一种环维黄杨星D盐酸盐的制备方法与流程

本发明属于医药化工领域，具体涉及一种高纯度高收率环维黄杨星D盐酸盐的制备方法。
背景技术：
：环维黄杨星D(CyclovirobuxineD)是从黄杨科植物小叶黄杨中提取的有效单体生物碱，是治疗新血管疾病的药物或作为新药开发的前体可广泛用于医疗领域。研究表明，采用传统萃取和重结晶等方法得到的环维黄杨星D中，还含有与其结构极为相似的环黄杨碱D(Cyclobuxine)、环常绿黄杨碱C(Cyclovirobxine)和环原绿黄杨碱C(CycloprotobuxineC)等杂质成分，总杂质含量在7～8％左右，并且这些杂质用常规手段很难除去，其纯度远远无法满足环维黄杨星D作为原料药制备单体药物的要求。科研工作者们对分离纯化方法作了深入研究并加以改进，但是仍然不能有效除去上述杂质。现有技术下，有多种检测环维黄杨星D的纯度的方法，各种方法检测的纯度存在差异。如徐新军等研究采用柱前荧光衍生化RP-HPLC测定环维黄杨星D的含量，检测结果发现环维黄杨星D非水滴定法含量均在98％以上，而HPLC含量只有87％左右(徐新军等，柱前荧光衍生化RP-HPLC测定环维黄杨星D的含量，药学通报，2002年第5期，359-361页)。此外，徐新军采用液-质联用(HPLC-MS)对采用重结晶法和用柱层析法制备的环维黄杨星D进行了检测后认为“重结晶难于提高环维黄杨星D的含量，而柱色谱法则为降低有关物质，提高环维黄杨星D含量的有效方法”(徐新军等，HPLC/MA法与柱前衍生化HPLC/UV法测定环维黄杨星D有关物质的比较，中国药科大学学报，2002，33(5)：408-411)。如CN1594355A公开一种环维黄杨星D一甲醇结晶体，两次结晶后经干燥去除甲醇后，得到环维黄杨星D，经TLC检测，其纯度可达98.5％以上。然而由于受检测方法本身所限，其产品实际上的HPLC纯度仅为95％。并没有达到真正意义上的98.5％的纯度。虽然现有技术下公开了使用柱层析能够提高环维黄杨星D的纯度，然而柱层析的方法繁琐，收率低，不适用工业化生产。现有技术下缺少简便的高纯度高收率环维黄杨星D及其盐酸盐的制备方法。技术实现要素：本发明提供了一种种环维黄杨星D盐酸盐的制备方法，将环维黄杨星D粗品，使用甲醇、乙醇、氯仿中的一种或几种进行重结晶；将重结晶产物溶于有机溶剂，滴入1M稀盐酸，室温反应成盐，将析出的盐品过滤干燥后甲醇与乙醇的混合溶剂，加热回流，溶清后缓慢自然降温析晶，得到环维黄杨星D盐酸盐。本发明针对现有技术不足，将环维黄杨星D粗品重结晶后，经成盐及再次重结晶，得到高纯度高收率的环维黄杨星D盐酸盐。本发明具体技术方案如下：一种环维黄杨星D盐酸盐的制备方法，包括以下步骤：(1)取环维黄杨星D粗品，使用甲醇、乙醇、氯仿中的一种或几种进行重结晶；(2)将重结晶产物溶于有机溶剂，滴入稀盐酸，室温反应成盐，将析出的盐品过滤、干燥；(3)将步骤(2)得到的环维黄杨星D成盐品加入甲醇与乙醇的混合溶剂，加热回流，溶清后缓慢自然降温析晶，得到环维黄杨星D盐酸盐。优选的，所述步骤(1)使用甲醇进行重结晶。甲醇体积为环维黄杨星D重量的18～25倍，更优选20倍。重结晶次数为1-3次，母液回收套用。优选的，所述步骤(2)有机溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷中的一种或几种，更优选二氯甲烷，体积为环维黄杨星D重量的20-40倍，更优选40倍。优选的，所述步骤(2)优选1M稀盐酸，稀盐酸摩尔量为环维黄杨星D的2倍。优选的，所述步骤(3)甲醇与乙醇的体积比为1∶1～4，更优选1∶1。本发明一个优选的具体方案为：以环维黄杨星D市售品为例，作为待纯化样品，其液相纯度约为55％。1)取环维黄杨星D市售品，加入20倍体积(W/V)甲醇，加热搅拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加热，缓慢自然降温，搅拌析晶。参照此方法反复结晶3次。2)取环维黄杨星D3次结晶品，加入40倍体积(W/V)二氯甲烷，室温搅拌溶清，滴入1M稀盐酸，稀盐酸摩尔量为环维黄杨星D的2倍。室温反应成盐，反应结束后，可直接将析出成盐产品滤出，40℃减压干燥后得到白色成盐产品。3)取环维黄杨星D成盐品，加入20倍体积(W/V)甲醇乙醇(1∶1)混合，65℃加热搅拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加热，缓慢自然降温，搅拌析晶。与现有技术相比，本发明方法具有以下优点：1)纯度高。本发明方法纯化后的环维黄杨星D盐酸盐HPLC纯度大于99％；2)成本低。无需特殊仪器、溶剂，所需溶剂、仪器均为实验室常用耗材，使用操作方便，价格低廉；3)操作简便。环维黄杨星D结晶、成盐、蒸馏、干燥等操作均比较简单，没有繁琐操作和特殊操作；4)易于放大生产。本发明操作简单，具有较好的重现性，能够实现工业化大生产；5)收率高。本发明收率高，成盐反应收率在90％以上；另一方面，本发明提供了环维黄杨星D含量的高效液相检测方法：色谱条件：色谱柱：月旭C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相A：0.01M庚烷磺酸钠与0.01MKH2PO4等量混合溶液(含0.2％三乙胺，用磷酸调pH至3.50)，流动相B：乙腈，流速：1ml/min，波长：206nm，柱温：30℃，流动相A-B(77∶23)，采集时间：60min，等度测样。附图说明图1为环维黄杨星D市售品HPLC检测结果。图2为现有技术精制环维黄杨星D二次结晶品HPLC检测结果。图3为本发明技术方案精制环维黄杨星D盐酸盐HPLC检测结果。具体实施方式在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，该实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下面结合具体实施例对本发明进一步说明。实施例1以环维黄杨星D市售品(南京世州医药科技有限公司)作为原料，采用CN1594355A公开的方法进行精制，制得环维黄杨星D二次结晶品，分别采用TLC色谱系统以及HPLC测定纯度。TLC色谱系统：薄层板：硅胶G薄层板；展开剂：氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；显色剂；稀碘化必钾试剂；点样量；100～250μg)。测定结果显示，采用CN1594355A公开的方法制得的环维黄杨星D二次结晶品的TLC纯度为96％。高效液相系统：色谱柱：月旭C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相A：0.01M庚烷磺酸钠与0.01MKH2PO4等量混合溶液(含0.2％三乙胺，用磷酸调pH至3.50)，流动相B：乙腈，流速：1ml/min，波长：206nm，柱温：30℃，流动相A-B(77∶23)，采集时间：60min，等度测样。测定结果显示，环维黄杨星D市售品的HPLC液相纯度约为55％(结果如图1和表1所示)。表1峰保留时间面积面积％高度分离度拖尾因子17.13431670.293270.00.0027.46674970.687301.10.00318.92139207635.731447523.81.05423.134139371.275096.61.18524.64597610.893342.30.77625.37896060.884261.31.29727.52959811054.51128922.71.40830.535342333.128392.60.97934.157288722.636032.91.11总计1097262100.0031136采用CN1594355A公开的方法制得的环维黄杨星D二次结晶品的HPLC纯度为94％左右(结果如图2，表2所示)，不能达到98.5％以上。表2峰保留时间面积面积％高度分离度拖尾因子18.69166180.962520.01.92218.75053910.7829218.70.88322.738140832.055227.41.11426.62464863694.29164024.42.59528.429131821.925492.11.02总计687909100.0018018实施例2取环维黄杨星D市售品，加入20倍体积(W/V)甲醇，加热搅拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加热，缓慢自然降温，搅拌析晶。参照此方法反复结晶4次，得到四次结晶产物。母液反复利用，四次结晶后，收率达70％左右。四次结晶结果如下：表3.环维黄杨星D市售品在甲醇中结晶结果环黄杨碱D(％)最大单杂(％)总杂(％)纯度(％)环维黄杨星D未纯化35.733.1245.4954.51一次结晶产物4.612.138.7391.27二次结晶产物0.782.055.7194.29三次结晶产物未检出1.692.9197.01四次结晶产物未检出2.112.5697.44如表3所示，表中依次为环维黄杨星D粗品以及粗品1至4次结晶的数据。第1次结晶效果尤为显著。环维黄杨星D纯度从54.51％上升至91.27％。然而，其后3次结晶效果不甚显著，4次结晶后环维黄杨星D纯度最高为97.44％，尤其第3次和第4次结晶，其结果几乎不变。结果证明用反复重结晶无法显著提高产物纯度。若要制备得到99.5％以上的环维黄杨星D，还需进一步增加精制手段。实施例3以实施例2环维黄杨星D三次结晶品为原料，作为待成盐样品，其液相纯度约为97％。取环维黄杨星D三次结晶品30g平均分成三分，分别溶于40倍体积(W/V)水、40倍体积(W/V)甲醇和40倍体积(W/V)二氯甲烷，室温下进行成盐反应。而后室温滴入2eq1M稀盐酸搅拌成盐。用水做溶剂成盐后室温下无法析出晶体或析出晶体较少，将温度降至4℃左右析晶；用甲醇做溶剂成盐后，产物和甲醇呈膏状，很难过滤处理；用二氯甲烷做溶剂，成盐反应结束后，产物直接析出，过滤极为方便。三种溶剂成盐结果如下：表4.环维黄杨星D市结晶品在不同溶剂中成盐结果编号环黄杨碱D(％)最大单杂(％)总杂(％)纯度(％)收率(％)环维黄杨星D三次结晶品未检出1.692.9197.01/水中成盐未检出1.221.7898.2255甲醇中成盐未检出1.291.8698.1480二氯甲烷中成盐未检出1.892.2497.7695如表4所示，在以上三种溶剂中进行成盐反应所得环维黄杨星D盐酸盐纯度相当，差别很小。水中成盐所得产品纯度最高为98.504，但收率仅为55％。甲醇中成盐后得到盐酸盐纯度为97.862％，收率为80％。二氯甲烷中成盐后得到盐酸盐纯度为97.5624％，收率为95％。从纯度、收率以及操作便利方面综合考虑，选用二氯甲烷作为最优成盐溶剂。实施例4以实施例3得到的环维黄杨星D二氯甲烷中制得的盐酸盐作为待精制样品，其液相纯度约为97％。取环维黄杨星D盐酸盐30g，平均分成三份，分别用10倍体积水(W/V)、10倍体积甲醇(W/V)，20倍体积甲醇乙醇(1∶1)混合液(W/V)进行结晶。搅拌加热至取环维黄杨星D盐酸盐溶清，溶清后停止加热，自然降温至室温析晶，过滤干燥后即得环维黄杨星D盐酸盐精制品。三种溶剂结晶结果如下：表5.环维黄杨星D市结晶品在不同溶剂中精制结果表6峰保留时间面积面积％高度127.6520.7680.5531.678229.873138.12299.44759.894总计138.890100.0061.572如表5所示，环维黄杨星D盐酸盐在水、甲醇以及甲醇乙醇混合液(1∶1)中结晶后所得精制品纯度相当，分别为99.52％、99.35％、99.45％。三种溶剂结晶后，收率却相差甚大，分别为35％、60％、85％。综合纯度和收率因素，更优选甲醇乙醇(1∶1)混合液为环维黄杨星D盐酸盐精制溶剂(HPLC液相检测结果如图3，表6所示)。当前第1页1 2 3