一种杀稻飞虱金龟子绿僵菌制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种金龟子绿僵菌菌株的新应用，具体涉及一种杀稻飞虱金龟子绿僵 菌制剂及其应用，属于生物农药领域。 技术背景
[0002] 稻飞虱是水稻主要的迁飞性害虫，国内广泛分布于全国主要稻区，严重的威胁着 我国粮食生产。目前，主要施用广谱性化学农药控制稻飞虱，不仅直接影响人体健康和水产 养殖业的安全，而且由于稻飞虱抗药性产生和化学农药大量使用，杀伤稻飞虱天敌，破坏稻 田生态平衡，严重削弱田间自然控制能力，容易导致稻飞虱的再猖獗、难以控制。因此，开发 安全、具有持续控制作用的生物农药替代化学农药对保护水稻种植区环境安全与生物多样 性具有重要意义。
[0003] 昆虫病原真菌是最重要的杀虫微生物类群，具有安全、持续控制和昆虫不易产生 抗药性的优点。绿僵菌（Metarhizium)是最早用于防治害虫的昆虫病原真菌之一，能感染 全世界约有200多种昆虫。利用它来防治害虫的研究与实践已愈百年，但尚未控制稻飞虱 登记的杀稻飞虱绿僵菌制剂，主要原因是缺乏高毒力杀虫真菌菌株和相应制剂。金龟子绿 僵菌CQMa421是一株从自然感染的稻纵卷叶螟僵虫上分离筛选出的一株生产性状好、对稻 纵卷叶螟具有高毒力杀虫真菌，已在中国专利CN102212483中公开，该菌株于2011年02月 25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏编号：CGMCC NO. 4609。该菌株及其制剂对稻飞虱的毒力与防治效果未见报道。
[0004] 可湿性粉剂是一种最基本的农药剂型，可制成悬浊液，进行喷雾。杀虫真菌可湿性 粉剂是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性剂和填充料，通过过筛制成。由于真菌孢子 活性受润湿剂的影响，制剂中往往减少表面活性剂的用量，导致湿润分散效果差，同时产品 贮存期仍较短，很少超过12个月。由于湿润分散特性、贮存稳定性的问题和田间防效受紫 外照射影响大，杀虫真菌可湿性粉剂虽有登记注册，但一直没有大量应用。因此，筛选驯化 高毒力菌株和研制湿润分散特性良好的真菌杀虫剂可湿性粉剂，延长其贮存稳定性，从而 促进真菌杀虫剂在防治稻飞虱中的应用，有利于减少水稻生产中化学农药的用量。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一目的在于提供一种金龟子绿僵菌菌株在杀稻飞虱中的应用。
[0006] 本发明第二目的在于提供一种金龟子绿僵菌制剂，该制剂耐紫外照射、保存期长、 防效好。
[0007] 本发明第三目的在于提供一种增强上述金龟子绿僵菌毒力法，而不影响其产孢、 耐热特性的方法。
[0008] 本发明目的是通过如下技术方案实现的： 金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治稻飞虱的药剂中的应用，该菌株对稻飞虱具有 侵染作用，致死率可达到32. 6%。
[0009] 不同的绿僵菌菌株具有特定的寄主，如公开报道：金龟子绿僵菌FI-1045菌株能 侵染甘鹿路赠 （Anoplophora glabripennis)，金龟子绿僵菌A ESALQ818菌株能侵染埃及 斑蚊（Aedes aegypti)，金龟子绿僵菌EAMb 09/01-Su菌株能侵染地中海果实蝇，金龟子 绿僵菌TORL526菌株能侵染萝卜蚜（Lipaphis erysimi)，金龟子绿僵菌M2菌株能侵染螺 旋粉風（Aleurodicus dispersus Russell),金龟子绿僵菌ICIPE-30菌株能侵染网比亚按 蚊（anopheles gambiae)，金龟子绿僵菌ESC 1菌株能侵染白蚁，金龟子绿僵菌ATCC62176 能侵染甜菜根蛆（sugarbeet root maggot),金龟子绿僵菌M105菌株能侵染幢虫，金龟子 绿僵菌广谱菌株F-52能侵染路赠 （Anoplophora glabripennis)、核桃象甲、光滑足距小蠹 (Xylosandrus germanus)，金龟子绿僵菌广谱菌株549能侵染烟草天蛾（Manduca sexta)、 埃及斑蚊（Aedes aegypti)，罗伯茨绿僵菌广谱菌株ARSEF 23能侵染蝗虫、鳞翅目幼虫、甲 虫等。
[0010] 优选地，上述防治稻飞虱的药剂由绿僵菌CQMa421干孢子粉35-52%、硅藻土 40-50%、纳米硅1-2%、羧甲基纤维素钠3-5%、0-30 2-4%和HEL-40 2-4%组成，均以重量百 分比。
[0011] 一种金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由硅藻土 40-50%、纳米硅1-2%、羧甲基 纤维素钠3-5%、0-30 2-4%、HEL-40 2-4%和绿僵菌CQMa421干孢子粉35-52%组成，均以重 量百分比。
[0012] 上述各组分均为本领域明确的组分，0-30为平平加-30 (脂肪醇与环氧乙烷缩合 物)、HEL-40为氢化蓖麻油与环氧乙烷缩合物，硅藻土、纳米硅(纳米硅为粒径为纳米级的 硅)、羧甲基纤维素钠均为市售产品。绿僵菌CQMa421在中国专利CN102212483中公开、该 菌株于2011年02月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保 藏、保藏编号：CGMCC NO. 4609。
[0013] 上述0-30和HEL-40优选纯度>95%的0-30和HEL-40 ;上述羧甲基纤维素钠 (CMC)优选纯度大于95% ;上述娃藻土优选为白色至浅褐色疏松粉末，纯度大于85%、含水量 小于1% ;上述纳米硅优选为粒径小于50nm ;上述绿僵菌CQMa421干孢子粉为纯孢子粉、含 孢量> 150亿孢子/克、含水量< 5% ;以上均以质量百分含量计。
[0014] 上述金龟子绿僵菌制剂中纳米硅能够附着在真菌孢子表面，，有效阻隔了制剂中 高浓度（2-4wt%) 0-30和HEL-40的不良影响，有效保证了孢子的生物活性。
[0015] 进一步优选地，本发明金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由硅藻土 40-45%、纳 米硅1.3-2%、羧甲基纤维素钠3-5%、〇-30 2-4%、冊1^-40 2-4%和绿僵菌〇01&1421干孢子粉 40-50%组成，均以重量百分比。
[0016] 上述绿僵菌CQMa421干孢子粉优选采用强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉，所 述强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：将金龟子绿僵菌CQMa421接种于 3-4龄稻飞虱幼虫，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的稻飞虱 僵虫用酒精表面消毒，放入28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面 生长出新鲜孢子，如上所述循环接种14一 16次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜 孢子；在无菌条件下，用接种环挑取驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨苄青霉素的 1/4SDA培养基平板上划线；将划线好的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3 -4日后 挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转 入试管斜面培养基中央，28°C恒温培养10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌CQMa421母种， 将CQMa421菌株母种接种在1/4SDA平板上，28°C培养15天，收集成熟分生孢子制得绿僵菌 CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龟子绿僵菌制剂的制备方法，是先将绿僵菌CQMa421干孢子粉和纳米硅在 混合机中混匀，再依次加入硅藻土、羧甲基纤维素钠、0-30 2-4%和HEL-40 2-4%，边加入边 搅拌，直至各组分完全混合均匀制得。
[0018] 一种增强金龟子绿僵菌毒力的方法，其特征在于：将金龟子绿僵菌CQMa421接种 于3-4龄稻飞虱，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的稻飞虱，放 入28 °C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜孢子，如上所 述循环接种14-16次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下，用接 种环挑取驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨苄青霉素的1/4SDA培养基平板上划线， 将划线好的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3-4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌 落，在菌落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28°C恒 温培养10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌CQMa421母种。
[0019] 采用本发明增强毒力的方法驯化后的强毒力金龟子绿僵菌CQMa421菌株，对稻 飞虱致死率可提高66. 1-67. 4%、达到98. 7-1