(杂芳基)烷基、-os(＝o)2cf3和-z-r3组成的组；
r1a和r1b各自独立地选自由氢、羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；
r1c选自由氢、羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基、甲酰氨基(carboxamido)和氟组成的组；
r2a和r2c独立地选自由氢、卤素、烷基和甲酰氨基组成的组；
r2b选自由氢、氨基、任选取代的烷基、羟烷基、烷氧基烷基、杂烷基、(杂环基)烷基、(氨基)烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基和甲酰氨基组成的组；
r3选自由任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环基组成的组；
a是任选取代的5元杂芳基；
x1选自-o-、-s-和-n(r5a1)-组成的组；
z选自由-c(＝o)-、-o-、-s-、-so2-和-n(r5b1)-组成的组；
r5a1选自由氢和烷基组成的组，和
r5b1选自由氢和烷基组成的组，
条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，但条件是：
a)当g是卤素、羟基、氰基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基、(杂芳基)烷基或-os(＝o)2cf3时，则b1或b2，或两者都为-n＝；或者
b)当g是卤素、羟基、氰基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基、(杂芳基)烷基、或-os(＝o)2cf3时，则r1b或r1c，或两者都为羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基、甲酰氨基或氟。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，但条件是：
c)y1，y2和y3中的至少一个为-n＝；和
d)y1，y2和y3中的至少一个不是-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ii表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，
其中：
r1选自由氢、羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；
r2选自由氢、氨基、烷基、羟烷基、烷氧基烷基、(杂环基)烷基、(氨基)烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基和甲酰氨基组成的组；
r3选自由任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环基组成的组；
a是任选取代的5元杂芳基；
x1选自由-o-、-s-和-n(r5a1)-组成的组；
y1选自由-ch＝和-n＝组成的组；
z选自-o-、-s-、-so2-和-n(r5b1)-组成的组；
r5a1选自由氢和烷基组成的组；和
r5b1选自由氢和烷基组成的组，
条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ii表示的化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中：
r1选自由氢、羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；
r2选自由氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、(杂环基)烷基、(氨基)烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基和甲酰氨基组成的组；
r3选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环基组成的组；
a是任选取代的5元杂芳基；
x1选自由-o-、-s-和-n(r5a1)-组成的组；
y1选自由-ch＝和-n＝组成的组；
z选自由-o-、-s-、-so2-和-n(r5b1)-组成的组；
r5a1选自由氢和烷基组成的组；和
r5b1选自由氢和烷基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ⅰ和ⅱ表示的化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中：
a是选自下组的任选取代的5元杂芳基：
r4a、r4b和r4c各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；
x2选自由-o-、-s-和-n(r5c1)-组成的组；和
r5c1选自由氢和烷基组成的组。在另一个实施方案中，r4a、r4b和r4c各自独立地选自由氢和烷基组成的组，和x2选自由-o-和-n(r5c1)-组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i和ii表示的化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中a是a-3且x2为-n(r5c1)-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i和ii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中a是a-9，r4a为烷基和r4b为烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式iii表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1、r2、r3、x1、y1和z
如以上关于式ii所定义，以及r4a、r4b和x2如关于基团a-1至a-9所定义。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a为c1-4烷氧基。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式ⅱ和ⅲ表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1是c1-4烷氧基。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式iii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r4a和r4b各自独立地选自由氢和c1-4烷基组成的组。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式iii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中x2是o。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中y2为-c(r2b)-且r2b为c1-4烷基。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式ⅱ和ⅲ表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2是c1-4烷基。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式i，ii和iii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中x1为-nh-。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式i，ii和iii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中x1为-n(r5a1)-，其中r5a1为c1-4烷基。
在另一实施方案中，本发明的化合物是由式i，ii和iii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中x1是-n(ch3)-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i，ii和iii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中z是-nh-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式iv表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2、r3、z和y1如以上关于式ii所定义。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式v表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2、r3、y1和z如以上关于式ii所定义。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式vi表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2、r3、y1和z如以上关于式ii所定义。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中g选自由卤素、羟基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g为-z-r3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中z是-nh-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中z是-o-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中z是-s-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中z是-so2-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中y2是-c(r2b)-且r2b是氢。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ii-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2是氢。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中y2是-c(r2b)-且r2b为c1-4烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ii-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2是烷基。在另一个实施方案中，r2是c1-6烷基。在另一个实施方案中，r2是c1-4烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中y2是-c(r2b)-且r2b为任选取代的杂环基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ii-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r2是任选取代的杂环基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中y1是-ch＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中y1为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是任选取代的芳基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是选自由任选取代的苯基和任选取代的萘基组成的组的任选取代的芳基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是选自下组的任选取代的苯基：
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是选自下组的任选取代的萘基：
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是任选取代的杂芳基。在一个实施方案中，任选取代的杂芳基选自下组：
在另一个实施方案中，任选取代的杂芳基选自下组：
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是任选取代的6元杂芳基。在一个实施方案中，任选取代的6元杂芳基选自下组：
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是任选取代的5元杂芳基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中：
g或r3是选自下组的任选取代的5元杂芳基：
r5a、r5b和r5c各自独立地选自由氢、卤素、氰基、烷基羰基、烷氧基羰基、卤代烷基、任选取代的烷基、羟烷基、烷氧基烷基、链烯基、芳烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基(heterocyclo)、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和甲酰氨基组成的组；
x3选自由-o-、-s-和-n(r5d)-组成的组；
r5d选自由氢、任选取代的烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、芳烷基、(杂环基)烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、甲酰氨基、(甲酰氨基)烷基和–c(＝o)r5e组成的组；和
r5e选自由烷基和烷氧基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中：
g或r3是选自下组的任选取代的5元杂芳基：
r5a、r5b和r5c各自独立地选自由氢、卤素、氰基、烷基羰基、烷氧基羰基、卤代烷基、任选取代的烷基、羟烷基、烷氧基烷基、链烯基、芳烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和甲酰氨基组成的组；
x3选自由-o-、-s-和-n(r5d)-组成的组；
r5d选自由氢、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、芳烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、甲酰氨基、(甲酰氨基)烷基和–c(＝o)r5e组成的组；和
r5e选自由烷基和烷氧基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中：
g或r3是选自下组的任选取代的杂芳基：
x4选自由-o-，-s-和-n(r5f)-组成的组；
r5f选自由氢、烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和甲酰氨基组成的组；和
n是1，2或3。在另一个实施方案中，x4是-n(r5f)-且n是1或2。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-1。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-2。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-4。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-5。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-6。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-7。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-8。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-9。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r3是r3-10。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-11。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是r3-12。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3是选自下组的任选取代的5元杂芳基：
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-v的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中g或r3选自下组：
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i-vi的任一项表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r3是任选取代的环烷基。在另一个实施方案中，r3选自由环戊基和环己基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；r1b是卤素；和r1c是氢。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式i表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；r1b是氢；和r1c是氟。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1、r2、r5a1、r5a、r5c、r5d、a、z和y1如以上关于式ii所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和x5选自由-o-和-s-组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r5a1是氢。在另一个实施方案中，r5a1是c1-4烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1是烷氧基。在另一个实施方案中，r1是甲氧基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中，a选自由a-3和a-9组成的组。在另一个实施方案中，a为a-3。在另一个实施方案中，x2是-o-，且r4a和r4b独立地为c1-4烷基。在另一个实施方案中，r4a和r4b是甲基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中，z是-nh-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中，y1为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式ix表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中r5a、r5c和r5d独立地选自由氢、c1-6烷基和c3-6环烷基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式x表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a、a、g、x1、y1、y2和y3是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g是-z-r3。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-n＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-c(r2b)＝；和y3为-n＝。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xi表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a、a、g、x1、y1、y2和y3是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g是-z-r3。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-n＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-c(r2b)＝；和y3为-n＝。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xii表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a和r1b独立地选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；和a、g、x1、y1、y2和y3是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g是-z-r3。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-n＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-c(r2b)＝；和y3为-n＝。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xiii表示的化合物：
及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中r1a和r1c独立地选自由羟基、任选取代的杂环基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和氟组成的组；和a、g、x1、y1、y2和y3是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组。在另一个实施方案中，g是-z-r3。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-n＝；和y3是-c(r2c)＝。在另一个实施方案中，y1是-c(r2a)＝；y2是-c(r2b)＝；和y3为-n＝。在另一个实施方案中，y1是-n＝；y2为-c(r2b)＝；和y3为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xiv表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；和r1b、r1c、r2b、r2c、a、g和x1是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g是-z-r3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xv表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；和r1b、r1c、r2a、r2c、a、g和x1是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g是-z-r3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xvi表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；和r1b、r1c、r2a、r2b、a、g和x1是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g是-z-r3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xvii表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1a选自由羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；和r1b、r1c、r2b、a、g和x1是如上面关于式i所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或:
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。在另一个实施方案中，g选自由卤素、羟基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、芳烷基和(杂芳基)烷基组成的组；以及r1b或r1c或两者都是羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基或氟。在另一个实施方案中，g是-z-r3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物：
及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1、r2、r5a1、r5a、r5c、r5d、a、z和y1是如上面关于式ii所定义，条件是a不是1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基，或：
其中：
r4a和r4b各自独立地选自由氢、卤素、卤代烷基和烷基组成的组；和
x5选自由-o-和-s-组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r5a1是氢。在另一个实施方案中，r5a1是c1-4烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中r1是烷氧基。在另一个实施方案中，r1是甲氧基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物，其中，a选自由a-3和a-9组成的组。在另一个实施方案中，a为a-3。在另一个实施方案中，x2是-o-，以及r4a和r4b独立地为c1-4烷基。在另一个实施方案中，r4a和r4b是甲基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中，z是-nh-。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中，y1为-n＝。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中r5a、r5c和r5d独立地选自由氢、c1-6烷基和c3-6环烷基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物，其中r5a1是氢，且r5f选自由c1-6烷基和c3-6环烷基组成的组。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是由式xviii表示的化合物，及其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物；其中，r1是-och3，r2选自由-ch3和-ch2och3组成的组；和z为-n(h)-。
在一个方面，本发明提供了下列具体实施方案：
实施方案i：一种治疗受试者中的癌症的方法，所述癌症选自由前列腺癌和乳腺癌组成的组，所述方法包括对受试者施用有效量的、抑制一种或多种bet溴结构域蛋白的化合物。
实施方式ii：实施方案ⅰ的方法，其中所述癌症是前列腺癌。
实施方案iii：实施方案ii的方法，其中所述前列腺癌具有活跃的ar信号传导。
实施方案iv：实施方案ii或iii的方法，其中所述前列腺癌是去势难治性前列腺癌。
实施方案v：实施方案ⅰ的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
实施方案vi：实施方案v的方法，其中乳腺癌具有活跃的ar信号传导。
实施方式vii：一种鉴别对抑制bet溴结构域蛋白质的化合物敏感的患者的方法，所述方法包括评价患有前列腺癌或乳腺癌肿瘤的患者中的ar-信号传导状态。
实施方案viii：实施方案i-vii中的任何一项所述的方法，其中所述化合物抑制brd2、brd3、brd4和/或brd-t。
实施方案ix：实施方案viii的方法，其中所述化合物抑制brd4。
实施方案x：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xi：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xii：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xiii：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xiv：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xv：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xvi：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xvii：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xviii：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xix：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xx：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xxi：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是：
实施方案xxii：实施方案i-iv或vii-xxi中的任一项所述的方法，其中所述化合物作为单一试剂施用或与前列腺癌的标准疗法组合施用。
实施方案xxiii：实施方案xxii的方法，其中，用于前列腺癌的标准疗法是选自由比卡鲁胺(biclutamide)、阿比特龙和恩杂鲁胺(enzalutamide)组成的组的ar信号传导的抑制剂。
实施方案xxiv：实施方案i、v、6vi或viii-xxi中的任一项的方法，其中所述化合物作为单一试剂施用或与乳腺癌的标准疗法组合施用。
实施方案xxv：实施方案xxiv的方法，其中，用于乳腺癌的标准疗法选自由赫赛汀(herceptin)、紫杉醇(taxol)、泰素帝(taxotere)、帕妥珠单抗(perjeta)、阿霉素(adriamycin)、环磷酰胺(cytoxan)、伯尔定(paraplatin)和曲妥珠单抗(kadcyla)组成的组。
实施方案xxvii：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是式i-xvii中的任一项，或其药学上可接受的盐，水合物或溶剂化物。
实施方案xxviii：实施方案i-ix中的任一项所述的方法，其中所述化合物是表1的化合物编号1-81、83-113、115-127、129、131-163、166、169-178、181-183、185-188、190、192-203、205-207、210-243、247-274、277-295、304-331或333中的任一个。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是表1中的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物。
表1
在另一个实施方案中，本发明的化合物是选自下组的化合物：
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺；
n-(3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺；和
n-(1,3-二环丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺
和其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物。
在另一个实施方案中，本发明的化合物是选自下组的化合物：
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺；
n-(3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺；和
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-(甲氧基甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺，
和其药学上可接受的盐，水合物和溶剂化物。
在另一个实施方案中，本发明提供制备本发明的化合物的方法。在一个实施方案中，制备本发明的化合物的方法包括使式vii的化合物：
其中：
l是离去基团，例如，cl、i、br或oso2r6，其中r6选自由烷基、卤代烷基以及任选取代的芳基组成的组；
r1选自由氢、羟基、烷基、卤代烷基、烷氧基、烷硫基、氨基和卤素组成的组；
r2选自由氢、氨基、烷基、羟烷基、烷氧基烷基、(杂环基)烷基、(氨基)烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环基和甲酰氨基组成的组；
a是任选取代的5元杂芳基；
x1选自由-o-、-s-和-n(r5a1)-组成的组；
y1选自由-ch＝和-n＝组成的组；和
r5a1选自由氢和烷基组成的组，
与具有式viii的化合物反应：
h-z-r3viii
其中：
z选自由-o-、-s-和-n(r5b1)-组成的组；
r3选自由任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环基组成的组；和
r5b1选自由氢和烷基组成的组。
在另一个实施方案中，该方法进一步包括分离本发明的化合物，例如，不含起始原料、试剂、溶剂和/或反应副产物。在另一个实施方案中，反应在溶剂中进行，例如，含有二甲基甲酰胺、乙腈、二甲亚砜和/或n-甲基-2-吡咯烷酮的溶剂。在另一个实施方案中，反应在约50℃至约200℃的温度下进行，例如，在约50℃、约60℃、约70℃、约80℃、约90℃、约100℃、约110℃、约120℃、约130℃、约140℃、约150℃、约160℃、约170℃、约180℃、约190℃或约200℃下。
本发明的化合物抑制bet溴结构域并且可用于各种疾病和病况的治疗。特别地，本发明的化合物可用于治疗其中bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病或病况的方法，所述疾病或病况例如，癌症和增生性疾病。本发明的方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的化合物。本发明的方法还包括对个体施用除了本发明的化合物之外的第二治疗剂。所述第二治疗剂选自这样的药物，所述药物已知可用于治疗折磨有需要的个体的疾病或病况，例如，已知可用于治疗特定的癌症的化学治疗剂和/或放射。
本发明的化合物的盐、水合物和溶剂化物也可以在本文所公开的方法中使用。本发明还包括本发明的化合物的所有可能的立体异构体和几何异构体以包括外消旋化合物和光学活性异构体。当期望本发明的化合物作为单一对映体时，它可以通过最终产物的拆分或通过从异构体纯的起始原料的立体定向合成或使用手性助剂来获得，例如，参见z.maetal.,tetrahedron:asymmetry,8(6),pages883-888(1997)。最终产物，中间体或起始原料的拆分可通过本领域中已知的任何合适的方法来实现。此外，在本发明的化合物的互变异构体是可能的情况下，本发明意欲包括化合物的所有互变异构形式。
本发明涵盖本发明化合物的盐的制备和使用。如本文所用，药物的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的盐或两性离子形式。本发明的化合物的盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备或单独通过使化合物与具有合适的阳离子的酸反应制得。本发明的化合物的药学上可接受的盐可以是用药学上可接受的酸形成的酸加成盐。可用于形成药学上可接受的盐的酸的实例包括无机酸如硝酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。本发明的化合物的盐的非限制性实例包括，但不限于，盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、2-羟基乙烷磺酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐(glycerolphsphate)、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、抗坏血酸盐、羟乙基磺酸盐、水杨酸盐、甲磺酸盐、均三甲苯磺酸盐(mesitylenesulfonate)、亚萘基磺酸盐(naphthylenesulfonate)、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、三氯乙酸、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、甲磺酸盐、乙烷二磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。此外，本发明的化合物中可用的氨基团可以用甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；癸基、月桂基、肉豆蔻基和甾醇基氯化物、溴化物和碘化物；和苄基和苯乙基溴化物季铵化。根据上述，本文出现的本发明的化合物的任何指代旨在包括本发明的化合物以及它们的药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物的化合物。
本发明涵盖本发明的化合物的溶剂化物的制备和使用。溶剂化物通常不显著改变所述化合物的生理活性或毒性，因此可以用作药理学等效物。如本文所用的术语“溶剂化物”是本发明的化合物与溶剂分子的化合(combination)，物理缔合和/或溶剂化，诸如，例如二溶剂化物、单溶剂化物或半溶剂化物，其中溶剂分子与本发明的化合物的比率分别为约2：1，约1：1或约1：2。该物理缔合涉及不同程度的离子和共价键合，包括氢键键合。在某些情况下，可以分离溶剂化物，例如当一个或多个溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时。因此，“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。本发明的化合物可以作为具有药学上可接受的溶剂如水、甲醇、乙醇等的溶剂化形式存在，并且意图是本发明包括本发明的化合物的溶剂化和非溶剂化形式。溶剂化物的一种类型是水合物。“水合物”涉及其中溶剂分子是水的溶剂化物的特定亚组(subgroup)。溶剂化物通常可以作为药理学等效物。溶剂化物的制备在本领域中是已知的。参见，例如，m.cairaetal,j.pharmaceut.sci.,93(3):601-611(2004)，其描述了用乙酸乙酯和用水的氟康唑的溶剂化物的制备。溶剂化物，半溶剂化物，水合物等的类似制备由e.c.vantonderetal.,aapspharm.sci.tech.,5(1):article12(2004)，和a.l.binghametal.,chem.commun.603-604(2001)描述。制备溶剂化物的典型的，非限制性的过程将涉及在高于20℃至约25℃的温度下将本发明的化合物溶解于期望溶剂(有机的，水或它们的混合物)中，然后以足以形成晶体的速度冷却该溶液，并用已知的方法例如，过滤分离晶体。分析技术如红外光谱法可用于确认溶剂在溶剂化物的晶体中的存在。
本发明提供作为bet溴结构域抑制剂用于治疗其中bet溴结构域的抑制具有有益效果的多种疾病和病况的本发明化合物。本发明化合物对bet溴结构域典型地具有小于100μm，例如，小于50μm、小于25μm、小于5μm、小于约1μm、小于约0.5μm或小于约0.1μm的结合亲和力(ic50)。在一个实施方案中，本发明涉及一种治疗患有其中所述bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病或病况的个体的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的化合物。
由于本发明的化合物是一种或多种bet溴结构域的抑制剂，一些通过bet溴结构域蛋白介导的疾病和病况可以通过采用这些化合物治疗。因此，本发明大体上涉及一种这样的方法，所述方法用于治疗响应于患有疾病或病况或具有患疾病或病况风险的动物例如人类中的brd2、brd3、brd4、brd-t或它们的同种型或突变体的抑制的疾病或病况，所述方法包括对动物施用有效量的一种或多种本发明的化合物。
本发明还涉及抑制有需要的动物中的bet溴结构域的方法，所述方法包括对动物施用有效量的至少一种本发明的化合物。
本发明的方法可以通过施用作为净化合物或作为药物组合物的本发明的化合物来完成。本发明的化合物的药物组合物或净化合物的施用可以在所关注的疾病或病况发作期间或者之后进行。通常，所述药物组合物是无菌的，并且不含有施用时会导致不良反应的毒性、致癌性或诱变化合物。还提供了一种试剂盒，其包含本发明的化合物和任选地可用于治疗其中bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病和病况的第二治疗剂，它们单独或一起包装，以及具有使用这些活性剂的用法说明的插页。
在一个实施方案中，本发明的化合物与可用于治疗其中bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病和病况的第二治疗剂联合施用。所述第二治疗剂不同于本发明的化合物。本发明的化合物和第二治疗剂可以同时或依次施用以达到期望效果。此外，本发明的化合物和第二治疗剂可以以单个组合物或两个单独的组合物施用。
以提供所需的治疗效果的量施用第二治疗剂。每种第二治疗剂的有效剂量范围是本领域中已知的，并且在这样已建立的范围内对有需要的个体施用所述第二治疗剂。
本发明的化合物和第二治疗剂可以作为单个单位剂量一起施用或作为多单位剂量分开施用，其中本发明的化合物在第二治疗剂之前施用，或反之亦然。可以施用一个或多个剂量的本发明的化合物和/或一个或多个剂量的第二治疗剂。因此，本发明的化合物可以与一种或多种第二治疗剂例如但不限于抗癌剂联合使用。
可由本发明的方法治疗的疾病和病况包括但不限于癌症和其他增生性疾病、炎症性疾病、败血症、自身免疫性疾病和病毒感染。在一个实施方案中，用本发明的化合物或包含本发明的化合物的药物组合物治疗人类患者，其中以足以抑制所述患者的bet溴结构域活性的量施用所述化合物。
在一个实施方案中，通过本发明的化合物治疗的疾病是癌症。可治疗的癌症的实例包括，但不限于，肾上腺癌、腺泡细胞癌、听神经瘤、肢端雀斑样痣性黑素瘤、肢端汗腺瘤(acrospiroma)、急性嗜酸性粒细胞白血病、急性红白血病、急性淋巴性白血病、急性巨核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、腺癌、腺样囊性癌、腺瘤、腺瘤样牙源性肿瘤、腺鳞癌、脂肪组织肿瘤、肾上腺皮质癌、成人t细胞白血病/淋巴瘤、侵袭性nk细胞白血病、艾滋病相关淋巴瘤、肺泡横纹肌肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞纤维瘤、间变性大细胞淋巴瘤、未分化甲状腺癌、血管免疫母细胞t细胞淋巴瘤、错构瘤、血管肉瘤、星形细胞瘤、非典型畸胎横纹肌样瘤、b细胞慢性淋巴细胞性白血病、b-细胞幼淋巴细胞白血病、b细胞淋巴瘤、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、母细胞瘤、骨癌、布伦纳瘤(brennertumor)、布朗瘤(browntumor)、伯基特淋巴瘤(burkitt'slymphoma)、乳腺癌、脑癌、癌(carcinoma)、原位癌、癌肉瘤、软骨瘤、牙骨质瘤、髓样肉瘤、软骨瘤、脊索瘤、绒毛膜癌、脉络丛乳头状瘤、肾的透明细胞肉瘤、颅咽管瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、子宫颈癌、结肠直肠癌、degos病、促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、胚胎发育不良性神经上皮瘤、无性细胞瘤、胚胎性癌、内分泌腺肿瘤、内胚窦瘤、肠病相关性t细胞淋巴瘤、食管癌、寄生胎、纤维瘤、纤维肉瘤、滤泡性淋巴瘤、滤泡性甲状腺癌、神经节细胞瘤、胃肠癌、生殖细胞瘤、妊娠性绒毛膜癌、巨细胞纤维母细胞瘤、骨的巨细胞瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、脑胶质瘤病、胰高血糖素瘤、性腺胚细胞瘤、粒层细胞瘤、两性母细胞瘤(gynandroblastoma)、胆囊癌、胃癌、毛细胞白血病、血管母细胞瘤、头颈部肿瘤、血管外皮细胞瘤、血液学恶性肿瘤、肝母细胞瘤、肝脾t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、浸润性小叶癌、肠癌症、肾癌、喉癌、恶性雀斑样痣、致死中线癌、白血病、莱迪希细胞瘤(leydigcelltumor)、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管瘤、淋巴管肉瘤、淋巴上皮瘤、淋巴瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、肝癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、malt淋巴瘤、恶性纤维组织细胞瘤、恶性外周神经鞘瘤、恶性蝾螈瘤(malignanttritontumor)、套细胞淋巴瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、肥大细胞白血病、纵隔生殖细胞瘤、乳腺髓样癌、甲状腺髓样癌、髓母细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、默克尔细胞癌(merkelcellcancer)、间皮瘤、转移性尿路上皮癌、混合苗勒氏管肿瘤(mixedmulleriantumor)、粘液瘤、多发性骨髓瘤、肌肉组织肿瘤、蕈样肉芽肿、粘液样脂肪肉瘤、粘液瘤、粘液肉瘤、鼻咽癌、神经鞘瘤、神经母细胞瘤、神经纤维瘤、神经瘤、结节性黑色素瘤、眼癌、少突星形细胞瘤、少突胶质细胞、嗜酸细胞瘤、视神经鞘脑膜瘤、视神经瘤、口腔癌、骨肉瘤、卵巢癌、潘科斯特瘤、乳头状甲状腺癌、副神经节瘤、松果体母细胞瘤、成松果体细胞瘤、垂体细胞瘤、垂体腺瘤、垂体瘤、浆细胞瘤、多胚瘤(polyembryoma)、前体t淋巴细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、原发性腹膜癌、前列腺癌、胰腺癌、咽癌、腹膜假性粘液瘤、肾细胞癌、肾髓质癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、里希特转变(richter'stransformation)、直肠癌、肉瘤、schwannomatosis、精原细胞瘤、塞尔托利细胞瘤(sertolicelltumor)、性索性腺间质瘤(sexcord-gonadalstromaltumor)、印戒细胞癌、皮肤癌、小蓝圆细胞肿瘤、小细胞癌、软组织肉瘤、生长抑素瘤、烟尘疣、脊柱肿瘤、脾边缘区淋巴瘤、鳞状细胞癌、滑膜肉瘤、塞扎病(sezary'sdisease)、小肠癌、鳞状细胞癌、胃癌、t细胞淋巴瘤、睾丸癌、卵泡膜细胞瘤、甲状腺癌、移行细胞癌、咽喉癌、脐尿管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、眼色素层黑素瘤、子宫癌、疣状癌、视觉通路神经胶质瘤、外阴癌、阴道癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(waldenstrom'smacroglobulinemia)、沃辛瘤(warthin'stumor)和维尔姆斯瘤(wilms'tumor)。
在另一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和混合系白血病(mll)的白血病。在另一个实施方案中，癌症是nut-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌如小细胞肺癌(sclc)。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食道癌。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗良性增生性病症，诸如，但不限于，良性软组织肿瘤、骨肿瘤、脑和脊髓肿瘤、眼睑和眼眶肿瘤、肉芽肿、脂肪瘤、脑膜瘤、多发性内分泌肿瘤、鼻息肉、垂体瘤、泌乳素瘤、脑假瘤、脂溢性角化病、胃息肉、甲状腺结节、胰腺的囊性肿瘤、血管瘤、声带结节、息肉、和囊肿、castleman病、慢性藏毛病、皮肤纤维瘤、毛发囊肿(pilarcyst)、化脓性肉芽肿和幼年性息肉综合征的方法。
本发明的化合物也可以通过对需要这种治疗的哺乳动物特别是人类施用有效量的本发明的化合物来治疗感染性和非感染性炎症事件和自身免疫性和其他炎性疾病。使用本文所述的化合物和方法治疗的自身免疫性和炎性疾病、病症和症状的实例包括炎性骨盆疾病、尿道炎、皮肤晒伤、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、皮炎、牙龈炎、阑尾炎(appendictitis)、胰腺炎、胆囊炎(cholocystitus)、无丙种球蛋白血症、牛皮癣、过敏症、克罗恩氏病、肠易激综合症、溃疡性结肠炎、斯耶格伦氏病、组织移植排斥、移植器官的超急性排斥、哮喘、过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺疾病(copd)、自身免疫性多腺体疾病(也称为自身免疫性多腺综合征)、自身免疫性脱发、恶性贫血、肾小球肾炎、皮肤肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎、自身免疫性溶血性和血小板减少的状态、肺出血肾炎综合征、动脉粥样硬化、阿狄森氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、i型糖尿病、脓毒性休克、系统性红斑狼疮(sle)、类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、幼年型关节炎、骨关节炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、特应性皮炎、退行性关节病、白癜风、自身免疫功能减退(autoimmunehypopituatarism)、格林-巴利综合症、白塞氏病、硬皮病(scleracierma)、蕈样肉芽肿、急性炎症反应(如急性呼吸窘迫综合征和局部缺血/再灌注损伤)和格雷夫斯病。
在另一个实施方案中，本发明提供通过对需要这种治疗的哺乳动物特别是人类施用有效量的本发明的化合物来治疗全身性炎症反应综合征，诸如lps诱导的内毒素休克和/或细菌引起的败血症的方法。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗病毒感染和疾病的方法。使用本文所述的化合物和方法治疗的病毒感染和疾病的实例包括基于附加体的dna病毒，包括但不限于，人乳头状瘤病毒、疱疹病毒、epstein-barr病毒、人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒。
在另一个实施方案中，本发明通过对需要这种治疗的受试者施用治疗有效量的本发明的化合物提供了调节上述疾病特别是癌症、炎性疾病和/或病毒疾病中的在体的蛋白甲基化、基因表达、细胞增殖、细胞分化和/或细胞凋亡的治疗方法。
在另一个实施方案中，本发明提供了通过使细胞与本发明的化合物接触来调节内源或异源启动子活性的方法。
在本发明的方法中，对有需要的人类施用治疗有效量的、通常按照药学实践配制的本发明的化合物。是否指定这样的治疗取决于个体情况并经受考虑到所存在的体征、症状和/或机能障碍，发展特定体征、症状和/或机能障碍的风险以及其它因素的医疗评估(诊断)。
本发明的化合物可以通过任何合适的途径施用，例如通过口服、口腔、吸入、舌下、直肠、阴道内、通过腰椎穿刺脑池内或鞘内、经尿道、经鼻、经皮、即，透皮，或胃肠外(包括静脉内、肌内、皮下、血管内、皮内、乳房内、腹膜内、关节内、鞘内、眼球后、肺内注射和/或在特定位点外科手术植入)施用。肠胃外施用可以使用针和注射器或使用高压技术来完成。
药物组合物包括其中本发明的化合物以有效量施用以实现其预期目的的那些。通过个体医生考虑到所诊断的病况或疾病来决定确切的制剂、施用途径和剂量。可以单独地调整剂量和间隔以提供足以维持治疗效果的本发明的化合物的水平。
可通过在细胞培养物或实验动物中的标准药学方法确定本发明的化合物的毒性和治疗功效，例如，用于确定化合物的最大耐受剂量(mtd)，其定义为不在动物中导致毒性的最高剂量。最大耐受剂量和治疗效果(例如，抑制肿瘤生长)之间的剂量比是治疗指数。可根据所采用的剂型和所利用的施用途径在此范围内改变该剂量。治疗有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内，特别是根据本文提供的详细的公开内容。
在治疗中使用所需的本发明的化合物的治疗有效量随待治疗的病况的性质，期望活性的时间长度，以及患者的年龄和病况而变化，最终由主治医生决定。可以单独地调整剂量和时间间隔以提供足以维持所需的治疗效果的bet溴结构域抑制剂的血浆水平。所需剂量可方便地以单剂量施用，或作为多剂量以适当的时间间隔施用，例如作为每天一、二、三、四或更多个亚剂量。常常期望或需要多剂量。例如，本发明的化合物可以以如下频率施用：以四天的时间间隔按每日一剂递送四个剂量(q4d×4)；以三天的时间间隔按每日一剂递送四个剂量(q3d×4)；以五天的时间间隔每日递送一剂(qd×5)；每周一次剂量持续三周(qwk3)；五次日剂量(fivedailydoses)，休息两天，另外五次日剂量(5/2/5)；或者，对于情况合适而确定的任何剂量方案。
在本发明的方法中使用的本发明的化合物可以以每剂约0.005至约500mg，量，每剂约0.05至约250mg，或每剂约0.5至约100mg的量施用。例如，本发明的化合物可以每剂约0.005、0.05、0.5、5、10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg的量施用，包括0.005和500mg之间的所有剂量。
含有本发明的化合物的组合物或含有其的组合物的剂量可以是约1ng/kg至约200mg/kg、约1μg/kg至约100mg/kg或约1mg/kg至约50mg/kg。组合物的剂量可以是任何剂量，包括但不限于约1μg/kg。组合物的剂量可以是任何剂量，包括但不限于，约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约75μg/kg、约100μg/kg、约125μg/kg、约150μg/kg、约175μg/kg、约200μg/kg、约225μg/kg、约250μg/kg、约275μg/kg、约300μg/kg、约325μg/kg、约350μg/kg、约375μg/kg、约400μg/kg、约425μg/kg、约450μg/kg、约475μg/kg、约500μg/kg、约525μg/kg、约550μg/kg、约575μg/kg、约600μg/kg、约625μg/kg、约650μg/kg、约675μg/kg、约700μg/kg、约725μg/kg、约750μg/kg、约775μg/kg、约800μg/kg、约825μg/kg、约850μg/kg、约875μg/kg、约900μg/kg、约925μg/kg、约950μg/kg、约975μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约125mg/kg、约150mg/kg、约175mg/kg、约200mg/kg或更多。上述剂量是一般情况的示例，但是存在其中较高或较低剂量是理所当然的个别情况，并且这些都在本发明的范围之内。在实践中，医生确定最适于个体患者的实际施用方案，其可以随着年龄、体重和具体患者的反应而变化。
如上所述，本发明的化合物可以与第二种治疗活性剂组合施用。在一些实施方案中，第二治疗剂是表观遗传药物。如本文所用，术语“表观遗传药物”是指靶向表观遗传调节剂的治疗剂。表观遗传调节剂的实例包括组蛋白赖氨酸甲基转移酶、组蛋白精氨酸甲基转移酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白脱乙酰酶、组蛋白乙酰基转移酶和dna甲基转移酶。组蛋白脱乙酰酶抑制剂包括，但不限于，伏立诺他(vorinostat)。
在另一个实施方案中，化疗剂或其他抗增生剂可以与本发明的化合物联合以治疗增生性疾病和癌症。可以与本发明的化合物联合使用的疗法和抗癌剂的实例包括外科手术、放射疗法(例如，伽马辐射、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距离放射疗法和全身放射性同位素)、内分泌治疗、生物反应调节剂(例如，干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子(tnf)、热疗和冷冻疗法、减弱任何不良效应(例如，止吐)的试剂以及任何其他经过批准的化疗药物。
抗增生化合物的实例包括，但不限于，芳香酶抑制剂；抗雌激素；抗雄激素；促性激素释放素激动剂；拓扑异构酶i抑制剂；拓扑异构酶ii抑制剂；微管活性剂；烷基化剂；类视黄醇，类胡萝卜素或生育酚；环氧合酶抑制剂；mmp抑制剂；mtor抑制剂；抗代谢药；铂(platin)化合物；甲硫氨酸氨基肽酶抑制剂；双膦酸盐；抗增生抗体；类肝素酶抑制剂；ras致癌同种型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；在血液学恶性肿瘤的治疗中使用的化合物；flt-3抑制剂；hsp90抑制剂；驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂；mek抑制剂；抗肿瘤抗生素；亚硝基脲；靶向/降低蛋白或脂质激酶活性的化合物，靶向/减少蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物，或另外的任何抗血管生成化合物。
非限制性示例性芳香酶抑制剂包括，但不限于，类固醇，如阿他美坦、依西美坦和福美坦，和非甾族化合物，如氨鲁米特、罗谷亚胺(roglethimide)、吡曲洛司坦、睾内酯、酮康唑(ketokonazole)、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑。
非限制性抗雌激素包括，但不限于，他莫昔芬、氟维司群、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。抗雄激素包括，但不限于比卡鲁胺。促性激素释放素激动剂包括，但不限于，阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸戈舍瑞林。
示例性的拓扑异构酶i抑制剂包括但不限于拓扑替康、吉马替康、伊立替康，喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱偶联物pnu-166148。拓扑异构酶ii抑制剂包括但不限于蒽环类，如阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌，如米托蒽醌和洛索蒽醌；和鬼臼毒素类，如依托泊苷和替尼泊苷。
微管活性剂包括微管稳定化、微管去稳定化化合物和微管聚合抑制剂，包括但不限于紫杉烷类，如紫杉醇和多西他赛；长春花生物碱，如长春碱、硫酸长春碱、长春新碱、硫酸长春新碱和长春瑞滨；圆皮海绵内酯(discodermolides)；秋水仙碱和埃博霉素及其衍生物。
示例性的非限制性的烷基化剂包括环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑和亚硝基脲，如卡莫司汀和洛莫司汀。
示例性的非限制性的环氧合酶抑制剂包括cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯基乙酸和衍生物，如塞来考昔、罗非考昔、艾托考昔、伐地考昔或5-烷基-2-芳基氨基苯基乙酸，例如罗美昔布。
示例性的非限制性的基质金属蛋白酶抑制剂(“mmp抑制剂”)包括胶原拟肽和非拟肽抑制剂、四环素衍生物、巴马司他、马立马司他、普啉司他、美他司他(metastat)、bms-279251、bay12-9566、taa211、mmi270b和aaj996。
示例性的非限制性的mtor抑制剂包括抑制雷帕霉素(mtor)的哺乳动物目标并具有抗增殖活性的化合物，如西罗莫司、依维莫司、cci-779和abt578。
示例性的非限制性的抗代谢物包括5-氟尿嘧啶(5-fu)、卡培他滨、吉西他滨、dna去甲基化合物，例如5-氮杂胞苷和地西他滨，甲氨蝶呤和依达曲沙，以及叶酸拮抗剂，如培美曲塞。
示例性的非限制性的铂化合物包括卡铂。顺-铂(cis-platin)、顺铂(cisplatinum)和奥沙利铂。
示例性的非限制性的甲硫氨酸氨基肽酶抑制剂包括bengamide或其衍生物和ppi-2458。
示例性的非限制性的二膦酸盐包括依替膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。
示例性的非限制性的抗增生性抗体包括曲妥单抗、曲妥单抗-dm1、西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、pr064553和2c4。术语“抗体”旨在包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体，由至少两种完整的抗体形成的多特异性抗体，和抗体片段，只要它们表现出期望的生物学活性。
示例性的非限制性的肝素酶抑制剂包括靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物，如pi-88和ogt2115。
如本文所使用的术语“ras致癌同种型的抑制剂”，如h-ras、k-ras或n-ras是指靶向、降低或抑制ras的致癌活性的化合物，例如，法呢基(farnesyl)转移酶抑制剂，例如l-744832、dk8g557、替吡法尼(tipifarnib)和洛那法尼(lonafarnib)。
示例性的非限制性的端粒酶抑制剂包括靶向，降低或抑制端粒酶活性的化合物，如抑制端粒酶受体的化合物，例如端粒抑素(telomestatin)。
示例性的非限制性的蛋白酶抑制剂包括靶向，降低或抑制蛋白酶体的活性的化合物，包括但不限于硼替佐米(bortezomid)。
如本文所用的短语“在血液学恶性肿瘤的治疗中使用的化合物”包括fms-样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向，降低或抑制fms-样酪氨酸激酶受体(flt-3r)的活性的化合物；干扰素，1-β-d-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(ara-c)和白消安(bisulfan)；和alk抑制剂，其是靶向，降低或抑制间变性大细胞淋巴瘤激酶的化合物。
示例性的非限制性的flt-3抑制剂包括pkc412、米哚妥林、星孢菌素衍生物、su11248和mln518。
示例性的非限制性的hsp90抑制剂包括靶向，降低或抑制hsp90的内在atp酶活性的化合物；或经由泛素蛋白酶体途径降解，靶向，降低或抑制hsp90客户蛋白的化合物。靶向，降低或抑制hsp90的内在atp酶活性的化合物特别是抑制hsp90的atp酶活性的化合物、蛋白质或抗体，例如17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格尔德霉素(17aag)、格尔德霉素衍生物；其他格尔德霉素相关的化合物；根赤壳菌素和hdac抑制剂。
如本文所用的短语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性；或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；或另外的任何抗血管生成的化合物”包括蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，例如a)靶向，降低或抑制血小板衍化生长因子受体(pdgfr)的活性的化合物，诸如靶向，降低或抑制pdgfr的活性的化合物，如n-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊马替尼、sulol、su6668和gfb111；b)靶向，降低或抑制成纤维细胞生长因子受体(fgfr)的活性的化合物；c)靶向，降低或抑制胰岛素样生长因子受体i(igf-ir)的活性的化合物，诸如靶向，降低或抑制igf-ir的活性的化合物；d)靶向，降低或抑制trk受体酪氨酸激酶家族或肝配蛋白b4抑制剂的活性的化合物；e)靶向，降低或抑制axl受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物；f)靶向，降低或抑制ret受体酪氨酸激酶的活性的化合物；g)靶向，降低或抑制kit/scfr受体酪氨酸激酶的活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向，降低或抑制c-kit受体酪氨酸激酶的活性的化合物，如伊马替尼；i)靶向，降低或抑制c-abl家族的成员，它们的基因-融合产物(例如bcr-abl激酶)和突变体的活性的化合物，如n-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼或尼洛替尼；pd180970；ag957；nsc680410；pd173955；或达沙替尼；j)靶向，降低或抑制蛋白激酶c(pkc)和丝氨酸/苏氨酸激酶的raf家族的成员，mek、src、jak、fak、pdk1、pkb/akt的成员和ras/mapk家族成员，和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(cdk)的成员的活性的化合物，如在美国专利号5093330中公开的星形孢菌素衍生物，如米哚妥林；进一步的化合物的实例包括ucn-01、沙芬戈(safingol)、bay43-9006、苔藓抑素1、哌立福辛1；伊莫福新；ro318220和ro320432；go6976；isis3521；ly333531/ly379196；异喹啉化合物；法尼基转移酶抑制剂；pd184352或qan697，或at7519；k)靶向，降低或抑制蛋白质-酪氨酸激酶的活性的化合物，如甲磺酸伊马替尼或酪氨酸磷酸化抑制剂，如酪氨酸磷酸化抑制剂a23/rg-50810；ag99；酪氨酸磷酸化抑制剂ag213；酪氨酸磷酸化抑制剂ag1748；酪氨酸磷酸化抑制剂ag490；酪氨酸磷酸化抑制剂b44；酪氨酸磷酸化抑制剂b44(+)对映体；酪氨酸磷酸化抑制剂ag555；ag494；酪氨酸磷酸化抑制剂ag556，ag957和adaphostin(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；nsc680410，adaphostin)；l)靶向，降低或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(作为均聚或异聚二聚体的egfr、erbb2、erbb3、erbb4)和它们的突变体的活性的化合物，如cp358774、zd1839、zm105180；曲妥珠单抗、西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼、osi-774、cl-1033、ekb-569、gw-2016、抗体el.l、e2.4、e2.5、e6.2、e6.4、e2.11、e6.3和e7.6.3，和7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物；和m)靶向，降低或抑制c-met受体的活性的化合物。
靶向，降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的示例性化合物包括磷酸酶1、磷酸酶2a或cdc25的抑制剂，例如冈田酸或其衍生物。
另外的抗血管生成化合物包括具有与蛋白或脂质激酶抑制无关的另一活性机制的化合物，例如，沙利度胺和tnp-470。
另外，额外的非限制性的示例性的其中的一种或多种可以与本发明的bet溴结构域酶抑制剂联合使用的化疗化合物包括：柔红霉素、阿霉素、ara-c、vp-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂、pkc412、6-巯基嘌呤(6-mp)、磷酸氟达拉滨、奥曲肽、som230、fty720、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨、6-巯基嘌呤、喷司他丁、羟基脲、2-羟基-1h-异吲哚-1,3-二酮衍生物、l-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸盐、血管抑素、内皮抑素、邻氨基苯甲酸酰胺、zd4190、zd6474、su5416、su6668、贝伐单抗、rhumab、rhufab、macugon；flt-4抑制剂、flt-3抑制剂、vegfr-2igg1抗体、rpi4610、贝伐单抗、卟吩姆钠、阿奈可他、曲安西龙、氢化可的松、11-a-脱氢皮甾醇(11-a-epihydrocotisol)、皮甾酮(cortexolone)、17α-羟孕酮、皮质酮、去氧皮质酮、睾酮、雌酮、地塞米松、氟轻松、植物生物碱、激素化合物和/或拮抗剂、生物反应调节剂、例如淋巴因子或干扰素、反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、shrna和sirna。
其中的一种或多种也可以与本发明的bet溴结构域抑制剂联合的第二治疗剂的其它实例包括但不限于：阿尔茨海默病的治疗，如多奈哌齐(donepezil)和利凡斯的明(rivastigmine)；帕金森氏病的治疗，如l-dopa/卡比多巴、恩他卡朋、罗吡尼洛(ropinrole)、普拉克索、溴隐亭、培高利特、三己芬迪(trihexephendyl)和金刚烷胺；用于治疗多发性硬化(ms)的试剂，诸如β干扰素(例如，
如本领域中所描述地制备和施用其中的一种或多种可以与本发明的化合物联合使用的上述第二治疗活性剂。
本发明的化合物通常与关于预期施用途径和标准药物实践所选择的药物载体混合施用。使用包括促进本发明的化合物的处理的赋形剂和/或助剂的一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制根据本发明使用的药物组合物。
可以例如通过常规的混合、溶解、制粒、制锭、乳化、包封、包埋或冻干方法制造这些药物组合物。适当的制剂取决于所选择的施用途径。当治疗有效量的本发明的化合物以口服施用时，组合物典型地是片剂、胶囊、粉末、溶液或酏剂的形式。当以片剂形式施用时，组合物还可以包含固体载体，如明胶或佐剂。片剂、胶囊和粉剂含有约0.01％至约95％，并且优选约1％至约50％的本发明的化合物。当以液体形式施用时，可以加入液体载体，例如水、石油、或动物或植物来源的油。组合物的液体形式可以进一步含有生理盐水溶液、右旋糖或其它糖类溶液或二醇类。当以液体形式施用时，该组合物含有按重量计约0.1％至约90％和优选约1％至约50％的本发明的化合物。
当通过静脉内，皮肤或皮下注射施用治疗有效量的本发明化合物时，组合物是无热原的，肠胃外可接受的水溶液的形式。适当考虑ph、等渗性、稳定性等的这种肠胃外可接受溶液的制备在本领域的技术范围内。用于静脉内、皮肤或皮下注射的优选的组合物通常包含等渗媒介物。
本发明的化合物可以与本领域中公知的药学上可接受的载体容易地组合。标准药物载体在remington'spharmaceuticalsciences,mackpublishingco.,easton,pa,19thed.1995中描述。这样的载体使活性剂能够配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液，悬浮液等，用于由待治疗的患者口服摄取。用于口服使用的药物制剂可以通过将本发明的化合物添加到固体赋形剂中，任选研磨所得的混合物并加工颗粒的混合物，如果需要的话，在加入合适的助剂后，以获得片剂或糖衣丸芯而获得。合适的赋形剂包括，例如，填料和纤维素制品。如果需要的话，可以加入崩解剂。
本发明的化合物可被配制用于通过注射的肠胃外施用，例如通过推注或连续输注。用于注射的制剂可以单位剂量形式存在，例如，在安瓿或多剂量容器中，具有添加的防腐剂。该组合物可以采取这样的形式，如悬浮液、溶液或在油性或水性媒介物中的乳剂，并且可以包含配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
用于胃肠外施用的药物组合物包括水溶性形式的活性剂的水溶液。此外，本发明的化合物的悬浮液可以制备为适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油或合成脂肪酸酯。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质。任选地，悬浮液还可以包含合适的稳定剂或增加化合物的溶解度并允许高度浓缩溶液的制备的试剂。可选地，本发明的组合物可以是用于在使用前用合适的媒介物例如无菌无热原水重构的粉末形式。
本发明还可以以直肠组合物配制，诸如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质。除了先前描述的制剂，本发明的化合物还可以配制成长效制剂。这样的长效制剂可通过植入(例如，皮下或肌内)或通过肌内注射施用。因此，例如，本发明的化合物可以用合适的聚合材料或疏水材料(例如，作为在可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂配制。
特别地，本发明的化合物可以以含赋形剂如淀粉或乳糖的片剂形式，或者以单独或与赋形剂混合的胶囊或胚珠的形式，或以包含调味剂或着色剂的酏剂或悬浮液的形式口服、向颊或舌下施用。这种液体制剂可以用药学上可接受的添加剂，例如悬浮剂来制备。本发明的化合物也可以非肠道注射，例如，静脉内、肌内、皮下或冠脉内。对于肠胃外施用，本发明的化合物通常以可以含有其它物质例如盐或单糖，如甘露糖醇或葡萄糖以使溶液与血液等渗的无菌水溶液的形式使用。
在另一个实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包含以有利于本发明的化合物(或包括本发明的化合物的组合物)用于实施本发明的方法的方式封装的本发明的化合物(或包括本发明的化合物的组合物)。在一个实施方案中，所述试剂盒包括包装在容器例如密封的瓶子或器皿中的本发明的化合物(或包括本发明的化合物的组合物)，具有固定到容器或包括在所述试剂盒中描述使用该化合物或组合物来实施本发明的方法的标签。在一个实施方案中，所述化合物或组合物被包装在单位剂型中。所述试剂盒还可以包括适于根据预期施用途径施用组合物的装置。
如本文所用的术语“bet溴结构域”是指brd2、brd3、brd4和brd-t或它们的同种型或突变体中的一种或多种。
术语“其中bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病或病况”涉及这样一种病况，其中brd2、brd3、brd4和brd-t中的至少一种和/或brd2、brd3、brd4和brd-t中的至少一种的活动对于例如该疾病或病况或已知通过bet溴结构域抑制剂进行治疗的疾病或病况的发作、发展、表达是重要的或必要的。这类病况的实例包括，但不限于，癌症、慢性自身免疫性疾病、炎性疾病、增生性疾病、败血症和病毒感染。本领域的普通技术人员能够容易地确定一种化合物是否治疗通过任何特定的细胞类型的bet溴结构域介导的疾病或病况，例如，通过可方便地用于评估特定化合物的活性的测定法。
术语“第二治疗剂”是指不同于本发明的化合物并且已知治疗所关注的疾病或病况的治疗剂。例如当癌症是所关注的疾病或病况时，第二治疗剂可以是已知的化学治疗药物如紫杉酚，或例如放射物。
术语“疾病”或“病况”表示这样的障碍和/或异常，其作为规则被认为是病理病况或功能，且可以特定体征、症状和/或机能障碍的形式表现出来。如下所示，本发明的化合物是bet溴结构域的有效抑制剂，并可以用于治疗其中bet溴结构域的抑制提供有益效果的疾病和病况。
如本文所用，术语“治疗”等是指消除、减少或改善疾病或病况和/或与它们相关联的症状。虽然不排除，然而治疗疾病或病况不需要完全消除疾病、病况或与之相关联的症状。如本文所用，术语“治疗”等可以包括“预防性治疗”，这是指在不患有但有风险或易于再发展疾病或病况或复发所述疾病或病况的受试者中减少再发展疾病或病况，或复发先前受控的疾病或病况的概率。术语“治疗”和同义词考虑对需要这种治疗的个体施用治疗有效量的本发明的化合物。
在本发明的含义内，“治疗”也包括复发预防或阶段预防，以及急性或慢性体征、症状和/或机能障碍的治疗。治疗可以根据症状定向，例如，以抑制症状。它可以实现在短时间内起效，在中期内对症或者可以是长期治疗，例如在维持治疗的范围内。
如本文所使用的术语“治疗有效量”或“有效剂量”是指当通过本发明的方法施用以对有需要的个体有效地递送用于治疗所关注的的病况或疾病的(多种)活性成分时足够的(多种)活性成分的量。在癌症或其他增殖紊乱的情况下，治疗有效量的试剂可减少(即，减缓到一定程度并优选停止)不需要的细胞增殖；减少癌细胞的数目；减少肿瘤尺寸；抑制(即，减缓到一定程度并优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即，减缓到一定程度并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；减少靶细胞中的bet溴结构域信号传导；和/或在一定程度上减轻与癌症相关的一种或多种症状。在一定程度上所施用的化合物或组合物阻止生长和/或杀死现有的癌细胞，它可以是抑制细胞的和/或细胞毒性的。
术语“容器”是指因此适合于储存、运输、分配和/或处理药物产品的任何容器和闭包。
术语“插页(insert)”是指伴随药物产品的信息，其提供如何施用该产品的描述，以及允许医生、药剂师及患者关于该产品的使用做出明智决定所需的安全性和有效性数据。包装插页通常被视为药物产品的“标签”。
“并行施用”、“联合施用”、“同时施用”和类似短语指对待治疗的受试者并行施用两种或更多种试剂。关于“并行”，其是指在不同的时间点同时或以任何顺序依次施用每种试剂。但是，如果不同时施用，其意思是按顺序和以充分接近的时间对个体施用它们，以提供所需的治疗效果，并且可以一齐起效。例如，本发明的化合物可以与第二治疗剂同时或以任何顺序按顺序地在不同的时间点施用。本发明的化合物和第二治疗剂可以单独地，以任何适当的形式和通过任何合适的途径施用。当本发明的化合物和第二治疗剂不并行施用时，应当理解的是它们可以以任何顺序对有需要的受试者施用。例如，本发明的化合物可以在施用第二治疗剂治疗模式(例如，放射治疗)之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同时或之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)对有需要的个体施用。在各种实施方案中，本发明的化合物和第二治疗剂以1分钟间隔、10分钟间隔、30分钟间隔、小于1小时间隔、1小时间隔、1小时至2小时间隔、2小时至3小时间隔、3小时至4小时间隔、4小时至5小时间隔、5小时至6小时间隔、6小时至7小时间隔、7小时至8个小时间隔、8小时至9小时间隔、9小时至10小时间隔、10小时至11小时间隔、11个小时至12小时间隔，不超过24小时间隔或不超过48小时间隔施用。在一个实施方案中，该组合疗法的组分以约1分钟至约24小时间隔施用。
在描述本发明的上下文中(特别是在权利要求书的上下文中)使用的术语“一”、“该”以及类似的指示物应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明。本文中的数值范围的叙述仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独的数值的速记方法，除非本文另外指出，并且每个单独的数值被并入说明书中，就好像它在本文中单独列举一样。本文所提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“如”)的使用旨在更好地说明本发明而不是对本发明的范围的限制，除非另有声明。说明书中的任何语言不应被解释为指示任何非要求保护的要素为对于本发明的实施是必要的。
本文所用的术语“约”包括所记载的数±10％。因此，“大约10”表示9至11。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷基”是指含有一到十二个碳原子(即c1-12烷基)或者指定的碳原子数的直链或支链脂族烃(即c1烷基，如甲基，c2烷基如乙基，c3烷基如丙基或异丙基等)。在一个实施方案中，烷基选自直链c1-10烷基基团。在另一个实施方案中，烷基选自支链c3-10烷基基团。在另一个实施方案中，烷基选自直链c1-6烷基基团。在另一个实施方案中，烷基选自支链c3-6烷基基团。在另一个实施方案中，烷基选自直链c1-4烷基基团。在另一实施方案中，烷基选自支链c3-4烷基基团。在另一个实施方案中，烷基选自直链或支链c3-4烷基基团。非限制性的示例性c1-10烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。非限制性的示例性c1-4烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和异丁基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的烷基”是指未取代的或被独立地选自硝基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、环烷基等的一个、两个或三个取代基取代的如上所定义的烷基。在一个实施方案中，任选取代的烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的烷基被一个取代基取代。非限制性示例性任选取代的烷基包括-ch2ch2no2、-ch2so2ch3ch2ch2co2h、-ch2ch2so2ch3、-ch2ch2coph、和-ch2c6h11。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“环烷基”是指饱和和部分不饱和的(含有一个或两个双键)的环状脂族烃，其含有具有3-12个碳原子(即c3-12环烷基)或指定碳原子数目的一至三个环。在一个实施方案中，环烷基具有两个环。在一个实施方案中，环烷基具有一个环。在另一个实施方案中，环烷基选自c3-8环烷基基团。在另一个实施方案中，环烷基选自c3-6环烷基基团。非限制性的示例性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基、十氢化萘、金刚烷基、环己烯基、和环戊烯基、环己烯基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的环烷基”是指未取代的或被独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、烷基、任选取代的环烷基、烯基、炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯基烷基和(杂环基)烷基的一个，两个或三个取代基取代的如上所定义的环烷基。在一个实施方案中，任选取代的环烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的环烷基被一个取代基取代。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“链烯基”是指含有一个，两个或三个碳-碳双键的如上所定义的烷基。在一个实施方案中，烯基选自c2-6链烯基基团。在另一个实施方案中，链烯基选自c2-4链烯基基团。非限制性的示例性烯基包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、仲丁烯基、戊烯基和己烯基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的链烯基”是指未取代的或被独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或杂环基的一个，两个或三个取代基取代的如上所定义的链烯基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“炔基”是指含一至三个碳-碳三键的如上所定义的烷基基团。在一个实施方案中，炔基具有一个碳-碳三键。在一个实施方案中，炔基选自c2-6炔基基团。在另一个实施方案中，炔基选自c2-4炔基基团。非限制性的示例性的炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、戊炔基和己炔基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的炔基”是指未取代的或被独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或杂环基的一个，两个或三个取代基取代的如上所定义的炔基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“卤代烷基”是指被一个或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。在一个实施方案中，所述烷基被一个、两个或三个氟和/或氯原子取代。在另一个实施方案中，卤代烷基选自c1-4卤代烷基基团。非限制性的示例性的卤代烷基包括氟甲基、2-氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4-三氟丁基和三氯甲基基团。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“羟烷基”是指被一个或多个，例如，一个、两个或三个羟基取代的烷基。在一个实施方案中，羟烷基为单羟基烷基基团，即被一个羟基基团取代。在另一个实施方案中，羟烷基是二羟基烷基，即，被两个羟基基团取代，例如，
在另一个实施方案中，羟烷基选自c1-4羟烷基。非限制性的示例性羟烷基包括羟甲基、羟乙基、羟丙基和羟丁基基团，如1-羟乙基、2-羟乙基、1,2-二羟基乙基、2-羟丙基、3-羟丙基、3-羟丁基、4-羟丁基、2-羟基-1-甲基丙基和1,3-二羟基丙-2-基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷氧基”是指连接到末端氧原子的任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基。在一个实施方案中，烷氧基选自c1-4烷氧基。在另一个实施方案中，烷氧基选自连接到末端氧原子的c1-4烷基，例如，甲氧基、乙氧基和叔丁氧基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷硫基”是指由任选取代的烷基取代的硫原子。在一个实施方案中，烷硫基选自c1-4烷硫基。非限制性的示例性烷硫基包括-sch3和-sch2ch3。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基。非限制性的示例性烷氧基烷基包括甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、甲氧基丁基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、乙氧基丙基、乙氧基丁基、丙氧基甲基、异丙氧基甲基、丙氧基乙基、丙氧基丙基、丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、异丁氧基甲基、仲丁氧基甲基和戊氧基甲基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“卤代烷氧基”指的是连接到末端氧原子的卤代烷基。非限制性的示例性卤代烷氧基包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基和2,2,2-三氟乙氧基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“芳基”是指具有6至14个碳原子的单环或双环芳环体系(即，c6-c14芳基)。非限制性的示例性芳基包括苯基(简写为“ph”)、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、联苯基、亚联苯基和芴基。在一个实施方案中，芳基选自苯基或萘基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的芳基”是指未取代的或被独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、烷基、任选取代的环烷基、烯基、炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯基烷基和(杂环基)烷基的一个至五个取代基取代的如上所定义的芳基。
在一个实施方案中，任选取代的芳基为任选取代的苯基。在一个实施方案中，任选取代的苯基具有四个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的苯基具有三个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的苯基具有两个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的苯基具有一个取代基。非限制性的示例性取代的芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、3-甲氧基苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、2,6-二氟苯基、2,6-二氯苯基、2-甲基、3-甲氧基苯基、2-乙基、3-甲氧基苯基、3,4-二-甲氧基苯基、3,5-二氟苯基3,5-二甲基苯基、3,5-二甲氧基、4-甲基苯基、2-氟-3-氯苯基和3-氯-4-氟苯基。术语任选取代的芳基旨在包括具有稠合的任选取代的环烷基和稠合的任选取代的杂环环的基团。非限制性实例包括：
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“芳氧基”指的是连接到末端氧原子的任选取代的芳基。非限制性的示例性芳氧基是pho-。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“芳烷氧基”是指连接到末端氧原子的芳烷基。非限制性的示例性芳烷氧基是phch2o-。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“杂烷基”是指包含1至10个碳原子和至少两个杂原子的稳定的直链或支链烃基，所述杂原子可以是相同或不同的，选自o、n或s，其中：1)(多个)氮原子和(多个)硫原子可以任选地被氧化；和/或2)(多个)氮原子可任选地被季铵化。杂原子可被置于杂烷基的任何内部位置处或位于杂烷基连接于分子的其余部分的位置处。在一个实施方案中，杂烷基包含两个氧原子。在一个实施方案中，杂烷基包含一个氧和一个氮原子。在一个实施方案中，杂烷基包含两个氮原子。非限制性的示例性杂烷基包括-ch2och2ch2och3、-och2ch2och2ch2och3、-ch2nhch2ch2och2、-och2ch2nh2、-nhch2ch2n(h)ch3、-nhch2ch2och3和-och2ch2och3。
为了本发明的目的，术语“杂芳基”或“杂芳族”是指具有5至14个环原子的单环和双环芳族环体系(即，c5-c14杂芳基)，其中所述环之一的至少一个碳原子被独立地选自由氧，氮和硫组成的组的杂原子替换。在一个实施方案中，杂芳基含有1，2，3或4个独立地选自由氧，氮和硫组成的组的杂原子。在一个实施方案中，杂芳基具有三个杂原子。在另一个实施方案中，杂芳基具有两个杂原子。在另一个实施方案中，杂芳基具有一个杂原子。非限制性的示例性杂芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、苯并恶唑基、色烯基(chromenyl)、呫吨基、2h-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、异吲哚基、3h-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、噌啉基、喹唑啉基、蝶啶基、4ah-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉、吩嗪基(phenazinyl)、噻唑基、异噻唑基、吩逸哇基(phenothiazolyl)、异恶唑基、呋咕基(furazanyl)和吩恶嗪。在一个实施方案中，所述杂芳基选自噻吩基(例如，噻吩-2-基和噻吩-3-基)、呋喃基(例如、2-呋喃基和3-呋喃基)、吡咯基(例如、1h-吡咯-2-基和1h-吡咯-3-基)、咪唑基(例如，2h-咪唑-2-基和2h-咪唑-4-基)、吡唑基(例如、1h-吡唑-3-基、1h-吡唑-4-基和1h-吡唑-5-基)、吡啶基(例如、吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基)、嘧啶基(例如、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧啶-5-基)、噻唑基(例如、噻唑-2-基、噻唑-4-基和噻唑-5-基)、异噻唑基(例如，异噻唑-3-基、异噻唑-4-基和异噻唑-5-基)、恶唑基(例如，恶唑-2-基、恶唑-4-基和恶唑-5-基)、异恶唑基(例如，异恶唑-3-基、异恶唑-4-基和异恶唑-5-基)和吲唑基(例如、1h-吲唑-3-基)。术语“杂芳基”还旨在包括可能的n-氧化物。非限制性的示例性n-氧化物是吡啶基n-氧化物。
在一个实施方案中，杂芳基是5-或6元杂芳基。在一个实施方案中，所述杂芳基是5元杂芳基，即杂芳基为具有5个环原子的单环芳香环体系，其中环的至少一个碳原子被独立地选自氮、氧和硫的杂原子替换。非限制性的示例性5元杂芳基包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、恶唑基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基和异恶唑基。
在另一个实施方案中，杂芳基是6元杂芳基，例如，杂芳基是具有6个环原子的单环芳环体系，其中环的至少一个碳原子被替换为氮原子。非限制性的示例性6元杂芳基包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的杂芳基”是指未取代的或被独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、烷基、任选取代的环烷基、烯基、炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯基烷基和(杂环基)烷基的一个至四个取代基例如一个或两个取代基取代的如上所定义的杂芳基。在一个实施方案中，任选取代的杂芳基具有一个取代基。任何可用的碳或氮原子可以被取代。非限制性的示例性任选取代的5元杂芳基包括但不限于：
术语任选取代的杂芳基还旨在包括具有稠合的任选取代的环烷基和稠合的任选取代的杂环环的基团。非限制性实例包括：
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“杂环”或“杂环基”是指饱和的和部分不饱和的(例如，含有一个或两个双键)的环状基团，其含有具有三至十四个环成员(即，3至14元杂环基)的一个、两个或三个环，其中所述环之一的至少一个碳原子被替换为杂原子。每个杂原子独立地选自由氧、硫，包括亚砜和砜，和/或氮原子组成的组，其可以被氧化或季铵化。术语“杂环基”旨在包括这样的基团，其中环-ch2-被替换为-c(＝o)-，例如，环状脲基，如2-咪唑啉酮和环酰胺基团，如β-内酰胺、γ-内酰胺、δ-内酰胺、ε-内酰胺和哌嗪-2-酮。术语“杂环基”也旨在包括具有稠合的任选取代的芳基的基团，例如，二氢吲哚基，苯并二氢吡喃-4-基。在一个实施方案中，杂环基基团选自含有一个环和一个或两个氧和/或氮原子的5-或6-元环状基团。杂环基可通过任何可利用的碳或氮原子任选地被连接到分子的其余部分。非限制性的示例性杂环基团包括二氧环基(dioxanyl)、四氢吡喃基、2-氧代吡咯烷-3-基、哌嗪-2-酮、哌嗪-2,6-二酮、2-咪唑啉酮、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和二氢吲哚基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“任选取代的杂环基”是指未取代的或被独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、甲酰氨基、磺酰氨基、烷基羰基、烷氧基羰基、cf3c(＝o)-、芳基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、羧基烷基、烷基、任选取代的环烷基、烯基、炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、烷氧基烷基、(氨基)烷基、(甲酰氨基)烷基、巯基烷基和(杂环基)烷基的一个至四个取代基取代的如上所定义的杂环基。取代可以发生在任何可用的碳或氮原子或两者上。非限制性的示例性任选取代的杂环基包括：
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“氨基”是指-nr7ar7b，其中r7a和r7b各自独立为氢、烷基、羟烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、或任选取代的杂芳基、或r7a和r7b连在一起形成3～8元任选取代的杂环基。非限制性的示例性氨基包括-nh2和-n(h)(ch3)。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“(氨基)烷基”是指被氨基取代的烷基。非限制性的示例性氨基烷基包括-ch2ch2nh2和-ch2ch2n(h)ch3、-ch2ch2n(ch3)2和-ch2n(h)环丙基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“甲酰氨基”是指式-c(＝o)nr9ar9b的基团，其中r9a和r9b各自独立为氢、任选取代的烷基、羟烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基或任选取代的杂芳基，或r9a和r9b与它们所连接的氮连在一起形成3～8元任选取代的杂环基。在一个实施方案中，r9a和r9b各自独立地为氢或任选取代的烷基。在一个实施方案中，r9a和r9b与它们所连接的氮连在一起形成3～8元任选取代的杂环基。非限制性的示例性甲酰氨基基团包括，但不限于-conh2、-con(h)ch3、-con(ch3)2、-con(h)ph、
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“磺酰氨基”是指式-so2nr8ar8b的基团，其中r8a和r8b各自独立为氢、任选取代的烷基或任选取代的芳基，或r8a和r8b与它们所连接的氮连在一起形成3～8元杂环基。非限制性的示例性磺酰氨基包括-so2nh2、-so2n(h)ch3和-so2n(h)ph。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷基羰基”是指被烷基取代的羰基，即-c(＝o)-。非限制性的示例性烷基羰基是-coch3。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“芳基羰基”是指被任选取代的芳基取代的羰基，即-c(＝o)-。非限制性的示例性芳基羰基是-coph。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷氧基羰基”是指被烷氧基取代的羰基，即-c(＝o)-。非限制性的示例性烷氧基羰基包括-c(＝o)ome、-c(＝o)oet和-c(＝o)otbu。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“烷基磺酰基”是指被任何上述任选取代的烷基取代的磺酰基，即，-so2-。非限制性的示例性烷基磺酰基是-so2ch3。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“芳基磺酰基”是指被任何上述任选取代的芳基取代的磺酰基，即，-so2-。非限制性的示例性芳基磺酰基是-so2ph。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“巯基烷基”是指被-sh基团取代的任何上述烷基。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“羧基”是指式-cooh的基团。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“羧基烷基”是指用-cooh取代的任何上述烷基。非限制性的示例性羧基烷基是-ch2co2h。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指被一个，两个或三个任选取代的芳基取代的烷基。在一个实施方案中，任选取代的芳烷基是被一个任选取代的芳基取代的c1-4烷基。在一个实施方案中，任选取代的芳烷基是被一个任选取代的芳基取代的c1或c2烷基。在一个实施方案中，任选取代的芳烷基是被一个任选取代的苯基取代的c1或c2烷基。非限制性的示例性任选取代的芳烷基包括苄基、苯乙基、-chph2、-ch2(4-f-ph)、-ch2(4-me-ph)、-ch2(4-cf3-ph)和-ch(4-f-ph)2。
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“(杂环基)烷基”是指被任选取代的杂环基取代的烷基。在一个实施方案中，(杂环基)烷基是被一个任选取代的杂环基团取代的c1-4烷基。非限制性的示例性(杂环基)烷基包括：
为了本发明的目的，单独使用或作为另一基团的一部分的术语“(甲酰氨基)烷基”是指用一个或两个甲酰氨基基团取代的烷基。在一个实施方案中，(甲酰氨基)烷基为被一个甲酰氨基取代的c1-4烷基。在另一个实施方案中，(甲酰氨基)烷基是被两个甲酰氨基基团取代的c1-4烷基。非限制性的示例性(甲酰氨基)烷基包括-ch2conh2、-c(h)ch3-conh2、-ch2con(h)ch3和-ch(co2nh2)ch2ch2co2nh2
实施例
实施例1
2-氨基-6-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-甲氧基-1h-吲哚-3-羧酸乙酯(s6)的合成
将s3(2.26g，20mmol)溶解在无水dmf(50ml)中并将溶液冷却至0℃。以小份加入nah(1.2g，60％在矿物油中，30mmol)。在0℃下搅拌所得的反应混合物0.5小时并且加入已知化合物s1和s2的无水dmf溶液(20mmol,j.med.chem.55:449-464(2012))。将所得溶液在0℃下搅拌3小时，然后用1nhcl淬灭。用乙酸乙酯萃取水层，并用盐水洗涤合并的有机层并用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器中除去挥发性组分，并通过快速柱色谱纯化残余物。所需产物s4分离为具有其他结构异构体杂质的无色油(4.17g，61％产率)。1hnmr(300mhz,cdcl3):8.41(s,1h),7.11(s,1h),5.60(s,1h),4.24(q,j＝7.03hz,2h),4.01(s,3h),1.25(t,j＝7.14hz,3h)。
将s4(1.43g,4.2mmol)，3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)异恶唑(2.34g，10.5mmol)和k2co3(2.03g，14.7mmol)加入到圆底烧瓶中。在室温下加入dme(30ml)和水(15ml)。将溶液脱气，然后一次性加入pd(pph3)4(242mg，0.21mmol)。将溶液再次脱气，然后加热回流14小时。用乙酸乙酯萃取水层，用盐水洗涤合并的有机层，然后用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器上除去挥发性组分，并将残余物通过快速柱色谱纯化。所需产物s5以>80％收率分离(1.47g，被异构体和频哪醇成分污染)。1hnmr(cdcl3,300mhz):8.10(s,1h),7.27(s,1h),5.78(s,1h),4.35(q,j＝7.12hz,2h),3.99(s,3h),2.33(s,3h),2.18(s,3h),1.37(t,j＝7.14hz,3h)。
在80℃下向s5(1.47g)的acoh(30ml)溶液中以小份加入0.8gzn粉。将混合物在80℃下搅拌1小时，加入另一0.8gzn粉，并且将反应保持在相同温度下2小时。将反应冷却，过滤，并用acoh洗涤。合并acoh溶液，并在旋转蒸发器上除去挥发性组分。通过快速柱色谱纯化得到所需产物s6(0.55g，约40％收率)。1hnmr(cdcl3,300mhz):8.01(br,s,1h),7.44(s,1h),6.78(s,1h),5.73(br,s,2h),4.40(q,j＝7.08hz,2h),3.82(s,3h),2.29(s,3h),2.15(s,3h),1.45(t,j＝7.08hz,3h)。esi-ms计算c17h20n3o4[m+h]+:330.15,实测:330.25。
实施例2
4-(4-氯代-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(s13)的合成
步骤1：在室温下向圆底烧瓶中加入s6(0.37g，1.1mmol)和mecn(20ml)。将干燥hcl通过mecn鼓泡30分钟并将反应混合物升温至回流(约82℃)2.5小时。然后将反应冷却至室温并在旋转蒸发器中除去挥发性组分。向该粗混合物中加入10％naoh水溶液(20ml)和etoh(50ml)，并将该溶液在加热至回流6小时。然后在旋转蒸发器中除去挥发性组分，并用2nhcl水溶液酸化含水残余物。在0℃下使产物s12沉淀。过滤混合物得到0.278g纯的s12(78％产率，2步)。1hnmr(dmso-d6,300mhz):7.57(s,1h),7.20(s,1h),3.81(s,3h),2.37(s,3h),2.27(s,3h),2.08(s,3h)。
步骤2：向圆底烧瓶中加入s12(0.278g，0.8mmol)和pocl3(8ml)。将混合物在90℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温并在旋转蒸发器中除去挥发性组分。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，并且用nahco3饱和水溶液将ph调节至8。过滤混合物得到0.208g的棕色固体的s13(75％产率)。1hnmr(dmso-d6,300mhz):7.81(s,1h),7.43(s,1h),3.89(s,3h),2.69(s,3h),2.31(s,3h),2.11(s,3h)。
实施例3
4-(4-氯代-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(cd54)的合成
步骤1：在175℃下将s6(0.45g，1.4mmol)，甲酸铵(1.06g，17mmol)和甲酰胺(16ml)加热14小时。将反应冷却至室温并加入水。将混合物过滤，得到褐色固体的s7(0.24g，0.77mmol，55％收率)。1hnmr(dmso-d6,300mhz):8.09(s,1h),7.57(s,1h),7.24(s,1h),3.81(s,3h),3.30(s,1h),2.62(s,3h),2.06(s,3h),esi-ms计算c16h15n4o3[m+h]+:311.11,实测:311.75
步骤2：将s7(0.24g，0.77mmol)溶解在pocl3(10ml)中，并将混合物在90℃下加热5小时。将混合物冷却至室温并在旋转蒸发器中除去挥发性组分。在0℃下加入乙酸乙酯(20ml)，接着加入nahco3(20ml)和水(20ml)。过滤该混合物并且收集到褐色固体的所需的cd54产物(0.17g)。用乙酸乙酯萃取水层，并用盐水洗涤合并的有机层并用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器中除去挥发性组分得到棕色固体(80mg，纯度90的cd54)。1hnmr(dmso-d6,300mhz):8.74(s,1h),7.84(s,1h),7.45(s,1h).3.89(s,3h),3.31(br,s,1h),2.29(s,3h),2.09(s,3h).13cnmr(dmso-d6,75mhz):167.84,161.17.155.84,122.24,120.26,116.96,115.15,113.11,105.80,57.84,13.36,12.39。esi-ms计算c16h1435cln4o2[m+h]+:329.08,实测:329.67
实施例4
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(1-甲基-1h-吲唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号17)的合成
将4-(4-氯代-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(cd54,56mg)和1-甲基-1h-吲唑-3-胺(60mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入五滴浓hcl。该混合物加热回流过夜。然后在旋转蒸发器上浓缩反应并通过反相hplc纯化剩余的残余物得到19mg的，作为cf3co2h的盐的化合物编号17。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.57(s,1h),8.17(s,1h),7.91(d,j＝8.42hz,1h),7.70(d,j＝8.42hz,1h),7.62-7.54(m,1h),7.54(s,1h),7.32(d,j＝7.40hz,1h),4.20(s,3h),3.98(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)。esi-ms计算c24h22n7o2[m+h]+＝440.18，实测：440.58
实施例5
4-(4-氯代-2-异丙基-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(cd177)的合成
步骤1：将s6(400mg)溶解于异丁腈(2ml)中。将hcl气体鼓入溶液中40分钟，将溶液在90℃下加热3小时。在真空中浓缩溶剂并将残余物溶解在乙醇(40ml)中。将naoh(10％，30ml)加入到乙醇溶液中，并将混合物加热回流过夜。将溶液冷却至室温并在真空中浓缩。加入乙酸乙酯(20ml)，接着加入hcl水溶液来设定ph＝4-5。将沉淀物通过过滤收集并用乙醚洗涤残余物得到0.26g的cd171。1hnmr(300mhz,dmso-d6):12.05(s,1h),12.00(s,1h),7.54(s,1h),7.18(s,1h),3.81(s,3h),2.97(七重峰,j＝6.75hz,1h),2.26(s,3h),2.06(s,3h),1.25(d,j＝6.80hz,6h)
步骤2：将cd171(0.26g)与磷(ⅴ)氯氧化物(5ml)混合，并在90℃下加热6小时。在真空中浓缩该混合物并用过量的nahco3饱和水溶液中和。加入乙酸乙酯(30ml)，并将该沉淀物通过过滤收集。用乙醚洗涤固体残余物以提供120mg的cd177(43％产率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6):12.52(s,1h),7.79(s,1h),7.38(s,1h),3.88(s,3h),3.19(七重峰,j＝6.88hz,1h),2.28(s,3h),2.09(s,3h),1.33(d,j＝6.88hz,6h)。
实施例6
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-2-异丙基-6-甲氧基-n-(1-甲基-1h-吲唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号18)的合成
将4-(4-氯代-2-异丙基-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(cd177,70mg)和1-甲基-1h-吲唑-3-胺(60mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入五滴浓hcl。将该混合物加热回流过夜。然后在旋转蒸发器中浓缩反应并通过反相hplc纯化剩余的残余物，得到40mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号18。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.97(d,j＝8.32hz,1h),7.90(s,1h),7.67(d,j＝8.53hz,1h),7.62-7.55(m,1h),7.49(s,1h),7.31(t,j＝7.42hz,1h),4.16(s,3h),3.89(s,3h),3.36(七重峰,j＝6.78hz,1h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.50(d,j＝6.90hz,6h)。esi-ms计算c27h28n7o2[m+h]+＝482.23，实测：482.42。
实施例7
4-(4-氯代-6-甲氧基-2-(四氢-2h-吡喃-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(cd197)的合成
步骤1：将s6(300mg)，四氢吡喃基-4-甲腈(330mg)和二恶烷(10ml)置于圆底烧瓶中。将hcl气体鼓入溶液中40分钟，并将溶液在80℃下加热5小时。在真空中浓缩溶剂并将残余物溶解在乙醇(30ml)中。将naoh(10％，30ml)加入到该乙醇溶液中，并将混合物加热回流12小时。将溶液冷却至室温并在真空中浓缩。加入乙酸乙酯(20ml)，随后加入hcl水溶液以设定ph＝4-5。将沉淀物通过过滤收集并用乙醚洗涤残余物得到0.12g的cd188(产率33％)。esi-ms计算c21h23n4o4[m+h]+＝395.17，实测：395.58。
步骤2：将cd188(0.12g)与磷(ⅴ)氯氧化物(10ml)混合，并在90℃下加热6小时。在真空中浓缩该混合物，并用过量的nahco3饱和水溶液中和。加入乙酸乙酯(20ml)，并通过过滤收集该沉淀物。用乙醚洗涤固体残余物以提供80mg的cd197(产率63％)。
实施例8
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(1-甲基-1h-吲唑-3-基)-2-(四氢-2h-吡喃-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号20)的合成
将4-(4-氯代-6-甲氧基-2-(四氢-2h-吡喃-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(cd197,28mg)和1-甲基-1h-吲唑-3-胺(60mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将该混合物加热回流过夜。然后在旋转蒸发器中浓缩反应并通过反相hplc纯化剩余的残余物，得到13mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号21。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.93(d,j＝8.16hz,1h),7.88(s,1h),7.68(d,j＝8.35hz,1h),7.64-7.54(m,1h),7.49(s,1h),7.34-7.24(m,1h),4.17(s,3h),4.08(dt,j＝6.13,2.73hz,2h),3.88(s,3h),3.70-3.45(m,2h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),2.10-1.98(m,5h)。esi-ms计算c29h30n7o3[m+h]+＝524.24，实测：524.50。
实施例9
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号1)的合成
将s13(68mg)，3-甲基-1-苯基-1h-吡唑-5-胺(80mg)，nahco3(100mg)和无水dmso(3ml)在130℃下加热过夜。然后将混合物通过反相hplc纯化，得到5mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号1(产率4％)。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.56-7.46(m,3h),7.43(s,1h),7.42-7.28(m,3h),6.52(s,1h),3.84(s,3h),2.61(s,3h),2.40(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)。esi-ms计算c27h26n7o2[m+h]+＝480.21；实测：480.67。
实施例10
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(3-苯基-1h-吡唑-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号2)的合成
将s13(70mg)，5-苯基-1h-吡唑-4-胺(70mg)，nahco3(100mg)和无水dmso(3ml)在130℃下加热16小时。然后将混合物通过反相hplc纯化，得到3mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号2(产率3％)。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.01(s,1h),7.72-7.66(m,2h),7.44(s,3h),7.42-7.32(m,3h),3.87(s,3h),2.57(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h)。esi-ms计算c26h24n7o2[m+h]+＝466.20；实测：466.75。
实施例11
4-(4-((4-异丙基-5-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)硫代)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号3)的合成
将s13(68mg)，4-异丙基-5-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-硫醇(64mg)，和k2co3(64mg)在一个圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在130℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到45mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号3(产率50％)。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.70(s,1h),7.42(s,1h),5.00-4.90(m,1h),3.96(s,3h),2.86(s,3h),2.54(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.62(d,j＝6.99hz,6h)。esi-ms计算c23h26n7o2s[m+h]+＝464.19；实测：464.33。
实施例12
1-异丙基-5-甲基-3-苯基-1h-吡唑-4-胺(ce261tfa盐)的合成
步骤1：将2-(羟基亚氨基)-1-苯基丁烷-1,3-二酮(1.3g)和异丙基肼(500mg)溶解在乙醇中。将溶液在环境温度下搅拌过夜。通过旋转蒸发器除去挥发性组分。加入乙酸乙酯和水，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器上浓缩。
步骤2：将前面剩余的残余物溶解在乙酸(20ml)中，随后加入zn粉(1.8g)。将混合物在80℃加热过夜。过滤该混合物并浓缩滤液。在制备型hplc上纯化剩余的残余物，得到96mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物ce261。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.65-7.57(m,2h),7.54-7.38(m,3h),5.40-5.10(宽单峰,2h),4.61(七重峰,j＝6.63hz,1h),2.43(s,3h),1.49(d,j＝6.63hz,6h).13c(75mhz,meod-d4):145.85,135.02,132.56,130.13,129.94,129.17,108.85,52.08,22.61,8.92。esi-ms计算c13h18n3[m+h]+＝216.15；实测：216.50。
实施例13
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-5-甲基-3-苯基-1h-吡唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号4)的合成
将s13(70mg)和1-异丙基-5-甲基-3-苯基-1h-吡唑-4-胺(70mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器上浓缩反应混合物并通过hplc纯化剩余的残余物，得到38mg、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号4。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.80-7.66(m,2h),7.50-7.40(m,1h),7.36-7.20(m,4h),4.80-4.60(m,1h),3.92(s,3h),2.56(s,3h),2.46-2.30(m,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h),1.59(d,j＝5.75hz,6h)。esi-ms计算c30h32n7o2[m+h]+＝522.26；实测：522.58。
实施例14
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(5-甲基-4-苯基-1h-吡唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号5)的合成
将s13(70mg)和5-甲基-4-苯基-1h-吡唑-3-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到2mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号5。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.52(s,1h),7.43-7.40(m,5h),7.30(s,1h),3.82(s,3h),2.72(s,3h),2.45(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)。esi-ms计算c27h26n7o2[m+h]+＝480.21；实测：480.17。
实施例15
2-(恶唑-2-基)-4-苯基噻唑-5-胺(ce267)的合成
将恶唑-2-甲醛(1g)，硫(352mg)和2-氨基-2-苯基乙腈-hcl(1.69g)在乙醇(50ml)中混合。加入三乙基胺(2.1ml)，并将该混合物在50℃下加热1小时。将混合物冷却至环境温度并加入羟胺水溶液(通过氢氧化钠中和的羟胺-hcl1.90g)。将反应在环境温度下搅拌过夜。将反应混合物过滤，浓缩并在乙酸乙酯和水之间分配。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器上浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到260mg的ce267。1hnmr(300mhz,dmso-d6):8.18(d,j＝0.77hz,1h),7.77-7.71(m,2h),7.41(t,j＝7.65hz,2h),7.33(d,j＝0.76hz,1h),7.24(t,j＝7.35hz,1h),6.50(s,1h).13c(75mhz,dmso-d6):158.32,150.83,142.08,136.92,136.59,134.41,130.56,130.45,128.39,128.23。esi-ms计算c12h10n3os[m+h]+＝244.05；实测：244.42。
实施例16
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-2-(恶唑-2-基)-4-苯基噻唑-5-胺(化合物编号6)的合成
将s13(230mg)和2-(恶唑-2-基)-4-苯基噻唑-5-胺(260mg)溶解在异丙醇(20ml)中。通过玻璃吸管加入十一滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到8mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号6。1hnmr(300mhz,dmso-d6):12.00(s,1h),10.08(s,1h),8.34(s,1h),8.08(d,j＝7.80hz,2h),7.80(s,1h),7.54(t,j＝7.62hz,2h),7.50(s,1h),7.40(t,j＝7.33hz,1h),7.28(s,1h),3.78(s,3h),2.64(s,3h),2.29(s,3h),2.09(s,3h)。esi-ms计算c29h24n7o3s[m+h]+＝550.17；实测：550.75。
实施例17
1-(3-氯代苯基)-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(ce280)的合成
步骤1：将(3-氯苯基)肼(415mg)，3-氧代丁腈(895mg)和乙酸钠(415mg)溶解在乙醇(20ml)中。将该溶液加热回流过夜。浓缩反应混合物并在乙酸乙酯和水之间分配。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器上浓缩。
步骤2：将前面的剩余残余物溶于甲醇中并加入三氟乙酸(1ml)。该混合物在环境温度下过夜。浓缩反应混合物，并通过碳酸氢钠饱和溶液中和。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物，得到0.84g的ce280。1hnmr(300mhz,cdcl3):7.67-7.61(m,1h),7.52-7.45(m,1h),7.42-7.34(m,1h),7.32-7.25(m,1h),7.26(s,1h),5.47(s,1h),3.77(s,2h),2.22(s,3h).13c(75mhz,cdcl3):150.16,145.46,140.09,135.27,130.53,127.07,123.88,121.48,91.61,14.11。esi-ms计算c10h1135cln3[m+h]+＝208.06；实测：208.33。
实施例18
n-(1-(3-氯代苯基)-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号7)的合成
将三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(18mg)和2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘(26mg)在无水甲苯中混合。并将该混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-(3-氯苯基)-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(1ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物，并通过hplc纯化混合物，得到40mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号7。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.54-7.49(m,1h),7.45-7.42(m,1h),7.43(s,1h),7.42-3.80(m,1h),7.34-2.25(m,1h),7.27(s,1h),6.52(s,1h),3.84(s,3h),2.61(s,3h),2.39(s,3h),2.30(s,3h),2.13(s,3h)。esi-ms计算c27h2535cln7o2[m+h]+＝514.18；实测：514.33。
实施例19
n-(1,3-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号8)的合成
根据用于制备化合物编号7的相同程序从s13(68mg)和1,3-二甲基-1h-吡唑-5-胺(50mg)制备化合物编号8。化合物编号8分离为40mg的cf3co2h盐。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.46(s,1h),7.43(s,1h),6.25(s,1h),3.87(s,3h),3.76(s,3h),2.70(s,3h),2.31(s,3h),2.30(s,3h),2.14(s,3h)。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.20；实测：418.92。
实施例20
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号9)的合成
根据用于制备化合物编号7的相同程序从s13(70mg)和1-异丙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(640mg)制备化合物编号9。化合物编号9分离为26mg的cf3co2h盐。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.45(s,1h),7.18(s,1h),6.18(s,1h),4.59(七重峰,j＝6.68hz,1h),3.83(s,3h),2.70(s,3h),2.32(s,3h),2.30(s,3h),2.13(s,3h),1.47(d,j＝6.66hz,6h)。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.67。
实施例21
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号21)的合成
根据用于制备化合物编号7的相同程序从s13(102mg)和2-甲基-5-(三氟甲基)吡唑-3-胺(100mg)制备化合物编号21。化合物编号21被分离成29mg的cf3co2h的盐。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.83(s,1h),7.47(s,1h),6.72(s,1h),3.92(s,3h),3.88(s,3h),2.67(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h)。esi-ms计算c22h21f3n7o2[m+h]+＝472.17，实测：472.33。
实施例22
1-异丙基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-胺的合成
将(e)-4-氨基-4-乙氧基-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-酮(1.0g)异丙基肼-hcl(1.21g)和乙酸钠(1.4g)在圆底烧瓶中混合。加入乙醇(20ml)并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应混合物并将剩余的残余物溶解在乙酸乙酯中，随后用水萃取。收集有机层，用无水硫酸钠干燥。将固体滤出，并用旋转蒸发器除去溶剂。使用剩余的残余物(1.12g)而不进一步纯化。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.79(s,1h),4.37(七重峰,j＝6.67hz,1h),1.47(d,j＝6.67hz,6h)。esi-ms计算c7h11f3n3[m+h]+＝194.09，实测：194.17。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号22)的合成
根据用于制备化合物编号7的相同程序从s13(102mg)和1-异丙基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-胺(174mg)制备化合物编号22。化合物编号22被分离为60mg的cf3co2h的盐。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.72(s,1h),7.48(s,1h),6.45(s,1h),4.65(七重峰,j＝6.60hz,1h),3.90(s,1h),2.67(s,1h),2.31(s,1h),2.14(s,1h),1.51(d,j＝6.67hz,6h)。esi-ms计算c24h25f3n7o2[m+h]+＝500.20，实测：500.42。
实施例23
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号10)的合成
根据用于制备化合物编号7的相同程序从s13(68mg)和1-甲基-1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-胺(60mg)制备化合物编号10。化合物编号10被分离为32mg的cf3co2h盐。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.65(d,j＝3.99hz,1h),8.38(d,j＝8.15hz,1h),7.89,7.48,7.31(dd,j＝8.08,4.55hz,1h),4.17(s,3h),3.86(s,3h),2.71(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h)。esi-ms计算c24h23n8o2[m+h]+＝455.19；实测：455.50。
实施例24
1-甲基-1h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺(ce311)的合成
将4-氯烟腈(500mg)和甲基肼(828mg)溶解在乙醇(20ml)中。将混合物加热回流过夜。浓缩反应混合物并在乙酸乙酯和水之间分配。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器中浓缩。剩余的残余物(187mg的ce311)直接用于下一步骤。1hnmr(300mhz,cdcl3):8.85(d,j＝1.01hz,1h),8.31(d,j＝6.11hz,1h),7.05(dd,j＝6.12,1.06hz,1h),4.50-4.20(br,2h),3.81(s,3h).13c(75mhz,cdcl3):147.93,144.54,143.98,143.70,112.55,103.50,34.88。esi-ms计算c7h9n4[m+h]+＝149.08；实测：149.50。
实施例25
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号11)的合成
根据用于制备化合物编号7的相同程序从s13(70mg)和1-甲基-1h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺(60mg)制备化合物编号11。化合物编号11被分离为47mg的cf3co2h盐。1hnmr(300mhz,cdcl3):9.71(s,1h),8.46(d,j＝6.97hz,1h),8.12(s,1h),8.08(d,j＝7.00hz,1h),7.38(s,1h),4.23(s,3h),3.98(s,3h),2.65(s,3h),2.34(s,3h),2.18(s,3h)。esi-ms计算c24h23n8o2[m+h]+＝455.19。
实施例26
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吲唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号12)的合成
将s13(90mg)和1-甲基-1h-吲唑-3-胺(90mg)溶解在异丙醇(30ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到60mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号12。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.44(d,j＝7.88hz,1h),7.84(s,1h),7.68(d,j＝8.62hz,1h),7.57(t,j＝7.63hz,1h),7.47(s,1h),7.30(t,j＝7.55hz,1h),4.16(s,3h),3.86(s,3h),2.73(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h)。esi-ms计算c25h24n7o2[m+h]+＝454.20；实测：454.42。
实施例27
5-氯代-1-甲基-1h-吲唑-3-胺(ce301)的合成
将5-氯-2-氟苯腈(600mg)和甲肼(1.1ml)溶解在乙醇(20ml)中。将混合物加热回流过夜。浓缩反应混合物并在乙酸乙酯和水之间分配。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器中浓缩。剩余的残余物(717mg的ce301)直接用于下一步骤。1hnmr(300mhz,cdcl3):7.48(s,1h),7.26(dd,j＝8.86,1.63hz,1h),7.11(d,j＝8.89hz,1h),4.20-3.90(br,2h),3.82(s,3h)。esi-ms计算c8h9cln3[m+h]+＝182.05；实测：182.67。
实施例28
n-(5-氯代-1-甲基-1h-吲唑-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号13)的合成
将s13(70mg)和5-氯-1-甲基-1h-吲唑-3-胺(100mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入五滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到18mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号13。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.92(s,2h),7.69(d,j＝9.01hz,1h),7.52(d,j＝9.01hz,1h),7.48(s,1h),4.15(s,3h),3.89(s,3h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.16(s,3h)。esi-ms计算c25h2335cln7o2[m+h]+＝488.16；实测：488.58。
实施例29
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(6-甲氧基-1-甲基-1h-吲唑-3-基)-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号19)的合成
将s13(68mg)和1-甲基-6-甲氧基-1h-吲唑-3-胺(80mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入六滴浓hcl。将该混合物加热回流过夜。然后在旋转蒸发器中浓缩反应并通过反相hplc纯化剩余的残余物，得到24mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号19。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.89(s,1h),7.75(d,j＝8.92hz,1h),7.47(s,1h),7.07(d,j＝1.95hz,1h),6.92(dd,j＝8.86,2.13hz,1h),4.11(s,3h),3.95(s,3h),3.90(s,3h),2.77(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h)。esi-ms计算c26h26n7o3[m+h]+＝484.21，实测：484.75。
实施例30
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号14)的合成
将s13(68mg)和吡唑并[1,5-a]吡啶-3-胺(84mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入五滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到55mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号14。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.67(d,j＝7.06hz,1h),8.22(s,1h),8.10-7.80(br,1h),7.68(d,j＝8.99hz,1h),7.47(s,1h),7.43-7.33(m,1h),7.06(t,j＝6.79hz,1h),3.89(s,3h),2.60(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h)。esi-ms计算c24h22n7o2[m+h]+＝440.18；实测：440.18。
实施例31
(2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(ce298)的合成
步骤1：将1-氨基吡啶鎓碘化物(10g)，2-丁炔酸乙酯(6.05g)，碳酸钾(7.45g)在无水dmf(50ml)中混合。将反应混合物在环境温度下搅拌3天。加入水(100ml)，乙酸乙酯(100ml)和己烷(100ml)的混合物，并通过过滤收集产物。用乙酸乙酯：己烷＝1：1的混合物洗涤滤饼，得到6.4g的2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(70％产率)。
步骤2：将6.4g2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯溶解在甲醇(40ml)和thf(40ml)的混合物中。向该混合物中加入8nnaoh(20ml)，并将该混合物在70℃下加热回流过夜。反应混合物的酸-碱处理得到4.1g的cd157(产率75％)，其不经进一步纯化即可使用。
步骤3：将cd157(350mg)和三乙胺(0.5ml)溶解于叔丁醇(5ml)中。经由注射器加入二苯基磷酰叠氮化物(dppa，0.65ml)。将反应混合物在环境温度下搅拌过夜，然后加热回流24小时。然后过滤该反应混合物，并用叔丁醇洗涤。将混合物浓缩并通过快速柱色谱法纯化得到116mg的ce298。1hnmr(300mhz,cdcl3):8.19(d,j＝6.77hz,1h),7.29(d,j＝7.99hz,1h),6.99(t,j＝7.68hz,1h),6.58(t,j＝6.68hz,1h),6.29(s,1h),2.32(s,3h),1.48(s,9h)。esi-ms计算c13h18n3o2[m+h]+＝248.14；实测：248.00。
实施例32
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号15)的合成
将ce298(116mg)和三乙基硅烷(0.1ml)溶解于二氯甲烷(4ml)中。加入三氟乙酸(6ml)，并将该混合物在环境温度下搅拌3小时。然后在旋转蒸发器中除去挥发性组分。加入s13(70mg)和异丙醇(5ml)，随后加入六滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到93mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号15。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.56(d,j＝6.96hz,1h),8.25(宽单峰,1h),7.57(d,j＝8.80hz,1h),7.47(s,1h),7.40-7.30(m,1h),6.99(t,j＝6.74hz,1h),3.95(s,3h),2.61(s,3h),2.44(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h)。esi-ms计算c25h24n7o2[m+h]+＝454.20；实测：454.42。
实施例33
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(cpd.no.16)的合成
将s13(120mg)和吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-胺(60mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入六滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到33mg作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号16。1hnmr(300mhz,meod-d4):9.07(dd,j＝7.16,1.64hz,1h),8.64(dd,j＝4.20,1.69hz,1h),8.47(s,1h),8.07(s,1h),7.47(s,1h),7.18(dd,j＝7.20,4.17hz,1h),3.93(s,3h),2.59(s,3h),2.34(s,3h),2.16(s,3h)。esi-ms计算c23h21n8o2[m+h]+＝441.18；实测：441.67。
实施例34
4-(4-((3-氯代苯基)硫代)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号23)的合成
将s13(68mg)，3-氯苯硫酚(85mg)和k2co3(64mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到38mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号23。esi-ms计算c23h20cln4o2s[m+h]+＝451.09；实测：451.23。1hnmr(300mhz,meod)δ7.77-7.71(m,2h),7.59(d,j＝6.9hz,1h),7.53-7.43(m,3h),3.92(s,3h),2.66(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)。
实施例35
4-(4-((2-氯代苯基)硫代)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号24)的合成
将s13(68mg)，2-氯苯硫酚(85mg)和k2co3(64mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到44mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号24。esi-ms计算c23h20cln4o2s[m+h]+＝451.09；实测：451.13.1hnmr(300mhz,meod)δ7.74(s,1h),7.69(dd,j＝7.8,1.6hz,1h),7.63(dd,j＝8.0,1.3hz,1h),7.48(td,j＝7.7,1.7hz,1h),7.42–7.35(m,2h),3.93(s,3h),2.56(s,3h),2.36(s,3h),2.19(s,3h)。
实施例36
4-(4-((2-异丙基苯基)硫代)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号25)的合成
将s13(68mg)，2-异丙基苯硫酚(85mg)和k2co3(64mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到40mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号25。esi-ms计算c26h27n4o2s[m+h]+＝459.18；实测：459.25.1hnmr(300mhz,meod)δ7.83(s,1h),7.65–7.59(m,1h),7.57–7.48(m,2h),7.40(s,1h),7.28(ddd,j＝7.8,6.2,2.7hz,1h),3.96(s,3h),3.52(dt,j＝13.8,6.8hz,1h),2.51(s,3h),2.37(s,3h),2.20(s,3h),1.26(d,j＝6.9hz,6h)。
实施例37
4-(4-((1h-吲哚-3-基)硫代)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号26)的合成
将s13(68mg)，3-巯基吲哚(90mg)和k2co3(64mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到30mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号26。esi-ms计算c25h22n5o2s[m+h]+＝456.14；实测：456.25.1hnmr(300mhz,dmso)δ12.08(s,1h),11.75(s,1h),7.88–7.81(m,2h),7.52(d,j＝8.1hz,1h),7.42(d,j＝7.9hz,1h),7.38(s,1h),7.20(t,j＝7.6hz,1h),7.07(t,j＝7.5hz,1h),3.93(s,3h),2.35(s,3h),2.33(s,3h),2.14(s,3h)。
实施例38
4-(4-((3-(叔丁基)苯基)硫代)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号27)的合成
将s13(68mg)，3-叔丁基苯硫酚(90mg)和k2co3(64mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到40mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号27。esi-ms计算c27h29n4o2s[m+h]+＝473.20；实测：473.44.1hnmr(300mhz,dmso)δ12.17(s,1h),7.84–7.29(m,6h),3.88(s,3h),2.51(s,3h),2.32(s,3h),2.12(s,3h),1.31(s,9h)。
实施例39
(r)-n-(苯并二氢吡喃-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号28)的合成
将s13(68mg)，(r)-苯并二氢吡喃-4-基胺(75mg)和cs2co3(244mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到1.5mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号28。esi-ms计算c26h26n5o3[m+h]+＝456.20；实测：456.44。
实施例40
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-1h-1,2,4-三唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号29)的合成
将s13(68mg)，1-异丙基-1h-1,2,4-三唑-5-胺(75mg)和cs2co3(244mg)在圆底烧瓶中混合。加入无水dmso(3ml)并将反应混合物在60℃下加热过夜。然后将反应冷却至环境温度并加入水(1ml)。在反相hplc上纯化该混合物，得到4mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号29。esi-ms计算c22h25n8o2[m+h]+＝433.21；实测：433.32。1hnmr(300mhz,meod)δ8.24(s,1h),7.50(s,1h),7.39(s,1h),5.07(dt,j＝13.3,6.5hz,1h),3.86(s,3h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.61(d,j＝6.7hz,6h)。
实施例41
n-(3-(叔丁基)-1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号30)的合成
将s13(70mg)和3-叔丁基-1,5-二甲基吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到30mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号30。向化合物中加入nahco3水溶液并用乙酸乙酯萃取混合物。将合并的有机层用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。在旋转蒸发器中除去挥发性组分得到固体。esi-ms计算c26h32n7o2[m+h]+＝474.26；实测：474.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.97(brs,1h),7.30(s,1h),3.88(brs,3h),3.80(brs,3h),2.52(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,6h),1.36(s,9h)。
实施例42
n-(5-(叔丁基)-1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号31)的合成
将s13(70mg)和5-叔丁基-1,3-二甲基吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到30mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号31。esi-ms计算c26h32n7o2[m+h]+＝474.26；实测：474.34。
实施例43
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(4-异丙基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号32)的合成
将s13(70mg)和4-异丙基-1h-吡唑-3-胺(88mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到2mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号32。esi-ms计算c23h26n7o2[m+h]+＝432.21；实测：432.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.76(s,1h),7.46(s,1h),7.28(s,1h),3.87(s,3h),3.04(td,j＝13.4,6.6hz,1h),2.77(s,3h),2.34(s,3h),2.16(s,3h),1.31(d,j＝6.9hz,6h)。
实施例44
4-(叔丁基)-n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)噻唑-5-胺(化合物编号33)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。并将该混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，4-叔丁基-1,3-噻唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(1ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物，并通过hplc纯化混合物，得到4mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号33。esi-ms计算c24h27n6o2s[m+h]+＝463.19；实测：463.25.1hnmr(300mhz,meod)δ9.02(s,1h),7.76(brs,1h),7.49(s,1h),3.92(s,3h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.18(s,3h),1.46(s,9h)。
实施例45
n-(1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号34)的合成
将s13(70mg)和1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基胺(88mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到30mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号34。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.19；实测：418.45.1hnmr(300mhz,meod)δ8.0-7.7(m,2h),7.47(s,1h),3.94(s,3h),3.93(s,3h),2.70(s,3h),2.34(s,3h),2.24(s,3h),2.17(s,3h)。
实施例46
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号35)的合成
将s13(70mg)和1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-胺(88mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到40mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号35。esi-ms计算c23h26n7o2[m+h]+＝432.21；实测：432.44.1hnmr(300mhz,meod)δ8.20(s,1h),7.48(s,1h),3.97(s,3h),3.85(s,3h),2.70(s,3h),2.34(s,3h),2.28(s,3h),2.20(s,3h),2.16(s,3h)。
实施例47
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号36)的合成
将s13(70mg)和1-异丙基-3,5-二甲基-1h-吡唑-4-胺(88mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到20mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号36。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.35.1hnmr(300mhz,meod)δ8.20(s,1h),7.49(s,1h),4.70-4.52(m,1h),3.97(s,3h),2.70(s,3h),2.33(s,3h),2.31(brs,1h),2.25(s,3h),2.16(s,3h),1.53(d,j＝6.4hz,6h)
实施例48
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号37)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。并将该混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-异丙基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(1ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物，并通过hplc纯化混合物，得到2mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号37。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.57(s,1h),7.48(s,1h),7.07(brs,1h),4.64(dt,j＝13.2,6.7hz,1h),3.84(s,3h),2.73(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h),1.95(s,3h),1.48(d,j＝6.7hz,6h)。
实施例49
4-(4-(3-氯代苯氧基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号95)的合成
将s13(50mg，0.146mmol)，3-氯苯酚(38mg，0.292mmol)和碳酸钾(61mg，0.438mmol)溶解于dmso(2ml)中，并加热至90℃。过夜后，将反应冷却至室温，加入盐水并用乙酸乙酯萃取所得溶液。将合并的乙酸乙酯萃取物用水洗涤两次，用盐水洗涤一次，并通过旋转蒸发除去乙酸乙酯。将所得油状物通过制备型hplc纯化并冷冻干燥，得到作为粉末的标题化合物的tfa盐。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.66(s,1h),7.53-7.26(m,5h),3.88(s,3h),2.60(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；esi-msm/z435.25(m+h)+。
实施例50
4-(6-甲氧基-2-甲基-4-(吡啶-3-基氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号96)的合成
以制备化合物编号95所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.93(s,1h),8.67(d,j＝5.52hz,1h),8.31(d,j＝8.55hz,1h),7.89(dd,j＝5.12,8.36hz,1h),7.77(s,1h),7.41(s,1h),3.91(s,3h),2.58(s,3h),2.34(s,3h),2.18(s,3h)；esi-msm/z402.58(m+h)+。
实施例51
n-(3-氯代苯基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号97)的合成
将浓盐酸(5滴)加入到s13(100mg，0.292mmol)和3-氯苯胺(82mg，0.642mmol)在异丙醇(3ml)中的溶液中。回流过夜后，将反应冷却，用旋转蒸发器除去溶剂，将粗产物通过制备型hplc纯化并冷冻干燥，得到作为粉末的标题化合物的tfa盐。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.69-7.66(m,1h),7.65(s,1h),7.56-7.46(m,2h),7.43(s,1h),7.38(dt,j＝1.92,7.06hz,1h),3.84(s,3h),2.69(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h)；esi-msm/z434.42(m+h)+。
实施例52
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-5-甲基-3-苯基异恶唑-4-胺(化合物编号98)的合成
以制备化合物编号97所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.09-7.91(m,1h),7.77-7.67(m,2h),7.47(s,1h),7.44-7.34(m,3h),3.92(s,3h),2.58(s,3h),2.52(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；esi-msm/z481.50(m+h)+。
实施例53
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号99)的合成
以制备化合物编号97所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.58(dt,j＝0.95.6.88hz,1h),8.21(s,1h),8.13-8.02(m,3h),7.53(td,j＝1.89,6.40hz,1h),7.43(s,1h),3.97(s,3h),2.42(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)；esi-msm/z440.67(m+h)+。
实施例54
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(4-甲氧基萘-1-基)-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号100)的合成
以制备化合物编号97所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.44-8.38(m,1h),8.04-7.98(m,1h),7.68-7.58(m,3h),7.49-7.31(m,1h),7.43(s,1h),7.09(d,j＝8.26hz,1h),4.12(s,3h),3.63(s,3h),2.59(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h)；esi-msm/z480.58(m+h)+。
实施例55
n-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(cpd,no.101)的合成
以制备化合物编号95所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.73(d,j＝6.56hz,1h),8.05(s,1h),7.97-7.82(m,2h),7.45-7.36(m,2h),4.02(s,3h),2.74(s,3h),2.35(s,3h),2.19(s,3h)；esi-msm/z441.58(m+h)+。
实施例56
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号102)的合成
以制备化合物编号97所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.40(d,j＝4.31hz,1h),8.14(dd,j＝1.35,7.94,1h),7.97-7.78(m,1h),7.82(s,1h),7.46(s,1h),7.30(dd,j＝4.94,7.95hz,1h),3.85(s,3h),2.61(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h)；esi-msm/z440.33(m+h)+。
实施例57
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-3-胺(化合物编号103)的合成
以制备化合物编号97所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.68(dd,j＝1.44,4.64hz,1h),8.22(dd,j＝1.50,8.17hz,1h),8.01(s,1h),7.91(s,1h),7.52(dd,j＝4.67,8.16hz,1h),7.48(s,1h),3.86(s,3h),2.60(s,3h),2.34(s,3h),2.16(s,3h)；esi-msm/z457.50(m+h)+。
实施例58
4-(6-甲氧基-2-甲基-4-(喹啉-4-基氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号104)的合成
以制备化合物编号95所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od和10％cdcl3)δppm9.12(d,j＝6.26hz,1h),8.69(d,j＝8.71hz,1h),8.27(d,j＝8.83hz,1h),8.23-8.14(m,1h),8.04-7.96(m,2h),7.65(s,1h),7.45(s,1h),3.78(s,3h),2.68(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；esi-msm/z452.67(m+h)+。
实施例59
4-(4-(5-溴代吡啶-3-基氧基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(化合物编号105)的合成
以制备化合物编号95所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od和10％cdcl3)δppm8.64-8.60(m,2h),8.13(t,j＝2.18hz,1h),7.72(s,1h),7.38(s,1h),3.91(s,3h),2.59(s,3h),2.34(s,3h),2.18(s,3h)；esi-msm/z480.25(m+h)+。
实施例60
n-(5-氯代吡啶-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号106)的合成
以制备化合物编号97所描述的类似方式制备该标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.86(d,j＝1.88hz,1h),8.52(s,1h),8.31(t,j＝2.10hz,1h),8.04(s,1h),7.47(s,1h),3.96(s,3h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；esi-msm/z435.33(m+h)+。
实施例61
4-(1-氯代-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(rx3)的合成
将7-溴代-1-氯代-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚(157mg,0.5mmol),3,5-二甲基异恶唑-4-硼酸频哪醇酯(655mg,2.0mmol)和k2co3(345mg,2.5mmol)溶解在dme/h2o(50ml/25ml)体系中。然后抽真空，并用n2再充满。在此之后，加入四(三苯膦)钯(0)，接着抽真空并用n2再充满。将反应混合物加热至回流过夜，当冷却到室温时，将其用etoac萃取，并将合并的有机级分浓缩，然后在制备型hplc中纯化。在冷冻干燥24小时之后获得作为浅黄色粉末的57mg(34.6％)的标题化合物。1hnmr(300mhz,meod-d4)δ8.26(d,1h,j＝6.0hz),8.09(s,1h),7.60(d,1h,j＝6.3hz),7.49(s,1h),3.98(s,3h),2.63(s,3h),2.20(s,3h)。esimsm/z[m+h]+计算＝328.77；实测＝328.83.
根据用于制备化合物编号255的相同方法可以从4-(1-氯代-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑和1-甲基-1h-吲唑-3-胺合成7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-甲氧基-n-(1-甲基-1h-吲唑-3-基)-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺。
实施例62
n-环己基-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号112)的合成
在圆底烧瓶中，加入s13(70mg)，nahco3(84mg)和无水dmso(3ml)。随后通过注射器加入环己胺(0.1ml)，并将该混合物在120℃下加热过夜。然后通过反相hplc纯化该反应混合物，得到32mg的、作为三氟乙酸的盐的标题产物。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.02(s,1h),7.41(s,1h),4.50-4.30(m,1h),3.96(s,3h),2.73(s,3h),2.31(s,3h),2.20-2.00(m,2h),2.14(s,3h),1.98-1.84(m,2h),1.84-1.60(m,3h),1.60-1.40(m,2h),1.40-1.20(m,1h)。esi-ms计算c23h28n5o2[m+h]+＝406.22；实测：406.42。
实施例63
n-环戊基-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号113)的合成
在圆底烧瓶中，加入s13(68mg)，nahco3(100mg)和无水dmso(3ml)。随后通过注射器加入环戊胺(0.1ml)，并将该混合物在120℃下加热过夜。然后通过反相hplc纯化该反应混合物，得到60mg的、作为三氟乙酸的盐的标题产物。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.02(s,1h),7.41(s,1h),4.86-4.70(m,1h),3.96(s,3h),2.73(s,3h),2.32(s,3h),2.32-2.18(m,2h),2.15(s,3h),2.00-1.70(m,6h)。esi-ms计算c22h26n5o2[m+h]+＝392.21；实测：392.25.
实施例64
3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(cf24)的合成
将4-甲基-3-氧代戊腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入甲基肼(26ml)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯萃取水层并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物，并得到所需产物0.98g。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.37(s,1h),3.61(s,3h),3.43(br,s,1h),2.83(七重峰,j＝6.89hz,1h),1.21(d,j＝6.93hz,6h).13cnmr(75mhz,cdcl3):158.17,144.75,88.24,34.18,28.35,23.10。esi-ms计算c7h14n3[m+h]+＝140.12，实测：140.33。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号65)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg，0.3mmol)，3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例65
n-(1,5-二甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号115)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg，0.3mmol)，1,5-二甲基-1h-吡唑-3-胺(70mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例66
1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(cf35)的合成
将3-氨基丁烯腈(2.0g，24.3mmol)溶解在乙醇(40ml)中。加入乙肼草酸盐(5g，33.3mmol)和乙酸钠(6g，73mmol)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩混合物，随后加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯萃取水层，并合并，干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并获得1.277g的所需产物。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.34(s,1h),3.91(q,j＝7.26hz,2h),2.16(s,3h),1.36(t,j＝7.26hz,3h)。esi-ms计算c6h12n3[m+h]+＝126.10，实测：126.33。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号116)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg，0.3mmol)，1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(75mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例67
1-(叔丁基)-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-胺(cf39)的合成
将(e)-4-氨基-4-乙氧基-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-酮(2g，10.9mmol)溶解在乙醇(40ml)中。加入叔丁基肼hcl盐(2.74g，22mmol)和乙酸钠(2.71g，33mmol)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到1.0g所需产物。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.77(s,1h),1.59(s,9h)。esi-ms计算c8h13f3n3[m+h]+＝208.11，实测：208.42。
n-(1-(叔丁基)-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号117)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13中(102mg，0.3mmol)，1-(叔丁基)-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-胺(120mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例68
n-(1-环戊基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号118)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13中(102mg，0.3mmol)，1-环戊基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(100mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例69
1-环丁基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(cf44)的合成
将3-氨基丁烯腈(670mg，8.16mmol)溶解在乙醇(40ml)中。加入环丁基肼hcl盐(1g，8.16mmol)和乙酸钠(1.6g，20mmol)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯萃取水层并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物，得到100mg所需产物。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.31(s,1h),4.60-4.40(m,1h),3.50(br,2h,nh2),2.80-2.50(m,2h),2.40-2.20(m,2h),2.16(s,3h),1.90-1.70(m,2h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12,实测：152.08.n-(1-环丁基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号119)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13中(102mg，0.3mmol)，1-环丁基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(100mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物在回流下加热过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例70
n-(3-叔丁基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号120)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13中(102mg，0.3mmol)，3-叔丁基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(100mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例71
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号121)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13中(102mg，0.3mmol)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(90mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例72
2-甲基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺的合成
将2-氧代环戊烷甲腈(1.5g，14mmol)溶解在乙醇(30ml)中。通过注射器加入甲肼(3.0ml，56mmol)，并将该反应混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至环境温度，并在旋转蒸发器中除去溶剂。加入乙酸乙酯和水，并用乙酸乙酯萃取水层。合并、干燥并在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.64g所需产物(以乙酸乙酯中的40％甲醇洗出所需产物)。通过己烷中的80％乙酸乙酯的洗脱梯度，我们还分离出腙，部分冷凝的产物，当在甲醇中用cf3co2h处理过夜时其转化为2-甲基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.70-3.50(m,2h,nh2),3.51(s,3h),2.52(t,j＝7.13hz,2h),2.46-2.34(m,2h),2.32-2.18(m,2h)。esi-ms计算c7h12n3[m+h]+＝138.10，实测：138.08。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(2-甲基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并-[c]吡唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号122)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg，0.3mmol)，2-甲基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(90mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例73
1-甲基-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺(cf55)的合成
将3-氟-2-吡啶甲腈(1.5g,12.3mmol)溶解在乙醇(30ml)中。加入甲肼(2.63ml，50mmol)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物并随后加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯萃取水层并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。剩余的残余物(1.28g)直接用于下一步而无需进一步纯化。1hnmr(300mhz,cdcl3):8.37(d,j＝4.33hz,1h),7.54(d,j＝8.56hz,1h),7.28-7.20(m,1h),4.40(br,2h),nh2),3.84(s,3h)。esi-ms计算c7h9n4[m+h]+＝149.08，实测：149.08。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号123)的合成
将pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)和binap(37mg，0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg，0.3mmol)，1-甲基-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-胺(90mg，0.6mmol)，k3po4(212mg，1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例74
1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-吲唑-3-胺(cf58)的合成
步骤1：将lihmds(10ml，1.0m，在thf中)冷却至-78℃10分钟。通过注射器加入环己酮(0.52ml，5.0mmol)，并将该混合物在-78℃下搅拌10分钟。通过注射器加入乙氧基羰基异硫氰酸酯(0.60ml，5.0mmol)，并将反应在-78℃下搅拌3小时，然后温热至环境温度过夜。然后加入水并且用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。使用剩余的残余物而不经纯化。
步骤2：将步骤1的残余物溶于乙醇中并通过注射器加入甲基肼(0.8ml，16mmol)。将溶液在环境温度下搅拌6小时，然后加热回流过夜。将反应混合物冷却至环境温度，并在旋转蒸发器中除去溶剂。加入乙酸乙酯和水，并用乙酸乙酯萃取水层。将有机层合并，干燥并在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.22g所需产物。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.50(s,3h),2.43(t,j＝5.87hz,2h),2.26(t,j＝5.76hz,2h),1.80-1.60(m,4h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12，实测：152.50。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-吲唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号124)的合成
将pd2(dba)3(64mg,0.07mmol)和binap(88mg,0.14mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(240mg,0.7mmol)，1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-吲唑-3-胺(220mg,1.4mmol)，k3po4(600mg,3.0mmol)和无水甲苯(10ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例75
2-甲基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-胺的合成
将2-氧代环己烷甲腈(2.0g,16mmol)溶解在乙醇(40ml)中。通过注射器加入甲肼(1.7ml,32mmol)，并将该反应混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至环境温度，并在旋转蒸发器中除去溶剂。加入乙酸乙酯和水，并用乙酸乙酯萃取水层。合并、干燥并在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物(以乙酸乙酯中的40％甲醇洗出所需产物)。获得1.58g的所需产物。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.50(s,3h),2.416(t,j＝5.54hz,2h),2.21(t,j＝5.49hz,2h),1.76-1.56n(m,4h).13cnmr(75mhz,cdcl3):147.63,140.71,99.76,33.91,23.49,23.36,23.32,19.56。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(2-甲基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号125)的合成
将pd2(dba)3(37mg,0.04mmol)和binap(50mg,0.08mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(136mg,0.4mmol)，2-甲基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-胺(144mg,1.0mmol)，k3po4(320mg,1.5mmol)和无水甲苯(10ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例76
n-(3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号126)的合成
将pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)和binap(37mg,0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg,0.3mmol)，5-氨基-3-叔丁基吡唑(84mg,0.6mmol)，k3po4(212mg,1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例77
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(5-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号127)的合成
将5-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基胺(100mg，0.6mol)和s13(102mg，0.3mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例78
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(6-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号59)的合成
将6-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基胺(100mg，0.6mol)和s13(102mg，0.3mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例79
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(7-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号129)的合成
将7-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基胺(100mg，0.6mol)和s13(102mg，0.3mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例80
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号58)的合成
将1h-吲唑-3-基胺(84mg,0.6mol)和s13(102mg，0.3mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
2-(3-氨基-1h-吲唑-1-基)乙醇(cf40)的合成
将2-氟苯腈(1g，8.25mmol)溶解在正丁醇(30ml)中。加入2-肼基乙醇(2.5g，33mmol)并将该混合物加热回流两天。在旋转蒸发器中浓缩混合物，随后加入乙酸乙酯和水。用乙酸乙酯萃取水层并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。剩余的残余物(1.11g)直接用于下一步而无需进一步纯化。esi-ms计算c9h12n3o[m+h]+＝178.10，实测：178.50。
2-(3-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吲唑-1-基)乙醇(化合物编号131)的合成
将2-(3-氨基-1h-吲唑-1-基)乙醇(290mg，1.6mol)和s13(170mg，0.5mmol)在无水异丙醇(15ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(6滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例82
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(4-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号132)的合成
将4-氟-1-甲基-1h-吲唑-3-基胺(102mg,0.6mol)和s13(102mg，0.3mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例83
3-(叔丁基)-n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)异噻唑-5-胺(化合物编号133)的合成
将3-叔丁基异噻唑-5-胺(90mg,0.6mol)和s13(102mg，0.3mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例84
步骤1：5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-羧酸甲酯(cf66-2)的合成
按照文献记载的方法(organicprocessresearch&development2006,10,712-716)制备3a,4,5,6-四氢-3-氧代-3h-吡咯并[1,2-c][1,2,3]恶二唑-7-鎓内盐。将3a,4,5,6-四氢-3-氧代-3h-吡咯并[1,2-c][1,2,3]恶二唑-7-鎓内盐(21.6mmol)溶解于1,2-二乙氧基乙烷(40ml)中。将该溶液在120℃下加热。通过注射器加入丙炔酸甲酯(1.68g，20mmol)，并将混合物保持回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩反应混合物并通过快速柱色谱纯化剩余的残余物。分离出315mg的cf66-2和分离出500mg的cf66-1。1hnmr(300mhz,cdcl3):7.80(s,1h),4.07(t,j＝7.32hz,2h),3.71(s,3h),2.99(t,j＝7.34hz,2h),2.66-2.50(m,2h).13cnmr(75mhz,cdcl3):163.84,149.91,145.21,107.69,51.12,48.20,25.96,23.84。esi-ms计算c8h11n2o2[m+h]+＝167.08，实测：167.25。
步骤2：5,6-二氢-4h-吡咯[1,2-b]吡唑-3-羧酸(cf70)的合成
将cf66-2(315mg)溶解于thf(5ml)中。随后加入水(5ml)和lioh-h2o(2g)，并将该溶液在环境温度下搅拌过夜。用二乙醚萃取水层，随后用1nhcl酸化。用乙酸乙酯萃取水层。将有机层合并，干燥，并在旋转蒸发器中浓缩。使用含有cf70(280mg)的剩余的残余物而无需进一步纯化。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.83(s,1h),4.14(t,j＝7.30hz,2h),3.07(t,j＝7.38hz,2h),2.74-2.60(m,4h).13cnmr(75mhz,meod-d4):164.99,150.21,144.61,107.63,47.51,25.24,23.08。esi-ms计算c7h9n2o2[m+h]+＝153.07，实测：153.08。
步骤3：(5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)氨基甲酸叔丁酯(cf72)的合成
将cf70(280mg，1.84mmol)与叔丁醇(6ml)和三乙基胺(0.8ml，4mmol)混合。通过注射器加入二苯基磷酰叠氮化物(0.71ml，3.31mmol)，并将该混合物在环境温度下搅拌过夜。将该溶液加热回流24小时。在旋转蒸发器中除去挥发性组分并将残余物通过快速柱色谱纯化。分离出224mg的cf72。1hnmr(300mhz,cdcl3):7.36(s,1h),6.24(s,1h),4.05(t,j＝7.31hz,2h),2.98-2.82(m,2h),2.60-2.44(m,4h),1.46(s,9h).13cnmr(75mhz,cdcl3):153.76,137.82,137.01,114.08,80.10,48.23,28.48,26.26,23.63。esi-ms计算c11h18n3o2[m+h]+＝224.14，实测：224.58。
步骤4：5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-胺的合成
将cf72(224mg，1.0mmol)溶解于ch2cl2(4ml)中。通过注射器加入三乙基硅烷(0.05ml)和三氟乙酸(6ml)。将反应物在环境温度下搅拌2小时，然后在旋转蒸发器中浓缩。含有5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-胺的剩余的残余物不经进一步纯化即用于下一步骤。esi-ms计算c6h10n3[m+h]+＝124.09，实测：124.42。
n-(5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号134)的合成
为前面的步骤4制备的5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-胺和s13(342mg,1.0mmol)在无水异丙醇(10ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(6滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例85
n-(1-环戊基-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号135)的合成
将pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)和binap(37mg,0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg,0.3mmol)，1-环戊基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(100mg,0.6mmol)，tbuona(120mg,1.2mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。浓缩、过滤和通过hplc纯化反应混合物，得到26mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号135。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.53(s,1h),7.45(s,1h),4.80-4.70(m,1h),3.83(s,3h),2.70(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h),2.10-2.00(m,4h),2.00-1.80(m,2h),1.93(s,3h),1.70-1.50(m,2h)。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.25；实测：472.58。
实施例86
3-环丁基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(cf78)的合成
将3-环丁基-3-氧代丙腈(1.0g，8.1mmol)和甲基肼(0.90ml，17mmol)溶解于乙醇中，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，并在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.986g的cf78。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.42(s,1h),3.59(s,3h),3.60-3.40(br,2h,nh),3.50-3.30(m,1h),2.34-2.20(m,2h),2.20-2.04(m,2h),2.041-1.90(m,1h),1.90-1.74(m,1h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12；实测：152.25。
n-(3-环丁基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号136)的合成
将pd2(dba)3(27mg,0.03mmol)和binap(37mg,0.06mmol)在无水甲苯(5ml)中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该澄清、橙红色的溶液转移到含有s13(102mg,0.3mmol)，1-甲基-3-环丁基-1h-吡唑-5-胺(90mg,0.6mmol)，k3po4(212mg,1.0mmol)和无水甲苯(5ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。通过
实施例87
2-异丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(cf83)的合成
将2-氧代环戊烷甲腈(2.0g，18.3mmol)，乙酸钠(3.04g，37mmol)和异丙基肼-hcl(2.5g，22mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到2.60g的cf83。1hnmr(300mhz,cdcl3):4.21(七重峰,j＝6.63hz,1h),2.60(t,j＝7.26hz,2h),2.40-2.38(m,2h),2.38-2.20(m,2h),1.39(d,j＝6.67hz,6h).13cnmr(75mhz,cdcl3):159.89,137.22,109.30,48.44,30.01,25.24,22.59,22.41。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.25。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-异丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号137)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(102mg)和2-异丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(107mg)制备化合物编号137。得到27mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号137。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),6.88(s,1h),4.70-4.55(m,1h),3.79(s,3h),2.80-2.60(m,2h),2.72(s,3h),2.44-2.30(m,4h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),1.50(d,j＝6.65hz,6h)。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.25；实测：472.83。
实施例88
2-异丙基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-胺(cf82)的合成
将2-氧代环己烷甲腈(2.0g，16.2mmol)，乙酸钠(2.7g,33mmol)和异丙基肼-hcl(2.13g,19.4mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到2.47g的cf82。1hnmr(300mhz,cdcl3):4.32(七重峰,j＝6.69hz,1h),2.60(t,j＝5.80hz,2h),2.31(t,j＝5.59hz,2h),1.80-1.66(m,4h),1.44(d,j＝6.69hz,6h)。esi-ms计算c10h18n3[m+h]+＝180.15；实测：180.25。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-异丙基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号138)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(102mg)和2-异丙基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-胺(115mg)制备化合物编号135。得到42mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号138。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),6.78(s,1h),4.78-4.62(m,1h),3.78(s,3h),2.75-2.65(m,2h),2.72(s,3h),2.30(s,3h),2.24-2.15(m,2h),2.12(s,3h),1.85-1.72(m,2h),1.72-1.60(m,2h),1.49(d,j＝6.65hz,6h)。esi-ms计算c27h32n7o2[m+h]+＝486.26；实测：486.42。
实施例89
(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(cf84)的合成
在室温下将4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(1.0g，6.0mmol)和etn(i-pr)2(3ml,18mmol)在t-buoh(20ml)中混合。通过注射器加入二苯基磷酰基叠氮化物(dppa，2.33ml，10.8mmol)，并将该混合物在室温下搅拌过夜，然后加热回流24小时。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.72g的cf84。1hnmr(300mhz,cdcl3):7.43(s,1h),5.99(s,1h),4.10-4.00(m,2h),2.70-2.55(m,2h),2.05-1.90(m,2h),1.90-1.75(m,2h),1.46(s,9h).13cnmr(75mhz,cdcl3):154.09,133.87,129.79,120.51,80.11,48.12,28.44,23.35,21.09,20.06。esi-ms计算c12h20n3o2[m+h]+＝238.16；实测：238.42。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号139)的合成
步骤1：将cf84(100mg)和tes-h(0.1ml)溶解于二氯甲烷(5ml)中。经由注射器加入tfa(5ml)，并将该混合物在环境温度下搅拌1小时。在旋转蒸发器中除去挥发性组分并且剩余的残余物不经进一步纯化即用于下一步骤。
步骤2：来自步骤1的4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-胺和s13(136mg，0.4mmol)在无水异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入浓hcl(5滴)。将反应物加热回流过夜。用甲醇稀释反应物并通过
实施例90
2-环丙基-3-氧代丁腈(cf85)的合成:
步骤1：将2-环丙基乙腈(4.86g，60mmol)溶解在无水thf(60ml)中并将该溶液冷却至-78℃。在20分钟内通过注射器加入lda(96ml，1.0m在thf中，96mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌20分钟。通过注射器逐滴加入乙酸酐(2.83ml，30mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌20分钟。用1nhcl淬灭反应并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.98g的cf85。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.17(d,j＝7.63hz,1h),2.40(s,3h),1.30-1.20(m,1h),0.85-0.70(m,2h),0.60-0.45(m,2h)。
4-环丙基-1,3-二甲基-1h-吡唑-5-胺(cf88)的合成
步骤2：将2-环丙基-3-氧代丁腈(0.50g，4.1mmol)和甲基肼(0.42ml，8.2mmol)溶于乙醇中，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，并在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.47g的cf88。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.55(s,3h),2.15(s,3h),1.45-1.30(m,1h),1.80-1.65(m,2h),1.45-1.30(m,2h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12；实测：152.42。
n-(4-环丙基-1,3-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(cpd.no.140)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(102mg)和4-环丙基-1,3-二甲基-1h-吡唑-5-胺(90mg)制备化合物编号140。得到8mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号140。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.46(s,1h),7.30-7.00(br,1h),3.84(s,3h),3.76(s,3h),2.72(s,3h),2.32(s,3h),2.29(s,3h),2.14(s,3h),1.40-1.20(m,1h),0.70-0.50(m,2h),0.50-0.30(m,2h)。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.58。
实施例91
2-乙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(cf91)
将2-氧代环戊烷甲腈(1.5g,14mmol)，乙酸钠(3.4g,42mmol)和乙肼-草酸盐(4.2g,28mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到1.03g的cf91。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.92(q,j＝7.23hz,2h),3.40-3.20(m,2h,nh),2.62(t,j＝7.19hz,2h),2.54-2.44(m,2h),2.40-2.28(m,2h),1.38(t,j＝7.24hz,3h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12；实测：152.33
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-乙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号141)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(102mg)和2-乙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(90mg)制备化合物编号141。得到39mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号141。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.45(s,1h),7.00(s,1h),4.17(q,j＝7.16hz,1h),3.80(s,3h),2.80-2.60(m,2h),2.73(s,3h),2.45-2.25(m,4h),2.30(s,3h),2.13(s,3h),1.46(t,j＝7.19hz,3h)。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.75。
实施例92
2-乙基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-胺(cf93)的合成
将2-氧代环己烷甲腈(2.0g,16.2mmol)，乙酸钠(3.94g,48mmol)和乙肼-草酸盐(4.8g,32mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到3.94g的cf93。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.94(q,j＝7.26hz,2h),3.40-3.10(m,2h,nh),2.58(t,j＝5.94hz,2h),2.31(t,j＝5.64hz,2h),1.80-1.60(m,4h),1.39(t,j＝7.26hz,3h).13cnmr(75mhz,cdcl3):147.94,139.61,100.67,42.16,23.80,23.65,23.57,19.82,15.27。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.33
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-乙基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号142)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(102mg)和2-乙基-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-胺(90mg)制备化合物编号142。得到49mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号142。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),6.90(s,1h),4.17(q,j＝7.16hz,2h),3.80(s,3h),2.80-2.60(m,2h),2.72(s,3h),2.30(s,3h),2.25-2.15(m,2h),2.13(s,3h),1.90-1.70(m,2h),1.70-1.50(m,2h),1.45(t,j＝7.17hz,3h)。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.25；实测：472.33。
实施例93
4-环丙基-1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(cf89)的合成
将cf85(0.50g，4.1mmol)，乙肼草酸盐(1.35g，9mmol)和乙酸钠(1g，12mmol)溶于乙醇中，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到171mg的cf89。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.88(q,j＝7.24hz,2h),3.60-3.40(br,2h,nh),2.16(s,3h),1.40-1.30(m,1h),1.34(t,j＝7.22hz,3h),0.80-0.70(m,2h),0.44-0.36(m,2h)。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.17。
n-(4-环丙基-1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号143)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(170mg)和4-环丙基-1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(170mg)制备化合物编号143。得到76mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号143。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.45(s,1h),7.00-6.50(br,1h),4.13(q,j＝7.15hz,2h),3.78(s,3h),2.74(s,3h),2.30(s,6h),2.12(s,3h),1.43(t,j＝7.19hz,3h),1.30-1.10(m,1h),0.70-0.54(m,2h),0.54-0.40(m,2h)。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.25；实测：472.33。
实施例94
3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-胺(cf96)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(2.0g，18.3mmol)，乙酸钠(5.4g，54mmol)和乙肼草酸盐(5.4g，36mmol)在乙醇中混合，并将混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到1.32g的cf96。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.17(s,1h),3.91(q,j＝7.25hz,2h),3.50-3.30(m,2h,nh),1.90-1.76(m,1h),1.36(t,j＝7.20hz,3h),0.90-0.80(m,2h),0.66-0.58(m,2h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12；实测：152.17。
n-(3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号144)的合成
根据用于制备化合物编号135的相同方法从s13(180mg)和3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-胺(140mg)制备化合物编号144。得到83mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号144。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),6.92(s,1h),6.03(s,1h),4.11(q,j＝7.20hz,2h),3.83(s,3h),2.71(s,3h),2.29(s,3h),2.12(s,3h),2.00-1.85(m,1h),1.44(t,j＝7.20hz,3h),1.00-0.90(m,2h),0.75-0.65(m,2h)。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.33。
实施例95
3-环丙基-1-乙基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(cf101)的合成
将3-环丙基-2-甲基-3-氧代丙腈(2.0g，16mmol)，乙酸钠(2.62g，32mmol)和乙肼草酸盐(2.4g，16mmol)在乙醇中混合，并将混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.52g的cf101。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.93(q,j＝7.23hz,2h),3.60-3.00(br,2h,nh),1.91(s,3h),1.80-1.60(m,1h),1.31(t,j＝7.24hz,3h),0.85-0.75(m,4h)。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.33
n-(3-环丙基-1-乙基-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号145)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(202mg)和3-环丙基-1-乙基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(132mg)制备化合物编号145。得到87mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号145。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.45(s,1h),7.20-6.80(br,1h),4.09(q,j＝7.19hz,2h),3.82(s,3h),2.72(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),1.90(s,3h),2.00-1.80(m,1h),1.38(t,j＝7.21hz,3h),1.00-0.80(m,4h)。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.25；实测：472.58。
实施例96
1-乙基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-胺(cf102)的合成
将(e)-4-氨基-4-乙氧基-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-酮(1.0g，5.5mmol)，乙酸钠(1.50g，18mmol)和乙肼草酸盐(1.7g，11mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.51g的cf102。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.80(s,1h),4.04(q,j＝7.42hz,2h),3.70-3.45(br,2h,nh),1.42(t,j＝7.25hz,3h)。esi-ms计算c6h9f3n3[m+h]+＝180.07；实测：180.33。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号146)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(136mg)和1-乙基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-5-胺(143mg)制备化合物编号146。得到26mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号146。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.72(s,1h),7.49(s,1h),6.70(s,1h),4.21(q,j＝7.17hz,2h),3.90(s,3h),2.68(s,3h),2.30(s,3h),2.13(s,3h),1.50(t,j＝7.20hz,3h)。esi-ms计算c23h23f3n7o2[m+h]+＝486.19；实测：486.33。
实施例97
3-环丙基-1,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(cf105)的合成
将3-环丙基-2-甲基-3-氧代丙腈(1.5g，12mmol)和甲基肼(1.26ml，24mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.70g的cf105。1hnmr(300mhz,cdcl3):3.58(s,3h),3.40-3.10(br,2h,nh),1.92(s,3h),1.80-1.60(m,2h),1.85-1.70(m,4h)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.12；实测：152.25。
n-(3-环丙基-1,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号147)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(136mg)和3-环丙基-1,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(120mg)制备化合物编号147。得到16mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号147。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.45(s,1h),7.30-7.00(br,1h),3.84(s,3h),3.72(s,3h),2.71(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),1.94(s,3h),2.00-1.80(m,2h),1.00-0.75(m,4h)。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.50。
实施例98
2-环丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(cf108)的合成
将2-氧代环戊烷甲腈(1.0g,9mmol),，乙酸钠(1.6g,20mmol)和异丙基肼-hcl(1.0g,10mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.56g的cf108。1hnmr(300mhz,cdcl3):4.00-3.50(br,2h,nh),3.20-3.00(m,1h),2.70-2.50(m,2h),2.50-2.35(m,2h),2.35-2.20(m,2h),1.20-0.90(m,4h)。esi-ms计算c9h14n3[m+h]+＝164.12；实测：164.50
n-(2-环丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号148)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(136mg)和2-环丙基-2,4,5,6-四氢-环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(162mg)制备化合物编号148。得到84mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号148。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.46(s,1h),7.09(s,1h),3.81(s,3h),3.50-3.30(m,1h),2.80-2.60(m,2h),2.74(s,3h),2.60-2.40(m,2h),2.40-2.20(m,2h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),1.20-1.10(m,2h),1.10-0.90(m,2h)。esi-ms计算c26h28n7o2[m+h]+＝470.23；实测：470.50。
实施例99
3-环丙基-1-异丙基-1h-吡唑-5-胺(cf110)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(1.0g,9mmol)，乙酸钠(2.0g,20mmol)和异丙基肼-hcl(1.6g,15mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到1.27g的cf110。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.08(s,1h),5.00-4.20(br,2h,nh),4.35-4.10(m,1h),1.94-1.80(m,1h),1.42(d,j＝6.69hz,6h),0.90-0.80(m,2h),0.62-0.52(m,2h).13cnmr(75mhz,cdcl3):154.07,143.79,86.80,48.21,22.05,9.72,7.99。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.17。
n-(3-环丙基-1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号149)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(273mg)和3-环丙基-1-异丙基-1h-吡唑-5-胺(320mg)制备化合物编号149。得到119mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号149。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.43(s,1h),6.86(s,1h),5.95(s,1h),4.70-4.50(m,1h),3.82(s,3h),2.71(s,3h),2.30(s,3h),2.13(s,3h),2.10-1.90(m,1h),1.47(d,j＝6.64hz,6h),1.10-0.90(m,2h),0.80-0.60(m,2h)。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.25；实测：472.58。
实施例100
2-(3-氨基-5,6-二氢环戊二烯并[c]吡唑-2(4h)-基)乙醇(cf106)的合成
将2-氧代环戊烷甲腈(1.0g,9mmol)和2-肼乙醇(1.3ml,18mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.347g的cf106。1hnmr(300mhz,cdcl3):4.00-3.90(m,2h),3.90-3.70(m,2h),2.65-2.50(m,2h),2.50-2.35(m,2h),2.35-2.20(m,2h)。esi-ms计算c8h14n3o[m+h]+＝168.11；实测：168.33。
2-(3-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-5,6-二氢环戊二烯并[c]吡唑-2(4h)-基)乙醇(化合物编号150)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(136mg)和2-(3-氨基-5,6-二氢环戊二烯并[c]吡唑-2(4h)-基)乙醇(120mg)制备化合物编号150。得到106mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号150。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.54(s,1h),7.47(s,1h),4.37(t,j＝4.53hz,2h),4.00(t,j＝4.51hz,2h),3.88(s,3h),2.90-2.70(m,2h),2.75(s,3h),2.65-2.50(m,2h),2.50-2.30(m,2h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)。esi-ms计算c25h28n7o3[m+h]+＝474.23；实测：474.92。
实施例101
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-(2-氟乙基)-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号151)的合成
将化合物编号150(30mg,0.05mmol)与无水二氯甲烷(4ml)混合，并将混合物冷却至-78℃10分钟。经由注射器加入dast的二氯甲烷溶液(40mg,0.25mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌20分钟。然后将混合物温热至环境温度并搅拌3小时，然后用碳酸氢钠饱和溶液猝灭。加入甲醇并在旋转蒸发器上浓缩该混合物。在反相hplc上纯化剩余的残余物并得到21mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号151。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),7.13(s,1h),4.73(t,j＝4.65hz,1h),4.49(t,j＝4.64hz,1h),4.40(t,j＝4.54,1h),3.82(s,3h),2.80-2.60(m,2h),2.72(s,3h),2.45-2.25(m,4h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)。esi-ms计算c25h27fn7o2[m+h]+＝476.22；实测：476.58。
实施例102
1,3-二环丙基-1h-吡唑-5-胺(cf118)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(1.0g,9mmol)，乙酸钠(1.6g,20mmol)和环丙基肼-hcl(1.0g,9.2mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到0.88g的cf118。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.05(s,1h),3.80-3.70(br,2h,nh),3.12-3.00(m,1h),1.88-1.76(m,1h),1.16-1.06(m,2h),1.06-0.94(m,2h),0.88-0.80(m,2h),0.66-0.56(m,2h)。esi-ms计算c9h14n3[m+h]+＝164.12；实测：164.17。
n-(1,3-二环丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号152)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(136mg)和1,3-二环丙基-1h-吡唑-5-胺(130mg)制备化合物编号152。得到140mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号152。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),7.08(s,1h),6.10(s,1h),3.83(s,3h),3.40-3.20(m,1h),2.73(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h),2.05-1.85(m,1h),1.20-1.00(m,2h),1.00-0.80(m,4h),0.80-0.60(m,2h)。esi-ms计算c26h28n7o2[m+h]+＝470.23；实测：470.58。
实施例103
n-(3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号153)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(170mg)和3-环丙基-1h-吡唑-5-胺(162mg)制备化合物编号153。得到37.5mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号153。1hnmr(300mhz,meod-d4):8.21(s,1h),7.45(s,1h),6.12(s,1h),3.97(s,3h),2.81(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),2.10-1.95(m,1h),1.80-1.00(m,2h),0.90-0.70(m,2h)。esi-ms计算c23h24n7o2[m+h]+＝430.20；实测：430.42。
实施例104
1-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)乙酮(化合物编号154)的合成
用无水thf(4ml)混合化合物编号153(20mg)和nahco3(200mg)。经由注射器加入乙酰氯(0.2ml)，并将该混合物在环境温度下搅拌过夜。用旋转蒸发器浓缩该反应混合物并用反相hplc纯化剩余的残余物。获得3mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号154。esi-ms计算c25h26n7o3[m+h]+＝472.21；实测：472.33。
实施例105
3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-羧酸乙酯(化合物编号155)的合成
用无水thf(5ml)混合化合物编号153(20mg,0.037mmol)和nahco3(500mg，过量)。经由注射器加入氯甲酸乙酯(0.2ml,2mmol)，并将该混合物在环境温度下搅拌过夜。用旋转蒸发器浓缩该反应混合物并用反相hplc纯化剩余的残余物。获得10mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号155。esi-ms计算c26h28n7o4[m+h]+＝502.22；实测：502.67。
实施例106
3-环丙基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1h-吡唑-5-胺(cf127)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(1.0g,9.2mmol)和(2,2,2-三氟乙基)肼(2.9ml,70％在水中,23mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到1.04g的cf127。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.27(s,1h),4.51(q,j＝8.72hz,2h),3.55-3.40(m,2h,nh),1.90-1.76(m,1h),0.94-0.82(m,2h),0.70-0.60(m,2h)。esi-ms计算c8h11f3n3[m+h]+＝206.09；实测：206.50。
n-(3-环丙基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号156)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(170mg)和3-环丙基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1h-吡唑-5-胺(200mg)制备化合物编号156。得到30mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号156。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),7.19(s,1h),6.09(s,1h),5.00-4.80(m,2h),3.84(s,3h),2.70(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),2.05-1.90(m,1h),1.05-0.90(m,2h),0.80-0.60(m,2h)。esi-ms计算c25h25f3n7o2[m+h]+＝512.20；实测：512.58。
实施例107
2-(2,2,2-三氟乙基)-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(cf128)的合成
将2-氧代环戊烷甲腈(1.0g,9.2mmol)和(2,2,2-三氟乙基)肼(2.9ml,70％在水中,23mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物得到1.66g的cf128。1hnmr(300mhz,cdcl3):4.53(q,j＝8.76hz,2h),3.40-3.30(br,2h,nh),2.65(t,j＝7.27hz,2h),2.56-2.46(m,2h),2.40-2.30(m,2h)。esi-ms计算c8h11f3n3[m+h]+＝206.09；实测：206.33。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(2-(2,2,2-三氟乙基)-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号157)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(170mg)和2-(2,2,2-三氟乙基)-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(200mg)制备化合物编号157。得到9mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号157。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),7.28(s,1h),3.83(s,3h),2.80-2.70(m,2h),2.70(s,3h),2.50-2.30(m,4h),2.32(s,3h),2.14(s,3h)。esi-ms计算c25h25f3n7o2[m+h]+＝512.20；实测：512.83。
实施例108
2-(5-氨基-3-环丙基-1h-吡唑-1-基)乙醇(cf137)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(5.0g,46mmol)和2-肼乙醇(4.7ml,92mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。将剩余的残余物用二氯甲烷洗涤并过滤得到4.52g的白色固体cf137。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.10(s,1h),3.98-3.88(m,2h),3.80(t,j＝4.95hz,2h),1.80-1.66(m,1h),0.88-0.72(m,2h),0.64-0.52(m,2h)。esi-ms计算c8h14n3o[m+h]+＝168.11；实测：168.58。2-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)乙醇(化合物编号158)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(800mg)和2-(5-氨基-3-环丙基-1h-吡唑-1-基)乙醇(640mg)制备化合物编号158。得到253mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号158。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.48(s,1h),7.46(s,1h),6.27(s,1h),4.33(t,j＝4.61,2h),3.99(t,j＝4.67,2h),3.89(s,3h),2.74(s,3h),2.30(s,3h),2.13(s,3h),2.04-1.90(s,1h),1.04-0.90(m,2h),0.80-0.70(m,2h)。esi-ms计算c25h28n7o3[m+h]+＝474.23；实测：474.50。
实施例109
n-(3-环丙基-1-(2-氟乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号159)的合成
将化合物编号158(20mg)与无水二氯甲烷(4ml)混合，并将混合物冷却至-78℃10分钟。经由注射器加入dast的二氯甲烷溶液(20mg)，并将混合物在-78℃下搅拌20分钟。然后将混合物温热至环境温度并搅拌3小时，然后用碳酸氢钠饱和溶液猝灭。加入甲醇并在旋转蒸发器上浓缩该混合物。在反相hplc上纯化剩余的残余物并得到13mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号159。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.44(s,1h),7.12(s,1h),6.08(s,1h),4.87(t,j＝4.67hz,1h),4.71(t,j＝4.63hz,1h),4.44(t,j＝4.45hz,1h),4.35(t,j＝4.70hz,1h),3.84(s,1h),2.72(s,1h),2.31(s,1h),2.14(s,1h),2.24-1.90(m,1h),1.04-0.90(m,2h),0.80-0.66(m,2h)。esi-ms计算c25h27fn7o2[m+h]+＝476.22；实测：476.58。
实施例110
3-环丙基-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-5-胺(cf148)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(1.0g,9.1mmol)和2-肼-n，n-二甲基乙胺-2hcl(1.76g,9.0mmol)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。剩余的残余物(cf148,2.50g)不经进一步纯化即用于下一步骤。1hnmr(300mhz,dmso-d6):5.40-5.30(m,1h),4.50-4.35(m,2h),3.50-3.40(m,2h),2.79(s,6h),1.90-1.80(m,1h),1.05-0.90(m,2h),0.90-0.75(m,2h)。esi-ms计算c10h19n4[m+h]+＝195.16；实测：195.25。
n-(3-环丙基-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号160)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(100mg)和3-环丙基-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-5-胺(160mg)制备化合物编号160。得到43mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号160。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.51(s,1h),7.43(s,1h),6.07(s,1h),4.45(t,j＝5.47hz,2h),3.67(t,j＝5.57hz,2h),3.89(s,3h),2.99(s,6h),2.68(s,3h),2.32(s,3h),2.14(s,3h),2.02-1.90(m,1h),1.04-0.90(m,2h),0.80-0.70(m,2h)。esi-ms计算c27h33n8o2[m+h]+＝501.27；实测：501.67
实施例111
1-甲基-3-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)-1h-吡唑-5-胺(cf141tfa盐)的合成
步骤1：将3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酸(1.5g,10mmol)和dmf(一滴)溶解在无水二氯甲烷(15ml)中。在环境温度下经由注射器加入草酰氯(1.0ml,12mmol)并将混合物搅拌过夜。用0℃水浴通过旋转蒸发器除去二氯甲烷。剩余的残留物不经进一步纯化即用于下一个步骤。
步骤2：将乙腈(1.56ml,30mmol)溶解在无水thf(30ml)中并将该溶液冷却至-78℃。在10分钟内通过注射器加入lihmds(30ml，1.0m在thf中，30mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌20分钟。通过注射器加入从步骤1制备的3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酰氯的thf溶液并将混合物在-78℃下搅拌2小时。将反应用1nhcl淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器上浓缩。剩余的残留物不经进一步纯化即用于下一个步骤。
步骤3：将从步骤2制备的5,5,5-三氟-4,4-二甲基-3-氧代戊腈溶解在乙醇(30ml)中。通过注射器加入甲基肼(1.1ml，20mmol)，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，并用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器上浓缩。剩余的残余物通过快速色谱法纯化得到0.22g的cf141。1hnmr(300mhz,meod-d4):5.54(s,1h),3.61(s,3h),3.60-3.40(m,2h,nh),1.45(s,6h)。esi-ms计算c8h13f3n3[m+h]+＝208.11；实测：208.25。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-3-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号161)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(102mg)和1-甲基-3-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)-1h-吡唑-5-胺(120mg)制备化合物编号161。得到48mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号161。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.67(s,1h),7.46(s,1h),6.41(s,1h),3.90(s,1h),3.83(s,3h),2.69(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.55(s,6h)。esi-ms计算c25h27f3n7o2[m+h]+＝514.22；实测：514.67。
实施例112
3-(5-氨基-3-环丙基-1h-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(cf178)的合成
将3-环丙基-3-氧代丙腈(2.16g,20mmol)和1-boc-3-肼氮杂环丁烷(3.83g,20.0mmol，根据wo2012/004706a2制备)在乙醇中混合，并将该混合物加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温，并用旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，在旋转蒸发器中浓缩。用二氯甲烷洗涤剩余的残余物并过滤得到2.67g的cf178。1hnmr(300mhz,cdcl3):5.21(s,1h),4.95-4.80(m,1h),4.50-4.35(m,2h),4.30-4.15(m,2h),1.90-1.80(m,1h),1.45(s,9h),0.95-0.80(m,2h),0.70-0.60(m,2h)。esi-ms计算c14h23n4o2[m+h]+＝279.18；实测：279.58。
3-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(化合物编号162)的合成
根据用于制备化合物编号135的相似方法从s13(205mg)和3-(5-氨基-3-环丙基-1h-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(348mg)制备化合物编号162。化合物编号162不经纯化用于下一反应。
实施例113
n-(1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号163)的合成
将化合物编号162(粗产物)和三乙基硅烷(0.2ml)溶解在cf3co2h-二氯甲烷(1：1，12ml)中，并将该混合物在室温下搅拌1小时。用旋转蒸发器浓缩反应混合物并用反相hplc纯化剩余的残余物，得到126mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号163。1hnmr(300mhz,meod-d4):7.54(s,1h),7.46(s,1h),6.09(s,1h),5.40-5.20(m,1h),5.70-5.50(m,2h),5.50-5.30(m,2h),3.89(s,3h),2.65(s,3h),2.30(s,3h),2.12(s,3h),2.10-1.95(m,1h),1.05-0.90(m,2h),0.90-0.75(m,2h)。esi-ms计算c26h29n8o2[m+h]+＝485.24；实测：485.67。
实施例114
n-(1-(叔丁基)-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号62)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-(叔丁基)-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到15mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号62。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.55.1hnmr(300mhz,meod)δ7.44(s,1h),6.59(s,1h),6.24(s,1h),3.80(s,3h),2.74(s,3h),2.31(s,3h),2.30(s,3h),2.14(s,3h),1.72(s,9h)。
实施例115
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-咪唑-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号166)的合成
将pd2(dba)3(53mg)和呫吨(xantphos)(100mg)在甲苯(8ml)和2mna2co3(0.58ml)中混合。然后加入s13(100mg)，1-甲基-1h-咪唑-4-胺(100mg)。将混合物加热回流过夜。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到4.5mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号166。esi-ms计算c21h22n7o2[m+h]+＝404.18；实测：404.44.1hnmr(300mhz,meod)δ8.16(s,2h),7.45(s,1h),7.41(s,1h),4.00(s,3h),3.93(s,3h),2.78(s,3h),2.35(s,3h),2.19(s,3h)。
实施例116
n-(1,4-二甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号77)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1,4-二甲基-1h-吡唑-3-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号77。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.19；实测：418.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.65(s,1h),7.62(s,1h),7.47(s,1h),3.93(s,3h),3.91(s,3h),2.75(s,3h),2.35(s,3h),2.17(s,3h),2.12(s,3h)。
实施例117
n-(1,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号76)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号76。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.19；实测：418.64.1hnmr(300mhz,meod)δ7.52(s,1h),7.48(s,1h),7.37(brs,1h),3.88(s,3h),3.83(s,3h),2.72(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.98(s,3h)。
实施例118
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3-乙基-1,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号169)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，3-乙基-1,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号169。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.67.1hnmr(300mhz,meod)δ7.46(s,1h),7.37(brs,1h),3.88(s,3h),3.78(s,3h),2.74–2.60(m,5h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.89(s,3h),1.27(t,j＝7.6hz,3h)。
实施例119
n-(1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号170)的合成
将s13(70mg)和1,5-二甲基-1h-吡唑-4-胺(68mg)在异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将反应物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到50mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号170。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.19；实测：418.46.1hnmr(300mhz,meod)δ7.95(brs,1h),7.65(s,1h),7.47(s,1h),3.92(s,3h),3.91(s,3h),2.70(s,3h),2.33(s,3h),2.31(s,3h),2.16(s,3h)。
实施例120
n-(1,2-二甲基-1h-咪唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号171)的合成
将pd2(dba)3(53mg)和呫吨(xantphos)(100mg)在甲苯(8ml)和2mna2co3(0.58ml)中混合。然后加入s13(100mg)，1,2-二甲基-1h-咪唑-5-胺(100mg)。将混合物加热回流过夜。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到7.5mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号171。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.19；实测：418.42.1hnmr(300mhz,meod)δ8.10(s,1h),7.60(s,1h),7.47(s,1h),3.98(s,3h),3.70(s,3h),2.77(s,3h),2.63(s,3h),2.36(s,3h),2.19(s,3h)。
实施例121
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号172)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到22mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号172。esi-ms计算c21h22n7o2[m+h]+＝404.18；实测：404.45.1hnmr(300mhz,meod)δ7.63(d,j＝2.1hz,1h),7.49(s,1h),7.48(s,1h),6.43(d,j＝2.1hz,1h),3.90(s,3h),3.85(s,3h),2.71(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h)。
实施例122
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号173)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-乙基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到22mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号173。esi-ms计算c22h24n7o2[m+h]+＝418.19；实测：418.66.1hnmr(300mhz,meod)δ7.67(d,j＝2.0hz,1h),7.50(s,1h),7.45(s,1h),6.39(d,j＝2.0hz,1h),4.17(q,j＝7.3hz,2h),3.90(s,3h),2.67(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.48(t,j＝7.2hz,3h)。
实施例123
5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1-甲基-1h-吡唑-4-甲腈(化合物编号174)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，5-氨基-1-甲基-1h-吡唑-4-甲腈(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到26mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号174。esi-ms计算c22h21n8o2[m+h]+＝429.17；实测：429.44.1hnmr(300mhz,meod)δ8.01(s,1h),7.94(s,1h),7.49(s,1h),3.96(s,3h),3.87(s,3h),2.68(s,3h),2.36(s,3h),2.19(s,3h)。
实施例124
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号175)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-异丙基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到22mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号175。esi-ms计算c23h26n7o2[m+h]+＝432.21；实测：432.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.69(d,j＝1.9hz,1h),7.46(s,1h),7.28(s,1h),6.37(d,j＝2.0hz,1h),4.65(dq,j＝13.2,6.6hz,1h),3.87(s,3h),2.70(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.51(d,j＝6.6hz,6h)。
实施例125
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号176)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-乙基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到22mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号176。esi-ms计算c23h26n7o2[m+h]+＝432.21；实测：432.48.1hnmr(300mhz,meod)δ7.54(s,1h),7.48(s,1h),7.06(brs,1h),4.18(q,j＝7.2hz,2h),3.85(s,3h),2.73(s,3h),2.32(s,3h),2.14(s,3h),1.95(s,3h),1.45(t,j＝7.2hz,3h)。
实施例126
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-2,4-二甲基噻唑-5-胺(化合物编号177)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，2,4-二甲基噻唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到14mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号177。esi-ms计算c22h23n6o2s[m+h]+＝435.16；实测：435.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.98(s,1h),7.48(s,1h),3.97(s,3h),2.78(s,3h),2.73(s,3h),2.41(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)。
实施例127
n-(1-环戊基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号178)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环戊基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号178。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.55.1hnmr(300mhz,meod)δ7.67(d,j＝1.8hz,1h),7.45(s,1h),7.35(s,1h),6.37(d,j＝2.0hz,1h),4.78(p,j＝7.6hz,1h),3.87(s,3h),2.68(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),2.14–2.04(m,4h),2.00–1.86(m,2h),1.72–1.57(m,2h)。
实施例128
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号179)的合成
将s13(70mg)和1-甲基-3-(三氟甲基)-1h-吡唑-4-胺(68mg)在异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到50mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号179。esi-ms计算c22h21f3n7o2[m+h]+＝472.17；实测：472.44.1hnmr(300mhz,meod)δ8.15(s,1h),7.97(s,1h),7.49(s,1h),4.08(s,3h),3.96(s,3h),2.70(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)。
实施例129
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1,3,4-三甲基-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号80)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1,3,4-三甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号80。esi-ms计算c23h26n7o2[m+h]+＝432.21；实测：432.65.1hnmr(300mhz,meod)δ7.47(s,1h),7.29(brs,1h),3.87(s,3h),3.77(s,3h),2.71(s,3h),2.33(s,3h),2.26(s,3h),2.16(s,3h),1.90(s,3h)。
实施例130
3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(zbb153)的合成
将3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑(500mg)，浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)的混合物在60℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。将有机相用旋转蒸发器浓缩并溶解在meoh(10ml)中。加入50mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb153(300mg)。esi-ms计算c7h14n3[m+h]+＝140.11；实测：140.44。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号181)的合成
将s13(70mg)和3-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(68mg)在异丙醇(5ml)中混合。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将反应物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到45mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号181。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.85(s,1h),7.60(brs,1h),7.47(s,1h),3.95(s,3h),3.89(s,3h),3.02(hept,j＝6.7hz,1h),2.71(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.30(d,j＝7.0hz,6h)。
实施例131
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3-乙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号182)的合成
将s13(70mg)和3-乙基-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将反应物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到45mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号182。esi-ms计算c23h26n7o2[m+h]+＝432.21；实测：432.55.
实施例132
n-(1-(叔丁基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号183)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。该混合物在回流下加热过夜用甲醇淬灭之前。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的作为cf3co2h盐的化合物编号183。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.65。
实施例133
1-异丙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb159)
将2-甲基-3-氧代丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入异丙基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到1.3g所需产物。esi-ms计算c8h16n3[m+h]+＝154.13；实测：154.66。
实施例134
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号81)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-异丙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号81。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.44。
实施例135
1-(叔丁基)-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb160)的合成
将2-甲基-3-氧代丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入叔丁基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到1.3g所需产物。esi-ms计算c9h18n3[m+h]+＝168.15；实测：168.44。
实施例136
n-(1-(叔丁基)-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号185)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-(叔丁基)-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，t-buok(100mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号185。esi-ms计算c26h32n7o2[m+h]+＝474.26；实测：474.44。
实施例137
1-乙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb164)的合成
将2-甲基-3-氧代丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入乙基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到1.3g所需产物。esi-ms计算c7h14n3[m+h]+＝140.11；实测：140.34。
实施例138
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号186)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-乙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号186。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.36。
实施例139
1-环丁基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb165)的合成
将2-甲基-3-氧代丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入环丁基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到1.3g所需产物。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.64。
n-(1-环丁基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号187)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环丁基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到30mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号187。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.24；实测：472.66。
实施例140
1-环丙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb170)的合成
将2-甲基-3-氧代丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入环丙基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到1.3g所需产物。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.11；实测：152.44。
实施例141
n-(1-环丙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号188)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环丙基-3,4-二甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号188。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.56。
实施例142
4-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb171)的合成
将2-甲酰基-3-甲基丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入甲基肼(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.4g所需产物。esi-ms计算c7h14n3[m+h]+＝140.11；实测：140.43。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(4-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号79)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，4-异丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到12mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号79。esi-ms计算c24h28n7o2[m+h]+＝446.23；实测：446.43.1hnmr(300mhz,meod)δ7.60(s,1h),7.49(s,1h),3.86(s,3h),3.81(s,3h),2.87–2.75(m,1h),2.73(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.20(d,j＝6.9hz,6h)。
实施例143
2-异丙基-4-甲基噻唑-5-胺(zbb179)的合成
将2-异丙基-4-甲基噻唑(500mg)，浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)的混合物在100℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相并将其溶解在meoh(10ml)中。加入500mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb179(300mg)。esi-ms计算c7h13n2s[m+h]+＝157.07；实测：157.44.1hnmr(300mhz,cdcl3)δ3.23(hept,j＝6.8hz,1h),2.79(s,3h),1.40(d,j＝6.9hz,6h)。
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-2-异丙基-4-甲基噻唑-5-胺(化合物编号190)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，2-异丙基-4-甲基噻唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到35mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号190。esi-ms计算c24h27n6o2s[m+h]+＝463.19；实测：463.44。
实施例144
4-异丙基-2-甲基噻唑-5-胺(zbb181)的合成
将4-异丙基-2-甲基噻唑(500mg)，浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)的混合物在100℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相并将其溶解在meoh(10ml)中。加入500mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb181(400mg)。esi-ms计算c7h13n2s[m+h]+＝157.07；实测：157.34。
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-4-异丙基-2-甲基噻唑-5-胺(化合物编号84)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，4-异丙基-2-甲基噻唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到35mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号84。esi-ms计算c24h27n6o2s[m+h]+＝463.19；实测：463.45.1hnmr(300mhz,meod)δ7.84(brs,1h),7.49(s,1h),3.93(s,3h),3.13(dt,j＝13.7,6.8hz,1h),2.78(s,3h),2.72(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.32(d,j＝6.9hz,6h)。
实施例145
1-环丙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb182)的合成
将3-氧代丁腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入环丙基肼(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.4g所需产物。esi-ms计算c7h12n3[m+h]+＝138.10；实测：138.33。
n-(1-环丙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号192)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环丙基-3-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到30mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号192。esi-ms计算c24h26n7o2[m+h]+＝444.21；实测：444.65.
实施例146
3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(zbb186)的合成
将3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(500mg)，t-buono(2ml)在thf(10ml)中的混合物在90℃下加热3h。然后用旋转蒸发浓缩该混合物并将其溶解在浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)中。将混合物在60℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相。通过快速柱色谱纯化剩余的残余物，得到zbb184。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.18(s,1h),3.86(s,3h),1.41(s,9h)。
将zbb184(200mg)溶解在meoh(10ml)中。加入50mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb186(150mg)。esi-ms计算c8h16n3[m+h]+＝154.13；实测：154.44。
n-(3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号193)的合成
将s13(70mg)和3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到45mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号193。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.55.1hnmr(300mhz,meod)δ7.85(s,1h),7.46(s,1h),3.94(s,3h),3.88(s,3h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.38(s,9h)。
实施例147
3-异丙基-1,5-二甲基-1h-吡唑-4-胺(zbb192)的合成
将1-(1,5-二甲基-1h-吡唑-3-基)乙-1-酮(1g)，t-buok(1.1g)和ch3pph3br(3.9g)在thf(10ml)中的混合物在室温下搅拌5h。然后加入nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和用旋转蒸发器浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物，得到0.8g所需产物zbb185。
将zbb185(0.5g)溶解在meoh(10ml)中。加入50mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩得到粗产物，该粗产物溶解在浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)中。并且将该混合物在60℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中并用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相得到溶解在meoh(10ml)中的硝基中间体。加入50mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb192(0.4g)。esi-ms计算c8h16n3[m+h]+＝154.13；实测：154.45。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3-异丙基-1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号194)的合成
将s13(70mg)和3-异丙基-1,5-二甲基-1h-吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将反应物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物，得到45mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号194。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.45。
实施例148
(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基甲酸叔丁酯(zbb195)的合成
将3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-羧酸(0.5g)，dppa(1.16ml)和et3n(1.25ml)在t-buoh(10ml)中的混合物在室温下搅拌3h。然后将混合物回流1天，然后用旋转蒸发器浓缩。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并获得0.3g所需产物zbb195。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号195)的合成
将(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.15g)溶解在dcm/tfa(10ml,1:1)中，并将该混合物在室温下搅拌3小时。然后用旋转蒸发器浓缩该混合物，得到溶于异丙醇(5ml)中的粗胺。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl和s13(70mg)。将混合物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残留物，得到47mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号195。esi-ms计算c24h26n7o2[m+h]+＝444.21；实测：444.34.1hnmr(300mhz,meod)δ8.0-7.7(m,2h),7.47(s,1h),3.92(s,3h),3.91(s,3h),2.72(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.79(tt,j＝7.9,5.5hz,1h),0.95–0.79(m,4h)。
实施例149
1-(叔丁基)-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb197)的合成
将2-甲基-3-氧代丙腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入叔丁基肼hcl盐(5g)并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.3g所需产物。esi-ms计算c8h16n3[m+h]+＝154.13；实测：154.44.1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.12(s,1h),3.29(s,2h),1.90(s,3h),1.64(s,9h)。
n-(1-(叔丁基)-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号196)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-(叔丁基)-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，t-buok(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号196。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.51(s,1h),7.45(s,1h),3.80(s,3h),2.75(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.85(s,3h),1.69(s,9h)。实施例150
1-环丙基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb198)的合成
将2-甲基-3-氧代丙腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入环丙基肼hcl盐(5g)并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.3g所需产物。esi-ms计算c7h12n3[m+h]+＝138.10；实测：138.44。
n-(1-环丙基-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号197)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环丙基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号197。esi-ms计算c24h26n7o2[m+h]+＝444.21；实测：444.54.1hnmr(300mhz,meod)δ7.73(s,1h),7.49(s,1h),7.47(s,1h),3.89(s,3h),3.77–3.62(m,1h),2.77(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.14(s,3h),1.17–0.96(m,4h)。
实施例151
1-环丁基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(zbb200)的合成
将2-甲基-3-氧代丙腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入环丁基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.3g所需产物。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.11；实测：152.54.1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.21(s,1h),4.72–4.52(m,1h),3.23(brs,2h),2.76–2.58(m,2h),2.45–2.28(m,2h),2.03–1.67(m,5h)。
n-(1-环丁基-4-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号198)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环丁基-4-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号198。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.55.1hnmr(300mhz,meod)δ7.60(s,1h),7.48(s,1h),4.98–4.79(m,1h),3.86(s,3h),2.81–2.57(m,5h),2.40-2.25(m,5h),2.16(s,3h),1.97(s,3h),1.90-1.70(m,2h)。
实施例152
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-3-异丙基-1h-吡唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号199)的合成
将s13(70mg)和1-乙基-3-异丙基-1h-吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到45mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号199。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.55。
实施例153
3-环丁基-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(zbb214-1)的合成
将3-环丁基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(500mg)，t-buono(2ml)在thf(10ml)中的混合物在90℃下加热3h。然后用旋转蒸发浓缩该混合物并将其溶解在浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)中。将混合物在60℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相。通过快速柱色谱纯化剩余的残余物，得到zbb210(250mg)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.10(s,1h),4.07–3.93(m,1h),3.91(s,3h),2.48–2.22(m,4h),2.16–1.81(m,2h)。
将zbb210(200mg)溶解在meoh(10ml)中。加入50mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb214-1(150mg)。esi-ms计算c8h14n3[m+h]+＝152.11；实测：152.34。
n-(3-环丁基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号200)的合成
将s13(70mg)和3-环丁基-1-甲基-1h-吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到40mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号200。esi-ms计算c25h28n7o2[m+h]+＝458.23；实测：458.66。
实施例154
3-环丁基-1-乙基-1h-吡唑-4-胺(zbb221)的合成
将3-环丁基-1-乙基-1h-吡唑-5-胺(500mg)，t-buono(2ml)在thf(10ml)中的混合物在90℃下加热3h。然后用旋转蒸发浓缩该混合物并将其溶解在浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)中。将混合物在60℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相。通过快速柱色谱纯化剩余的残余物，得到zbb220。
将zbb220(200mg)溶解在meoh(10ml)中。加入50mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb221(150mg)。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.55。
n-(3-环丁基-1-乙基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号201)的合成
将s13(70mg)和3-环丁基-1-乙基-1h-吡唑-4-胺(68mg)溶解在异丙醇(5ml)中。通过玻璃吸管加入四滴浓hcl。将混合物加热回流过夜。用旋转蒸发器浓缩反应物，并通过hplc纯化剩余的残余物。得到40mg的、作为三氟乙酸的盐的所需产物化合物编号201。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.24；实测：472.66。
实施例155
2-(叔丁基)-4-甲基噻唑-5-胺(zbb222-2)的合成
将2-(叔丁基)-4-甲基噻唑(500mg)，浓h2so4(1ml)和发烟hno3(1ml)的混合物在100℃下加热过夜。然后将混合物倾入冷却的氢氧化钠水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用旋转蒸发器浓缩有机相并将其溶解在meoh(10ml)中。加入500mg10％的pd/c。将反应混合物脱气2次，每次用氢气替换真空，然后在室温下在h2下搅拌过夜。过滤该混合物并用旋转蒸发器浓缩，得到zbb222-2(300mg)。esi-ms计算c8h15n2s[m+h]+＝171.09；实测：171.44。
2-(叔丁基)-n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-4-甲基噻唑-5-胺(化合物编号202)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，2-(叔丁基)-4-甲基噻唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到35mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号202。esi-ms计算c25h29n6o2s[m+h]+＝477.20；实测：477.44.1hnmr(300mhz,meod)δ8.02(s,1h),7.49(s,1h),3.96(s,3h),2.73(s,3h),2.40(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h),1.51(s,9h)。
实施例156
1-乙基-3-异丙基-1h-吡唑-5-胺(zbb243)的合成
将4-甲基-3-氧代戊腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入乙基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.9g所需产物。esi-ms计算c8h16n3[m+h]+＝154.13；实测：154.44。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-3-异丙基-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号203)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-乙基-3-异丙基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号203。esi-ms计算c25h30n7o2[m+h]+＝460.24；实测：460.66。
实施例157
1,3-二异丙基-1h-吡唑-5-胺(zbb246)的合成
将4-甲基-3-氧代戊腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入异丙基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.9g所需产物。esi-ms计算c9h18n3[m+h]+＝168.15；实测：168.44。
n-(1,3-二异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号83)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1,3-二异丙基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号83。esi-ms计算c26h32n7o2[m+h]+＝474.26；实测：474.44。
实施例158
1-环丙基-3-异丙基-1h-吡唑-5-胺(zbb247)的合成
将4-甲基-3-氧代戊腈(1g)溶解在乙醇(30ml)中。加入环丙基肼hcl盐(5g)，并将该混合物加热回流过夜。在旋转蒸发器中浓缩该混合物，随后加入乙酸乙酯和nahco3水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，并合并、干燥和在旋转蒸发器中浓缩有机层。通过快速柱色谱法纯化剩余的残余物并得到0.9g所需产物。esi-ms计算c9h16n3[m+h]+＝166.13；实测：166.56。
n-(1-环丙基-3-异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号205)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有s13(60mg)，1-环丙基-3-异丙基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号205。esi-ms计算c26h30n7o2[m+h]+＝472.24；实测：472.44。
实施例159
2-氨基-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-醇(zbb251)的合成
在室温下向圆底烧瓶中加入s6(1g)，nh2cn(0.2g)浓盐酸(0.2ml)和二恶烷(30ml)。将反应混合物升温至回流(约90℃)2天。然后将反应物冷却至室温并在旋转蒸发器中除去挥发性组分。向该粗混合物中加入10％的naoh水溶液(20ml)，并将该溶液加热回流8小时。然后将挥发性组分在旋转蒸发器中除去，并用2nhcl水溶液酸化含水残余物。允许产物zbb251在0℃下沉淀。将混合物过滤得到0.5g纯zbb251。esi-ms计算c16h16n5o3[m+h]+＝326.12；实测：326.44.1hnmr(300mhz,dmso)δ11.31(s,1h),10.64(s,1h),7.39(s,1h),7.04(s,1h),6.66(s,2h),3.78(s,3h),2.27(s,3h),2.07(s,3h)。
实施例160
4-氯代-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-胺(zbb253)的合成
向圆底烧瓶中加入zbb251(0.278g，0.8mmol)和pocl3(8ml)。将混合物在90℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温并在旋转蒸发器中除去挥发性组分。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，并且用nahco3饱和水溶液将ph调节至8。将混合物过滤得到0.208g棕色固体的zbb253。esi-ms计算c16h15cln5o2[m+h]+＝344.09；实测：344.44。
实施例161
n4-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二胺(化合物编号206)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb253(60mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到15mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号206。esi-ms计算c23h25n8o2[m+h]+＝445.21；实测：445.54.1hnmr(300mhz,meod)δ7.70(s,1h),7.35(s,1h),6.09(s,1h),3.92(s,3h),3.74(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.98-1.88(m,1h),1.03-0.93(m,2h),0.78-0.71(m,2h)。
实施例162
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-(甲氧基甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-醇(zbb256)的合成
在室温下向圆底烧瓶中加入s6(1g)，meoch2cn(4ml)和4m在二恶烷中的盐酸溶液(4ml)。将反应混合物搅拌过夜。在旋转蒸发器中除去挥发性组分。向该粗混合物中加入10％的naoh水溶液(10ml)和etoh(20ml)，并将该溶液加热回流8小时。然后将挥发性组分在旋转蒸发器中除去，并用2nhcl水溶液酸化含水残余物。允许产物zbb256在0℃下沉淀。将混合物过滤得到0.8g纯zbb256。esi-ms计算c18h19n4o4[m+h]+＝355.14；实测：355.44.1hnmr(300mhz,dmso)δ12.15(s,1h),12.09(s,1h),7.59(s,1h),7.26(s,1h),4.39(s,2h),3.84(s,3h),3.38(s,3h),2.29(s,3h),2.09(s,3h)。
实施例163
4-(4-氯代-6-甲氧基-2-(甲氧基甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(zbb257)的合成
向圆底烧瓶中加入zbb256(0.278g，0.8mmol)和pocl3(8ml)。将混合物在90℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温并在旋转蒸发器中除去挥发性组分。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，并且用nahco3饱和水溶液将ph调节至8。将混合物过滤得到0.22g棕色固体的zbb257。esi-ms计算c18h18cln4o3[m+h]+＝373.10；实测：373.44.1hnmr(300mhz,dmso)δ7.83(s,1h),7.48(s,1h),4.62(s,2h),3.90(s,3h),3.42(s,3h),2.32(s,3h),2.12(s,3h)。
实施例164
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-(甲氧基甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号207)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb257(60mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(2ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到15mg的、作为cf3co2h盐的zbb259。esi-ms计算c25h28n7o3[m+h]+＝474.22；实测：474.67.1hnmr(300mhz,meod)δ7.50(s,1h),7.38(s,1h),6.11(s,1h),4.69(s,2h),3.90(s,3h),3.76(s,3h),3.59(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.05–1.86(m,1h),1.04-0.95(m,2h),0.78-0.72(m,2h)。
实施例165
如实施例51中对化合物编号97的描述制备下列化合物：
n-(3-氯代-4-氟苯基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号107)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.85-7.77(m,2h),7.62-7.54(m,1h),7.47-7.36(m,2h),3.90(s,3h),2.68(s,3h),2.33(s,3h),2.16(d,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(5-甲基吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号108)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm9.47(s,1h),8.56(s,1h),8.42(s,1h),8.04(s,1h),7.41(s,1h),3.98(s,3h),2.70(s,3h),2.60(s,3h),2.34(s,3h),2.18(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(喹啉-8-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号210)
1h-nmr(300mhz,cdcl3)δppm13.36(s,1h),11.10(s,1h),9.19(dd,j＝2.25,6.67hz,1h),8.93(dd,j＝1.51,4.24hz,1h),8.34(dd,j＝1.38,8.22hz,1h),8.11(s,1h),7.78-7.66(m,2h),7.65-7.54(m,2h),4.17(s,3h),2.98(s,3h),2.39(s,3h),2.25(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(喹啉-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号211)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm9.14-9.05(m,1h),8.80(d,j＝7.79hz,1h),8.25(d,j＝8.65hz,1h),8.06(t,j＝7.96hz,1h),7.90(d,j＝7.15hz,1h),7.84-7.73(m,2h),7.48(s,1h),3.78(s,3h),2.54(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-间-甲苯基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号212)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.48-7.22(m,6h),3.75(s,3h),2.69(s,3h),2.42(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(3-甲氧基苯基)-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号213)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.51-7.28(m,3h),7.15-6.98(m,3h),3.83(s,3h),3.74(s,3h),2.71(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(3-(三氟甲基)苯基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号214)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.97(s,1h),7.87(d,j＝7.56hz,1h),7.75-7.61(m,3h),7.45(s,1h),3.85(s,3h),2.69(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h)；
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-3,5-二甲基异恶唑-4-胺(化合物编号215)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.02(s,1h),7.49(s,1h),3.96(s,3h),2.69(s,3h),2.44(s,3h),2.34(s,3h),2.26(s,3h),2.16(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3-乙基苯基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号216)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.52-7.40(m,2h),7.37-7.27(m,3h),7.16(s,1h),3.69(s,3h),2.78-2.64(m,5h),2.30(s,3h),2.13(s,3h),1.21(t,j＝7.59hz,3h)；
n-(3-氯代-2-氟苯基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号217)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.92(s,1h),7.61-7.53(m,2h),7.46(s,1h),7.37-7.29(m,1h)3.91(s,3h),2.67(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号218)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.40(s,1h),7.14(s,1h),6.92-6.81(m,3h),3.79(s,3h),3.70(s,3h),2.71(s,3h),2.36(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h)；
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-3,4-二甲基异恶唑-5-胺(化合物编号219)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.74(s,1h),7.40(s,1h),3.90(s,3h),2.64(s,3h),2.33(s,3h),2.30(s,3h),2.16(s,3h),1.92(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1h-吲哚-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号220)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.57(d,j＝8.13hz,1h),7.39(s,1h),7.37(d,j＝3.18hz,1h),7.29(t,j＝7.82hz,1h),7.18(d,j＝6.85hz,1h),7.12(br.s.,1h),6.40(dd,j＝0.78,3.20hz,1h),3.57(s,3h),2.64(s,3h),2.29(s,3h),2.11(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(异喹啉-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号221)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm9.66(s,1h),8.60-8.52(m,1h),8.43(d,j＝8.60hz,1h),8.31-8.13(m,2h),8.02(t,j＝7.87hz,1h),7.92(s,1h),7.47(s,1h),3.84(s,3h),2.48(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-4,5-二甲基异恶唑-3-胺(化合物编号222)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.85(s,1h),7.44(s,1h),3.92(s,3h),2.70(s,3h),2.45(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.99(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(异喹啉-8-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号223)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm9.75(s,1h),8.68-8.58(m,1h),8.40(d,j＝6.43hz,1h),8.28-8.14(m,2h),8.01(d,j＝6.82hz,1h),7.80(s,1h),7.46(s,1h),3.80(s,3h),2.51(s,3h),2.34(s,3h),2.16(s,3h)；
n-(5-氯代-2-氟苯基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号224)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.88(s,1h),7.84-7.78(m,1h),7.49-7.30(m,3h),3.91(s,3h),2.66(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；
n-(3-氯代-5-氟苯基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号225)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.82(s,1h),7.57(s,1h),7.51(d,j＝10.68hz,1h),7.43(s,1h),7.15(d,j＝7.91hz,1h),3.91(s,3h),2.71(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-苯基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号226)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.60-7.51(m,4h),7.48-7.37(m,3h),3.75(s,3h),2.69(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号227)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.43(dd,j＝1.42,4.83hz,1h),8.07(dd,j＝1.44,7.95hz,1h),7.93(br.s.,1h),7.79(s,1h),7.47(s,1h),7.27(dd,j＝4.82,7.93hz,1h),4.02(s,3h),3.86(s,3h),2.60(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(2-甲基喹啉-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号228)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.93(d,j＝8.71hz,1h),8.21-8.11(m,2h),7.95(dd,j＝2.17,6.41hz,1h),7.89(s,1h),7.83(d,j＝8.81hz,1h),7.47(s,1h),3.84(s,3h),2.98(s,3h),2.49(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；
n-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)苯并[d]噻唑-7-胺(化合物编号229)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm9.31(s,1h),8.19(dd,j＝1.11,8.04hz,1h),7.75(t,j＝7.88hz,1h),7.67(d,j＝7.69hz,1h),7.54(s,1h),7.46(s,1h),3.74(s,3h),2.62(s,3h),2.32(s,3h),2.14(s,3h)；
n1-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)-n3,n3-二甲基苯-1,3-二胺(化合物编号230)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.44(m,2h),7.20(s,1h),7.03-6.87(m,3h),3.70(s,3h),3.01(s,3h),2.71(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(吲哚-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号231)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.45(br.s.,1h),7.43(s,1h),7.38(t,j＝7.93hz,1h),7.17(d,j＝7.56hz,1h),7.11(d,j＝7.72hz,1h),3.79(s,3h),3.71(t,j＝8.04hz,2h),3.09(t,j＝7.89hz,2h),2.68(s,3h),2.32(s,3h),2.14(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基吲哚-6-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号232)
esi-msm/z455.83(m+h)+，
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1h-吲哚-6-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号233)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.74(d,j＝8.40hz,1h),7.57(s,1h),7.40(d,j＝3.17hz,1h),7.36(s,1h),7.18(dd,j＝1.93,8.37hz,1h),6.70(br.s.,1h),6.58(dd,j＝0.85,3.17hz,1h),3.29(s,3h),2.69(s,3h),2.27(s,3h),2.08(s,3h)；
n-(2,3-二氢苯并呋喃-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号234)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.43(s,1h),7.28(t,j＝8.02hz,1h),7.25(s,1h),6.96(dd,j＝0.68,7.95hz,1h),6.86(d,j＝7.74hz,1h),4.60(t,j＝8.67hz,2h),3.73(s,3h),3.15(t,j＝8.66hz,2h),2.71(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吲唑-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号235)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.02(d,j＝0.82hz,1h),7.68(d,j＝8.53hz,1h),7.57(dd,j＝7.30,8.48hz,1h),7.43(s,1h),7.34(s,1h),7.29(dd,j＝0.47,7.17hz,1h),4.15(s,3h),3.65(s,3h),2.65(s,3h),2.30(s,3h),2.13(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-1h-吲哚-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号236)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.58(d,j＝8.22hz,1h),7.40(s,1h),7.40-7.28(m,2h),7.22(dd,j＝0.57,7.48hz,1h),7.17(br.s.,1h),6.39(dd,j＝0.73,3.19hz,1h),3.90(s,3h),3.58(s,3h),2.63(s,3h),2.30(s,3h),2.12(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(3,5-二甲基苯基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号237)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.42(s,1h),7.21-7.09(m,4h),3.70(s,3h),2.70(s,3h),2.37(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2,5-二甲基苯基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号238)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.43(s,1h),7.38(d,j＝8.12hz,1h),7.34-7.23(m,3h),3.74(s,3h),2.67(s,3h),2.36(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h)；
n-(3,5-二环丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号239)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.18(br.s.,1h),7.47(s,1h),3.96(br.s.,3h),3.90(s,3h),2.70(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.84-1.67(m,2h),1.01-0.67(m,8h)；
n-(3,5-二乙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号240)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.17(s,1h),7.47(s,1h),3.96(br.s.,3h),3.88(s,3h),2.82-2.49(m,7h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.36-1.01(m,6h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1,3,5-三乙基-1h-吡唑-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号241)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.16(s,1h),7.47(s,1h),4.28-4.12(m,2h),3.96(s,3h),2.85-2.52(m,7h),2.33(s,3h),2.15(s,3h),1.57-1.38(m,3h),1.34-0.96(m,6h)；
n-(3,5-二异丙基-1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号242)
esi-msm/z488.67(m+h)+；以及
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-异丙基苯基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号243)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.63(d,j＝7.83hz,1h),7.56-7.47(m,1h),7.45-7.39(m,3h),6.89(br.s.,1h),3.64(s,3h),2.69(s,3h),2.29(s,3h),2.12(s,3h),1.31(d,j＝6.82hz,6h)。
实施例166
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(4-甲基吡啶-3-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号109)的合成：
将pd2(dba)3(18.3mg,0.02mmol)和binap(25mg,0.04mmol)在无水甲苯中的溶液在预热的油浴(温度120℃)中回流5分钟。短暂冷却之后，将该混合物转移到含有s13(68mg,0.2mmol)，4-甲基吡啶-3-胺(43mg,0.4mmol)，k3po4(127mg,0.6mmol)和甲苯(1ml)的圆底烧瓶中，并使该混合物回流。在回流过夜之后，冷却反应物至rt，用甲醇淬灭，并浓缩至干燥。将粗固体重新溶解在3：1的甲醇：水中，酸化，过滤并通过hplc纯化，得到为其tfa盐的标题化合物。1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm9.12(s,1h),8.63(d,j＝4.92hz,1h),8.00-7.92(m,2h),7.46(s,1h),3.95(s,3h),2.64(s,3h),2.62(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)。
实施例167
如实施例166中对化合物编号109所描述的制备下面的化合物。在一些例子中，naot-bu代替k3po4使用。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(4-甲基吡啶-2-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号110)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.42(d,j＝5.53hz,1h),8.22(s,1h),7.58(s,1h),7.46(s,1h),7.29(d,j＝5.67hz,1h),4.02(s,3h),2.88(s,3h),2.56(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(6-甲基吡啶-2-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号111)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.25(s,1h),8.02(t,j＝8.02hz,1h),7.53(d,j＝8.28hz,1h),7.48(s,1h),7.28(d,j＝7.67hz,1h),4.01(s,3h),2.90(s,3h),2.74(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(喹啉-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号247)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.74(d,j＝7.83hz,1h),8.30-8.23(m1h),8.03-7.71(m,3h),7.41(s,1h),6.95-6.75(m,2h),3.41(s,3h),2.77(s,3h),2.29(s,3h),2.11(s,3h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(2-甲基吡啶-4-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号248)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm8.39(d,j＝7.07hz,1h),8.20(dd,j＝2.39,7.03hz,1h),8.05(d,j＝2.16hz,1h),7.89(s,1h),7.40(s,1h),3.95(s,3h),2.76(s,3h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h)；
n-(3-环丙基-4-氟-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号249)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.96(s,1h),7.45(s,1h),3.94(s,6h),2.71(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.96-1.80(m,1h),1.18-1.03(m,2h),0.99-0.84(m,2h)；
n-(3-环丙基-1-乙基-4-氟-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号250)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.66(br.s.,1h),7.44(s,1h),4.01(q,j＝7.07hz,2h),3.91(s,3h),2.65(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),2.01-1.86(m,1h),1.39(t,j＝7.19hz,3h),1.05-0.83(m,4h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-3-(1-甲基环丙基)-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号251)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.44(s,1h),7.38(br.s.,1h),6.14(s,1h),3.88(s,3h),3.75(s,3h),2.69(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.45(s,3h),0.99-0.90(m,2h),0.84-0.72(m,2h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-乙基-3-(1-甲基环丙基)-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号252)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.43(s,1h),7.12(br.s.,1h),6.10(s,1h),4.12(q,j＝7.22hz,2h),3.84(s,3h),2.70(s,3h),2.32(s,3h),2.14(s,3h),1.50-1.38(m,6h),0.99-0.91(m,2h),0.81-0.74(m,2h)；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(1-异丙基-3-(1-甲基环丙基)-1h-吡唑-5-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号253)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.40(s,1h),7.09(br.s.,1h),6.03(s,1h),4.62-4.43(m,1h),3.84(s,3h),2.66(s,3h),2.32(s,3h),2.14(s,3h),1.47(d,j＝6.79hz,6h),1.44(s,3h),0.99-0.88(m,2h),0.79-0.68(m,2h)；和
n-(3-环丙基-4-氟-1-异丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号254)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.60(br.s.,1h),7.44(s,1h),4.52-4.38(m,1h),3.91(s,3h),2.65(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.99-1.88(m,1h),1.44(d,j＝6.57hz,6h),1.01-0.85(m,4h)。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n-(3-(1-甲氧基环丙基)-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号260)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.60(s,1h),7.43(s,1h),6.33(s,1h),3.90(s,3h),3.79(s,3h),3.34(s,3h),2.66(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h),1.22-1.11(m,2h),1.11-1.01(m,2h)
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-n-(1-甲基-3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1h-吡唑-5-基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号261)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.72(s,1h),7.43(s,1h),6.43(s,1h),3.91(s,3h),3.78(s,3h),2.65(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.41-1.25(m,4h)
2-(3-环丙基-5-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基氨基)-1h-吡唑-1-基)-n-乙基乙酰胺(化合物编号262)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.86(s,1h),7.44(s,1h),6.28(s,1h),4.95-4.84(m,2h),3.95(s,3h),3.30-3.21(m,2h),2.72(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),2.01-1.88(m,1h),1.14(t,j＝7.30hz,3h),1.02-0.92(m,2h),0.80-0.71(m,2h)
n-(3-环丙基-1-(哌啶-4-基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号263)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.39(s,1h),7.33(s,1h),5.93(s,1h),4.59-4.41(m,1h),3.87(s,3h),3.62-3.48(m,2h),3.16-3.00(m,2h),2.61(s,3h),2.48-2.19(m,7h),2.15(s,3h),2.03-1.88(m,1h),1.00-0.91(m,2h),0.74-0.66(m,2h)
n-(3-环丙基-1-(1-乙基哌啶-4-基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号264)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.40(s,1h),7.31(s,1h),5.94(s,1h),4.59-4.40(m,1h),3.86(s,3h),3.76-3.61(m,2h),3.15(q,j＝7.34hz,2h),3.10-2.94(m,2h),2.62(s,3h),2.55-2.23(m,7h),2.15(s,3h),2.03-1.87(m,1h),1.33(t,j＝7.32hz,3h),1.01-0.88(m,2h),0.76-0.64(m,2h)
1-(4-(3-环丙基-5-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基氨基)-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙酮(化合物编号265)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.39(s,1h),7.25(s,1h),5.90(s,1h),4.66-4.55(m,1h),4.50-4.33(m,1h),4.10-3.98(m,1h),3.86(s,3h),3.24-3.01(m,2h),2.62(s,3h),2.32(s,3h),2.23-1.87(m,11h),0.99-0.86(m,2h),0.73-0.62(m,2h)；esi-msm/z555.58(m+h)+；
(2s)-4-(3-环丙基-5-(7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基氨基)-1h-吡唑-1-基)丁烷-1,2-二醇(化合物编号280)：
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.53(s,1h),7.44(s,1h),6.12(s,1h),4.31-4.18(m,2h),3.91(s,3h),3.57-3.34(m,3h),2.70(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),2.04-1.76(m,3h),1.05-0.91(m,2h),0.80-0.68(m,2h)；
(s)-3-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙烷-1,2-二醇(化合物编号281)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.62(s,1h),7.46(s,1h),6.34(s,1h),4.44-4.23(m,2h),4.19-4.04(m,1h),3.93(s,3h),3.68-3.52(m,2h),2.75(s,3h),2.33(s,3h),2.15(s,3h),2.03-1.90(m,1h),1.04-0.93(m,2h),0.81-0.68(m,2h)；
n-(1-((1,4-二恶烷-2-基)甲基)-3-环丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号282)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.43(s,1h),7.00(s,1h),6.12(s,1h),4.25-4.17(m,2h),4.07-3.95(m,1h),3.89-3.79(m,4h),3.71-3.39(m,5h),2.73(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),2.03-1.89(m,1h),1.02-0.93(m,2h),0.74-0.65(m,2h)；
n-(3-环丙基-1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号283)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.43(s,1h),7.06(s,1h),5.96(s,1h),4.50-4.35(m,1h),4.02(dd,j＝3.96,11.84hz,2h),3.85(s,3h),3.52-3.38(m,2h),2.69(s,3h),2.38-2.19(m,5h),2.14(s,3h),2.06-1.83(m,3h),1.01-0.90(m,2h),0.73-0.63(m,2h)；
n-(3-环丙基-1-(2-吗啉代乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号284)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.56(s,1h),7.44(s,1h),6.11(s,1h),4.50(t,j＝6.03hz,2h),4.01-3.87(m,7h),3.70(t,j＝6.03hz,2h),3.52-3.36(m,4h),2.69(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),2.05-1.91(m,1h),1.04-0.91(m,2h),0.82-0.70(m,2h)；
实施例168
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺(化合物编号255)的合成
在圆底烧瓶中，将4-(1-氯代-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(10mg,0.03mmol),3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(9.06mg,0.06mmol)和叔丁醇钠(11.5mg,0.12mmol)溶解在无水甲苯(10ml)中。在两颈容器将pd2(dba)3(10.8mg,0.012mmol)和davephos(9.4mg,0.024mmol)在无水甲苯中的溶液(5ml)加热回流5分钟，随后通过针注射器转移到圆底烧瓶中。将得到的混合物抽真空，并用氮气气球保护，并加热至回流过夜。当反应达到完成，用三氟乙酸酸化体系，并在真空中浓缩。将残余物溶解在meoh/h2o(3：1)体系中，过滤并通过制备型hplc纯化。将产物冷冻干燥，得到无色粉末状的标题化合物(2.4mg，产率18.7％)。1hnmr(300mhz,meod-d4)δ8.01(s,1h),7.80(d,1h,j＝7.2hz),7.56(s,1h),7.37(d,1h,j＝7.2hz),6.24(s,1h),3.98(s,3h),3.80(s,3h),2.36(s,3h),2.19(s,3h),2.00(m,1h),1.00(m,2h),0.81(m,2h).esimsm/z[m+h]+calcd.＝429.49；实测＝430.17。
以类似的方式制备下列化合物：
n-(3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺(化合物编号285)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.90(s,1h),7.08(d,j＝7.03hz,1h),7.55(s,1h),7.37(d,j＝7.05hz,1h),6.17(s,1h),4.14(q,j＝7.23hz,2h),3.94(s,3h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),2.05-1.91(m,1h),1.43(t,j＝7.23hz,3h),1.04-0.93(m,2h),0.83-0.72(m,2h)；和
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n-(2-异丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺(化合物编号286)
1h-nmr(300mhz,cd3od)δppm7.93(s,1h),7.81(d,j＝7.04hz,1h),7.56(s,1h),7.37(d,j＝7.03hz,1h),4.61(hept.,j＝6.55hz,1h),3.94(s,3h),2.81(t,j＝7.19hz,2h),2.63-2.39(m,4h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),1.49(d,j＝6.65hz,6h)。
实施例169
如实施例168中对化合物编号255所描述的制备下面的化合物。
n-(1-环戊基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺(化合物编号256)
1hnmr(300mhz,meod-d4)δ8.08(s,1h),7.78(d,1h,j＝7.2hz),7.57(s,1h),7.36(d,1h,j＝7.2hz),6.34(s,1h),3.98(s,3h),2.38(s,3h),2.36(s,3h),2.19(s,3h),2.07(m,4h),1.95(m,2h),1.66(m,2h),missingoneproton.esimsm/z[m+h]+calcd.＝457.55；实测＝457.83；
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-甲氧基-n-(1-甲基-1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺(化合物编号257)
1hnmr(300mhz,meod-d4)δ8.73(d,1h,j＝3.9hz),8.46(d,1h,j＝8.4hz),8.21(s,1h),8.05(d,1h,j＝6.6hz),7.59(s,1h),7.46(d,j＝7.2hz),7.39(m,1h),4.25(s,3h),4.05(s,3h),2.38(s,3h),2.21(s,3h).esimsm/z[m+h]+calcd.＝440.48；实测＝440.50；
n-(3-环丙基-1-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基-异恶唑-4-基)-6-甲氧基-n,2,9-三甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号258)
在圆底烧瓶中，加入化合物编号163(13mg)。加入多聚甲醛(30mg)，nabh(oac)3(212mg)和1,2-二氯甲烷(5ml)，然后通过注射器加入乙酸(0.1ml)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用反相hplc纯化，得到2mg的、作为三氟乙酸的盐的标题化合物258。esi-ms计算c29h35n8o2[m+h]+＝527.29；实测：527.67；
n-(3-环丙基-1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号266)
步骤1:将3-环丙基-3-氧代丙腈(1.4g,8mmol)和2-甲氧基乙基肼-hcl(1.0g,8.0mmol)在乙醇(20ml)中混合并加热回流过夜。将该反应混合物冷却至室温并通过旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，用旋转蒸发器浓缩。通过快速柱色谱纯化剩余的残余物，得到0.89g(4.92mmol,62％产率)的3-环丙基-1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-5-胺。1hnmr(cdcl3,300mhz):5.12(s,1h),4.12-4.06(m,2h),3.95(s,2h),3.70-3.64(m,2h),3.32(s,3h),1.95-1.70(m,1h),0.90-0.80(m,2h),0.70-0.60(m,2h).esi-ms计算c9h16n3o[m+h]+＝182.13，实测：182.50。
步骤2:根据用于制备化合物编号135的类似方法从s13(444mg)和3-环丙基-1-(2-甲氧基乙基)-1h-吡唑-5-胺(456mg,2.51mmol)制备化合物编号266。得到241mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号266。1hnmr(meod-d4,300mhz):7.44(s,1h),6.90(s,1h),6.11(s,1h),4.34(t,j＝4.62hz,2h),3.83(s,3h),3.78(t,j＝4.81hz,2h),3.23(s,3h),2.74(s,3h),2.30(s,3h),2.12(s,3h),2.00-1.85(m,1h),1.00-0.90(m,2h),0.75-0.65(m,2h).esi-ms计算c26h30n7o3[m+h]+＝488.24；实测：488.58；
n-(3-环丙基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基-异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号267)
步骤1:将3-环丙基-3-氧代丙腈(900mg,5mmol)和4-肼基-1-甲基-哌啶-hcl(1.0g,4.9mmol)在乙醇(20ml)中混合并加热回流过夜。将该反应混合物冷却至室温并通过旋转蒸发器除去乙醇。加入水，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，用旋转蒸发器浓缩。通过快速柱色谱纯化剩余的残余物，得到0.81g(74％产率)的3-环丙基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1h-吡唑-5-胺。1hnmr(cdcl3,300mhz):5.11(s,1h),3.90-3.40(m,1h),3.60(s,2h),3.10-2.85(m,2h),2.40-2.20(m,2h),2.28(s,3h),2.20-2.00(m,2h),1.95-1.70(m,3h),0.90-0.80(m,2h),0.70-0.50(m,2h)。esi-ms计算c12h21n4[m+h]+＝221.18，实测：221.50。
步骤2:根据用于制备化合物编号135的类似方法从s13(650mg)和3-环丙基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1h-吡唑-5-胺(810mg,3.67mmol)制备化合物编号267。得到414mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号267。1hnmr(meod-d4,300mhz):7.44(s,1h),6.90(s,1h),5.98(s,1h),5.70-5.50(m,1h),3.82(s,3h),3.70-3.65(m,2h),3.20-3.00(m,2h),2.86(s,3h),2.71(s,3h),2.60-2.40(m,2h),2.30(s,3h),2.30-2.20(m,2h),2.12(s,3h),2.00-1.85(m,1h),1.00-0.90(m,2h),0.80-0.60(m,2h).esi-ms计算c29h35n8o2[m+h]+＝527.29；实测：527.50；
1-(3-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基)乙烷-1-酮(化合物编号277)
在圆底烧瓶中，加入化合物编号163(40mg)。加入三乙基胺(0.3ml)和thf(5ml)，随后加入乙酸酐(0.1ml)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用反相hplc纯化混合物，得到19mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号277。1hnmr(meod-d4,300mhz):7.50(s,1h),7.46(s,1h),6.06(s,1h),5.20-5.05(m,1h),4.63(dd,j＝9.00,5.36hz,1h),4.51(t,j＝8.69hz,1h),4.33(dd,j＝9.98,5.53hz,1h),4.25(t,j＝9.07hz,1h),3.89(s,3h),2.68(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h),2.10-1.96(m,1h),1.91(s,3h),1.05-0.95(m,2h),0.80-0.70(m,2h).esi-ms计算c28h31n8o3[m+h]+＝527.25；实测：527.50。
3-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并-[4,5-b]吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸甲酯(化合物编号278)
在圆底烧瓶中，加入化合物编号163(30mg)。加入三乙基胺(0.3ml)和thf(5ml)，随后加入氯甲酸甲酯(0.1ml)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用反相hplc纯化混合物，得到6mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号278。1hnmr(meod-d4,300mhz):7.52(s,1h),7.46(s,1h),6.05(s,1h),5.15-5.05(m,1h),4.50-4.35(m,1h),4.35-4.20(m,1h),3.89(s,3h),3.66(s,3h),2.66(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),2.10-2.00(m,1h),2.03(s,3h),1.05-0.95(m,2h),0.80-0.70(m,2h).esi-ms计算c28h31n8o4[m+h]+＝543.25；实测：543.67；和
n-(3-环丙基-1-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号279)
在圆底烧瓶中，加入化合物编号163(40mg)。加入乙醛(0.1ml)，nabh(oac)3(424mg)和1,2-二氯乙烷(5ml)，随后通过注射器加入乙酸(0.05ml)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用反相hplc纯化混合物，得到40mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号279。1hnmr(meod-d4,300mhz):7.66(s,1h),7.47(s,1h),6.08(s,1h),5.50-5.30(m,1h),4.80-4.60(m,2h),4.55-4.30(m,2h),3.90(s,3h),3.54(q,j＝7.43hz,2h),2.66(s,3h),2.31(s,3h),2.14(s,3h),2.10-2.00(m,1h),1.28(t,j＝7.43hz,3h),1.05-0.95(m,2h),0.85-0.75(m,2h).esi-ms计算c28h33n8o2[m+h]+＝513.27；实测：513.58。
实施例170
方案1
步骤1：6-溴代-5-甲氧基-2-硝基吡啶-3-胺的合成
在室温下向5-甲氧基-2-硝基吡啶-3-胺(1.32g,7.8mmol)的dmf(15ml)搅拌溶液中分批加入nbs(1.46g,8.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。加入水(30ml)。过滤黄色沉淀过滤，用水洗涤并干燥，得到标题化合物(1.9g,90％)。1hnmr(300mhz,dmso):7.60(s,2h),7.00(s,1h),3.91(s,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝248.0，实测：248.1。
步骤2：2-溴代-5-氯代-3-甲氧基-6-硝基吡啶的合成
将亚硝酸戊酯(7.5mmol,1ml)和cucl2(0.8g,6mmol)的ch3cn(20ml)溶液加热到55℃。将固体6-溴-5-甲氧基-2-硝基吡啶-3-胺(1.35g,5.5mmol)缓慢地加入到反应混合物中伴随着气体逸出。一旦加入完成，将反应温度升高至65℃，并且再搅拌另外1小时。将反应混合物冷却至室温并在真空下除去溶剂。将残余物用水和etoac稀释。将有机层分离，经na2so4干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(洗脱剂：己烷/etoac＝1/1)纯化，得到yh2固体(1.2g,79％)。1hnmr(300mhz,cdcl3ppm)7.30(s,1h),4.02(s,3h)。
步骤3:4-(5-氯代-3-甲氧基-6-硝基吡啶-2-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
向圆底烧瓶中加入yh2(1.2g,4.3mmol)，3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(1.45g,6.5mmol)，pd(dppf)ch2cl2(175mg,0.2mmol),二恶烷(20ml)和na2co3(2m,5ml)。将反应混合物在100℃下在n2下加热12小时。在用etoac(2×100ml)萃取之前，将溶液冷却。将有机层合并并用盐水(50ml)洗涤。将有机层分离，经na2so4干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：dcm/etoac＝15：1)，得到固体yh3(610mg,50％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)7.47(s,1h),4.01(s,3h),2.43(s,3h),2.30(s,3h)。
步骤4：2-氰基-2-(6-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-甲氧基-2-硝基吡啶-3-基)乙酸乙酯的合成
在0℃下向nah(60％在矿物油中，176mg,4.4mmol)的dmf(8ml)悬浮液中逐滴加入氰基乙酸乙酯(452mg,4mmol)。将溶液温热至室温并搅拌15分钟。然后，在滴加yh3(530mg,1.9mmol)的thf/dmf(2ml/2ml)溶液之前将反应混合物冷却至0℃。在通过1mhcl中和之前在室温下搅拌反应1小时。用etoac(2×20ml)萃取反应混合物。将有机层合并，并用盐水(3×20ml)洗涤。将有机层分离，经na2so4干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(洗脱剂：己烷/etoac＝1/1)纯化，得到为油状物的yh4(648mg,95％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)：7.67(s,1h),5.80(s,1h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),4.09(s,3h),2.47(s,3h),2.35(s,3h),1.39(t,j＝7.1hz,3h)。
步骤5：2-氨基-6-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-甲氧基-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸乙酯的合成
向yh4(648mg，1.8mmol)的乙酸(10ml)溶液中加入铁粉(360mg，6.4mmol)。将反应在室温下搅拌6小时，然后加入dcm/meoh(4:1，20ml)并过滤悬浮液。在真空下蒸发滤液，并将残余物用etoac(100ml)和水(100ml)处理。分离有机层，依次用nahco3和盐水洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱(洗脱剂：dcm/meoh＝9/1)纯化残余物，得到固体状的yh5(430mg，72％)。1hnmr(300mhz,cdcl312.50(s,1h),7.74(s,1h),5.72-4.79(m,2h),4.40(q,j＝7.0hz,2h),3.89(s,3h),2.40(s,3h),2.29(s,3h),1.45(t,j＝7.0hz,3h)。
步骤6:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-3,9-二氢-4h-吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮的合成
将萘-2-基甲基硫代乙酰亚胺氢溴酸盐(naphthalen-2-ylmethylethanimidothioatehydrobromide)(3.55g，12mmol)加入到剧烈搅拌的k2co3(1.6g，12mmol)在水(10ml)和dcm(10ml)中的溶液中。10分钟后，分离有机层并用mg2so4干燥。将澄清溶液倒入其中含有yh5(400mg，1.2mmol)的烧瓶中。向该溶液中加入乙酸(0.34ml，6mmol)，将反应混合物搅拌12小时。将溶液蒸发，得到粗油状物。将naoh溶液(1m，10ml)加入到粗油状物中，然后加入乙醇(30ml)。将反应混合物加热至80℃。保持2小时。溶液冷却后，在真空下蒸发乙醇，将水溶液冷却至0℃，缓慢加入1mhcl直到ph＝4。混合物用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱(洗脱剂：dcm/meoh＝9/1)纯化残余物，得到固体状的yh6(34mg，8％)。1hnmr(300mhz,dmso12.56(s,1h),7.90(s,1h),3.90(s,3h),2.43(s,3h),2.35(s,3h),2.20(s,3h)。
步骤7:4-(4-氯代-6-甲氧基-2-甲基-9h-吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
将yh6(34mg，0.1mmol)在pocl3(4ml)中的悬浮液在90℃下加热1小时，然后在真空下除去挥发物。将残余物溶于乙酸乙酯(4ml)，加入饱和nahco3溶液直至ph＝9。过滤沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤沉淀，得到标题化合物(30mg，88％)。esi-ms计算[m+h]+＝344.1，实测：344.4。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(化合物编号304)的合成
将yh7(12mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(20mg)，pd2(dba)3(5mg)，binap(6mg)，k3po4(30mg)和无水甲苯(2ml)混合，将反应混合物加热回流12小时。粗混合物用etoac稀释，用水洗涤有机层。除去溶剂，残余物通过反相hplc纯化，得到3mg标题化合物。1hnmr(300mhz,cd3od):7.40(s,1h),6.09(s,1h),3.93(s,3h),3.76(s,3h),2.70(s,3h),2.41(s,3h),2.29(s,3h),2.02-1.90(m,1h),1.08-0.92(m,2h),0.85-0.70(m,2h)。
方案2
步骤1:1-溴代-3,4-二氟-2-甲氧基苯的合成
在0℃下将6-溴代-2,3-二氟苯酚(3g，14mmol)缓慢加入到nah(60％，672mg，16.8mmol)在dmf(14ml)的悬浮液中。在气体逸出停止后，将mei(3.0g，21mmol)缓慢加入到反应混合物中。加完后，将反应混合物温热至室温。将反应混合物搅拌12小时，然后用盐水淬灭。将溶液用etoac(2×20ml)萃取。合并，分离，用na2so4干燥并在真空下浓缩有机层。通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝16/1)纯化残余物，得到油状的yh9(2.4g，77％)。1hnmr(300mhz,cdcl37.26(dt,j＝7.5,2.4hz,1h),6.82(dt,j＝9.2,7.5hz,1h),4.00(d,j＝1.5hz,3h)。
步骤2:1-溴代-3,4-二氟-2-甲氧基-5-硝基苯的合成
在n2气氛下，在室温下，将tf2o(1m的dcm溶液，7.5ml)的溶液滴加到搅拌的四甲基硝酸铵(1.02g，7.5mmol)在7.5mldcm中的悬浮液中。在室温下搅拌1.5小时后，将搅拌的悬浮液冷却至-78℃。向搅拌的三氟甲磺酸硝鎓(nitroniumtriflate)悬浮液中滴加3滴溶解于2mldcm中的。然后移去冷却浴，使其温热至室温。将反应混合物用饱和nahco3溶液淬灭。将溶液用dcm(2×20ml)萃取。合并，分离，用na2so4干燥并在真空下浓缩有机层。通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝32/1)纯化残余物，得到油状的yh10(720mg，54％)。1hnmr(300mhz,cdcl38.12(ddd,j＝5.0,4.0,2.5hz,1h),4.19(d,j＝1.2hz,3h)。
步骤3:4-(3,4-二氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
向圆底烧瓶中装入yh10(1.4g，5mmol)，3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(1.4g，6mmol)，pd(dppf)ch2cl2(408mg，0.5mmol)，kf(696mg，12mmol)，甲苯(10ml)和水(10ml)。将反应混合物在n2下在100℃下加热12小时。将溶液冷却，然后用etoac(2×100ml)萃取。合并有机层，用盐水(50ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱法(洗脱剂：己烷/etoac＝4/1至2：1)纯化残余物，得到红色固体状的yh11，将其用二乙醚研磨，然后过滤，得到黄色固体状的yh11(1.0g，70％)。1hnmr(300mhz,cdcl37.80-7.64(m,1h),4.05(s,3h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)。
步骤4:2-氰基-2-(4-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-2-氟-3-甲氧基-6-硝基苯基)乙酸乙酯的合成
在0℃下向nah(60％在矿物油中，88mg，2.2mmol)在dmf(4ml)中的悬浮液中滴加氰基乙酸乙酯(226mg，2mmol)。将溶液温热至室温，并搅拌15分钟。然后将反应混合物冷却回0℃，然后滴加yh11(284mg，1mmol)的dmf(1ml)溶液。将反应物在0℃下搅拌1小时，然后用1mhcl中和。将反应混合物用etoac(2×20ml)萃取。合并有机层，用盐水(3×10ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱法(洗脱剂：己烷/etoac＝4/1，然后2/1)纯化残余物，得到油状的yh12(377mg，99％)。1hnmr(300mhz,cdcl37.94(d,j＝1.7hz,1h),5.62(d,j＝1.9hz,1h),4.45-4.25(m,2h),4.00(s,3h),2.37(s,3h),2.21(s,3h),1.39(q,j＝7.2hz,3h)。
步骤5:2-氨基-6-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-4-氟-5-甲氧基-1h-吲哚-3-羧酸乙酯的合成
向yh12(614mg，1.6mmol)的乙酸(6ml)溶液中加入铁粉(537mg，9.6mmol)。将反应混合物搅拌4小时，然后过滤并用乙酸(2ml)和溶剂(dcm/甲醇9:1)洗涤。真空下除去挥发物，残余物用溶剂(dcm/甲醇9:1)和水(10ml)处理。将混合物用etoac萃取，分离有机层，依次用naoh(1m，5ml)，nahco3和盐水洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。将残余物在etoac中研磨并过滤，得到固体状的yh13(360mg，63％)。1hnmr(300mhz,dmso10.92(m,1h),6.94(s,1h),6.78(s,1h),4.20(q,j＝7.1hz,2h),3.49(s,3h),2.29(s,3h),2.10(s,3h),1.29(t,j＝7.1hz,3h)；％)。esi-ms计算[m+h]+＝348.1，实测：348.2。
步骤6:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-氟-6-甲氧基-2-甲基-3,9-二氢-4h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-酮的合成
将hcl气体鼓泡到yh13(35mg，0.1mmol)的ch3cn(10ml)溶液中5分钟。将反应混合物加热至80℃，保持1小时。溶液冷却后，在真空下蒸发挥发物，加入naoh(1m，3ml)溶液，然后加入乙醇(9ml)。将溶液回流2小时，然后除去乙醇。在0℃下向残余物中加入1mhcl直至ph＝4。过滤沉淀物，用水(2ml)，乙酸乙酯(2ml)洗涤。将固体在真空下干燥并称重粗品30mg(88％)。1hnmr(300mhz,cd3od7.06(s,1h),3.61(s,3h),2.41(s,3h),2.32(s,3h),2.13(s,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝343.1，实测：343.5。
步骤7:4-(4-氯代-5-氟-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
将yh14(30mg，0.09mmol)在pocl3(2ml)中的悬浮液在90℃下加热6小时，然后在真空下除去挥发物。将残余物溶于乙酸乙酯(4ml)中并加入饱和nahco3溶液直至ph＝9。过滤沉淀物并用水和乙酸乙酯洗涤。1hnmr(300mhz,cd3od):12.97(s,1h),7.44(s,1h),3.48(s,3h),2.68(s,2h),2.37(s,3h),2.16(s,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝361.1，实测：361.3。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-氟-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号305)
按照与化合物编号304相同的方法合成化合物编号305。1hnmr(300mhz,cd3od):7.31(s,1h),6.40(s,1h),3.84(s,3h),3.76(s,3h),2.69(s,3h),2.40(s,3h),2.23(s,3h),2.08-1.92(m,1h),1.14-0.97(m,2h),0.92-0.78(m,2h)；esi-ms计算[m+h]+＝462.20，实测：462.50。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-氟-6-甲氧基-n,2-二甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号306)的合成
将yh15(36mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(30mg)，pd(oac)2(2mg)，pcy3(6mg)，cs2co3(130mg)和无水thf(2ml)混合，将反应混合物加热回流12小时。粗混合物用etoac稀释，用水洗涤有机层。除去溶剂，残余物通过反相hplc纯化，得到6mg标题化合物。1hnmr(300mhz,cd3od):6.03(s,1h),5.41(s,1h),3.75(s,3h),3.73(s,3h),3.71(s,3h),2.79(s,3h),2.27(s,3h),2.10(s,3h),1.99-1.80(m,1h),1.03-0.84(m,2h),0.74-0.54(m,2h)；esi-ms计算[m+h]+＝476.2，实测：476.3。
方案3
步骤1:2-溴代-3,5-二氟-1-甲氧基-4-硝基苯的合成
将2-溴代-1,3,5-三氟-4-硝基苯(4.48g，17.6mmol)的甲醇(35ml)溶液冷却至-30℃，然后逐滴加入naome在甲醇中的溶液(3.8g，25％wt)。添加完成后，将反应混合物在该温度下保持1小时，然后使其温热至室温。真空下除去溶剂，将残余物在etoac和水中稀释。将溶液用etoac(2×50ml)萃取。合并，分离，用na2so4干燥并在真空下浓缩有机层。残余物通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝8/1)纯化，得到yh18a和yh18b的混合物(3g，64％，yh18a：yh18b比＝4:1)。1hnmr(300mhz,cdcl3):6.69-6.59(m,1h),3.99(s,3h)。
步骤2:4-(2,4-二氟-6-甲氧基-3-硝基苯基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
向圆底烧瓶中装入yh18a和yh18b的混合物(3g，11mmol)，3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(3g，13mmol)，pd(dppf)ch2cl2(898mg，1.1mmol)，kf(1.4g,24mmol)，甲苯(22ml)和水(22ml)。将反应混合物在n2下在100℃下加热12小时。将溶液冷却，然后用etoac(2×100ml)萃取。合并有机层，并用盐水(50ml)洗涤。分离，用na2so4干燥，并在真空下浓缩有机层。通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝2:1)纯化残余物，得到固体状的yh19(370mg，12％)。1hnmr(300mhz,cdcl36.68(dd,j＝11.7,1.8hz,1h),3.90(s,3h),2.28(s,3h),2.15(s,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝285.1，实测：285.1。
步骤3:2-氰基-2-(4-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-3-氟-5-甲氧基-2-硝基苯基)乙酸乙酯的合成
在0℃下向nah(60％，在矿物油中，114mg，2.9mmol)在dmf(6ml)中的悬浮液中滴加氰基乙酸乙酯(294mg，2.6mmol)。将溶液温热至室温并搅拌15分钟。然后将反应混合物冷却回0℃，然后滴加yh19(370mg，1.3mmol)的dmf(1ml)溶液。将反应在0℃下搅拌1小时，然后用1mhcl中和。将反应混合物用etoac(2×20ml)萃取。合并有机层，用盐水(3×10ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝1/1)纯化残余物，得到油状的yh20(476mg，97％)。1hnmr(300mhz,cdcl3):7.08(s,1h),5.49(s,1h),4.40-4.20(m,2h),3.96(s,3h),2.26(s,3h),2.13(s,3h),1.32(t,j＝7.1hz,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝378.1，实测：378.2。
步骤4:2-氨基-6-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-7-氟-5-甲氧基-1h-吲哚-3-羧酸乙酯的合成
向yh20(476mg，1.26mmol)在乙酸(4ml)中的溶液中加入铁粉(424mg，7.6mmol)。将反应搅拌12小时，然后用etoac(10ml)稀释，过滤悬浮液。在真空下除去挥发物，并将残余物用etoac(50ml)和水(10ml)处理。分离有机层，依次用naoh(1m，5ml)，nahco3和盐水洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。残余物通过柱色谱(洗脱剂：dcm/etoac＝4/1)纯化，得到固体状的yh21(240mg，55％)。1hnmr(300mhz,cdcl39.81(s,1h),7.25(s,1h),6.13(s,1h),4.41(q,j＝7.0hz,2h),3.81(s,3h),2.27(s,3h),2.16(s,3h),1.46(t,j＝7.0hz,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝348.1，实测：348.5。
步骤5:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-氟-6-甲氧基-2-甲基-3,9-二氢-4h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-酮的合成
将hcl气体鼓泡到yh21(240mg，0.7mmol)在ch3cn(10ml)中的溶液中10分钟。将反应混合物加热至80℃，保持1小时。溶液冷却后，在真空下蒸发挥发物，加入naoh(1m，6ml)溶液，然后加入乙醇(18ml)。将溶液回流2小时，然后除去乙醇。在0℃下向残余物中加入1mhcl直至ph＝4。过滤沉淀物，用水(2ml)，乙酸乙酯(2ml)洗涤。将固体在真空下干燥，称量粗品200mg(83％)。1hnmr(300mhz,cd3od12.40(s,1h),7.40(s,1h),3.85(s,3h),2.43(s,3h),2.26(s,3h),2.07(s,3hesi-ms计算[m+h]+＝343.1，实测：343.3；
步骤6:4-(4-氯代-8-氟-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
将yh22(100mg，0.3mmol)在pocl3(4ml)中的悬浮液回流4小时，然后在真空下除去挥发物。将残余物溶于乙酸乙酯(4ml)，加入饱和nahco3溶液直到ph＝9。过滤沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤，得到yh23(100mg，95％)。1hnmr(300mhz,cd3od7.65(s,1h),3.92(s,3h),2.70(s,3h),2.29(s,3h),2.10(s,3h)；esi-ms计算[m+h]+＝361.1，实测：361.2；
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-氟-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号307)
按照与化合物编号304相同的方法合成化合物编号307。1hnmr(300mhz,cd3od):7.20(s,1h),6.05(s,1h),3.91(s,3h),3.74(s,3h),2.65(s,3h),2.31(s,3h),2.15(s,3h),2.04-1.85(m,1h),1.14-0.83(m,2h),0.85-0.74(m,2h)；esi-ms计算[m+h]+＝462.2，实测：462.4。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-8-氟-6-甲氧基-n,2-二甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号308)
按照与化合物编号306相同的方法合成化合物编号308。1hnmr(300mhz,cd3od):6.03(s,1h),5.41(s,1h),3.75(s,3h),3.73(s,3h),3.71(s,3h),2.79(s,3h),2.27(s,3h),2.10(s,3h),1.99-1.80(m,1h),1.03-0.84(m,2h),0.74-0.54(m,2h)；esi-ms计算[m+h]+＝476.2，实测：476.3。
方案4
步骤1:3-(4-溴代-3-氟-5-甲氧基-2-硝基苯基)-2,4-二氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
向圆底烧瓶中加入2,4-二氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.13g，10mmol)，k2co3(2.07g，15mmol)，dmso(15ml)。将反应混合物搅拌10分钟，然后加入yh18a和yh18b(1.4g，5mmol)的混合物。将反应混合物在n2下在60℃下加热2小时。将溶液冷却，然后用水和etoac(100ml)稀释。分离有机层并用水和盐水(50ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝1：1)纯化残余物，得到固体状的yh26(820mg，45％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δppm6.65(d,j＝1.2hz,1h),4.00-3.92(m,2h),3.94(s,3h),2.71-2.53(m,2h),1.55(s,9h)；esi-ms(m+h):461.0计算,461.1实测。
步骤2:7-溴代-6-氟-8-甲氧基-2,3,4,5-四氢-1h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-酮的合成
向yh26(820mg，1.7mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入铁粉(952mg，17mmol)，fecl2(324mg，2.6mmol)和乙酸(0.48ml，8.5mmol)。将反应混合物加热至回流12小时，然后冷却至室温。将反应混合物用etoac(10ml)稀释，过滤悬浮液。在真空下除去挥发物，并将残余物用etoac(50ml)和水(10ml)处理。分离有机层，依次用nahco3和盐水洗涤。分离，用na2so4干燥，并在真空下浓缩有机层。通过柱色谱(洗脱剂：dcm/meoh＝9/1)纯化残余物，得到固体状的yh27(310mg，59％)。esi-ms(m+h):313.0计算,313.2实测。
步骤3:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-氟-8-甲氧基-2,3,4,5-四氢-1h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-酮的合成
向圆底烧瓶中装入yh27(150mg，0.5mmol)，3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(223mg，1mmol)，pd(dppf)ch2cl2(20mg，0.025mmol)，二恶烷(4ml)和na2co3溶液(2m，1ml)。将反应混合物在n2下在100℃下加热12小时。将溶液冷却，然后用etoac(2×10ml)萃取。分离有机层并真空浓缩。残余物通过hplc纯化，得到固体状的yh28(50mg，30％)。1hnmr(300mhz,cd3od)δ7.43(s,1h),3.84(s,3h),3.65(d,j＝5.8hz,2h),3.07(t,j＝6.2hz,2h),2.26(s,3h),2.11(s,3h)；esi-ms(m+h):330.12计算,330.33实测。
步骤4:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-氟-8-甲氧基-2,5-二氢-1h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-酮的合成
向yh28(50mg，0.15mmol)的二恶烷(4ml)溶液中加入ddq(69mg，0.3mmol)。将反应混合物回流6小时。溶液冷却后，将反应物用水(2ml)和乙酸乙酯(10ml)稀释。分离，用na2so4干燥，并在真空下浓缩有机层。通过柱色谱(洗脱剂：dcm/meoh＝9/1)纯化残余物，得到固体状的yh29(41mg，87％)。1hnmr(300mhz,cd3od)δppm7.67(s,1h),7.39(d,j＝6.9hz,1h),6.66(d,j＝6.9hz,1h),3.92(s,3h),2.32(s,3h),2.16(s,3h)；esi-ms(m+h):328.10计算,328.20实测。
步骤5:4-(1-氯代-6-氟-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
将18(41mg，0.13mmol)在pocl3(3ml)中的悬浮液回流4小时，然后在真空下除去挥发物。将残余物溶于乙酸乙酯(4ml)，加入饱和nahco3溶液直至ph＝9。过滤沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤，得到19(12mg，29％)。1hnmr(300mhz,dmso)δ12.77(s,1h),8.27(d,j＝5.6hz,1h),7.81(s,1h),7.53(d,j＝5.6hz,1h),3.93(s,3h),2.30(s,3h),2.10(s,3h)；esi-ms(m+h):346.1计算,346.2实测。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-氟-8-甲氧基-5h-吡啶并[4,3-b]吲哚-1-胺(化合物编号309)
按照与化合物编号304相同的方法合成化合物编号309。1hnmr(300mhz,cd3od)δppm7.86(s,1h),7.85(d,j＝7.2hz,1h),7.37(d,j＝7.1hz,1h),6.24(s,1h),3.99(s,3h),3.81(s,3h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.01-1.91(m,1h),1.00-0.95(m,2h),0.87-0.73(m,2h)；esi-ms(m+h):447.2计算,447.3实测。
方案5
步骤1:3-溴代-6-氟-2-甲氧基-5-硝基吡啶的合成
在0℃下将5-溴代-6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-胺(19g，80mmol)缓慢加入到hf/吡啶的溶液中(70％hf，30％吡啶77ml)。将nano2(5.8g，84mmol)分批缓慢加入反应混合物中。加完后，将反应混合物温热至室温。随着反应进行，反应混合物变得非常热，并且应用临时的冷却以保持温度不过热。将反应混合物再搅拌1小时，然后倒入冰中。将溶液用et2o(2×200ml)萃取。合并有机层，依次用naoh(1m，2x500ml)，饱和nahco3(100ml)和盐水(100ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。残余物通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝8/1)纯化，得到白色固体状的yh32(16g，82％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δppm8.67(d,j＝8.2hz,1h),4.12(s,3h)。
步骤2:4-(6-氟-2-甲氧基-5-硝基吡啶-3-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
向圆底烧瓶中装入yh32(3.8g，15mmol)，3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(3.7g，16.5mmol)，pd(dppf)ch2cl2(612mg，0.75mmol)，kf(1.9g，33mmol)，甲苯(40ml)和水(40ml)。将反应混合物在n2下在100℃下加热12小时。将溶液冷却，然后用etoac(2×100ml)萃取。合并有机层，用盐水(50ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱法(洗脱剂：己烷/etoac＝4/1至2：1)纯化残余物，得到红色固体的yh33，将其用二乙醚研磨，然后过滤，得到黄色固体状的yh33(2.2g，55％)。hnmr(300mhz,cdcl3)δppm8.30(d,j＝8.6hz,1h),4.06(s,3h),2.33(s,3h),2.17(s,3h)。
步骤3:2-氰基-2-(5-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)乙酸乙酯的合成
在0℃下向nah(60％，在矿物油中，2.5g，63mmol)在dmf(114ml)中的悬浮液中滴加氰基乙酸乙酯(6.4g，57mmol)。将溶液温热至室温并搅拌15分钟。然后将反应混合物冷却回0℃，然后滴加yh33(7.6g，28.5mmol)的thf(8ml)溶液。将反应在0℃下搅拌1小时，然后用2mhcl中和。将反应混合物用etoac(2×200ml)萃取。合并有机层，用盐水(3×100ml)洗涤。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。残余物通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝4/1，然后dcm)纯化，得到油状的yh34(10g，98％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δppm8.32(s,1h),5.87(s,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),4.14(s,3h),2.37(s,3h),2.22(s,3h),1.37(t,j＝7.1hz,3h)。
步骤4:2-氨基-6-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-5-甲氧基-1h-吡咯并[3,2-b]吡啶-3-羧酸乙酯的合成
向yh34(10.1g，28.5mmol)在乙酸(99ml)中的溶液中加入铁粉(9.6g，171mmol)。搅拌反应，随着反应进行溶液的温度升高。在温度回到室温后，将反应混合物用etoac(100ml)稀释，过滤悬浮液。在真空下除去挥发物，并将残余物用etoac(500ml)和水(100ml)处理。分离有机层，依次用naoh(1m，50ml)，nahco3和盐水洗涤有机层。分离有机层，用na2so4干燥，并在真空下浓缩。通过柱色谱(洗脱剂：己烷/etoac＝2/1，然后etoac)纯化残余物，得到固体状的yh35(7g，76％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δppm10.19(s,1h),6.72(s,1h),6.52(s,2h),4.40(q,j＝6.8hz,2h),3.89(s,3h),2.05(s,3h),1.91(s,3h),1.44(t,j＝6.8hz,3h)。
步骤5:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-吡啶并[2',3':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇的合成
将乙基乙酰亚胺盐酸盐(22.2g，180mmol)加入到剧烈搅拌的k2co3(24.8g，180℃)在水(200ml)和dcm(200ml)中的溶液中。10分钟后，分离有机层并用mg2so4干燥。将澄清的溶液倒入其中含有yh35(2.0g，6mmol)的烧瓶中。向该溶液中加入乙酸(3.4ml，60mmol)，将反应混合物搅拌12小时，在此期间沉淀物析出。过滤溶液，蒸发滤液，得到粗油状物。将naoh溶液(2.5m，36ml)加入到粗油状物中，然后加入乙醇(80ml)。将反应混合物加热至80℃，保持4小时。溶液冷却后，在真空下蒸发乙醇，将水溶液冷却至0℃，缓慢加入1mhcl直到ph＝4。过滤沉淀，用水(50ml)，乙酸乙酯(50ml)和dcm(50ml)洗涤。将白色固体真空干燥并称重1.0g(50％)。1hnmr(300mhz,cd3od)δppm7.67(s,1h),4.08(s,3h),2.53(s,2h),2.35(s,3h),2.18(s,3h)；esi-ms(m+h):323.2计算,323.4实测。
步骤6:7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-吡啶并[2',3':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基三氟甲磺酸酯的合成
在-78℃下向yh36(2.2g，6.8mmol)和2-氯代吡啶(2.55ml，27.2mmol)在thf(200ml)和dcm(100ml)中的悬浮液中滴加tf2o在dcm(1m，13.6ml)中的溶液。将反应混合物搅拌10分钟，tlc表明剩余一些原料。加入2-氯代吡啶(2.55ml，27.2mmol)，然后滴加tf2o在dcm(1m，13.6ml)中的溶液。加入后，用饱和nahco3(20ml)淬灭反应混合物。分离有机层，水层用etoac萃取。合并有机层，用na2so4干燥并真空浓缩。将粗固体在dcm中研磨，过滤白色固体，得到yh37(1.3g)。将滤液浓缩并通过柱色谱(洗脱剂：dcm/etoac＝3/1，然后etoac)纯化，得到另一批yh37(0.7g，总产率64％)。1hnmr(300mhz,cd3od)δppm7.87(s,1h),4.09(s,3h),2.80(s,3h),2.39(s,3h),2.22(s,3h).esi-ms(m+h):458.1计算,458.5实测。
化合物编号310和相关类似物的合成
将yh37(0.1mmol)，胺(0.2mmol)和无水dmf(1ml)混合，将反应混合物在80℃下加热12小时。除去溶剂dmf，残余物通过反相hplc纯化，得到以下化合物：
化合物
化合物编号325及其类似物的合成
步骤1:4-(4-氯代-6-甲氧基-2-甲基-9h-吡啶并[2',3':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
向yh37(635mg，1.38mmol)，四丁基氯化铵(772mg，2.8mmol)的无水thf(10ml)溶液中加入4nhcl的二恶烷(0.1ml)溶液。将反应混合物搅拌12小时，然后真空除去溶剂。将残余物用dcm稀释，过滤并用水洗涤，得到yh39，其为白色固体(398mg，84％产率)。
步骤2：将yh39(0.1mmol)，硼酸酯(0.1mmol)，pd(dppf)cl2(8mg)，kf(19mg)和二恶烷/h2o(1ml/0.5ml)混合并将反应混合物加热回流12小时。粗混合物用etoac稀释，有机层用水洗涤。除去溶剂，残余物通过反相hplc纯化，得到以下化合物：
化合物
实施例171
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-(2-甲氧基乙基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-醇(zbb261)的合成
在室温下向圆底烧瓶中加入s6(1g)，meoch2ch2cn(4ml)和4m在二恶烷(4ml)中的氯化氢溶液。将反应混合物搅拌过夜。在旋转蒸发器上除去挥发性组分。向该粗混合物中加入10％naoh水溶液(10ml)和etoh(20ml)，并将溶液加热回流8小时。然后在旋转蒸发器上除去挥发性组分，并用2nhcl水溶液酸化含水残余物。使产物zbb261在0℃下沉淀。过滤混合物，得到粗品zbb261，将其通过hplc纯化，得到0.15g、作为cf3co2h盐的所需产物。esi-ms计算c19h21n4o4[m+h]+＝369.15；实测：369.74.1hnmr(300mhz,meod)δ7.80(s,1h),7.30(s,1h),3.98–3.79(m,5h),3.40(s,3h),3.03(t,j＝6.2hz,2h),2.33(s,3h),2.17(s,3h)。
4-(4-氯代-6-甲氧基-2-(2-甲氧基乙基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(zbb264)的合成
向圆底烧瓶中，加入zbb261(0.278g，0.8mmol)和pocl3(8ml)。将混合物在90℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温，并在旋转蒸发器上除去挥发性组分。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，并使用nahco3饱和水溶液将ph调节至8。过滤混合物，得到0.24g的褐色固体状的zbb264。esi-ms计算c19h20cln4o3[m+h]+＝387.12；实测：387.44.1hnmr(300mhz,dmso)δ12.56(s,1h),7.82(s,1h),7.43(s,1h),3.94-3.84(m,5h),3.27(s,3h),3.18(t,j＝6.4hz,2h),2.32(s,3h),2.12(s,3h)。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-(2-甲氧基乙基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号287)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb264(60mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，naotbu(100mg)和甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到25mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号287。esi-ms计算c25h28n7o3[m+h]+＝488.24；实测：488.76.1hnmr(300mhz,meod)δ7.49(s,1h),7.46(s,1h),6.14(s,1h),3.91(s,3h),3.87(t,j＝5.9hz,2h),3.78(s,3h),3.36(s,3h),3.22(t,j＝5.9hz,2h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.02–1.89(m,1h),1.04–0.94(m,2h),0.81–0.69(m,2h)。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-醇(zbb266)的合成
在室温下，向圆底烧瓶中加入s6(1g)，meoch2ch2och2cn(4ml)和4m的氯化氢在二恶烷(4ml)中的溶液。将反应混合物搅拌过夜。在旋转蒸发器上除去挥发性组分。向该粗混合物中加入10％naoh水溶液(10ml)和etoh(20ml)，将溶液加热回流8小时。然后在旋转蒸发器上除去挥发性组分，含水残余物用2nhcl水溶液酸化。使产物zbb266在0℃下沉淀。过滤混合物，得到0.7g粗品zbb266。esi-ms计算c20h23n4o5[m+h]+＝399.16；实测：399.44.1hnmr(300mhz,dmso)δ12.12(s,1h),12.04(s,1h),7.59(s,1h),7.26(s,1h),4.49(s,2h),3.84(s,3h),3.76–3.65(m,2h),3.53(dd,j＝5.6,3.7hz,2h),3.28(s,3h),2.29(s,3h),2.09(s,3h)。
4-(4-氯代-6-甲氧基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(zbb267)的合成
向圆底烧瓶中加入zbb266(0.278g，0.8mmol)和pocl3(8ml)。将混合物在90℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温，并在旋转蒸发器上除去挥发性组分。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，使用nahco3饱和水溶液将ph调节至8。过滤混合物，得到0.25g褐色固体状的zbb267。esi-ms计算c20h22cln4o4[m+h]+＝417.13；实测：417.65。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号288)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb267(60mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，naotbu(100mg)和甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到23mg的作为cf3co2h盐的化合物编号288。esi-ms计算c27h32n7o4[m+h]+＝518.25；实测：518.44.1hnmr(300mhz,meod)δ7.50(s,1h),7.43(s,1h),6.12(s,1h),4.79(s,2h),3.91(s,3h),3.86(dd,j＝4.1,2.0hz,2h),3.76(s,3h),3.69–3.64(m,2h),3.39(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.95(tt,j＝8.4,5.1hz,1h),1.04–0.94(m,2h),0.79–0.71(m,2h)。
7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-((甲基磺酰基)甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-醇(zbb271)的合成
在室温下，向圆底烧瓶中加入s6(1g)，meso2ch2cn(4ml)和4m的氯化氢在二恶烷(4ml)中的溶液。将反应混合物搅拌过夜。在旋转蒸发器上除去挥发性组分。向该粗混合物中加入10％naoh水溶液(10ml)和etoh(20ml)，将溶液加热回流8小时。然后在旋转蒸发器上除去挥发性组分，含水残余物用26dnhcl水溶液酸化。使产物zbb271在0℃下沉淀。过滤混合物，得到0.8g粗品zbb271。esi-ms计算c18h19n4o5s[m+h]+＝403.10；实测：403.55.1hnmr(300mhz,meod)δ7.82(s,1h),7.34(s,1h),4.62(s,2h),3.91(s,3h),3.25(s,3h),2.33(s,3h),2.17(s,3h)。
4-(4-氯代-6-甲氧基-2-((甲基磺酰基)甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(zbb273)的合成
向圆底烧瓶中加入zbb271(0.278g，0.8mmol)和pocl3(8ml)。将混合物在90℃下加热6小时。将反应混合物冷却至室温，并在旋转蒸发器上除去挥发性组分。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，使用nahco3饱和水溶液将ph调节至8。过滤混合物，得到0.21g褐色固体状的zbb273。esi-ms计算c18h18cln4o4s[m+h]+＝421.07；实测：421.44。
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-((甲基磺酰基)甲基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号289)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb273(60mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到27mg的作为cf3co2h盐的化合物编号289。esi-ms计算c25h28n7o4s[m+h]+＝522.19；实测：522.44。
n4-(3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二胺(化合物编号290)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb253(60mg)，3-环丙基-1-乙基-1h-吡唑-5-胺(84mg)，k3po4(130mg)和甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到20mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号290。esi-ms计算c24h27n8o2[m+h]+＝459.22；实测：459.67.1hnmr(300mhz,meod)δ7.56(s,1h),7.34(s,1h),6.04(s,1h),4.07(q,j＝7.2hz,2h),3.90(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),1.95(ddd,j＝13.3,8.4,5.0hz,1h),1.44(t,j＝7.2hz,3h),1.03–0.91(m,2h),0.79–0.65(m,2h)。
n4-(1,3-二环丙基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二胺(化合物编号291)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb253(60mg)，1,3-二环丙基-1h-吡唑-5-胺(88mg)，k3po4(130mg)和甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到24mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号291。esi-ms计算c25h27n8o2[m+h]+＝471.22；实测：471.33.1hnmr(300mhz,meod)δ7.59(s,1h),7.35(s,1h),6.10(s,1h),3.90(s,3h),3.44–3.34(m,1h),2.33(s,3h),2.16(s,3h),1.92(td,j＝8.4,4.4hz,1h),1.16-1.08(m,2h),1.00-0.92(m,4h),0.77-0.71(m,2h)。7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-n4-(2-异丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-基)-6-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二胺(化合物编号292)的合成
将pd2(dba)3(18mg)和binap(26mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流3-4分钟。将该混合物转移到含有zbb253(60mg)，2-异丙基-2,4,5,6-四氢环戊二烯并[c]吡唑-3-胺(88mg)，k3po4(130mg)和甲苯(4ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。过滤反应混合物并通过hplc纯化混合物，得到24mg的、作为cf3co2h盐的化合物编号292。esi-ms计算c25h29n8o2[m+h]+＝473.24；实测：473.56.1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.47(s,1h),7.35(s,1h),4.65–4.45(m,1h),3.87(s,3h),2.77(t,j＝7.2hz,2h),2.58(t,j＝6.9hz,2h),2.49–2.36(m,2h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),1.51(d,j＝6.7hz,6h)。
3-(3-环丙基-5-((7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]-吲哚-4-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲醛(化合物编号293)的合成
将化合物编号163(50mg)，甲酸(13.8mg)，edci-hcl(76mg)和hobt(54mg)溶于无水dmf(3ml)中。通过注射器加入etn(i-pr)2(0.1ml)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过反相hplc纯化，得到24mg的、作为cf3co2h的盐的标题化合物。1hnmr(300mhz,meod):8.01(s,1h),7.47(s,1h),6.07(s,1h),5.30-5.15(m,1h),4.70-4.50(m,2h),4.40-4.20(m,2h),3.89(s,3h),2.68(s,3h),2.31(s,3h),2.13(s,3h),2.10-1.90(m,1h),1.10-0.90(m,2h),1.80-1.70(m,2h)。esi-ms计算c27h29n8o3[m+h]+＝513.24，实测：513.67。
n-(3-环丙基-1-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号294)的合成
步骤1:3-环丙基-1-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-1h-吡唑-5-胺
将3-(溴代甲基)氧杂环丁烷(0.5g,3.3mmol)和肼(250mg,5.0mmol)溶解在乙醇(20ml)中并将该混合物加热回流过夜。向反应混合物中加入3-环丙基-3-氧代丙腈(540mg)，将反应物加热回流12小时。混合物通过反相hplc纯化，得到198mg标题化合物。esi-ms计算c10h16n3o[m+h]+＝194.13,实测：194.58。
步骤2:根据用于制备化合物编号135的类似方法从s13(180mg)和3-环丙基-1-(氧杂环丁烷-3-基甲基)-1h-吡唑-5-胺(198mg)制备标题化合物。获得15mg的、作为cf3co2h的盐的标题化合物。1hnmr(300mhz,meod):8.00(s,1h),7.46(s,1h),6.41(s,1h),4.80-4.70(m,1h),4.65-4.45(m,2h),4.45-4.30(m,1h),3.94(s,3h),3.85-3.75(m,2h),3.65-3.50(m,1h),2.73(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h).2.20-2.05(m,1h),1.40-1.25(m,2h),1.10-0.90(m,2h)。esi-ms计算c27h30n7o3[m+h]+＝500.24，实测：500.50。
n-(3-环丙基-1-(2-(甲基磺酰基)乙基)-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-2-甲基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(化合物编号295)的合成
步骤1:3-环丙基-1-(2-(甲基磺酰基)乙基)-1h-吡唑-5-胺
将1-溴代-2-(甲基磺酰基)乙烷(1.87g,10mmol)和肼(4.8ml,10mmol)在乙醇(50ml)中溶解并将该混合物加热回流过夜。向该混合物中加入3-环丙基-3-氧代丙腈(810mg)，将反应物加热回流12小时。然后除去乙醇并且用2nnaoh水溶液中和该混合物。用乙酸乙酯萃取水相并通过快速柱色谱法纯化产物，得到733mg标题化合物。esi-ms计算c9h16n3o2s[m+h]+＝230.10,实测：230.67。
步骤2:
根据用于制备化合物编号135的类似方法从s13(547mg)和3-环丙基-1-(2-(甲基磺酰基)乙基)-1h-吡唑-5-胺(773mg)制备标题化合物。获得90mg的、作为cf3co2h的盐的标题化合物。1hnmr(300mhz,meod):7.63(s,1h),7.47(s,1h),6.17(s,1h),4.54(t,j＝6.14hz,2h),3.75(t,j＝5.98hz,2h),3.92(s,3h),2.84(s,3h),2.71(s,3h),2.32(s,3h),2.15(s,3h),2.00-1.90(m,1h),1.00-0.90(m,2h),0.80-0.70(m,2h)。esi-ms计算c26h30n7o4s[m+h]+＝536.21，实测：535.83。
4-(4-氯代-6-甲氧基-9h-吡啶并[3,4-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑的合成
步骤1:5-氯代-n-甲基烟酰胺的合成。将5-氯代烟酸(25g)和无水dmf(0.1ml)溶于无水1,2-二氯乙烷(250ml)中。通过注射器加入socl2(34.8ml)，将反应混合物加热回流5小时。在旋转蒸发器上除去挥发性组分。加入二氯甲烷(200ml)，并在旋转蒸发器上除去挥发性组分。将该过程重复两次，并将剩余固体溶于无水thf(250ml)中。在0℃下通过滴液漏斗加入me-nh2的thf溶液(2m，240ml)并将反应混合物在环境温度下搅拌过夜。加入水，用乙酸乙酯萃取水相。将合并的有机层合并，用无水硫酸钠干燥，并在旋转蒸发器上浓缩。将固体在真空下干燥过夜，得到25.73g干粉末状的5-氯代-n-甲基烟酰胺。esi-ms计算c7h835cln2o[m+h]+＝171.0，实测：171.1。
步骤2:5-氯代-4-(3-甲氧基苯基)-n-甲基烟酰胺(yj3)的合成。将干燥的5-氯代-n-甲基烟酰胺(6.8g，40mmol)溶于无水thf(100ml)中。通过滴液漏斗加入(3-甲氧基苯基)溴化镁(1.0m的thf溶液，200ml)，同时用水浴冷却反应烧瓶。将反应在环境温度下搅拌8小时。在0℃下通过注射器加入甲醇(11.4ml，280mmol)，随后分批加入ncs(6.91g，52mmol)。将反应在环境温度下搅拌过夜。然后用nh3水溶液(15％)淬灭反应。水相用乙酸乙酯萃取，合并有机层，并用无水硫酸钠干燥。在旋转蒸发器上除去溶剂，剩余的残余物通过快速柱色谱法纯化。分离出8.0g标题化合物(yj3)。esi-ms计算c14h1437cln2o2[m+h]+＝279.07，实测：279.42。
步骤3:5-氯代-4-(3-甲氧基苯基)烟酸(yj4)的合成。将yj3(8.0g)，boc2o(9.8g)和et3n(10ml)溶于无水thf(40ml)中。分小批加入dmap(366mg)，并将混合物在环境温度下搅拌6小时。将混合物在旋转蒸发器上浓缩，将残余物溶于thf(40ml)和水(40ml)中。加入lioh-h2o(7.14g，170mmol)并将混合物在环境温度下搅拌过夜。加入t-buome(150ml)，用naoh(0.5m，3×40ml)萃取有机层。合并水层，用10％柠檬酸酸化。然后用乙酸乙酯/thf(2:1,7×40ml)萃取水层。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在旋转蒸发器上浓缩，得到7.03g标题化合物(yj4)。粗产物不经进一步纯化即使用。esi-ms计算c13h1135clno3[m+h]+＝264.04，实测：263.83。
步骤4:5-氯代-4-(2,4-二溴代-5-甲氧基苯基)烟酸(yj5)的合成。将yj4(7.03g)溶于acoh/h2o(30ml：20ml)中。分小批加入pyhbr3(15.5g，1.8当量)。将反应混合物在环境温度下搅拌4小时。将反应混合物用nahso3淬灭(气体逸出)并通过
步骤5：(5-氯代-4-(2,4-二溴代-5-甲氧基苯基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(yj6)的合成。将yj5(1.03g，2.5mmol)和et3n(1ml，7.17mmol)溶于t-buoh(20ml)中。在环境温度下通过注射器加入dppa，将混合物在环境温度下搅拌4小时，然后加热回流过夜。在旋转蒸发器上除去溶剂，残余物通过快速柱色谱纯化，得到673mg标题化合物(yj6)。1hnmr(300mhz,cdcl3):9.28(s,1h),8.53(s,1h),7.90(s,1h),6.68(s,1h),3.88(s,3h),1.46(s,9h)。esi-ms计算c17h1879br235cln2o3[m+h]+＝492.94；实测：493.25。
步骤6：7-溴代-4-氯代-6-甲氧基-9h-吡啶并[3,4-b]吲哚(yj7)的合成。将yj6(673mg)，nah(60％，在矿物油中，109mg)和cui(400mg)称重到干燥的圆底烧瓶中。加入无水二甘醇二甲醚(5ml)，将体系脱气并再充满氮气。将反应物在120℃下加热2小时。然后将反应混合物倒入5％nh3水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取水层。在旋转蒸发器上除去溶剂，剩余的残余物通过快速柱色谱纯化，得到347mg标题化合物(yj7)。1hnmr(300mhz,dmso-d6):11.92(s,1h),8.89(s,1h),8.41(s,1h),8.10(s,1h),7.94(s,1h),3.95(s,3h)。
步骤7：4-(4-氯代-6-甲氧基-9h-吡啶并[3,4-b]吲哚-7-基)-3,5-二甲基异恶唑(yj8)的合成。将yj7(135mg，0.44mmol)和3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(196mg，0.88mmol)与dme(6ml)混合，随后加入na2co3(2m水溶液，3ml)。将体系脱气并用氮气重新充满。加入pd(dppf)cl2-dcm(33mg)，将体系脱气并用氮气重新充满。然后将反应混合物加热回流过夜。然后用乙酸乙酯萃取水层，将合并的有机层干燥并在旋转蒸发器上浓缩。剩余的残余物通过快速柱色谱法纯化，得到40mg的标题化合物(yj8)。1hnmr(300mhz,cdcl3):9.83(s,1h),8.83(s,1h),8.41(s,1h),8.09(s,1h),7.32(s,1h),3.95(s,3h),2.35(s,3h),2.22(s,3h)。esi-ms计算c17h1535cln3o2[m+h]+＝328.09，实测：328.42
n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-胺(化合物编号323)的合成
将pd2(dba)3(45mg)和brettphos(sigma-aldrich，107mg)在无水甲苯中混合。将混合物加热回流10分钟。冷却预先形成的催化剂溶液并转移到含有yj8(80mg)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(83mg)，t-buona(100mg)和无水甲苯(10ml)的脱气并充满氮气的烧瓶中。将反应混合物加热回流过夜。将粗混合物用甲醇淬灭，酸化，通过反相hplc纯化，得到3mg作为cf3co2h的盐的标题化合物。1hnmr(300mhz,meod):8.74(s,1h),7.69(s,1h),7.62(s,1h),7.58(s,1h),5.78(s,1h),3.88(s,3h),3.79(s,3h),2.35(s,3h),2.17(s,3h),2.00-1.80(m,1h),1.00-0.80(m,2h),0.70-0.50(m,2h)。esi-ms计算c24h25n6o2[m+h]+＝429.20，实测：429.75。
制备n-(3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-7-(3,5-二甲基-异恶唑-4-基)-6-甲氧基-9h-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-胺(化合物编号323)的另一途径
步骤1：将5-溴代烟酸(25g，124mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(200ml)中。在0℃下加入socl2(27ml，371mmol)，然后加入无水dmf(0.2ml)以引发反应。将反应混合物加热回流5小时，然后在旋转蒸发器上浓缩。加入ch2cl2(100ml)并在旋转蒸发器上除去，将该过程重复一次。将剩余的残余物溶于thf(100ml)中并加入甲基胺(124ml，2m的thf溶液)。在旋转蒸发器上除去挥发性组分，将剩余的残余物溶于乙酸乙酯中，然后加入水。用乙酸乙酯萃取水层，用盐水洗涤合并的有机层，然后用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器上除去乙酸乙酯，得到25.3g的固体状的zyj22。1hnmr(300mhz,dmso-d6):8.94(d,j＝1.73hz,1h),8.83(d,j＝2.17hz,1h),8.72(br,1h),8.37(t,j＝1.93hz,1h),2.79(s,1.5h),2.78(s,1.5h)。esi-ms计算c7h879brn2o[m+h]+＝214.98；实测：215.0。
步骤2:在提供相应的格式试剂的催化碘的存在下，无水thf(100ml)中的1-(苄氧基)-4-溴代-2-甲氧基苯(30.5g，104mmol)与镁屑(3.0g,125mmol)反应。将格氏试剂转移到zyj22(5.09g，49mmol)的thf溶液中并将反应物在环境温度下搅拌过夜。然后在0℃下用甲醇(5.9ml，146mmol)淬灭反应。20分钟后，分小份加入ncs(6.5g，49mmol)。将反应物在环境温度下搅拌过夜，然后用7％氨溶液淬灭。将乙酸乙酯加入到水溶液中，收集固体，得到所需的zyj23(2.06g)。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用盐水洗涤，然后用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器上除去乙酸乙酯并将剩余的固体与二乙基醚混合。过滤提供4.57g的另一部分zyj23。1hnmr(300mhz,dmso-d6):8.85(s,1h),8.51(s,1h),8.34-8.22(m,1h),7.54-7.30(m,5h),7.12-7.08(m,1h),6.89(s,1h),6.82-6.72(m,1h),5.10(s,2h),3.72(s,3h),2.52(d,j＝4.503h)。esi-ms计算c21h2079brn2o3[m+h]+＝427.07；实测：427.17。
步骤3:将zyj23(6.63g，15.5mmol)和boc2o(7.0g，32mmol)溶于无水thf(40ml)中。分小批加入dmap(1.95g，16mmol)。将反应物在环境温度下搅拌过夜。将lioh-h2o(6.72g，l60mmol)和水(40ml)加入到反应混合物中，并将其搅拌过夜。加入水(100ml)，并用二乙醚(100ml×2)萃取水层。将水层用柠檬酸酸化，并用thf/乙酸乙酯(4:1，5×50ml)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在旋转蒸发器上浓缩，得到6.60g的zyj24。1hnmr(400mhz,dmso-d6):8.95(s,1h),8.83(s,1h),7.52-7.46(m,2h),7.46-7.40(m,2h),7.40-7.34(m,1h),7.14(d,j＝8.30hz,1h),6.90(d,j＝1.83hz,1h),6.78(dd,j＝8.22,1.86hz,1h),5.13(s,2h),4.09(br,1h),3.76(s,3h),3.32(br,1h)。
步骤4:将zyj24(6.60g，16mmol)与acoh-水(200ml，6:4)混合。分小份加入pyhbr3(5.12g，16mmol)，将混合物在环境温度下搅拌过夜。再加入5gpyhbr3，并将反应加热至75℃直至转化完成(>6小时)。将反应混合物用水(400ml)稀释并用冰水浴冷却15分钟。通过过滤收集固体并用冷乙醚(40ml)洗涤，得到5.90g所需产物zyj25。1hnmr(400mhz,dmso-d6):9.04(s,1h),9.02(s,1h),7.54-7.48(m,2h),7.48-7.40(m,2h),7.40-7.36(m,1h),7.36(s,1h),6.91(s,1h),5.15(s,2h),3.72(s,3h)。esi-ms计算c20h1679br2no4[m+h]+＝491.94；实测：492.0。
步骤5:将zyj25(5.90g，12mmol)与t-buoh(30ml)混合。通过注射器加入et3n(4.3ml，30mmol)，然后通过注射器加入二苯基磷酰叠氮化物(4.13ml，19.2mmol)。将混合物在环境温度下搅拌3小时，然后加热回流24小时。将反应冷却至环境温度6小时，并用meoh(200ml)稀释。通过过滤收集固体，得到5.60g的zyj26。将母液浓缩并通过快速柱色谱纯化，得到0.33g的zyj26。1hnmr(400mhz,meod-d4):8.56(s,1h),7.56-7.34(m,5h),7.28(s,1h),6.68(s,1h),5.96(s,1h),5.21(s,2h),3.89(s,3h),1.50(s,9h)。esi-ms计算c24h2579br81brn2o4[m+h]+＝565.02；实测：565.42
步骤6:将zyj26(5.93g，10.5mmol)与无水二甘醇二甲醚(40ml)混合。分小份加入nah(840mg，21mmol，60％，在矿物油中)，然后加入cui(3.04g，16mmol)。将体系脱气并用氮气重新充满，然后加热回流4小时。将反应用50ml浓氨水和150ml水淬灭。通过过滤收集固体，并在环境温度下搅拌2小时后溶解于ch2cl2(40ml)和cf3co2h(15ml)中。通过过滤收集所需产物zyj27，其为绿色固体，在高真空中干燥过夜后为4.23g。1hnmr(400mhz,dmso-d6):12.32(s,1h),8.03(s,1h),7.56-7.50(m,2h),7.48-7.40(m,2h),7.40-7.36(m,1h),7.35(s,1h),5.31(s,2h),3.92(s,3h)。esi-ms计算c19h1679brn2o2[m+h]+＝383.04；实测：383.50。
步骤7:zyj27(2.0g，4.5mmol)与无水ch2cl2混合并将混合物冷却至-78℃。通过注射器加入bbr3(7.65ml，1.0m的ch2cl2溶液)，通过hplc监测反应并在约3小时内完成。在-78℃下，用meoh(20ml)淬灭反应，然后在室温下加入水。收集固体并用二乙醚洗涤，得到1.41g的固体状的zyj28。1hnmr(400mhz,dmso-d6):12.47(s,1h),9.09(s,1h),8.68(s,1h),8.02(s,1h),7.19(s,1h),3.94(s,3h)。esi-ms计算c12h1079brn2o2[m+h]+＝292.99；实测：292.25。
步骤8:将pd2(dba)3(184mg,0.2mmol)和binap(248mg,0.4mmol)在无水1,4-二恶烷(10ml)中混合。将混合物加热回流5分钟。将该澄清的橙红色溶液转移至含有zyj28(620mg，2.2mmol)，3-环丙基-1-甲基-1h-吡唑-5-胺(602mg，4.4mmol)，lihmds(13.2ml，1.0m在甲苯中)和无水1,4-二恶烷(20ml)的圆底烧瓶中。将该混合物加热回流过夜，然后用甲醇淬灭。将反应混合物浓缩，过滤并通过hplc纯化，得到340mg的、作为cf3co2h盐的zyj29。1hnmr(400mhz,meoh-d4):8.65(s,1h),7.84(s,1h),7.15(s,1h),7.06(s,1h),5.65(s,1h),3.88(s,3h),3.87(s,3h),1.95-1.83(m,1h),1.00-0.90(m,2h),0.70-0.62(m,2h)。esi-ms计算c19h20n5o2[m+h]+＝350.16；实测：350.25。
步骤9:将zyj29(287mg，0.62mmol)溶于无水thf(10ml)中。在0℃下分小份加入nah(180mg，3.0mmol，60％，在矿物油中)，然后一次性加入phn(tf)2(428mg，1.2mmol)。反应在4小时内升温至环境温度，然后用水淬灭。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用盐水洗涤，然后用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器上除去乙酸乙酯，并将含有zyj30的剩余残余物不经进一步纯化用于suzuki偶联。
步骤10：将粗zyj30和3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)异恶唑(401mg，1.8mmol)溶于dme(9ml)中，然后加入na2co3(2m水溶液，6ml)。将体系脱气，然后加入pd(pph3)4(80mg，0.06mmol)，将反应加热回流过夜。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用盐水洗涤，然后用无水na2so4干燥。在旋转蒸发器上除去乙酸乙酯，通过反相hplc纯化剩余的残余物，得到60mg的、作为cf3co2h的盐的化合物编号323。
实施例172
竞争性荧光偏振(fp)分析
使用fam标记的荧光探针(zba248或brd-1f)进行荧光偏振(fp)竞争性结合研究，以确定本发明的有代表性的化合物对重组brd4bd1和brd4bd2蛋白的结合亲和力。例如，通过监测由固定浓度的荧光探针和浓度增加直至完全饱和的蛋白质组成的混合物的总荧光偏振，从蛋白饱和实验确定zba248对这六种蛋白质的平衡解离常数(kd)值。测试蛋白的系列稀释液与zba248在测定缓冲液中混合成200μl的终体积。为了实现大的动态范围(dynamicrages)，特别是对于bd1溴结构域，使用100mm磷酸缓冲液(ph＝6.5，0.01％tritonx-100(sigma公司，282103)刚好在测定前添加)作为测定缓冲液。对于所有的蛋白质，最终zba248浓度是1.5nm。将培养板在室温下孵育30分钟，伴随着温和振荡，以保证平衡。在microfluor196孔黑色圆底板(thermoscientific，马萨诸塞州沃尔瑟姆)中使用infinitem-1000酶标仪(tecan美国，researchtrianglepark，nc)以485nm的激发波长和530nm的发射波长测定毫偏振(millipolarization)单位(mp)的fp值。通过使用graphpadprism6.0软件(graphpadsoftware，圣地亚哥，加利福尼亚州)拟合作为蛋白质浓度的函数的s形剂量-依赖性fp增加计算zba248的kd值。
在如上所述的竞争性结合试验中测定本发明的代表性化合物的ic50和ki值。将10μl的在具有40％乙二醇的测定缓冲液中的测试化合物和190μl的在测定缓冲液(100mm磷酸钾，ph6.5，0.01％tritonx-100)中的预培养的蛋白质/探针复合物溶液的混合物加入到在室温下孵育30分钟并轻轻摇动的测定板中。在用于brd4的bd1和bd2的测定法中，蛋白质的最终浓度分别为10和6nm。在所有的测定法中，最终探针浓度是1.5nm。只含有蛋白质/探针复合物的阴性对照(相当于0％抑制)和仅含有游离的探针的阳性对照(相当于100％抑制)包括在每个测定板中。如上所述地测定fp值。由竞争曲线的非线性回归拟合来确定ic50值。不是如上所述地从ic50值计算，而是通过非线性回归拟合直接获得竞争性抑制剂的ki值，其基于探针对不同的蛋白质的kd值，以及竞争性测定中的蛋白质和探针的浓度(wang,febslett.360；111(1995)；zhangetal.,analyticalbiochemistry,331；138(2004))。
在竞争性的荧光偏振测定中本发明的代表性化合物对brd4bd1和brd4bd2蛋白质的结合亲和力在表2中给出。
表2
也可以通过使用octetred无标记生物层干涉法(bli)结合测定的无标记结合测定确定对brd2bd1和bd2，brd3bd1和bd2，和brd4bd1和bd2的结合亲和力。
实施例173
细胞生长抑制
使用
对于乳腺癌细胞系，将细胞以5,000-10,000个细胞/孔的密度接种于具有系列稀释的化合物的96孔细胞培养板中并在95％空气和5％co2的气氛下在37℃下培养4天。从atcc获得的所有的乳腺癌细胞系。使用wst-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫苯基)-2h-四唑鎓，单钠盐)基于细胞计数-8试剂盒(dojindo分子技术公司，马里兰州，罗克维尔市)根据制造商的指示测定细胞活力。简言之，以10％的终浓度(v/v)将wst-8加入到每个孔中，然后将板在37℃下温育1-2小时进行显色。使用spectramaxplus酶标仪(moleculardevices，桑尼维尔，加州)在450nm测定吸光度。使用graphpadprism5软件计算ic50值。
对于前列腺癌细胞系，在5％co2细胞培养箱中在具有补充有10％fbs(invitrogen)的glutamax(gibco)的dmem中培养vcap前列腺癌细胞。对所有的细胞系进行测试，发现无支原体污染。在含有10％fbs的总体积为100ml的培养基中，以2,000-10,000个细胞每孔(生长的最佳密度)在96孔板中接种细胞。12小时后，将100ml培养基中的系列稀释的化合物加至细胞中。孵育96小时后，通过cell-titerglo(promega)评估细胞活力。将值进行归一化并使用graphpadprism软件计算ic50。
本发明的代表性化合物在molm13白血病和mda-mb-436乳腺癌细胞系中的细胞生长抑制示于表3中，以及在vcap前列腺癌细胞系中的细胞生长抑制示于表4。
表3
表4
在表5中提供来自上述测定的其他生物数据。
表5
实施例174
由bet溴结构域抑制剂阻断ar信号传导
用jq1处理5种前列腺癌和1种良性前列腺细胞系的组(panel)。发现三种ar-信号传导阳性细胞对jq1敏感，但是所有六种细胞系表达高水平的其靶蛋白(图1)。接着，brd2/3/4的敲除(数据未显示)显示细胞增殖/浸润的显著抑制，表型模拟jq1处理(数据未示出)。此外，jq1处理在ar阳性细胞中诱导g0-g1阻滞，细胞凋亡和抗凋亡bcl-xl蛋白的相关联的转录下调(图2)(filippakopoulos,p.etal.,nature468:1067-1073(2010)；mertz,j.a.etal.,procnatlacadsciusa108:16669-16674(2011))。在白血病中，类似于通过bet抑制剂i-bet151的bcl2下调(dawson,m.a.etal.,nature478:529-533(2011))；通过jq1减少bcl-xl可以部分地由观察到brd2/3/4招募到其启动子区域的损失来解释(数据未显示)。即使在100nm，ar阳性细胞的长期集落形成仍受到jq1的严重抑制(图3)，而对jq1靶蛋白没有明显的影响(数据未显示)。由于ar-阳性细胞优先地对jq1敏感，检查了jq1是否影响ar-靶基因。具有tmprss2-erg基因融合和ar扩增的vcap细胞(tomlins,s.a.etal.,science310:644-648(2005))显示psa和erg的剂量依赖性减少-在mrna水平和蛋白水平均如此(图4和5)。在lncap和22rv1细胞中均可见jq1处理的类似效果(未示出数据)。此外，硼替佐米没有扭转jq1介导的psa和erg蛋白质损失，这表明这些基因在转录水平上受到调控(未示出数据)。进行微阵列分析，以研究jq1处理时整体基因表达的变化。使用ar基因签名(表6)的基因集富集分析(gsea)揭示了这些基因在ar阳性细胞中受到显著抑制(图6)，表明ar介导的转录的bet蛋白调节。另外，jq1处理时，在ar阳性细胞系中观察到myc相关基因签名的损失(表7)。myc是在血液癌症中已知的bet抑制的转录靶标(delmore,j.e.etal.,cell146:904-917(2011)；mertz,j.a.etal.,procnatlacadsciusa108:16669-16674(2011))。在ar阳性和对jq1抑制敏感的细胞而不是在ar阴性细胞中，jq1衰减myc水平(数据未显示)。因此，在前列腺癌细胞中，myc本身的高表达(未示出数据)并不赋予对jq1的敏感性。利用jq1的时程实验证实myc的损失(数据未示出)，以及环己酰胺对myc蛋白没有额外的影响(数据未显示)，排除了jq1对myc蛋白的翻译后模式的作用。从表型看，myc的敲除不影响细胞浸润(数据未显示)，而jq1处理抑制浸润(数据未示出)。此外，myc的外源表达没有导致jq1介导的细胞生长抑制的恢复(未示出数据)。因此，虽然在ar阳性细胞中myc水平可以被jq1抑制，并且可以在增殖中发挥作用，然而myc似乎不是jq1的抗肿瘤作用的主要目标。
jq1阻滞或ar靶基因转录(图4-6)表明，ar可以与已知接合序列特异性dna结合蛋白的brd4相互作用(wu,s.y.etal.,molcell49:843-857(2013))。进行凝胶过滤色谱法，并发现ar和brd4主要以高分子量复合物一起洗脱(图7)。而且，据报道，通过brd4磷酸化的目标rnapolii(devaiah,b.n.etal.,procnatlacadsciusa109:6927-6932(2012))也以相同的复合物共洗脱，暗示了存在由ar、brd4和rnapolii组成的大的多蛋白复合物。免疫沉淀实验进一步证实ar和brd4之间的内源关联(图8)。此外，观察到ar和brd2/3之间的相互作用(图8)，暗示brd2/3/4蛋白质中的共同区域负责ar相互作用。为了映射介导这种相互作用的区域，测试brd4的不同缺失变体在293t细胞中拉下ar的能力(图9)。据发现，包括bd1-bd2结构域的brd4的截短版本保持拉下ar的能力，即使是在高盐浓度下(图10和11)。为了确定bd1-bd2结构域是否直接与ar相互作用，进行采用octet-red系统的结合亲和力的定量评价。将不同浓度的bd1-bd2蛋白应用到具有固定的ar的生物传感器，并且发现brd4以浓度依赖性的方式与ar相互作用，具有70nm的估计的kd，支持高亲和力相互作用(图12)。精细映射这种相互作用从而为体外拉下研究创建一系列的halo-ar和gst-brd4构建体，所述研究表明brd4的bd1，以及在较小程度上的bd2，直接结合到ar的ntd结构域，其进一步被映射到ar的38氨基酸区ntd1b(图13-15)。接着，观察到jq1对bd1-ar和bd1-ntd1b相互作用的破坏(图16)。同样，jq1处理的vcap显示内源性brd4-ar相互作用的损失(未显示数据)。总之，这些数据表明，bet蛋白抑制导致对ar-brd4相互作用的破坏，并且可以解释jq1在ar阳性前列腺癌细胞中的优先活动。
有人提出，普遍表达的brd2/3/4蛋白质具有重叠功能(dawson,m.a.etal.,nature478:529-533(2011)；filippakopoulos,p.etal.,nature468:1067-1073(2010)；belkina,a.c.anddenis,g.v.,natrevcancer12:465-477(2012))并且与此相一致，观察到ar与brd2/3/4的相互作用。bet抑制剂如jq1和i-bet762众所周知的是它们对brd2/3/4蛋白质的bd1/bd2结构域的高亲和力结合(dawson,m.a.etal.,nature478:529-533(2011)；delmore,j.e.etal.,cell146:904-917(2011)；filippakopoulos,p.etal.,nature468:1067-1073(2010))。这表明，bet-抑制剂可能影响所有这三种bet蛋白的全基因组招募。为此目的，在用jq1或i-bet762处理的vcap细胞中用针对brd2/3/4的抗体实施chip-seq(表8)。观察到brd2/3/4(62-86％峰重叠)之间的高的全基因组重叠(数据未显示)。jq1或i-bet762处理导致所有这三种蛋白质到染色质的招募减少(数据未显示)。此外，该降低的brd2/3/4招募对具有或不具有ar的区域平均分配(数据未显示)。
雄激素(dht)与ar的结合导致其从细胞质到核的激活/易位，在核处其结合包括are的dna的区域并且导致随后以基因特异性方式参与转录活化或抑制的蛋白质的招募。brd4与乙酰化组蛋白以及结合dna的转录因子相互作用，导致靶基因的背景依赖性转录激活或抑制(jang,m.k.etal.,molcell19:523-534(2005)；wu,s.y.etal.,molcell49:843-857(2013)；belkina,a.c.anddenis,g.v.,natrevcancer12:465-477(2012))。由于ar-brd4相互作用受到jq1的破坏(图7-16)，有人探讨此是否影响在全基因组范围中的ar定位。在饥饿的、用dht或dht加jq1(表8)处理的细胞中用针对ar，brd4和rnapolii的抗体实施chip-seq。两种抗雄激素抗体，比卡鲁胺和mdv3100用于比较。ar的平均chip-seq信号在dht处理过的细胞中高度富集(图17)。ar到目标基因位点的招募被mdv3100显著地减弱且被比卡鲁胺稍少地减弱。jq1可以阻滞ar招募达到几乎等同于mdv3100的水平(图17)。此外，观察到ar和brd4在2031位点的共同招募。在ar调节的基因的启动子内观察到最强的关联(502个启动子，p值＝4e-49)，并且对于最高ar峰(1112个位点，p值＝1e-38)(图18)。限制对ar和brd4重合峰的评估，可以观察到dht可以介导ar招募到这些位点，这种招募可以通过mdv3100抑制并且在较小程度上通过jq1抑制(图19)。与此相反，jq1几乎完全废除dht诱导的brd4到ar-brd4共享位点的招募(图20)。与ar和brd4关联的基因组区域例如增强子和超级增强子的基因追踪的实例(loven,j.etal.,cell153:320-334(2013))以及不同的处理对它们的水平的影响显示在图21中。如用chip-seq数据确证的，在vcap和lncap细胞中的基因表达分析显示了通过jq1而不是mdv3100或比卡鲁胺有效抑制dht诱导的ar-靶基因(数据未显示)。
接着，探讨了vcap细胞中的致癌性erg表达，因为jq1处理对其表达具有显着影响(图4和5)。jq1引起的dht诱导的erg表达的减弱是由于rnapolii从erg基因体的去招募以及ar和brd4在tmprss2启动子/增强子上的结合减少(数据未显示)。考虑到在50％的前列腺癌中tmprss2-erg基因融合产物是关键的致癌驱动物，jq1引起的这种高效的erg下调引人注目(tomlins,s.a.etal.,science310:644-648(2005)；chen,y.etal.,natmed19:1023-1029(2013))。接着，研究了jq1对erg介导的转录的影响。为了实现这个，在用jq1处理了12个小时的细胞中实施ergchip-seq；在此时间窗erg蛋白水平仍未受到jq1的影响(数据未示出)。观察到前4％erg富集峰的显著损失(数据未显示)。接下来，jq1处理后，通过测试其几个靶基因的表达，测定erg去招募的功能结果(数据未显示)。jq1引起erg激活的基因的下调和erg抑制的基因的去抑制(未示出数据)。，为了确认在近等基因设置中bet抑制剂在阻滞erg介导的致癌功能中的作用，测试过表达erg的rwpe和pc3细胞(未示出数据)。jq1或i-bet762的处理导致erg介导的浸润的减弱(数据未显示)和gsea展示了bet抑制剂治疗时在这些细胞中对erg靶基因的高度显著的阴性富集(数据未显示)。接着，研究了erg是否参与myc的转录调控。据发现，erg高度富集于myc的已知的远侧增强子上；但在jq1处理时减少(数据未显示)。同样地，etv1占据etv1融合阳性lncap中的同一远侧增强子区域(chen,y.etal.,natmed19:1023-1029(2013))。erg和etv1以及ar的敲除导致myc下调，牵涉融合阳性前列腺癌细胞中的myc的调节中的ets转录因子(未示出数据)。myc基因座处的ar和rnapolii富集的chip-seq分析提出了有趣的方式，其中dht处理分别导致在myc远侧增强子和基因体上的ar结合增加以及rnapolii结合减少，这在mdv3100或比卡鲁胺的存在下而不是通过jq1恢复(数据未示出)，并且这个结果由在mdv3100的存在下而不是通过jq1去抑制的、dht处理时所观察到的myc表达的伴随减少所支持(数据未显示)。在此设置中通过jq1去抑制myc的缺乏可以通过这样的事实解释，即ar和erg都不存在myc远侧增强子，从而导致myc表达的净损失。该数据还表明一种机制，通过该机制，crpc可通过保持myc致癌基因的表达而对抗雄激素治疗产生抗性。
研究了相比于mdv3100的jq1效果，mdv3100是临床上用于晚期crpc的直接的ar拮抗剂(scher,h.i.etal.,nengljmed367:1187-1197(2012))。在着手进行体内实验前，在体外对vcap细胞测试jq1和mdv31008天。观察到相对于jq1在亚微摩尔浓度引起的细胞生长的抑制，mdv3100导致边缘细胞死亡(图22)。未发现对雄激素调节的生理过程的影响，表明jqi不充当通用抗雄激素。然而，如先前所报道的，jq1降低小鼠的睾丸大小(lin,t.h.etal.,celldeathdis4:e764(2013))。(数据未显示)。用jq1处理vcap荷瘤小鼠导致肿瘤体积/重量的显著减少(图23-25)。然而，mdv3100具有不太明显的效果。最近，一些研究描述了在临床前模型中mdv3100的促转移效应(pro-metastaticeffects)(lin,t.h.etal.,celldeathdis4:e764(2013))。测试mdv3100处理是否导致vcap异种移植模型中的自发转移。为此目的，从mdv3100处理的小鼠中分离股骨、肝和脾，并观察到在股骨和肝中转移的证据(数据未显示)。与此相反，jq1处理的小鼠未显示转移的证据(数据未显示)。综合考虑，这些临床前的研究表明，在临床局限性前列腺癌中使用mdv3100会增强微转移的形成，在使用bet抑制剂的情况下不是这样。与以前的报告一致，jq1和mdv3100是小鼠良好耐受的(数据未显示)。虽然vcap细胞最初从患有crpc的患者来源，vcap肿瘤异种移植响应小鼠模型中的去势。研究在去势难治性vcap肿瘤异种移植瘤中jq1是否仍然具有生长抑制效果，并观察到jq1处理引起这些去势难治性肿瘤减少50％(图26)。
ar信号传导的维持已被确定为患有晚期前列腺癌的患者在常规激素治疗之后发展的最常见的耐药机制(harris,w.p.etal.,natclinpracturol6:76-85(2009))。ar扩增、突变和选择性剪接都被建议作为抗雄激素治疗的潜在抗性机制(chen,c.d.etal.,natmed10:33-39(2004)；taplin,m.e.etal.,cancerres59:2511-2515(1999)；sun,s.etal.,jclininvest120:2715-2730(2010))。crpc患者的半数以上具有至少一个ar途径中的这些畸变(grasso,c.s.etal.,nature487:239-243(2012))。由于bet抑制剂在ar本身的“下游”起作用(图27)，这些数据表明，这些化合物在ar指导的抗性机制的背景下是有效的，所述ar指导的抗性机制包括涉及也可能需要bet溴结构域功能的相关类固醇激素受体的代偿机制。通过在ar的下游起作用，bet-抑制不太可能受到与ar拮抗剂相关的获得性抗性的影响，包括最近鉴定的ar的f876l突变(balbas,m.d.etal.,elife2:e00499(2013))。虽然mdv3100和jq1都阻滞ar到全基因组范围的目标位点的招募(“ar顺反组”)，据发现，通过充分废除brd4的联合招募，这是调动转录机制所需要的，jq1可能具有增强的效果(jang,m.k.etal.,molcell19:523-534(2005)；yang,z.etal.,molcell19:535-545(2005))。最近的一项研究表明，bet-抑制导致“超级增强子”处的brd4的优先损失以及随后的转录延伸缺陷(loven，j。等人，cell153：320-334(2013))。这些超级增强子往往与多种癌症中的关键致癌驱动子相关联。肿瘤细胞被认为对所选定的致癌基因上瘾，并变得异常依赖它们的高表达，这可以解释bet-抑制在癌症中相对于在正常组织中的优先灵敏度。虽然myc及其与多发性骨髓瘤的相关性可归纳为超级增强子依赖性癌症(loven,j.etal.cell153:320-334(2013))，该框架有可能适用于参与crpc的发展的关键转录因子，包括ar，ets和myc(图27)。总之，这些数据有力地表明bet-抑制剂的临床评价在crpc中是有保证的，无论是作为单一疗法或与第二代抗雄激素组合。
方法
细胞培养
在5％co2细胞培养器中，vcap前列腺癌细胞在具有glutamax(gibco)的dmem中生长，lncap、22rv1、du145和pc3前列腺癌细胞系在rpmi1640中生长，所有都补充有10％fbs(invitrogen)。在具有补充剂的角化细胞培养基(lonza)中培养永生化良性前列腺细胞系rwpe-1。对所有的细胞系进行测试，发现无支原体污染。
细胞活力测定
在96孔板中，在总体积为100μl的含有10％fbs的培养基中，以2000-10,000个细胞/孔(生长最佳密度)接种细胞。12小时后，将在100μl培养基中的系列稀释的化合物加至细胞中。96小时孵育之后，通过cell-titerglo(promega公司)评估细胞活力。将值归一化，并使用graphpadprism软件计算ic50。对于长期集落形成试验，在6孔板中接种10,000-50,000个细胞/孔，并用100nm或500nmjq1或dmso处理。12天后，用甲醇固定细胞，用结晶紫染色并拍照。对于比色测定，用500μl10％乙酸处理染色的孔并使用分光光度计在560nm处测量吸光度。
细胞周期分析
细胞在6孔板中生长，并用不同浓度的jq1处理。对于细胞周期分析，处理后48小时，将细胞用pbs洗涤并在70％乙醇中固定过夜。将细胞再用pbs洗涤，用碘化丙锭染色并通过流式细胞术分析。
rna干扰
对于敲除实验，根据制造商的说明，将细胞接种在6孔板中并用靶向brd2、brd3、brd4、myc的100nmon-target加smartpoolsirna(themoscientific)或使用脂质体(invitrogen)的非靶向对照进行转染。在转染后24h，将细胞用胰酶消化，并用于细胞增殖和基底膜侵袭测定，以及用于rna提取以测定敲除效率。通过使用脂质体转染100nm特异性on-target加smartpoolsirna实现ar，erg和etv1敲除。
细胞增殖测定
对于sirna敲除后的细胞增殖测定，将20,000个细胞/孔接种在24孔板(n＝3)中，并在指定的时间点收获细胞和通过coulter计数器(beckmancoulter,fullerton,ca)计数细胞。
用ad-c-myc(vectorbiolabs，目录号1285)或lacz对照腺病毒颗粒转导vcap，lncap和22rv1细胞。感染24小时后；在24孔板中接种相等数目的细胞并用500nm浓度的载体、jq1或i-bet762处理。通过coulter计数器在指定的时间点计数细胞。
基底膜侵袭测定
用sirna感染或500nmjq1处理24小时后，将0.2x106个vcap或0.1x106个lncap细胞接种在预涂有基底膜基质(bdbiosciences)的transwell小室中。在下部室中含有10％fbs的培养基充当化学引诱物。在jq1的情况下，将500nm化合物添加到上部室和下部室。48小时后，用棉签轻轻移去非侵入细胞和ec基质并用结晶紫染色位于所述室的下侧的侵入细胞，空气中干燥，拍照和计数。
在预涂有基底膜基质的transwell小室中接种50,000个细胞/孔以及用于处理的相应药物之前，用500nm浓度的jq1或i-bet762以及dmso对照处理pc3和rwpe细胞24小时。在下部室中含有10％fbs的培养基充当化学引诱物。48小时后，用棉签轻轻移去非侵入细胞和ec基质并用结晶紫染色位于所述室的下侧的侵入细胞，空气中干燥并拍照。对于比色测定，用150μl10％乙酸处理插入物并使用分光光度计在560nm处测量吸光度(gehealthcare)。
rna分离和定量实时pcr
使用rneasymini试剂盒(qiagen)从细胞分离总rna并且使用superscriptiiifirst-strandsynthesissupermix(invitrogen)从1,000ng总rna合成cdna。使用taqman测定法(appliedbiosystems)或标准sybr绿试剂和steponeplus实时pcr系统上的方案(appliedbiosystems)一式两份或三份进行qpcr。使用δδct方法定量靶mrna表达并且将其相对于gapdh表达进行归一化。使用primer3(http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)设计并通过dna整合技术公司(integrateddnatechnologies，coralville，ia)合成所有引物。在表9中提供sybr绿的引物序列以及所使用的taqman测定法的目录号。
抗体和免疫印迹分析
在研究中所用的抗体在表10中列出。以制造商建议的稀释度使用所有的抗体。对于western印迹分析，在样品缓冲液中煮沸200ug总蛋白提取物，并通过sds-page分离10-20μg等份，并将其转移到聚偏二氟乙烯膜(gehealthcare)上。将膜在封闭缓冲液[tris缓冲盐水，0.1％吐温(tbs-t)，5％脱脂奶粉]中孵育一小时，接着在4℃下用第一抗体孵育过夜。在用tbs-t洗涤之后，用辣根过氧化物酶缀合的第二抗体孵育印迹，并按照生产商的方案通过增强的化学发光系统(gehealthcare)可视化信号。
免疫沉淀
对于内源性免疫沉淀实验，使用ne-per核提取试剂盒(thermoscientific)从vcap和lncap细胞得到核提取物。然后通过超声处理在ip缓冲液(20mmtrisph7.5，150mmnacl，1％triton-x100，蛋白酶抑制剂)中裂解核沉淀。通过用蛋白gdynabeads(lifetechnologies)在4℃下在旋转器上进行1小时的孵育预清洗核裂解物(0.5-1.0mg)。在加入蛋白gdynabead1小时之前，将5μg抗体加入到预清洗的裂解物中并在旋转器上在4℃下孵育过夜。珠粒在ip缓冲液中洗涤三次，并再悬浮于40μl的2×上样缓冲液中，并且在90℃下煮沸10分钟，用于蛋白质和珠粒的分离。随后通过如上所述的sds-page和免疫印迹分析样品。对于内源性竞争性测定，在核蛋白质提取之前用5或25μmjq1孵育vcap细胞6小时。
对于在293t细胞中的免疫共沉淀实验，根据制造商的指示使用fugene6.0hd(roche)转染pcdna4c中(addgene)的编码brd4的不同缺失体的质粒，和pfn21质粒(promega)中的编码全长ar的质粒。转染二十四小时后；用补充有蛋白酶抑制剂鸡尾酒混合物(sigma)的ip缓冲液提取总蛋白，并通过免疫印迹检查相应的蛋白质的表达。如上所述使用halo-珠免疫沉淀，随后用抗his抗体进行免疫印迹。
无细胞蛋白质-蛋白质相互作用研究
通过克隆所需的halo-或gst标签的下游表达盒以创建融合蛋白进行体外蛋白表达。简而言之，将ar及其子结构域克隆入含有n端gst序列的pfn2k载体中(cat.#g1891，promega)；将brd4及其子结构域克隆入含有n端halo序列的pfn19a载体(cat.#c8461，promega)中。克隆后，根据制造商的方案使用无细胞转录和翻译系统(cat.#l5030，promega)表达融合蛋白。对于每个反应，通过western印迹证实蛋白质表达。
在4℃下，在pbst(0.1％吐温)中，孵育含有halo-和gst标签融合蛋白的总共10μl的无细胞反应过夜。在bsa中在4℃下将10微升halolink珠(cat.#g931，promega)封闭过夜。用pbs洗涤之后，将珠粒与ar-brd4混合物混合，并在rt下孵育1小时。然后将halolink珠粒用pbst洗涤4次，并在sds上样缓冲液中洗脱。在sds凝胶上分离蛋白质并用抗gstab(gehealthcare)杂交。对于竞争性测定，在不同剂量的jq1的存在下孵育ar-bd1，ntd1b-bd1和ar-bd2混合物。
通过octetred的ar：brd4直接相互作用测定
通过使用octetred系统(fortebio)的生物层干涉测量技术确定ar和brd4之间的结合亲和力。根据制造商的方案，通过ez-linknhs-peg4生物素化试剂盒(cat.#21329，thermoscientific)生物素化重组ar蛋白(cat.#ar-8486h，creativebiomart)，并用zeba2ml脱盐柱从反应中除去任何未结合的生物素。然后将生物素化的蛋白(5μg/ml)在结合缓冲液(20mmhepesph7.4，150mmnacl)中用超级链霉亲和素生物传感器(cat.#18-5057，fortebio)孵育并在结合缓冲液中洗涤三次。在结合缓冲液中系列稀释brd4(bd1-bd2)蛋白(cat.#31047，bpsbiosciences)，并在25℃下通过octetred监测ar：brd4结合/解离10分钟。通过从ar：brd4相互作用获得的信号减去从ar：rnf2相互作用获得的信号来控制非特异性结合，并且通过监测没有brd4的固定的ar控制基线信号漂移。使用octetred分析软件分析数据。
基因表达阵列分析
用500nmjq1处理vcap、lncap、22rv1和du145细胞24小时，并使用rneasymini试剂盒(qiagen)提取总rna用于基因表达阵列分析。对于抗雄激素比较研究，在含10％活性炭处理血清的培养基中培养vcap和lncap细胞48小时，然后用500nmjq1、10μmmdv3100或25μm比卡鲁胺预处理6小时并用10nmdht(雄激素)刺激18小时。仅用载体或10nmdht处理的细胞作为对照。对于近等基因erg系统中的bet抑制剂的效果，用500nmjq1或i-bet762处理rwpe-erg和pc3-erg细胞24小时。根据制造商的方案，使用agilent全人类基因组寡核苷酸微阵列(圣克拉拉，ca)进行表达谱分析。所有样品均相对于对照以技术二重或四重运行。通过过滤产生过表达和低表达的基因集以在所有的杂交中包括仅2倍的平均过表达或低表达(对数比p<0.001)。如subramanian,a.etal.,procnatlacadsciusa102:15545-15550(2005)中所述地使用java程序实施基因集富集分析(gsea)。
从dht处理时在vcap和lncap中的共同上调的基因产生gsea分析中使用的ar靶基因签名，并在表6中提供基因列表。
相较于各自的lacz表达细胞，通过从稳定表达erg的rwpe和pc3细胞提取2倍上调基因产生erg基因签名。使用这种基因集对从jq1和i-bet762处理过的rwpe和pc3细胞获得的基因表达数据进行gsea。也使用这样的基因集测试gsea，所述基因集在erg表达时不改变从而排除用jq1和i-bet762处理可能以非特异性的方式改变基因表达的可能性。
染色质免疫沉淀(chip)和chip-seq
根据制造商的方案，用highcellchip试剂盒(diagenode)实施brd2、brd3、brd4、ar、rnapolii、erg和h3k27ac的chip测定。对于用bet抑制剂的brd2/3/4chip-seq实验，用500nm的jq1或i-bet762处理vcap细胞12小时。对于ar信号传导chip-seq实验，在经活性炭处理血清的培养基中培养vcap细胞48小时，然后用载体或500nmjq1或10μmmdv3100或25μm比卡鲁胺预处理6小时并用10nmdht刺激12小时。对于ergchip-seq研究，用500nmjq1或载体处理vcap细胞12小时。接着，用1％甲醛将细胞交联10分钟。在室温下通过加入1/10体积的1.25m甘氨酸5分钟终止交联，随后进行细胞裂解和超声处理(bioruptor，diagenode)，导致200bp的平均染色质片段大小。相当于5x106个细胞的染色质用于使用不同的抗体的chip。通过在4℃下用抗体孵育过夜，随后进行洗涤和解交联，从样品分离chipdna(ipure试剂盒，diagenode)。根据制造商的说明(illumina)进行用于测序的chip-seq样品制备。使用t4dna聚合酶，大肠杆菌dna聚合酶i大片段(klenow聚合酶)和t4多聚核苷酸激酶(newenglandbiolabs，neb)将chip富集的dna样品(1-10ng)转化成平末端片段。通过klenow片段(3'至5'外切；neb)将单个a-碱基加入到片段末端，接着是illumina适配体的连接(quick连接酶，neb)。通过使用illuminabarcode引物和phusiondna聚合酶(neb)的pcr富集适配体修饰的dna片段。使用3％nusieve琼脂糖凝胶(lonza)选择pcr产物的大小，随后使用qiaexii试剂(qiagen)进行凝胶提取。将文库用生物分析仪2100(安捷伦)进行量化并在illuminahiseq2000测序仪(100个核苷酸读取长度)上测序。
chip-seq分析
chip-seq富集水平：如下地从测序数据计算峰(或位点)内的chip富集水平：(1)以所有默认的设置，使用bowtie2(langmead,b.andsalzberg,s.l.,natmethods9:357-359(2012))将读数相对于hg19参照基因组校准。(2)使用novosort将校准的读数排序并使用samtools除去确切的重复(li,h.etal.,bioinformatics25:2078-2079(2009))。(3)对于每个峰(位点)，计数重叠的读数并通过峰或位点的长度划分该计数。(4)为了校正测序深度和校准覆盖度的差异，通过校准的每百万读段数的数量归一化该值。
chip-seq重复性绘图：为了评估ar和ergchip-seq实验的生物变异度，比较它们各自的重复的富集水平。对于每个重复，使用macs相对于igg对照以所有默认设置调用峰。排除基因组区域内的容易出现技术伪影的峰(pickrell,j.k.etal.,bioinformatics27:2144-2146(2011))。对于每个重复对，定义一组和谐峰(concordantpeak)，如在两个重复中重叠的那些。对于每一个和谐峰，计算两个重叠峰的并集内的富集程度。散布图包括富集水平高达第99百分位的所有峰。
溴结构域蛋白的重叠：比较dmso处理的vcap细胞中的brd2、brd3和brd4峰的全基因组分布。首先，使用macs以所有默认设置调用每个蛋白质的峰和igg对照的峰。使用了中度严格显著性界限(macs分数>100)。接着，对富集至少一种这些蛋白质的所有基因组区域进行鉴定。具体地，使用genomicranges“减少”所有的严格峰(lawrence,metal.,ploscomputbiol9:e1003118(2013))。对于每个这样的区域，确立富集溴结构域蛋白质的那些以计数重叠的数量。
药物诱导的溴结构域蛋白富集水平的变化：对于每一种蛋白质(brd2、brd3、brd4)，评估在经药物治疗(i-bet762，jq1)之后它们各自的富集水平相对于dmso对照中的水平的定量变化。首先，对于所有的情况和蛋白质，如在溴结构域蛋白的重叠中调用地那样调用峰。接着，分别对于各个蛋白质，鉴定在任一(联合)治疗情况(dmso，ⅰ-bet762或jq1)中富集的基因组。在那些区域内，对如(chip-seq富集水平)中所描述的对富集水平进行定量。因为不同蛋白质的富集水平不能直接比较，将所有的富集相对于(dmso)对照的中值水平进行归一化。
差异的ar-brd4富集和ar-brd4重叠：将为蛋白质相互作用基因组区域的识别而设计的基于hiddenmarkov模型(hmm)的峰调用软件hpeak(qin,z.s.etal.,bmcbioinformatics11:369(2010))用于chip-seq峰确定。对于图17，19和20中所示的富集图，通过峰顶确定每个样品的识别峰的中心并且在1500bp内相对于峰中心计数每百万平均覆盖度。通过bedtools计算ar和brd4富集区域的重叠(quinlan,a.r.andhall,i.m.,bioinformatics26:841-842(2010))。基于相关基因的导出数量使用超几何测试计算ar和brd4结合之间的重叠的显著性。使用基于python的脚本对原始数据生成ar峰富集的热图(heatmap)并使用javatreeview可视化(saldanha,a.j.,bioinformatics20:3246-3248(2004))。
差异的erg富集：对具有dmso和jq1处理的细胞之间的erg水平的显著差异的位点进行鉴别。首先，对重叠或在注释基因位点的+/-5kbp近侧的和谐峰(参见chip-seq重复性图)进行鉴别。将基因位点定义为其所有已知脚本的联合(ensemblgenes73)。将deseq2用于评估erg富集水平的差异的统计学显著性。虽然deseq2最初为rna-seq而开发，但其统计模型非常适合一般地计数数据。采用工具的默认多重假设校正方法和具有erg水平的显著差异(调整后的p值<0.1)的报告峰。为了评估在显著“增进”(经jq1治疗后erg水平的正差)和“丧失”(经jq1治疗后erg水平的负差)处erg水平的定量差异，遵照与chip-seq富集水平中的相同程序。
鼠前列腺肿瘤异种移植模型
从密歇根大学的繁殖群采购四周龄雄性scidc.b17小鼠。所有涉及小鼠的程序由密歇根大学的动物使用和护理大学委员会(ucuca)批准，并符合所有监管标准。使用2％异氟烷(吸入)麻醉小鼠并将悬浮在100μl的具有50％基底膜基质(bdbiosciences)的pbs中的2x106vcap前列腺癌细胞皮下植入到小鼠的两侧的背侧。一旦肿瘤达到可触及的阶段(100mm3)，将动物随机化并通过口服管饲法或腹膜内每周五天地用10mg/kg体重mdv3100或50mg/kg体重(先前在小鼠前列腺癌和多发性骨髓瘤模型中使用的剂量)分别处理(delmore,j.e.etal.,cell146:904-917(2011)；tran,c.etal.,science324:787-790(2009))。使用数显卡尺记录肿瘤体积的增长并用公式(π/6)(l×w2)估计肿瘤体积，其中l＝肿瘤长度和w＝宽度。在研究过程中也监测体重的损失。在研究结束时处死小鼠，并提取肿瘤和称重。此外，采集股骨骨髓、肝和脾以通过检测人-alu序列来检查自发转移。简要地说，使用puregenedna纯化系统(qiagen)制备来自股骨骨髓，肝和脾的基因组dna，然后通过如所描述的人alu特异性fluorogenictaqmanqpcr探针进行人alu序列的定量(tran,c.etal.,science324:787-790(2009)；vanderhorst,e.h.etal.,biotechniques37:940-942,944,946(2004))。对于crpc实验，当肿瘤的大小约为200mm3时，将vcap荷瘤小鼠去势并且一旦肿瘤长回去势前的大小后将其随机化并用jq1或载体(d5w)对照处理。所有涉及小鼠的程序由密歇根大学的动物使用和护理大学委员会(ucuca)批准，并符合所有监管标准。
前列腺组织学和激素测定
分别通过口腔管饲法或腹膜内每周五天地对四到五周大的雄性scidc.b17小鼠施用载体，10mg/kgmdv3100或50mg/kgjq1。注射4周后，从小鼠采集附着于前列腺的高度激素反应性的精囊。将前列腺在福尔马林溶液中固定并进行切片处理。在福尔马林固定切片上实现标准h&e染色并用于成像腺体的不同叶。为了确定睾酮水平，通过心脏穿刺从用异氟烷麻醉的小鼠收集血液样品。从血液中分离血清并在-80℃下保存直到测定。在密歇根大学-ulampathologycoresforanimalresearch通过配体测定(ligandassay)测量血清睾酮水平。
表6：在用于图6中示出的gsea分析的vcap和lncap细胞中在dht刺激时共同上调的基因。
表7：gsea显示在jq1处理后在ar阳性细胞而不是ar阴性du145细胞中的myc签名(4个基因集)的损失。大小-每一集中的基因的数量；nes-标准化富集分数；p-和fdrq，统计学显着性测试。
表8：brd2、brd3、brd4、ar、rnapol.ii、erg、h3k27ac和igg的chip文库的高通量测序读段信息。
表9：pcr引物。
表10：抗体。
ip-免疫沉淀
ib-免疫印迹分析
chip-seq-染色质免疫沉淀后测序
现在既然已经充分地描述本文所提供的方法，化合物和物质组合物，本领域的技术人员可以理解的是，可以在宽和等同的范围的病况，制剂和其它参数内实施这些，而不影响本文所提供的方法，化合物和组合物的范围或它们的任何实施方案。本文引用的所有专利，专利申请和出版物在这里通过引用以其整体完全并入本文。
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