一种防治柑橘黄龙病的微生物复合菌及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物防治领域，特别涉及一种防治柑橘黄龙病的微生物复合菌及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]柑橘是世界产量最多的水果，在我国已经有4000多年的栽培历史。2009年我国柑橘栽培面积和产量均超过巴西、美国，位居世界首位，但在柑橘产业迅速发展的同时，黄龙病已成为柑橘生产上危害最为严重的毁灭性病害。早在18世纪中叶，印度就有相关报道。Reinking于19世纪20年代对我国华南地区进行首次报道，半个多世纪以来，柑橘黄龙病严重制约了广东、广西、福建3省区柑橘产业的发展。20世纪70年代末，四川省西昌地区和渡口市、江西赣州地区以及云南省得部分地区也先后发现柑橘黄龙病，到20世纪80年代中期，柑橘黄龙病已在我国广东、广西、福建、海南和台湾的柑橘产区广泛蔓延，并在浙江、贵州、湖南相继发生，我国柑橘栽培的19个省、区已有11个遭受危害，受害面积占柑橘总栽培面积的80%以上，产量占总产量的85%左右。2004年巴西圣保罗州和2005年美国佛罗里达州黄龙病相继发生，造成柑橘从业者的恐慌。迄今，黄龙病已广泛分布于亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的40多个国家。
[0003]黄龙病主要危害柑橘的新梢、嫩叶、花及果实。初期在浓绿的树冠中出现少数新梢黄化，俗称“插金花”、“鸡头黄”。叶片出现均匀黄化、斑驳型黄化和缺素型黄化三种症状类型。斑驳黄化叶片和“红鼻果”是最典性的症状，可以作为形态学鉴定该病害的主要依据。在田间病树调查时，未结果的幼年树以斑驳型黄化叶片为诊断依据，结果树以“红鼻果”作为诊断依据。
[0004]现有技术通常采用综合防治的方法来控制该病害:一是严格植物检疫，从苗木上把关；二是培育和推广无病毒苗木;三是及时挖除病株，加强果园管理；四是通过物理和化学农药方式防治柑橘木虱，切断传染源。但这些方法“治标不治本”，没有从病原深处解决问题，目前现有技术缺乏能有效地直接减少或消除病株中病原的可行方法。
【发明内容】
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[0005]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能有效地直接减少或消除柑橘黄龙病病株中病原的微生物复合菌及其制备方法和应用。
[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案:
[0007]本发明提供了一种微生物复合菌，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCC N0.7996，所述的微生物复合菌为微生物复合菌液或微生物复合菌剂。
[0008]优选的，所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的体积比为(20?60): (5?8);
[0009]优选的，所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌的活菌总数为50?100亿/ml，枯草芽孢杆菌的活菌总数为50?100亿/ml。
[0010]优选的，所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的重量比为(5?80):(10?80)。
[0011]优选的，所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌的活菌总数为50?200亿/g，枯草芽孢杆菌的活菌总数为60?150亿/g。
[0012]本发明还提供了一种微生物复合菌液的制备方法，包括以下步骤:
[0013]al)克里本类芽孢杆菌的发酵，所述的克里本类芽孢杆菌发酵条件为:液体培养基，温度为29?30°C、培养时间为48?120小时，发酵72?96小时后每隔2?4小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达50?100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液；
[0014]a2)枯草芽孢杆菌的发酵，所述的枯草芽孢杆菌种子的发酵条件为:液体培养基，温度为29?30°C、时间28?48小时，发酵28?32小时后每隔2?4小时检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达50?100亿/ml时停止发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液；
[0015]a3)发酵液的混合，在无菌条件下，将上述两种发酵液按体积比为(20?60): (50?80)的比例混合得到微生物复合菌液；
[0016]步骤al)与步骤a2)之间无时间顺序限定。
[0017]本发明还提供了一种微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤:
[0018]bl)克里本类芽孢杆菌的发酵，所述的克里本类芽孢杆菌发酵条件为:温度为29?30°C、培养时间为48?120小时，发酵72?96小时后每隔2?4小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达50?100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液；
[0019]b2)枯草芽孢杆菌的发酵，所述的枯草芽孢杆菌种子的发酵条件为:温度为29?30°C、培养时间28?48小时，发酵28?32小时后每隔2?4小时检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达50?100亿/ml时停止发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液；
[0020]b3)发酵液的混合，在无菌条件下，将上述两种发酵液按体积比为1:0.5?1.5的比例混合得到微生物复合菌液；
[0021 ] b4)微生物复合菌液的干燥，将步骤b3)中得到的微生物复合菌液干燥后得到微生物复合菌剂；
[0022]所述的步骤bl)和步骤b2)之间无时间顺序限定。
[0023]优选的，步骤b4)中所述的干燥为喷雾干燥，喷雾干燥的出口温度为90?95°C，入口温度为145?150°C，
[0024]优选的，所述的喷雾干燥的入料速度1000?1500ml/h。
[0025]优选的，步骤4)中所述的喷雾干燥需加入保护剂，所述保护剂为脱脂奶粉或蔗糖，保护剂的浓度为15?25%。
[0026]本发明还提供了所述的微生物复合菌在防治柑橘黄龙病方面的应用，所述的微生物复合菌的应用方法为根灌或喷雾;所述根灌具体为:每株树使用0.5?lkg复合菌，浇在根部15-25公分处;所述喷雾具体为:每株树使用复合菌0.5?lkg，兑水3?5kg后，喷雾叶片。
[0027]本发明的技术原理:克里本类芽孢杆菌在发酵过程中产生嘌呤类似物等抗菌物质，在土壤中形优势菌群，抑制有害菌的生长;同时在生长过程中产生大量的胞外多糖及小分子蛋白，能在果树根尖定植并形成“生物膜”，并且在根部维管柱外的细胞内空间积累，产生的“生物膜”能够大大加速果树吸收营养物质的过程。枯草芽孢杆菌通过营养竞争进行生长繁殖从而占据生存空间的方式来阻止植物病原菌的生长，能在植物表面迅速形成一层高密保护膜，使病原菌得不到生存空间，从而保护作物免受病原菌危害。
[0028]本发明的有益效果:本发明所述的微生物复合菌可以有效地防治柑橘黄龙病，通过抑制柑橘病株根部和叶部的革兰氏阴性细菌的生殖繁衍，达到“以菌治菌”，杀灭有害菌的目的，使用本发明所述的微生物复合菌可使柑橘树黄叶转绿，黄化症状消失，试验组的柑橘黄龙病发病率明显低于常规处理，由常规处理75.1 %的发病率降低至35.6%?67.5%，与常规处理相比发病率最高降低了 52%，具有显著的防治黄龙病的效果，试验组的产量较常规处理最高增加90公斤/亩，增产率高达30%，具有显著的增产效果。
【附图说明】
[0029]图1为本发明实施例3得到的树木发病率的防治效果柱状图；
[0030]图2为本发明实施例3得到的树木产量统计柱状图。
【具体实施方式】
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[0031]本发明提供了一种微生物复合菌，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCC N0.7996。
[0032]本发明提供的微生物复合菌包括枯草芽孢杆菌，本发明对所述枯草芽孢杆菌的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的枯草芽孢杆菌普通市售商品即可。
[0033]在本发明中，所述的微生物复合菌优选为微生物复合菌液。当本发明提供的为微生物复合菌液时，所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的体积比优选为(20?60): (50?80)，更优选的为(30?50) ； (55?75)，最优选为(35?45): (60?70)。所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌的活菌总数优选为50?100亿/ml，更优选的为80?100亿/ml，最优选为85?95亿/ml;所述的微生物复合菌液中枯草芽孢杆菌的活菌总数优选为50?100亿/ml，更优选的为70?95亿/ml，最优选为80?90亿/ml。
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