专利名称：多肽及其盐的制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及制备多肽的方法。更具体地，本发明涉及制备乙酸格拉替雷(glatiramer acetate)的方法。
背景技术：
名称为“乙酸格拉替雷”(曾用名共聚物-I)的药物在化学上为L-谷氨酸(L-glutamic acid)、L-丙氨酸、L-赖氨酸和L-酪氨酸的无规聚合混合物的乙酸盐。其具有下式(I)的结构和化学式。(Glu, Ala, Lys, Tyr) x · XCH3COOH(C5H9NO4 · C3H7NO2 · C6H14N2O2 · C9H11NO3) x · XC2H4O2 式⑴乙酸格拉替雷为人工多肽的乙酸盐，包含四种天然氨基酸L_谷氨酸、L-丙氨酸、L-赖氨酸和L-酪氨酸，它们的平均摩尔分数分别为O. 141,0. 427,0. 095和O. 338。乙酸格拉替雷的平均分子量为5，000-9, 000道尔顿。乙酸格拉替雷是Teva以COPAXONE. 销售的可注射药物制品的活性成分，此制品可降低患有复发缓解型多发性硬化症(RRMS)的患者的复发频率。美国专利5，800，808公开了制备共聚物_1的方法，包括使受保护的共聚物_1与氢溴酸反应以形成三氟乙酰基共聚物-1，随后将此三氟乙酰基共聚物-I与哌啶水溶液反应以形成共聚物-1，并纯化所得到的共聚物-I。美国专利7，495，072公开了制备乙酸格拉替雷的方法，包括共聚酪氨酸、丙氨酸、Y -苄基谷氨酸酯和N-三氟乙酰基赖氨酸的N-羧酸酐以形成受保护的多肽，将此受保护的多肽在乙酸溶液中用预处理的氢溴酸去保护以形成三氟乙酰基乙酸格拉替雷，随后将此三氟乙酰基乙酸格拉替雷与哌啶水溶液反应以形成乙酸格拉替雷的溶液，并纯化此乙酸格拉替雷。美国专利7，294，719B2中讨论了氨基酸N-羧酸酐的制备，包括将氨基酸、其衍生物如酯和它们的盐与羰基化试剂如碳酰氯反应。美国专利7，049，399公开了制备多肽I (包括在多肽I中无规排列的L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-赖氨酸和L-酪氨酸)或其药学上可接受盐的方法，其在单一步骤中通过将受保护的共聚物6或其盐去保护以提供多肽I或其药学上可接受的盐。美国专利申请2006/0172942A1公开了制备多肽的乙酸盐的混合物的方法，每种多肽由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和赖氨酸组成。美国专利申请2008/0021200A1公开了制备乙酸格拉替雷的方法，其通过聚合
L-酪氨酸的N-羧酸酐、L-丙氨酸的N-羧酸酐、受保护的L-谷氨酸的N-羧酸酐和N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸的N-羧酸酐以形成受保护的格拉替雷，随后用酸处理此受保护的格拉替雷以形成格拉替雷。国际专利公布WO 2009/016643A1公开了制备药物中使用的共聚物_1部分(乙酸格拉替雷，由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和赖氨酸以约O. 141,0. 427,0. 095和O. 338的摩尔比组成的多肽的混合物)的方法。仍需要以经济且环保的方式来制备包含高纯度乙酸格拉替雷的多肽的改进方法。
发明内容
一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和 (d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤 (a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸(L-glutamate)和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；
(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷； (b)使所述受保护的格拉替雷与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸的酸反应；
(c)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸的酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受 的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢碘酸的酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。—方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢氯酸的酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢氯酸的酸反应；(C)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢氯酸的酸反应；
(c)将步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢溴酸的溶液反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。 一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢溴酸的溶液反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与在乙酸中的氢溴酸的溶液反应；(c)将步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷用试剂处理；和(d)使步骤(C)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。
—方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽； (b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢碘酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷与碱反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤 (a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢氯酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与哌啶反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢氯酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与哌啶反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢氯酸的酸反应；(c)使步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷与哌啶反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。—方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含硫酸的酸反应；和(c)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与哌啶反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含硫酸的酸反应；和
(c)使步骤(b)中获得的受保护的多肽与哌啶反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；(b)使所述受保护的格拉替雷与包含硫酸的酸反应；和(C)使步骤(b)中获得的受保护的格拉替雷与哌啶反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤 (a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；和(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；和(b)使所述受保护的多肽与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的溶液反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；和(b)使所述受保护的格拉替雷与在乙酸中的氢碘酸和次磷酸的混合物反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。—方面，本发明提供特征制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供特征制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；和(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤
(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；和(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢碘酸和次磷酸的酸反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；和(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸的酸反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按 所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合选自L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；和(b)使所述受保护的多肽与包含氢碘酸的酸反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。一方面，本发明提供一种制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，其包括单独或按所述顺序的一个或多个以下步骤(a)聚合由L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸组成的受保护氨基酸的混合物以形成受保护的格拉替雷；和(b)使所述受保护的格拉替雷与包含氢碘酸的酸反应，以形成格拉替雷或其药学上可接受的盐。
具体实施例方式一方面，本发明提供一种制备多肽或其药学上可接受盐的方法，其包括聚合受保护的氨基酸以形成受保护的多肽的步骤。聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽可在一种或多种适合的引发剂存在下进行。可在聚合反应中使用的适合的引发剂包括但不限于烷基胺，例如二甲胺、二乙胺、二正丙胺、二异丙胺、三乙胺、N-乙基甲胺、二正丁胺、二异丁胺、二仲丁胺、二叔丁胺、二戍胺、二正辛胺、二(2-乙基己基)胺、二异壬胺、二烯丙基胺、N-甲基苯胺、二苯胺、己胺、苯乙基胺等。其它可用的引发剂包括氮杂环丙烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、吲哚、哌啶、嘌呤、甲醇钠、叔丁醇钾、氢化钠、氢化钾、2，2，6，6-四甲基哌啶、二环己胺、二环己基i^一烷(DCT)、二异丙基氨基锂、叔丁基锂等；离子交换树脂，包括与离子例如钠、钾、锂、钙、镁、取代或未取代的铵结合的树脂。也可使用任意两种或更多种引发剂的组合。聚合反应中可使用的引发剂的量可小于约5%、小于约4%、小于约3%、小于约2%、小于约1%、小于约O. 5%、小于约O. 25%、小于约O. 1%、小于约O. 05%、小于约O. 01%和任何其它适合的量，以受保护的氨基酸的混合物的重量计。聚合受保护的氨基酸以形成受保护的多肽可在溶剂中进行。可使用的适合的溶剂包括但不限于醚，例如，乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚、二丁基醚、四氢呋喃、二甲基呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、茴香醚、1，4-二恶烷等；酯，例如，甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯等；脂族或脂环族烃，例如，己烷、庚烷、戊烷、环己烷、甲基环己烷等；硝基甲烷滷代烃，例如，二氯甲烷、氯仿、1，1,2-三氯乙烷、1，2-二氯乙烯等；芳族烃，例如，甲苯、二甲苯、氯苯、四氢化萘等；腈类，例如，乙腈、丙腈等；极性非质子溶剂，例如，N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡啶、二甲亚砜、环丁砜、甲酰胺、乙酰胺、丙酰胺等；包括两个或更多的任何混合物。适合聚合反应的温度可小于约55° C、小于约45° C、小于约35° C、小于约25。C、小于约15° C、小于约10° C或任何其它适合的温度。受保护的多肽的分离可通过将反应混合物与水混合来完成，这导致受保护的多肽的沉淀。用于分离受保护的多肽的适合的温度可小于约50° C、小于约40° C、小于约30° C、小于约20° C、小于约10° C或任何其它适合的温度。适合分离的时间可小于约5小时、小于约3小时、小于约2小时、小于约I小时、小于约45分钟或任何更长时间。本领域技术人员容易确定完整分离所需的具体温度和时间，其也与诸如溶液或浆料的例如浓度和温度等参数有关。混合内容物的搅拌或其它替代方法例如摇动、搅拌等也适用于分离。 分离的受保护的多肽可通过包括倾析、离心、重力分离、吸滤或回收固体所用的任何其它技术来回收。回收的受保护的多肽可选地干燥。干燥可在盘式干燥器、真空炉、空气烘箱、流化床干燥器、旋转闪蒸干燥器、闪蒸干燥器等中进行。干燥可在大气压或更低压力下，在小于约55° C、小于约45° C、小于约35° C、小于约25° C或任何其它适合的温度下进行。例如，干燥时间可从约I小时至约10小时或更长之间变化。本发明的方面包括将受保护的多肽与酸反应的步骤。可用在受保护的多肽与一种或多种适合的酸反应中的适合的酸包括但不限于乙酸、丙酸、丁酸、盐酸、溴化氢、氟化氢、碘化氢(氢碘酸)、甲磺酸、三氟甲磺酸、亚磷酸、三氟乙酸、硫酸、磷酸和连二磷酸等；或它们的混合物。受保护多肽与一种或多种酸反应中所用的酸的量可小于约50倍、小于约40倍、小于约30倍、小于约20倍、小于约10倍、小于约5倍，以受保护多肽的体积或重量计。适合地，所述酸可具有不小于约30重量％的浓度。对于不同浓度的酸，本领域技术人员容易计算受保护多肽与一种或多种适合的酸反应中所用的酸的量。在多个实施方式中，所用的酸可将保护基团从受保护的多肽上裂解，以形成多肽或形成其药学上可接受的盐。受保护多肽与一种或多种适合的酸反应中所用的适合温度可小于约60° C、小于约50。C、小于约40。C、小于约30。C、小于约25。C、小于约15。C、小于约10。C、小于约5° C、小于约0° C或任何其它适合温度。受保护多肽与一种或多种适合的酸反应中所用的适合溶剂包括但不限于醚，例如，乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚、二丁基醚、四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、茴香醚、1，4-二恶烷等；酯，例如，甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯等；脂族或脂环族烃，例如，己烷、庚烷、戊烷、环己烷、甲基环己烷等；硝基甲烷；卤代烃，例如，二氯甲烷、氯仿、1，1，2_三氯乙烷、1，2_ 二氯乙烯等；芳族烃，例如，甲苯、二甲苯、氯苯、四氢化萘等；腈类，例如，乙腈、丙腈等；极性非质子溶剂，例如，N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡啶、二甲亚砜、环丁砜、甲酰胺、乙酰胺、丙酰胺等；乙酸等；和两个或更多的任何混合物。受保护多肽或受保护格拉替雷的分离可通过以下方法完成，其包括去除溶剂、冷却、浓缩反应物质，将其与反溶剂(anti-solvent)混合等。在多个实施方式中，受保护多肽的分离可通过将反应混合物加入至水中来完成，这导致受保护多肽或受保护格拉替雷的沉淀。用于分离的适合的温度可小于约50° C、小于约40° C、小于约30° C、小于约20° C、小于约10° C或任何其它适合的温度。适合分离的时间可小于约5小时、小于约3小时、小于约2小时、小于约I小时、小于约45分钟。本领域技术人员容易确定完整分离所需的具体温度和时间，其也与诸如溶液或浆料的例如浓度和温度等参数有关。混合内容物的搅拌或其它替代方法例如摇动、搅拌等也适用于分离。分离的受保护的多肽或受保护的格拉替雷可通过包括倾析、离心、重力分离、吸滤或回收固体所用的任何其它技术来回收。
回收的固体可选地干燥。干燥可在盘式干燥器、真空炉、空气烘箱、流化床干燥器、旋转闪蒸干燥器、闪蒸干燥器等中进行。干燥可在大气压或更低压力下，在小于约55° C、小于约45° C、小于约35° C、小于约25° C或任何其它适合的温度下进行。在多个实施方式中，干燥时间可从约I小时至约10小时或更长之间变化。本发明的多个方面包括在使用受保护多肽或受保护格拉替雷与碱反应形成多肽或格拉替雷之前，将通过受保护多肽与酸反应获得的受保护多肽或受保护格拉替雷用试剂处理的步骤。将受保护多肽或受保护格拉替雷用试剂处理可通过包括清洗、浆化、冷却(quenching)等方法完成。可用于受保护多肽与酸反应中的酸或酸组合中的分子物质含量对多肽或格拉替雷中官能化多肽的形成很重要。例如，可用于受保护多肽与酸反应中的酸或酸组合中的分子卤素或游离卤素物质的含量对多肽或格拉替雷中卤化多肽的形成很重要。已发现，包含分子物质(源自可用于制备其的酸或酸组合)的受保护多肽或受保护格拉替雷会参与同多肽的一种或多种官能团的官能团转化，同时受保护多肽或受保护格拉替雷与碱反应以形成多肽或格拉替雷，且导致官能化多肽或官能化格拉替雷在所得多肽或格拉替雷中以污染物存在。例如，包含与表面结合的分子卤素或游离卤素物质的受保护多肽或受保护格拉替雷可与多肽的一个或多个官能团相互作用，同时受保护多肽或受保护格拉替雷与碱反应以形成多肽或格拉替雷，且导致卤化的多肽或卤化的格拉替雷在所得多肽或格拉替雷中以污染物存在。这可通过在使用受保护多肽或受保护格拉替雷与碱反应形成基本不含分子物质的受保护多肽或受保护格拉替雷之前，将通过受保护多肽与酸反应获得的受保护多肽或受保护格拉替雷用试剂处理来避免。例如，在使用受保护多肽或受保护格拉替雷与碱反应之前，将通过受保护多肽与酸反应获得的受保护多肽或受保护格拉替雷用试剂处理，这可导致形成基本不含分子卤素或游离卤素物质的受保护多肽或受保护格拉替雷。
可用于此处理以降低分子杂质含量的适合的试剂包括但不限于碱金属或碱土金属硫代硫酸盐，例如，硫代硫酸钠等；碱金属硫酸氢盐，例如，硫酸氢钠等；碱金属的偏亚硫酸氢盐，例如，偏亚硫酸氢钠等；抗坏血酸；活性碳纤维；可溶性有机离子交换树脂的溶液，例如Amberlite LA-2等；银盐；碳酸氢钠等。Amberlite LA_2是液体的高度支化的仲胺，重均分子量约350-400，结合力约2. 2-2. 3meq/mL, CAS编号11128_96_4。其溶于有机溶剂但不溶于水性介质。通过用溶剂处理受保护的多肽或受保护的格拉替雷获得的受保护的多肽或受保护的格拉替雷可进一步用溶剂清洗。可使用的适合的溶剂包括但不限于水、脂族或脂环脂族烃，例如，己烷、庚烷、戊烷、环己烷、甲基环己烷等；醚类，例如，乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚、二丁基醚、四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、2-甲氧基乙 醇、2-乙氧基乙醇、苯甲醚、I, 4- 二恶烷等；酯，例如，甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯等；和两种或多种的任意混合物。在多个实施方式中，根据本发明所述方法制备的受保护的多肽或受保护的格拉替雷具有以下峰值平均分子量约2，000道尔顿至约40，000道尔顿、或约4000道尔顿至约18，000道尔顿、或约4，000道尔顿至约13，000道尔顿、或约5，000道尔顿至约9，000道尔顿，其使用例如凝胶渗透色谱(GPC)等技术测定。本发明的多个方面包括将受保护的多肽或受保护的格拉替雷与碱反应的步骤。
可用在受保护的多肽或受保护的格拉替雷与碱反应以形成多肽或受保护的格拉替雷中的碱或其药学上可接受的盐包括但不限于有机碱，例如，三乙胺、三丁胺、N-甲基吗啉、N，N- 二异丙基乙胺、N-甲基吡咯烷、哌啶、含水哌啶、吡咯烷、吡啶、4-(N，N- 二甲基氨基)卩比唳、吗啉、咪唑、2-甲基咪唑、4-甲基咪唑、氨的甲醇溶液(methanolic ammonia)等；无机碱，包括碱金属氢氧化物，例如，氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铯；碱土金属氢氧化物，例如，氢氧化钡、氢氧化镁、氢氧化钙等；碱金属碳酸盐，例如，碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、碳酸铯等；碱土金属碳酸盐，例如，碳酸镁、碳酸钙、碳酸钡等；碱金属碳酸氢盐，例如，碳酸氢锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾等；以及任何两种或多种的混合物。受保护的多肽或受保护的格拉替雷与碱反应形成多肽或格拉替雷或它们药学上可接受的盐的反应可在溶剂中进行。可用在受保护多肽与碱反应以形成多肽或格拉替雷中的适合的溶剂包括但不限于冰；醚，例如，乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚、二丁基醚、四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烧、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、茴香醚、1，4-二恶烧等；酯，例如，甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯等；脂族或脂环族烃，例如，己烷、庚烷、戊烷、环己烷、甲基环己烷等；硝基甲烷；卤代烃，例如，二氯甲烷、氯仿、1，1，2_三氯乙烷、1，2_ 二氯乙烯等；芳族烃，例如，甲苯、二甲苯、氯苯、四氢化萘等；腈类，例如，乙腈、丙腈等；极性非质子溶剂，例如，N，N-二甲基甲酰胺、N, N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、卩比唆、二甲亚砜、环丁砜、甲酰胺、乙酰胺、丙酰胺等；乙酸等；和两个或更多的任何混合物。可用在受保护多肽与碱反应以形成多肽或格拉替雷中的适合的温度小于约60° C、小于约55° C、小于约50° C、小于约45° C、小于约40° C、小于约35° C、小于约30° C、小于约25。C、小于约15。C、小于约10。C、小于约5° C、小于约0° C或任何其
它适合温度。
一方面，可纯化根据本发明方法制备的多肽或格拉替雷。纯化可使用包括现有技术已知方法在内的任何技术进行。在多个实施方式中，多肽或格拉替雷的纯化可使用诸如透析或超滤等方法。在多个实施方式中，多肽或格拉替雷用针对水或诸如乙酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂或柠檬酸盐缓冲剂等缓冲剂的渗滤处理，其使用分子量截留膜(例如，lKDa.2KDa.3KDa和30KDa)，以逐步或恒定操作模式进行。在多个实施方式中，渗滤溶液可使用弱酸例如乙酸水溶液酸化，并针对水透析。例如，乙酸的浓度可小于约I体积％或小于约O. 5体积％。可将通过超滤膜浓缩获得的最终透析溶液冻干以形成基本上纯的多肽或基本上纯的格拉替雷，或它们的药学上可接受的盐。除非有其它定义，本文所用术语“基本上纯的”是指基本不含一种或多种分子量大于约40KDa的多肽片段或基本上不含分子量小于约2KDa的多肽片段的多肽、格拉替雷或它 们的药学上可接受的盐。除非有其它定义，本文所用术语“基本上不含”是指多肽、格拉替雷或它们的药学上可接受的盐包含约5重量％、小于约3重量％、小于约2重量％、小于约I重量％或小于约O. 5重量％的分子量大于约40KDa或更高的一种或多种多肽对应物质，或分子量约2KDa或更低的多肽片段。在多个实施方式中，根据本发明所述方法制备的多肽或其药学上可接受的盐可具有以下峰值平均分子量约2，000道尔顿至约40，000道尔顿、或约4，000道尔顿至约18，000道尔顿、或约4，000道尔顿至约13，000道尔顿、或约5，000道尔顿至约9，000道尔顿，其使用例如凝胶渗透色谱(GPC)等技术测定。在多个实施方式中，根据本发明所述方法制备的格拉替雷或其药学上可接受的盐可具有以下峰值平均分子量约5，000道尔顿至约9，000道尔顿，其使用例如凝胶渗透色谱(GPC)等技术测定。在多个实施方式中，根据本发明所述方法制备的多肽或其药学上可接受的盐的至少75%摩尔分数在约2，000道尔顿至约20，000道尔顿分子量内。在多个实施方式中，根据本发明所述方法制备的乙酸格拉替雷的至少75%的摩尔分数在约2，000道尔顿至约20，000道尔顿的分子量内。用于确定多肽或其药学上可接受的盐的分子量的凝胶渗透色谱利用Suppose 12(10X300-310mm, Hum)或等效柱。其它参数如表I所示。表I
流速O. 5mL/分钟(恒溶剂)
检测器2 IOnm
柱温小于30° C
浓度4mg/mL
移动相缓冲液=Na2HPO4和NaCl溶液
权利要求
1.用于制备多肽或其药学上可接受盐的方法，包括 (a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽； (b)使所述受保护的多肽与酸反应； (c)可选地，将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理以减少分子杂质的含量；和 (d)使步骤(b)或(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。
2.权利要求I的方法，其中所述氨基酸为L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸。
3.权利要求I的方法，其中所述多肽为格拉替雷。
4.权利要求1-3之一的方法，其中所述受保护的氨基酸为氨基酸N-羧酸酐。
5.权利要求1-3之一的方法，其中所述酸包括以下酸中的一种或多种乙酸、丙酸、丁酸、盐酸、溴化氢、氟化氢、碘化氢、甲磺酸、三氟甲磺酸、亚磷酸、三氟乙酸、硫酸、磷酸和连二磷酸。
6.权利要求1-3之一的方法，其中所述酸包括以下酸中的两种或多种乙酸、丙酸、丁酸、盐酸、溴化氢、氟化氢、碘化氢、甲磺酸、三氟甲磺酸、亚磷酸、三氟乙酸、硫酸、磷酸和连二磷酸。
7.权利要求1-3之一的方法，其中所述酸包括以下酸中的两种或多种乙酸、盐酸、溴化氢、碘化氢和连二磷酸。
8.权利要求1-3之一的方法，其中所述酸包括以下酸中的至少一种盐酸、溴化氢、碘化氢、硫酸和连二磷酸。
9.权利要求1-3之一的方法，其中所述试剂包括以下物质中的一种或多种硫代硫酸钠、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、活化碳纤维、离子交换树脂、银盐和碳酸氢钠。
10.权利要求1-3之一的方法，其中所述碱为有机碱。
11.权利要求1-3之一的方法，其中所述碱为无机碱。
12.权利要求1-3之一的方法，其中所述碱包括哌啶。
13.用于制备格拉替雷或其药学上可接受盐的方法，包括 (a)聚合受保护氨基酸L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸的混合物以形成受保护的格拉替雷； (b)使所述受保护的格拉替雷与酸反应； (c)可选地，将步骤(b)中获得的受保护的多肽用试剂处理以减少分子杂质的含量；和 (d)使步骤(b)或(C)中获得的受保护的多肽与碱反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。
14.权利要求13的方法，其中所述受保护的氨基酸为氨基酸N-羧酸酐。
15.权利要求13的方法，其中所述酸包括以下酸中的一种或多种乙酸、丙酸、丁酸、盐酸、溴化氢、氟化氢、碘化氢、甲磺酸、三氟甲磺酸、亚磷酸、三氟乙酸、硫酸、磷酸和连二磷酸。
16.权利要求13的方法，其中所述酸包括以下酸中的两种或多种乙酸、丙酸、丁酸、盐酸、溴化氢、氟化氢、碘化氢、甲磺酸、三氟甲磺酸、亚磷酸、三氟乙酸、硫酸、磷酸和连二磷酸。
17.权利要求13的方法，其中所述酸包括以下酸中的两种或多种乙酸、盐酸、溴化氢、碘化氢和连二磷酸。
18.权利要求13的方法，其中所述酸包括以下酸中的至少一种盐酸、溴化氢、碘化氢、硫酸和连二磷酸。
19.权利要求13的方法，其中所述试剂包括以下物质中的一种或多种硫代硫酸钠、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、活化碳纤维、离子交换树脂、银盐和碳酸氢钠。
20.权利要求13的方法，其中所述碱为有机碱。
21.权利要求13的方法，其中所述碱为无机碱。
22.权利要求13的方法，其中所述碱包括哌啶。
23.用于制备多肽或其药学上可接受盐的方法，包括 (a)聚合受保护氨基酸的混合物以形成受保护的多肽；和 (b)使所述受保护的多肽与酸反应，以形成多肽或其药学上可接受的盐。
24.权利要求23的方法，其中所述受保护的氨基酸为氨基酸N-羧酸酐。
25.权利要求23的方法，其中所述氨基酸为L-酪氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸。
26.权利要求23的方法，其中所述多肽为格拉替雷。
27.权利要求23的方法，其中所述酸包括以下酸中的一种或多种乙酸、碘化氢、亚磷酸、磷酸和连二磷酸。
28.权利要求23的方法，其中所述酸包括以下酸中的两种或多种乙酸、亚磷酸、磷酸和连二磷酸。
29.权利要求23的方法，其中所述酸包括以下酸中的两种或多种乙酸、碘化氢和连二磷酸。
30.权利要求23的方法，其中所述酸包括以下酸中的至少一种碘化氢。
31.权利要求13-30之一的方法，进一步包括纯化多肽或其药学上可接受盐。
32.权利要求13-30之一的方法，进一步包括纯化格拉替雷或其药学上可接受盐。
全文摘要
本发明涉及制备多肽的方法。本发明还提供了制备乙酸格拉替雷的方法。
文档编号A61K31/19GK102844325SQ201180019491
公开日2012年12月26日 申请日期2011年4月27日 优先权日2010年4月27日
发明者R·R·克维斯, S·K·斯瑞瓦桑, B·戴维, S·K·甘达瓦迪, K·拉玛萨米, Y·K·K·科马拉沃卢, K·C·瓦拉纳西, R·博查, P·R·康澈, L·R·卡塔, R·夏玛, S·奈卡卢普 申请人:雷迪博士实验室有限公司, 雷迪博士实验室公司