本发明涉及多肽药物合成技术领域，具体涉及一种醋酸格拉替雷的制备方法。
背景技术：
被称作醋酸格拉替雷（Glatiramer acetate，GA）的、不是都具有相同氨基酸序列的多肽混合物在商标名Copaxone下进行市售，其包括这样的多肽的醋酸盐，所述多肽分别以0.141,0.427,0.095和0.338的平均摩尔级分包含L-谷氨酸，L-丙氨酸，L-络氨酸，L-赖氨酸。Copaxone的平均分子量为4700-11000道尔顿。在化学上，醋酸格拉替雷被称为含有L-丙氨酸，L-赖氨酸，L-络氨酸，L-谷氨酸的聚合物醋酸盐。它的结构式是：
(Glu，Ala，Lys，Tyr)x.XCH3COOH
(C5H9NO4.C3H7NO2.C6H14N2O2.C9H11NO3)x.XC2H4O2
CAS:147245-92-9。
醋酸格拉替雷被批准用于在患有间歇复发型多发性硬化的患者中减少复发的频率。多发性硬化被归类为自体免疫性疾病。还已经公开了将醋酸格拉替雷用于治疗其它自体免疫疾病（R.Aharoni等的公开号US2002/0055466 A1），炎性非自体免疫疾病（V.Wee Yong等的公开号US2005/0014694 A1；和公开于2002年6月20日的美国专利申请号2002/0077278 A1，（Young等）），并且用于促进神经再生和/或防止或抑制继发变性，所述继发变性可以接着原发性神经系统损伤发生（M.Eisenbach-Schwartz等的公开号US2003/0004099 A1；和公开于2002年3月28日的美国专利申请号2002/0037848（Eisenbach-Schwartz））。此外，公开了将醋酸格拉替雷用于治疗免疫介导疾病（例如，授权于2003年2月4日的美国专利号6514938 B1（Gad等）；公布于2001年8月23日的PCT国际公开号WO 00/27417，（Aharoni等））以及与脱髓鞘作用相关的疾病（公布于2001年12月27日的PCT国际公开号WO-1/97846，（Moses等））。
在上述专利中详细描述的制备方法包括使被保护的多肽与在乙酸中的33%氢溴酸反应（1998年9月1日授权于Konfino等的美国专利号5800808）。这种去保护反应将Gama苄基保护基从谷氨酸残基的5-羧酸酯上去除，并且将所述聚合物裂解为更小的多肽以形成三氟乙酰基多肽（1998年9月1日授权于Konfino等的美国专利号5800808）。获得介于7000±2000道尔顿的正确平均分子量的GA所需要的时间取决于反应温度和被保护的醋酸格拉替雷的分子量模式（1998年9月1日授权于Konfino等的美国专利号5800808）。测试反应在不同的时间阶段在每个批次上进行，以确定在给定温度上获得正确分子量模式的三氟乙酰基多肽所需要的反应时间。反应所需要的时间的量的范围，例如介于10和50小时之间。此外，美国专利号5981589,6048898,6054430,6342476,6362161和6620847还涉及用于制备多肽的混合物，包括GA的组合物和方法。
国内外关于格拉替雷制备报道的报道很多，如美国专利3849550、5800808和美国专利公开案第2006/0172942号、第2006/0154862号、第2007/0141663号等。这些专利所涉及到的制备方法是通过L-丙氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸-γ-苄酯、L-ε-三氟乙酰基赖氨酸的N-甲酸酐（NCA）在无水1,4-二氧六环中，使用二乙胺引发进行随机聚合，以产生受保护的多肽。γ-苄基基团的脱保护是通过室温下在溴化氢/乙酸中搅拌受保护的多肽来实现的。同时，该条件也可以切割共聚物。下一步通过哌啶处理可以脱除ε-三氟乙酰基。最后通过透析纯化共聚物，得到醋酸格拉替雷。在此方法中，合成聚合物采用的氨基酸单体为氨基酸NCA，氨基酸NCA的质量会直接影响聚合物的质量（包括聚合物的平均分子量、分子量分布、杂质种类及含量等），从而导致终产品醋酸格拉替雷的质量问题，例如平均分子量偏大或偏小、分子量分布增宽；产品质量的稳定性问题对工业化生产影响较大，不利于大规模安全生产。
由N-羧基酸酐（NCA）制备多肽混合物(如，醋酸格拉替雷）时，N-羧基酸酐的品质，尤其是游离氯离子含量，对于聚合反应和产物的品质影响很大。特别地，如果N-羧基酸酐不能达到应有规格，醋酸格拉替雷的平均分子量和氨基酸组成都会达不到应有的范围:醋酸格拉替雷的氨基酸摩尔比大约是0.392-0.462:0.129-0.153:0.300-0.374:0.086-0.100,平均分子量大约5000-9000道尔顿。
现有技术中，合成聚合物采用的氨基酸NCA只有简单的制备方法，未发现明确的质量标准及合成合格单体的详细方法。
技术实现要素：
针对以上问题，本发明提供了一种醋酸格拉替雷的制备方法，该方法操作简便，合格率高，通过控制氨基酸单体质量可稳定平均分子量的大小，分子量分布，适于工业化，可以有效解决背景技术中的问题。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种醋酸格拉替雷的制备方法，包括如下步骤：
S1、制备四个氨基酸NCA单体，分别为丙氨酸单体、赖氨酸单体、酪氨酸单体和谷氨酸单体；其化学式依次如下：
S2、以四个氨基酸NCA单体为原料，制备白色纸状固体Polymer-1；其化学式为：
S3、以步骤S2得到的制备白色纸状固体Polymer-1，制备白色固体Polymer-2，其化学式为：
S4、制备醋酸格拉替雷，在10L反应瓶中加入80.0g的Polymer-2、4L的水和250mL的哌啶，氩气保护，23-25℃避光搅拌反应24小时，得到浅黄色反应液；反应液过滤，选择3KDa膜包，依次碱液、去离子水清洗膜包；将反应液通过超滤设备浓缩至700mL，加入去离子水700mL稀释，再超滤至反应液体积为700mL，循环超滤至体系的pH值为10～11；将反应浓缩液转移到1L反应瓶内，搅拌下，加入乙酸调节体系的pH值为3.0，搅拌一小时；将反应浓缩液再通过超滤设备，用去离子水洗滤，直至反应液的pH值至5.0-6.0；滤液分装，冻干，得到白色絮状固体即醋酸格拉替雷；其化学式为：
优选的，所述谷氨酸单体的制备方法如下：
S2.1、在2L反应瓶中加入63.6g的L-谷氨酸-γ-苄酯，640mL的无水THF，并抽真空通氩气置换三次，在氩气保护下搅拌加热至55℃；
S2.2、将32.0g三光气固体溶于100mL无水THF中，转移到250mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，10-15分钟滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；
S2.3、反应结束冷至室温，抽滤除去杂质，并在20℃环境下，搅拌下将滤液滴入干燥的2000mL正己烷中，在1小时内滴完，析出大量白色沉淀，然后在0～-5℃下静置析晶3小时；
S2.4、将滤饼后的滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末即其NCA单体。
S2.5、将此单体55.0g溶于干燥的150mL的THF中，搅拌下滴加450mL的干燥正己烷，滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，得高纯度谷氨酸单体。
优选的，所述酪氨酸单体的制备方法如下：
S3.1、在1L反应瓶中加入48.0g的O-苄基-L-酪氨酸，480mL的无水THF，抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；
S3.2、将24.0g的三光气固体溶于70mL的无水THF中，转移到250mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，10-15分钟滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；
S3.3、反应结束冷至室温，抽滤除去杂质；并在20℃环境下，搅拌下将滤液滴入干燥的1500mL正己烷中，在1小时内滴完，析出大量黄白色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；
S3.4、进行抽滤，并将滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得灰白色粉末即其NCA单体；
S3.5、将40.0g的此单体溶于干燥的120mLTHF中，搅拌下滴加400mL的干燥正己烷，滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，得高纯度酪氨酸单体。
优选的，所述赖氨酸单体的制备方法如下：
S4.1、在2L反应瓶中加入150.0g的N-6-三氟乙酰-L-赖氨酸以及1500mL的无水THF，抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；
S4.2、将78.0g的三光气固体溶于140mL的无水THF中，转移到250mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；
S4.3、反应结束冷至室温，抽滤除去杂质，滤液在40℃以下浓缩至1L体积；并在20℃环境下，搅拌下将滤液滴入4000mL的干燥正己烷中，在1小时内滴完，析出大量白色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；
S4.4、经过抽滤，将滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末即其NCA单体；
S4.5、将150.0g此单体溶于500mL干燥的THF中，搅拌下滴加1500mL的干燥正己烷，滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，即高纯度赖氨酸单体。
优选的，所述丙氨酸单体的制备方法如下：
S5.1、在5L反应瓶中加入70.0g的L-丙氨酸以及3500mL的无水THF，抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；
S5.2、将113.0g的三光气固体溶于300mL的无水THF中，转移到500mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；
S5.3、反应结束冷至室温，抽滤除去杂质，滤液在40℃以下浓缩至500mL体积；并在20℃环境下，搅拌下将滤液滴入2000mL干燥的正己烷中，1小时滴完，析出大量淡粉色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；
S5.4、经过抽滤，并将滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末即其NCA单体；
S5.5、将60.0g的此单体溶于200mL干燥的THF中，搅拌下滴加1000mL干燥的正己烷，滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，即高纯度NCA单体。
优选的，所述白色纸状固体Polymer-1的制备方法如下：
S6.1、精确称量四个氨基酸NCA单体，分别为丙氨酸单体40.0g；赖氨酸单体64.0g；酪氨酸单体20.6g；谷氨酸单体28.6g；置入3L的四口瓶中；抽真空氩气置换三次；
S6.2、在氩气氛下，加入1600mL干燥的二氧六环，真空氩气置换三次；
S6.3、在22～24℃下搅拌至固体全部溶解；一次性加入经干燥重蒸的二乙基胺的二氧六环溶液，25℃搅拌24小时；
S6.4、将反应液在搅拌下慢慢滴加至12L的去离子水中，3小时滴完，抽滤，滤饼用纯水洗涤；
S6.5、将滤饼捣碎后转入烧瓶中，加入12L纯水，剧烈搅拌1小时，抽滤，再重复打浆一次；抽滤得白色纸状固体，真空60℃干燥6～8小时至失重<0.1g，得到白色纸状固体Polymer-1。
优选的，所述白色纸状固体Polymer-2的制备方法如下：
S7.1、在2L反应瓶中加入5.0g的苯酚、110.0g的POLYMER-1，加入900mL的HBr-乙酸溶液，氩气保护，23-25℃避光搅拌反应16小时，得到深红色反应液；
S7.2、反应液用3倍量正己烷萃取三次，将反应液在搅拌下滴加到8L的去离子水中，三小时滴完，继续搅拌一小时；
S7.3、经过抽滤，将滤饼用纯水洗涤；得到浅白色固体，真空40℃干燥，得到白色固体Polymer-2。
本发明的有益效果：
本发明的方案操作简便，合格率高，通过控制氨基酸单体质量可稳定平均分子量的大小，分子量分布，适于工业化。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实例一：
操作步骤：
在2L反应瓶中加入L-谷氨酸-γ-苄酯（63.6g，0.27mol），无水THF（640mL），抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；将三光气（32.0g，0.11mol）固体溶于无水THF（100mL）中，转移到250mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，10-15分钟滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；反应结束冷至室温，抽滤除去杂质；20℃下，搅拌下将滤液滴入干燥的正己烷（2000mL）中，1小时滴完，析出大量白色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；抽滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末即其NCA单体约（57.0g）。将此单体（55.0g）溶于干燥的THF（150mL）中，搅拌下滴加干燥正己烷（450mL），滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，得高纯度谷氨酸单体（50.0g）。
实例二：
操作步骤：
在1L反应瓶中加入O-苄基-L-酪氨酸（48.0g，0.18mol），无水THF（480mL），抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；将三光气（24.0g，0.08mol）固体溶于无水THF（70mL）中，转移到250mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，10-15分钟滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；反应结束冷至室温，抽滤除去杂质；20℃下，搅拌下将滤液滴入干燥的正己烷（1500mL）中，1小时滴完，析出大量黄白色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；抽滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得灰白色粉末即其NCA单体约（42.0g）。将此单体（40.0g）溶于干燥的THF（120mL）中，搅拌下滴加干燥正己烷（400mL），滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，得高纯度酪氨酸单体（37.0g）。
实例三：
操作步骤：
在2L反应瓶中加入N-6-三氟乙酰-L-赖氨酸（150.0g，0.62mol），无水THF（1500mL），抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；将三光气（78.0g，0.27mol）固体溶于无水THF（140mL）中，转移到250mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；反应结束冷至室温，抽滤除去杂质，滤液在40℃以下浓缩至1L体积；20℃下，搅拌下将滤液滴入干燥的正己烷（4000mL）中，1小时滴完，析出大量白色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；抽滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末即其NCA单体约（152.0g）。将此单体（150.0g）溶于干燥的THF（500mL）中，搅拌下滴加干燥正己烷（1500mL），滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，即高纯度赖氨酸单体（130.0g）。
实例四：
操作步骤：
在5L反应瓶中加入L-丙氨酸（70.0g，0.80mol），无水THF（3500mL），抽真空通氩气置换三次，氩气保护下搅拌加热至55℃；将三光气（113.0g，0.38mol）固体溶于无水THF（300mL）中，转移到500mL的恒压滴液漏斗中，抽真空通氩气置换三次，滴加到反应液内，继续搅拌反应4小时；反应结束冷至室温，抽滤除去杂质，滤液在40℃以下浓缩至500mL体积；20℃下，搅拌下将滤液滴入干燥的正己烷（2000mL）中，1小时滴完，析出大量淡粉色沉淀，0～-5℃下静置析晶3小时；抽滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末即其NCA单体约（66.0g）。将此单体（60.0g）溶于干燥的THF（200mL）中，搅拌下滴加干燥正己烷（1000mL），滴完冷至0-5℃，搅拌三小时，过滤，滤饼用少量干燥正己烷洗涤，然后25℃真空干燥得白色粉末，即高纯度丙氨酸单体（52.0g）。
实例五：
操作步骤：
精确称量四个氨基酸NCA单体（丙氨酸单体40.0g，0.35mol；赖氨酸单体64.0g，0.48mol；酪氨酸单体20.6g，0.07mol；谷氨酸单体28.6g，0.11mol；），置入3L的四口瓶中；抽真空氩气置换三次；在氩气氛下，加入干燥的二氧六环（1600mL），真空氩气置换三次。22～24℃下搅拌至固体全部溶解；一次性加入经干燥重蒸的二乙基胺的二氧六环溶液（1mL二乙胺+20mL二氧六环），25℃搅拌24小时；将反应液在搅拌下慢慢滴加至去离子水（12L）中，3小时滴完，抽滤，滤饼用纯水洗涤；滤饼捣碎后转入烧瓶中，加入12L纯水，剧烈搅拌1小时，抽滤，再重复打浆一次；抽滤得白色纸状固体，真空60℃干燥6～8小时至失重<0.1g，得到白色纸状固体Polymer-1（119.0g）。
实例六：
操作步骤：
在2L反应瓶中加入苯酚（5.0g）、POLYMER-1（110.0g），加入HBr-乙酸溶液（900mL），氩气保护，23-25℃避光搅拌反应16小时，得到深红色反应液；反应液用3倍量正己烷萃取三次，将反应液在搅拌下滴加到去离子水（8L）中，三小时滴完，继续搅拌一小时，抽滤，滤饼用纯水洗涤；得到浅白色固体，真空40℃干燥，得到白色固体Polymer-2（87.0g）。
实例七：
操作步骤：
在10L反应瓶中加入Polymer-2（80.0g）、水（4L）和哌啶（250mL），氩气保护，23-25℃避光搅拌反应24小时，得到浅黄色反应液；反应液过滤，选择3KDa膜包，依次碱液、去离子水清洗膜包；将反应液通过超滤设备浓缩至700mL，加入去离子水700mL稀释，再超滤至反应液体积为700mL，循环超滤至体系的pH值为10～11；将反应浓缩液转移到1L反应瓶内，搅拌下，加入乙酸调节体系的pH值为3.0，搅拌一小时；将反应浓缩液再通过超滤设备，用去离子水洗滤，直至反应液的pH值至5.0-6.0；滤液分装，冻干，得到白色絮状固体即醋酸格拉替雷（51.0g）。
本发明的方案操作简便，合格率高，通过控制氨基酸单体质量可稳定平均分子量的大小，分子量分布，适于工业化。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。