本发明涉及一种药用原料升压素的生物提取方法，属于生物工程领域，具体是一种升压素溶液的提取工艺。
背景技术：
升压素又名加压素、抗利尿激素，是由下丘脑的视上核和室旁核的神经细胞分泌的9肽激素，分子式为：C43H67N15O12S2，分子量为：1050.22，经下丘脑-垂体束到达神经垂体后叶后释放出来。其主要作用是提高远曲小管和集合管对水的通透性，促进水的吸收，是尿液浓缩和稀释的关键性调节激素。主要用作尿崩症、食管静脉曲张出血的治疗。
未见有用生物提取方法制备升压素的报道，有报道用制备型高效液相纯化合成的升压素，虽然可以达到纯度95%以上，但是其收率却只有20%左右。
技术实现要素：
本发明的目的是寻找出一条工艺路线，在提高产品收率的同时能提高产品的纯度。采用树脂交换、超滤、制备型高效液相纯化等技术相结合的手段来纯化分离解决了这一问题。
为实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：
一种升压素溶液的提取工艺，具体步骤如下：
⑴原料提取：垂体后叶粉中加入醋酸，搅拌提取，过滤；滤饼中再次加入醋酸，搅拌提取，过滤；合并两次滤液；
⑵除蛋白：溶液搅拌加热至一定温度，保温一段时间，冷却至室温；
⑶树脂交换：先用平衡液（1×10-4mol/L的NaOH溶液中加入酸调节pH值）平衡离子交换树脂柱，然后进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在280nm下进行紫外检测，吸光值在原有吸光值上升时收集升压素，在收集升压素的同时，不断用酸调节收集液的PH值，当吸光值为降至0.4时，停止收集；
⑷超滤：将收集的上述升压素用超滤器超滤，收集滤液；
⑸制备型高效液相粗分离纯化：将步骤⑷中的滤液用0.45μm的滤膜过滤，然后使用制备型高效液相色谱仪进行粗分离纯化，具体步骤包括：5a.平衡制备柱；5b.将步骤⑷超滤后的升压素溶液上样；5c.平衡制备柱；5d.用流动相洗脱样品，收集分离纯化的粗分液；
⑹制备型高效液相精制：将步骤⑸中的升压素溶液稀释，然后使用制备型高效液相色谱仪进行精制纯化，步骤具体包括：6a.平衡制备柱；6b.将稀释后的升压素溶液上样；6c.平衡制备柱；6d.用流动相洗脱，分析型高效液相跟踪测定，收集成分峰；
⑺浓缩：将精制后的升压素溶液经旋转蒸发仪减压浓缩，浓缩至为原体积的2/3以下，加入乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3以下，再加入乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3以下，收集浓缩后的升压素溶液，用适量注射用水分三次洗涤浓缩圆底烧瓶，并入浓缩液中混合均匀，得升压素溶液。
优选步骤⑴中的醋酸溶液的浓度为0.2%～0.3%；加入的醋酸溶液的量为20～30mL/g垂体后叶干粉量；提取的温度为45～55℃；提取时间为10～20min。
优选步骤⑵中的加热温度为95～100℃；保温时间为10～20min。
优选步骤⑶中平衡液的配制中调节PH所用的酸为醋酸，调节PH值为3.5～4.5；用0.1～0.3M的氯化钠溶液来洗脱；在收集升压素的过程中调节pH值所用的酸为醋酸，调节PH值为3.5～4.0。
优选步骤⑷中的超滤膜截留分子量为10000道尔顿。
优选步骤⑸中的制备色谱柱为C18柱；流动相为：0.2M磷酸三乙胺缓冲液-乙腈（80～90：20～10）；检测波长为280nm；步骤5a和5c中平衡制备柱用的平衡液均为0.2M磷酸三乙胺缓冲液。
优选步骤⑹制备色谱柱为C18柱；流动相为：0.5%醋酸溶液-乙腈（比例为75～85：25～15）；检测波长为280nm；步骤6a和6c中平衡制备柱用的平衡液均为2%醋酸溶液。
优选步骤⑺中减压浓缩过程中水浴温度38~40℃，真空压力为0.07～0.10MPa，加入的乙醇溶液的浓度为95%。
有益效果：
本发明采用多种分离纯化手段相结合的工艺，直接从动物脑垂体中分离纯化得到升压素，得到的产品能够保证收率达到75%以上，同时产品的纯度也可以达到98%以上。所用的原料廉价易得，工艺中用到的丙酮、乙醇等有机试剂均可回收再利用。该工艺操作简单、环保、生产周期短、生产成本较低等优点，适合大规模工业化生产。
具体实施方式
以下结合实例来进一步解释本发明，但实施案例并不对本发明做任何形式的限制。
实施例1
称取垂体后叶粉1000g，向垂体后叶粉中第一次加入0.2%的醋酸溶液20L，45℃下搅拌10min，过滤，得到滤液和滤饼，向滤饼中再加入0.2%的醋酸溶液10L，45℃下搅拌10min，得到滤液，合并两次滤液。将滤液搅拌加热至95℃，保温10min后冷却至室温。用PH为3.5的平衡液平衡弱酸型离子交换树脂柱，用浓度为0.1M的氯化钠溶液通过平衡好的离子柱洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在280nm下进行紫外检测，吸光值在原有吸光值上升时收集升压素，在收集升压素的同时，不断用酸调节收集液的PH值在3.5左右，当吸光值为降至0.4时，停止收集。将收集的升压素溶液通过节流分子量为10000道尔顿的超滤器，收集滤液。将滤液用0.45μm的滤膜过滤，用制备型高效液相进行粗分离纯化，色谱条件：色谱柱：C18柱，检测波长：280nm，流动相：0.2M磷酸三乙胺缓冲液/乙腈（80/20），粗分离纯化具体包括：a.平衡：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液1～1.5个柱体积平衡制备柱；b.上样：将过滤后的升压素溶液上样；c.平衡：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液1个柱体积平衡制备柱；d.洗脱：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液/乙腈（80/20）流动相洗脱样品，收集分离纯化的粗分液 。用制备型高效液相精制，色谱条件：填充料：C18，检测波长：280nm，流动相：0.5%醋酸/乙腈（比例为75/25），具体包括：a.平衡：用2%醋酸溶液平衡制备柱；b.上样：将稀释后的升压素溶液上样；c.平衡：用2%醋酸溶液平衡制备柱，再用0.5%醋酸溶液平衡制备柱约1个柱体积；；d.洗脱：用流动相洗脱，分析型高效液相跟踪测定，收集成分峰。最后将精制后的升压素溶液经旋转蒸发仪减压浓缩，水浴温度为38℃，真空压力为0.10MPa，浓缩至为原体积的2/3时，加入95%的乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3，再加入乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3以下，收集浓缩后的升压素溶液，用适量注射用水分三次洗涤浓缩圆底烧瓶，并入浓缩液中混合均匀，得升压素溶液360ml,检测其纯度为98.6%，收率为75.6%。
实施例2
称取垂体后叶粉800g，向垂体后叶粉中第一次加入0.25%的醋酸溶液20L，50℃下搅拌15min，过滤，得到滤液和滤饼，向滤饼中再加入0.25%的醋酸溶液12L，50℃下搅拌15min，得到滤液，合并两次滤液。将滤液搅拌加热至98℃，保温15min后冷却至室温。用PH为4.0的平衡液平衡弱酸型离子交换树脂柱，用浓度为0.2M的氯化钠溶液通过平衡好的离子柱洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在280nm下进行紫外检测，吸光值在原有吸光值上升时收集升压素，在收集升压素的同时，不断用酸调节收集液的PH值在3.8左右，当吸光值为降至0.4时，停止收集。将收集的升压素溶液通过节流分子量为10000道尔顿的超滤器，收集滤液。将滤液用0.45μm的滤膜过滤，用制备型高效液相进行粗分离纯化，色谱条件：色谱柱：C18柱，检测波长：280nm，流动相：0.2M磷酸三乙胺缓冲液/乙腈（85/15），粗分离纯化具体包括：a.平衡：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液1～1.5个柱体积平衡制备柱；b.上样：将过滤后的升压素溶液上样；c.平衡：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液1个柱体积平衡制备柱；d.洗脱：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液/乙腈（85/15）流动相洗脱样品，收集分离纯化的粗分液 。用制备型高效液相精制，色谱条件：填充料：C18，检测波长：280nm，流动相：0.5%醋酸溶液/乙腈（比例为80/20），具体包括：a.平衡：用2%醋酸溶液平衡制备柱；b.上样：将稀释后的升压素溶液上样；c.平衡：用2%醋酸溶液平衡制备柱，再用0.5%醋酸溶液平衡制备柱约1个柱体积；d.洗脱：用流动相洗脱，分析型高效液相跟踪测定，收集成分峰。最后将精制后的升压素溶液经旋转蒸发仪减压浓缩，水浴温度为39℃，真空压力为0.09MPa，浓缩至为原体积的2/3时，加入95%的乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的1/3，再加入乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3以下，收集浓缩后的升压素溶液，用适量注射用水分三次洗涤浓缩圆底烧瓶，并入浓缩液中混合均匀，得升压素溶液270ml，检测其纯度为99.0%。收率为75.9%。
实施例3
称取垂体后叶粉600g，向垂体后叶粉中第一次加入0.3%的醋酸溶液18L，55℃下搅拌20min，过滤，得到滤液和滤饼，向滤饼中再加入0.3%的醋酸溶液12L，55℃下搅拌20min，得到滤液，合并两次滤液。将滤液搅拌加热至100℃，保温20min后冷却至室温。用PH为4.5的平衡液平衡弱酸型离子交换树脂柱，用浓度为0.3M的氯化钠溶液通过平衡好的离子柱洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在280nm下进行紫外检测，吸光值在原有吸光值上升时收集升压素，在收集升压素的同时，不断用酸调节收集液的PH值在4.0左右，当吸光值为降至0.4时，停止收集。将收集的升压素溶液通过节流分子量为10000道尔顿的超滤器，收集滤液。将滤液用0.45μm的滤膜过滤，用制备型高效液相进行粗分离纯化，色谱条件：色谱柱：C18柱，检测波长：280nm，流动相：0.2M磷酸三乙胺缓冲液/乙腈（85/15），粗分离纯化具体包括：a.平衡：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液1～1.5个柱体积平衡制备柱；b.上样：将过滤后的升压素溶液上样；c.平衡：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液1个柱体积平衡制备柱；d.洗脱：用0.2M磷酸三乙胺缓冲液/乙腈（90/10）流动相洗脱样品，收集分离纯化的粗分液 。用制备型高效液相精制，色谱条件：填充料：C18，检测波长：280nm，流动相：0.5%醋酸溶液/乙腈（比例为85/15），具体包括：a.平衡：用2%醋酸溶液平衡制备柱；b.上样：将稀释后的升压素溶液上样；c.平衡：用2%醋酸溶液平衡制备柱；再用0.5%醋酸溶液平衡制备柱约1个柱体积；d.洗脱：用流动相洗脱，分析型高效液相跟踪测定，收集成分峰。最后将精制后的升压素溶液经旋转蒸发仪减压浓缩，水浴温度为40℃，真空压力为0.07MPa，浓缩至为原体积的2/3时，加入95%的乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3，再加入乙醇溶液，摇匀后继续浓缩至原体积的2/3以下，收集浓缩后的升压素溶液，用适量注射用水分三次洗涤浓缩圆底烧瓶，并入浓缩液中混合均匀，得升压素溶液 200ml，检测其纯度为98.8%，收率为76.1%。