一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制 剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 柑橘黄龙病是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌引起，该病原菌目前全 世界均无法分离和人工培养，测试具有一定难度，能够侵染包括柑橘属、枳属、金柑属和九 里香等多种芸香科植物，是世界柑橘生产上的毁灭性病害，该病传染快，发病率高，损失惨 重。目前，该病主要分布在亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的近50个国家和地区。我 国是柑橘生产大国，2006年种植面积188. 2万公顷，占世界柑橘种植面积的24%，居世界首 位；总产量1842. 5万吨，占世界总产量的16%，居世界第二位，但19个柑橘生产省（市、自 治区）中已有11个受到该病危害，尤以主产区广东、福建、广西、江西南部、湖南南部、贵州 南部、浙江南部等有柑橘木虱活跃的省（区）为重，严重制约柑橘产业的健康发展。人们已 经取得共识，只有把黄龙病防治好，排除柑橘业发展中的这个最大障碍，保障安全生产，才 能提高效益，使果品的数量和质量能满足消费者的需求，然而目前，对柑橘黄龙病以预防为 主，对于染病植株大部分采取控制木虱或铲除植株方法或喷施有机杀虫剂，劳动强度大，影 响收益且对果实、土壤、环境及人的健康影响较大，因此，研究制备环境友好、毒性小或无毒 的有效控制黄龙病的制剂对柑橘产业至关重要。
【发明内容】
[0003] 为解决上述技术问题，本发明提供一种制备工艺简单、无毒高效的生物蛋白制剂 及其制备方法，采用能够促进植物的生长、提高植物抗病害免疫能力的生物蛋白与包括多 种抗生素和生物活性物质的微生物代谢产物作为有效组分并合理配伍，应用于柑橘上，不 仅对柑橘黄龙病有很好的预防效果，还使病株叶片由黄转绿，对病株有一定的恢复效果，达 到预防与治疗相结合，有效防治柑橘黄龙病的效果。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是，一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋 白制剂，所述制剂的有效成分由NAC蛋白和吸水链霉菌代谢产物复配而成。
[0005] 上述技术方案中，NAC蛋白，即初生多肽复合蛋白，具有提高植物免疫能力的效果， 机理在于NAC蛋白通过增加植物的叶绿素，能够促进植物的生长、代谢，使用NAC蛋白后可 以促进植物产生水杨酸、茉莉酸和乙烯等物质，进而促进植保素、抗病相关蛋白和酚类有机 物等抗菌、抗病毒物质的合成，最终达到提高植物抗多种病害免疫能力的效果，因此还被称 为植物免疫蛋白，本发明人所在的研究小组以此申请并获有发明专利ZL 201010528359. 8， "一种植物免疫蛋白的制备方法"和ZL 201010528067. 4, "NAC蛋白作为植物免疫蛋白的应 用"。链霉菌是一类在自然界尤其是在土壤中广泛存在的微生物，是微生物中产抗生素最多 的种属，目前已发现约有三分之二的天然抗生素都来自源链霉菌，随着天然化学和病理学 研究的深入，链霉菌最引人关注的是它们不仅具有复杂的形态分化过程，而且能够产生多 种包括抗生素和生物活性物质在内的次级代谢产物，这些次级代谢产物在医药、农业和畜 牧业等领域起着巨大的作用。吸水链霉菌是链霉菌属中的一个比较常见种，据不完全统计， 吸水链霉菌能够产生100多种不同的次级代谢产物，主要有酶制剂(蛋白酶、淀粉酶、和纤 维素酶等)、药理活性物质、杀虫杀螨和除草剂、抗菌剂等，在农业和医学等领域起到了重要 作用。
[0006] 将NAC蛋白与吸水链霉菌代谢产物作为制剂的有效成分，一方面促进植物生长、 代谢，及抗菌、抗病毒物质的合成，进而提高植物抗多种病害的免疫能力；另一方面，可以有 效控制已经被病菌感染的植株的病情，两者复配以预防和控制相结合的原则，协同调节植 物的免疫及抗病能力，相比于只提高免疫能力或治标不治本的见病施药，其促进植株健康 的效果更加显著。
[0007] 本发明还提供上述一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂的制备方法，所述方 法包括以下步骤： ① 选取吸水链霉菌菌种经活化、扩大培养及发酵罐培养至菌体浓度达60-80%时停止 发酵，获得吸水链霉菌； ② 将①中所得吸水链霉菌进行细胞破碎，浓缩去除70-90%体积的水分，得浓缩发酵 液； ③ 以质量份数计，称取浓缩发酵液20-40份，NAC蛋白1-1. 5份，载体20-30份，助剂 5-8份，混合均匀，干燥，粉碎，得用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂粉末。
[0008] 本发明的有益效果是：（1)本发明的生物蛋白制剂环境友好、制备工艺简单、无毒 高效；（2)本发明的生物蛋白制剂不仅对柑橘黄龙病有很好的防治效果，还使病株叶片由 黄转绿，对病株有一定的恢复效果。
[0009] 下面结合附图对本发明进行详细说明。
【附图说明】
[0010] 图1是本发明的生物蛋白制剂制备方法的工艺路线图； 图2是洋墩乡芦柑黄龙病植株照片； 图3是图2中的黄龙病植株两次喷施本发明的生物蛋白制剂稀释液后的照片； 图4是云坑镇南丰蜜桔黄龙病植株照片； 图5是图4中的黄龙病植株两次喷施本发明的生物蛋白制剂稀释液后的照片。
【具体实施方式】
[0011] 以下通过具体实施例对本发明作详细说明，其中所使用的实验方法如无特殊说 明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本发明利用 NAC蛋白与吸水链霉菌发酵后的代谢产物作为有效组分并合理配伍制成生物蛋白制剂应用 于柑橘上，其配伍示例如下表1所示。
[0012] 表1用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂有效组分的质量份数组成示例
【主权项】
1. 一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂，其特征在于：所述制剂的有效成分由 NAC蛋白和吸水链霉菌代谢产物复配而成。
2. 根据权利要求1所述的一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂，其特征在于：NAC 蛋白与吸水链霉菌代谢产物的质量比为1:1-50。
3. 根据权利要求1所述的一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂，其特征在于：所 述NAC蛋白由发酵毕赤酵母CGMCC 2. 1838经菌体培养、细胞破碎、沉淀蛋白和喷雾干燥得 至IJ，所述吸水链霉菌代谢产物是由吸水链霉菌ACCC 40473经活化、发酵、细胞破碎、浓缩而 成。
4. 根据权利要求1所述的一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂，其特征在于：所 述制剂的成分还包括载体娃藻土、高岭土或膨润土。
5. 根据权利要求1所述的一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂，其特征在于：所 述制剂的成分还包括助剂十二烧基苯磺酸钠或十二烧基硫酸钠。
6. -种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括 以下步骤： ① 选取吸水链霉菌菌种经活化、扩大培养及发酵罐培养至菌体浓度达60-80%时停止 发酵，获得吸水链霉菌； ② 将①中所得吸水链霉菌进行细胞破碎，浓缩去除70-90%体积的水分，得浓缩发酵 液； ③ 以质量份数计，称取浓缩发酵液20-40份，NAC蛋白1-1. 5份，载体20-30份，助剂 5-8份，混合均匀，干燥，粉碎，得用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂粉末。
7. 根据权利要求6所述一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂的制备方法，其特 征在于，所述步骤①中菌种活化采用固体平板培养，培养基成分为硝酸钾lg、磷酸氢二钾 0. 5g、氯化钠0. 5g、硫酸亚铁0,01g、玉米淀粉20g、硫酸镁0. 5g、琼脂20g、水lL，pH 7. 0,经 121 °C灭菌30min，冷却后采用划线法接种，于28 °C恒温培养48h得活化的菌种；扩大培养采 用摇瓶液体培养，培养基成分为硝酸钾lg、磷酸氢二钾〇. 5g、氯化钠0. 5g、硫酸亚铁0,01g、 玉米淀粉20g、硫酸镁0. 5g、水lL，pH 7. 0,经121°C灭菌30min，灭菌后常温冷却，挑取活化 的菌种接入摇瓶，于恒温摇床上以转速200rpm、28°C培养48h，作为发酵罐种子液；将发酵 罐种子液转至发酵罐进行发酵，接种量为1%，条件为温度28°C、转速200rpm、通气量I : 1，发 酵罐培养基成分比例为硝酸钾lg、磷酸氢二钾〇. 5g、氯化钠0. 5g、硫酸亚铁0,01g、玉米淀 粉20g、硫酸镁0· 5g、蛋白胨10g、豆柏粉5g、水1L，pH为7. 0,经121°C灭菌30min，灭菌后 冷却至28°C。
8. 根据权利要求6所述一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂的制备方法，其特征 在于，所述步骤③中载体为硅藻土、高岭土或膨润土。
9. 根据权利要求6所述一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂的制备方法，其特征 在于，所述步骤③中助剂为十-烧基苯横酸纳或十-烧基硫酸纳。
10. 根据权利要求6所述一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂的制备方法，其特 征在于，所述步骤③所得生物蛋白制剂粉末粒度为80目-200目。
【专利摘要】本发明公开了一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂及其制备方法，属于生物农药技术领域，采用的技术方案是，一种用于防控柑橘黄龙病的生物蛋白制剂，有效成分由NAC蛋白和吸水链霉菌代谢产物复配而成。其制备方法包括以下步骤：①选取吸水链霉菌菌种经活化、扩大培养及发酵罐培养至菌体浓度达60-80%时停止发酵，获得吸水链霉菌；②将①中所得吸水链霉菌进行细胞破碎，浓缩去除70-90%体积的水分，得浓缩发酵液；③以质量份数计，称取浓缩发酵液20-40份，NAC蛋白1-1.5份，载体20-30份，助剂5-8份，混合均匀，干燥，粉碎。本发明的制剂环境友好、制备工艺简单、无毒高效；不仅对柑橘黄龙病有很好的防治效果，还使病株叶片由黄转绿，对病株有一定的恢复效果。
【IPC分类】A01N63-04, A01P21-00, A01N63-02, A01P1-00
【公开号】CN104604946
【申请号】CN201510014206
【发明人】邱德文, 符江华
【申请人】邱德文
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月12日