一种柑橘轮斑病菌分子检测的引物及其检测方法与流程

技术特征：

1.一种柑橘轮斑病菌分子检测的引物，其特征在于，柑橘轮斑病菌分子检测的特异性上、下游引物为：

Cc-SP1-上游：CCTTTCACAATGAAGCAGGAATAG

Cc-SP1-下游：GTGGCTGTACCATCCTTAGAAA

和/或

Cc-SP2-上游：GCTGATTGAGTGCCCATAGA

Cc-SP2-下游：ACTCCAACCAACGAGATGATAG。

2.柑橘轮斑病菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：利用柑橘轮斑病菌中的2条基因组DNA序列在Primer Primier 6软件中设计并合成两对特异性上、下游引物Cc-SP1和Cc-SP2；

S2：将柑橘轮斑病菌的特异性引物Cc-SP1-上游、Cc-SP1-下游和与其相对应的柑橘轮斑病菌基因组DNA加入PCR反应体系中，并在PCR反应条件下进行多个循环反应；

和/或将柑橘轮斑病菌的特异性引物Cc-SP2-上游、Cc-SP2-下游和与其相对应的柑橘轮斑病菌基因组DNA加入PCR反应体系中，并在PCR反应条件下进行多个循环反应；

S3：PCR反应结束后，取5μL扩增产物在琼脂糖凝胶中并在100V电压条件下电泳，在BIO-RAD凝胶成像系统上观察、拍照,若能够检测出224bp和/或389bp大小的片段,则可判断出所述的柑橘轮斑病菌。

3.根据权利要求2所述的柑橘轮斑病菌的检测方法，其特征在于：在S2中，所述PCR反应体系总体积为20μL，其中10μL 2×Taq PCR Mix，0.2μM正向引物，0.2μM反向引物，100ng基因组DNA，超纯水补足20μL。

4.根据权利要求2所述的一种柑橘轮斑病菌的检测方法，其特征在于：在S2中，所述PCR反应条件为94℃5分钟，94℃30秒，55℃30秒，72℃30秒，72℃10分钟，共35个循环。

5.根据权利要求2所述的一种柑橘轮斑病菌的检测方法，其特征在于：在S3中，所述琼脂糖凝胶的浓度为1.0％，所述电泳时间为20min。

6.根据权利要求2所述的一种柑橘轮斑病菌的检测方法，其特征在于：在S3中，所述224bp大小的片段的核苷酸序列为：

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7.根据权利要求2所述的一种柑橘轮斑病菌的检测方法，其特征在于：在S3中，所述389bp大小的片段的核苷酸序列为：

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