这项工作得到了National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)的部分支持，合同号为HHSN272200900036C (与Corixa Corporation d/b/a GlaxoSmithKline Biologicals SA签署)。
发明背景
本发明涉及咪唑并喹啉类和氧代腺嘌呤类的磷酸脂化（phospholipidation）方法。更具体地说，本发明涉及用于咪唑并喹啉类和氧代腺嘌呤类的磷酸脂化（phospholipidation）的高产率和可缩放步骤，其避免了分离不稳定的亚磷酰胺中间体的需要。该方法可用于toll样受体7(TLR7)-活性和toll样受体8(TLR8)-活性咪唑并喹啉类和氧代腺嘌呤类的磷酸脂化（phospholipidation）。
Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)是检测大类微生物侵入物常见的病原体特异性成分的先天性免疫细胞中超过10种结构相关受体的家族。这些受体的激活导致炎症性细胞因子/趋化因子和I型干扰素α和β(IFNα/β)的表达，其对于对传染性疾病和癌症的有效的先天性和适应性免疫反应而言是重要的。
在TLR7和TLR8活化的情况下，已经识别了富含天然尿苷和/或鸟苷的病毒ssRNA配体的几个不同类的小分子模拟物(Heil et al. Eur. J. Immunol. 2003, 33, 2987-2997, Hemmi et al. Nat. Immunol. 2002, 3, 196-200, Lee et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2006, 103, 1828-1833)，包括氧代腺嘌呤类似物(Hirota et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 5419; WO 2007/034882 PCT/JP2006/318758, Dainippon Sumitomo Pharma Co. Ltd./AstraZeneca Aktiebolag)和1H-咪唑并[4,5-c]喹啉类(Gerster et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 3481-3491) 诸如咪喹莫特，其被批准用于局部治疗某些皮肤疾病并且已知主要激活TLR7，以及结构上相关的咪唑并喹啉瑞喹莫德，其有效激活TLR7和TLR8二者(Miller et al. Drug News Perspect. 2008, 21, 69-87)。
由于TLR7和TLR8在树突细胞(DC)和其它抗原呈递细胞中广泛表达，因此TLR7 /8激动剂及其衍生物可以特别用作疫苗佐剂。然而，咪喹莫特和瑞喹莫德以及其它小分子TLR7/8激动剂的口服和局部制剂可能表现出严重的副作用，并且基于安全性的考虑已经暂停了某些TLR7/8激动剂的临床试验(Horscroft et al. J. Antimicrob. Chemother.2012, 67, 789-801, Strominger, N. L.; Brady, R.; Gullikson, G.; Carpenter, D. O. Brain Res. Bull. 2001, 55, 445-451)。另外，由于TLR7和TLR8位于内体/溶酶体区室中(Lee et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2003, 100, 6646-6651)，细胞摄取是TLR7/8配体细胞活化的先决条件。因此，对增加TLR7/8配体渗入DC和其它免疫细胞以及改善毒性效应的策略具有相当的兴趣。包括TLR7/8激动剂的核苷药物的脂质缀合(Chan et al. Bioconjugate Chem. 2009, 20, 1194-1200)是已知的促进胞吞作用、提高口服生物利用度和减少毒副作用的一种策略。这种核脂也可以掺入到脂质体和其它可生物降解的纳米颗粒中以帮助保护药物免于降解并且通过储库效应进一步降低毒性(Rosemeyer, H. Chemistry & Biodiversity 2005, 2, 977-1063)。
发明概述
本发明涉及用于制备包含与磷酸基共价连接的咪唑并喹啉或氧代腺嘌呤分子的式(I)和式(II)的化合物的方法。
式(I)
其中
R1选自H、C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基C1-6烷基、C3-6环烷基C1-6烷基氨基、C3-6环烷基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基氨基和C1-6烷氧基C1-6烷氧基;其中所述C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基C1-6烷基、C3-6环烷基C1-6烷基氨基、C3-6环烷基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基氨基或C1-6烷氧基C1-6烷氧基是支链或非支链的并任选地在末端被羟基、氨基、巯基、肼基、酰肼基（hydrazido）、叠氮基、乙炔基、羧基或马来酰亚氨基取代;
Z选自C2-C6 烷基和C2-C6烯基，其中所述C2-C6 烷基或C2-C6烯基是未被取代的或在末端被―(O―C2-C6烷基)l-6―取代;
A是
其中
R2是H或直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24 烷基，或直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24酰基;
R3是直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24 烷基或直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24 酰基;
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
式II:
其中
R4选自C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基C1-6烷基、C3-6环烷基C1-6烷基氨基、C3-6环烷基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基氨基和C1-6烷氧基C1-6烷氧基;其中所述C1-6烷基、C1-6烷基氨基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基C1-6烷基、C3-6环烷基C1-6烷基氨基、C3-6环烷基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基氨基或C1-6烷氧基C1-6烷氧基是支链或非支链的并任选地在末端被羟基、氨基、巯基、肼基、酰肼基（hydrazido）、叠氮基、乙炔基、羧基或马来酰亚氨基取代;
D是0、1、2、3、4、5或6;
Het是四元、五元或六元饱和氮杂环，其中
X、Y= CH或N，并且X和Y中的至少一个是氮原子;
m是0、1、2、3、4、5或6;
A是
其中
R2是H或直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24 烷基，或直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24酰基;
R3是直链的或支链的、任选不饱和的C4-C24 烷基或直链的或支链的、任选不饱和的 C4-C24 酰基;
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
作为第一方面，本发明提供了用于制备式(I)的化合物的方法。该方法包括以下步骤:
a) 使式(III)的化合物
与式(V)的化合物反应
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
以制备式(VI)的化合物
其中
R是
所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
b) 使式(VI)的化合物与式(VII)的化合物反应
以制备式(IX)的化合物
其中
R是
R’是
并且所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
c) 氧化式(IX)的化合物并除去羟基保护基以得到式(I)的化合物。
另一方面，本发明提供了另一种用于制备式(I)的化合物的方法。该方法包括如下步骤:
a) 使式(IV)的化合物
与式(V)的化合物反应
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;和
所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
以制备式(VI)”的化合物;
其中
R”是
所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
b) 使式(VI)”的化合物与式(VII)的化合物反应
以制备式(IX)”的化合物;
其中
R”是
R’是
所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
c) 氧化式(IX)”的化合物并除去羟基保护基以得到式(I)的化合物。
在第三方面，本发明提供了用于制备式(II)的化合物的方法。该方法包括以下步骤:
a) 使式(III)的化合物
与式(V)的化合物反应
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
所有其它变量如上面关于式(II)所定义;
以制备式(VI)的化合物
其中
R是
所有其它变量如上面关于式(II)所定义;
b) 使式(VI)的化合物与式(VIII)的化合物反应
以制备式(IX)*的化合物
其中
R是
R*是
所有其它变量如上面关于式(II)所定义;
c) 氧化式(IX)*的化合物并除去羟基保护基以得到式(II)的化合物。
在第四方面，本发明提供了另一种用于制备式(II)的化合物的方法。该方法包括如下步骤:
a) 使式(IV)的化合物
与式(V)的化合物反应
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
所有其它变量如上面关于式(II)所定义;
以制备式(VI)”的化合物;
其中
R”是
所有其它变量如上面关于式(II)所定义;
b) 使式(VI)”的化合物与式(VIII)的化合物反应
以制备式(IX)*”的化合物;
其中
R”是
R*是
所有其它变量如上面关于式(II)所定义;
c) 氧化式(IX)*”的化合物并除去羟基保护基以得到式(II)的化合物。
在下面的具体实施方案、实施例和权利要求的描述中描述了本发明的其它方面。
优选实施方案的详述
如本文所用，“式(I)的化合物” 是指式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。“式(II)的化合物” 是指式(II)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
如本文所用，“本发明的化合物”是指式(I)或式(II)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
如本文所用，术语“任选地”是指随后描述的事件可以发生或可以不发生，并且包括发生的事件和不发生的事件两者。
某些式(I)或式(II)的化合物可以以立体异构形式存在(例如它们可以含有一个或多个不对称碳原子)。各种立体异构体(对映异构体和非对映异构体)及其混合物包括在本发明的范围内。本发明还包括由式(I)或式(II)表示的化合物的各个异构体作为与它们的其中一个或多个手性中心反转的异构体的混合物。
本发明的某些化合物可以以互变异构形式存在。应该理解，本发明包括本发明的化合物的所有互变异构体，无论是作为单独的互变异构体还是作为其混合物，无论是否在本发明式中明确指出。
本领域技术人员将容易地确定本发明合适的药学上可接受的盐，并且将包括例如由无机碱如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸锂、碳酸氢锂、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、以及叔丁醇钾和有机碱如二乙胺、赖氨酸、精氨酸、胆碱氢氧化物、胆碱碳酸氢盐、三(羟甲基)氨基甲烷(氨丁三醇)、三乙醇胺、二乙醇胺和乙醇胺制备的盐。
当用于药物时，式(I)或式(II)的化合物的盐应该是药学上可接受的，但药学上不可接受的盐可方便地用于制备相应的游离碱或其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“溶剂合物”是指含有式(I)或式(II)的化合物或其药学上可接受的盐以及化学计量或非化学计量量的溶剂的晶体形式。举例来说，溶剂包括水(因此产生水合物)、甲醇、乙醇或乙酸。在下文中，对式(I)或式(II)的化合物的提及是指该化合物的任何物理形式，除非指定了其特定形式、盐或溶剂合物。
用于制备式(I)或式(II)的化合物的药学上可接受的盐的方法是本领域中常规的。参见例如Burger’s Medicinal Chemistry And Drug Discovery 第5版, 第1卷:Principles And Practice。
式(I)或式(II)的本发明的化合物可以是结晶或无定形形式。此外，本发明的化合物的一些结晶形式可以以多晶型物形式存在，所有这些都包括在本发明的范围内。本发明的化合物的最热力学稳定的一种或多种多晶型形式是特别有意义的。
使用多种常规分析技术可以表征和区分本发明的化合物的多晶型形式，所述技术包括但不限于X射线粉末衍射(XRPD)、红外光谱(IR)、拉曼光谱、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)和固态核磁共振(ssNMR)。
从前述内容将理解，包括在本发明范围内的是式(I)和式(II)的化合物及其盐的溶剂合物、异构体和多晶型形式。
式(I)或式(II)的化合物可以使用下述方法制备。
方案1
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
R是
R’是
所有其它变量如上面关于式(I)所定义。
一般来说，如方案1所示的制备式(I)化合物的方法包括以下步骤：
a) 使式(III)的化合物与式(V)的化合物反应
以制备式(VI)的化合物;
b) 使式(VI)的化合物与式(VII)的化合物反应
以制备式(IX)的化合物;和
c) 氧化式(IX)的化合物并除去羟基保护基以得到式(I)的化合物。
方案2
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
R”是
R’是
;和
所有其它变量如上面关于式(I)所定义;
一般来说，如方案2所示制备式(I)的化合物的方法包括以下步骤:
a) 使式(IV)的化合物与式(V)的化合物反应
以制备式(VI)”的化合物;
b) 使式(VI)”的化合物与式(VII)的化合物反应
以制备式(IX)”的化合物;和
c) 氧化式(IX)”的化合物并除去羟基保护基以得到式(I)的化合物。
方案3
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
R是
R*是
所有其它变量如上面关于式(II)所定义。
一般来说，如方案3所示制备式(II)的化合物的方法包括以下步骤:
a) 使式(III)的化合物与式(V)的化合物反应
以制备式(VI)的化合物;和
b) 使式(VI)的化合物与式(VIII)的化合物反应
以制备式(IX)*的化合物;和
c) 氧化式(IX)*的化合物并除去羟基保护基以得到式(II)的化合物。
方案4
其中
PG是适用于羟基保护的保护基，包括但不限于氰乙基、甲基、乙基、苄基和烯丙基;
R”是
R*是
所有其它变量如上面关于式(II)所定义。
一般来说，如方案4所示制备式(II)的化合物的方法包括以下步骤:
a) 使式(IV)的化合物与式(V)的化合物反应
以制备式(VI)”的化合物;
b) 使式(VI)”的化合物与式(VIII)的化合物反应
以制备式(IX)*”的化合物;
c) 氧化式(IX)*”的化合物并除去羟基保护基以得到式(II)的化合物。
更具体地说，式(VI)或(VI)”的化合物可以通过在0℃至环境温度在非质子溶剂诸如但不限于二氯甲烷中在合适的亚磷酰胺偶联试剂诸如1H-四唑、取代的四唑、二氰基咪唑、咪唑三氟甲磺酸盐或本领域技术人员已知的任何此类偶联试剂的存在下使式(III)或(IV)的化合物与式(V)的化合物反应制备。
式(VI)或(VI)”的化合物(其可以通过硅胶上的色谱法纯化，但优选不分离或纯化)可以在形成后在0℃至环境温度在非质子溶剂诸如但不限于二氯甲烷中在合适的亚磷酰胺偶联试剂诸如1H-四唑、取代的四唑、二氰基咪唑、咪唑三氟甲磺酸盐或本领域技术人员已知的任何此类偶联试剂的存在下直接与式(VII)或(VIII)的化合物反应以制备式(IX)、(IX)”、(IX)*和(IX)*\"的化合物。
通过使用磷氧化剂诸如但不限于间氯过苯甲酸、过氧化氢、碘/吡啶/水或叔丁基过氧化物氧化，随后使用本领域技术人员已知的技术除去保护基将式(IX)、(IX)”、(IX)*或(IX)*\"的化合物转化为式(I)或式(II)的化合物。
在一个实施方案中，如下制备式(I)或式(II)的化合物:
(i) 将1H-四唑(2.1当量)分数次加入至式(III)或式(IV)的化合物(2.0当量)的二氯甲烷溶液中，随后加入式(V)的亚磷酰二胺试剂(2.1当量)并在最后加入四唑后在室温反应30 min至1 h，
(ii) 将反应混合物冷却至0 ℃，
(iii) 加入式(VII)或(VIII)的化合物(1.0当量)和咪唑三氟甲磺酸盐(1.5当量)，并在0 ℃反应至多30 min，然后在室温反应1 小时至24 小时，和
(iv) 随后用用叔丁基过氧化物(1.5当量)氧化式(IX)、(IX)”、(IX)*或(IX)*\"的化合物(纯化或未纯化)，随后使保护基团去保护。
在一个实施方案中，用~ 30 min(例如，4部分; 例如，每10分钟加入一次)将1H-四唑加入至式(III)或式(IV)的化合物中。如在该实施方案中所使用的，~30 min 是指+或– 10 分钟、20 – 40 分钟。
在另一个实施方案中，加入式(V)的化合物并与式(III)的化合物或式(IV)的化合物反应，形成式(VI)或(VI)”的化合物，向其中加入式(VII)或式(VIII)的化合物，然后加入咪唑三氟甲磺酸盐。
在另一个实施方案中，将含有式(VI)或(VI)”的化合物的反应混合物冷却至0 ℃，然后加入式(VII)或式(VIII)的化合物。
在一个实施方案中，保护基是氰乙基。
在另一个实施方案中，用三乙胺(TEA)进行去保护。
在一个优选实施方案中，保护基是氰乙基并且用三乙胺(TEA)去保护。
在一个实施方案中，与式(III)或式(IV)的化合物和式(V)的化合物一起使用的偶联剂为2.1当量，式(III)或式(IV)的化合物为2.0当量，式(V)的化合物为2.1当量，式(VII)或式(VIII)的化合物为1.0当量且式(IX)、(IX)”、(IX)*或(IX)*\"的化合物的氧化剂为1.5当量。
在一个实施方案中，将咪唑三氟甲磺酸盐与式(VII)的化合物或式(VIII)的化合物一起加入到通过式(V)的化合物与式(III)的化合物或式(IV)的化合物的反应产生的相同的反应混合物中。
以下实施例仅用于说明，并不意图以任何方式限制本发明的范围，本发明由权利要求限定。
在这些实施例中，以下术语具有指定的含义：
eq = 当量;
ES TOF-MS = 飞行质谱的电喷雾时间;
h = 小时;
H = 氢原子;
Hz = 赫兹; MHz = 兆赫;
min = 分钟;
M = 摩尔;
NMR = 核磁共振;
rt = 室温;
TEA = 三乙胺;
v = 体积。
实施例1: 用于磷酸三酯 IX的合成的一般步骤
在室温向III或IV (2.0当量)于无水二氯甲烷(0.4 M)中的溶液中加入2-氰乙基 N,N,N',N'-四异丙基亚磷酰二胺V (2.1当量)。然后经20 分钟分四次加入1H-四唑(2.1当量)并将反应混合物在室温下搅拌1 h。1 h后，形成所得亚磷酰胺VI 或VI” 。将反应混合物冷却至0 ℃并加入咪唑并喹啉VII或氧代腺嘌呤 VIII (1.0当量)和咪唑三氟甲磺酸盐(1.5当量)。使反应混合物升温至室温。反应通常在室温下1小时后完成。所得亚磷酸酯 IX、IX”、IX*或IX*”可以在此阶段纯化或随后在不分离的情况下被氧化。
实施例2:IX的氧化的一般步骤
通过向反应混合物中加入叔丁基过氧化氢(1.5当量)并在室温下搅拌30 min将磷酸三酯IX、IX”、IX*或IX*” (纯化或未纯化的)在二氯甲烷中的溶液氧化。氧化完成后，将反应混合物真空浓缩并通过硅胶色谱法纯化。将所得被保护的磷酸三酯溶于乙腈(0.06 M)中。加入三乙胺(乙腈:TEA 1:0.35 v:v)并将反应混合物在室温下搅拌6-18 h。一旦脱保护完成，将反应混合物用Büchner过滤器过滤并将分离的固体用乙腈冲洗并在高真空下干燥。反应混合物也可以通过硅胶色谱纯化。
实施例3: 4-氨基-l-[2-(1,2-二-O-棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉, 化合物(Ia)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=0, R2=R3=n-C15H31CO
通过使二-O-棕榈酰基甘油IIIa与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以93%收率制备磷酸三酯IXa。按照实施例2中所述的步骤将IXa氧化和去保护，以71%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Ia。
1H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 8.23 (bs, IH), 7.39 (t, IH), 7.22 (bs, IH), 6.93 (bs, IH), 5.25 (m, IH), 4.70 (bs, 2H), 4.60 (bs, 2H), 4.42 (dd, IH), 4.19 (dd, IH), 4.04 (t, 2H), 3.06 (bs, 2H), 2.32 (m, 4H), 1.96 (m, 2H) 1.59 (m, 6H), 1.26 (m, 48H), 1.07 (t, 3H), 0.88 (m, 6H); 正性ES TOF-MS [M+H]+的计算值 915.6340; 实测值915.6309。
实施例4: 4-氨基-l-[2-(1,2-二-O-棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉, 化合物(Ib)的合成
R1=CH2OEt, Z=(CH2)2, n=0, R2=R3=n-C15H31CO
通过使二-O-棕榈酰基甘油IIIa与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIb和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以99%收率制备磷酸三酯IXb 。按照实施例2中所述的步骤将 IXb氧化和去保护，以73%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Ib。
1H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 8.05 (bs, 1H), 7.29 (t, 1H), 7.09 (bs, 1H), 6.78 (bs, 1H), 5.11 (m, 1H), 4.80 (bs, 4H), 4.60 (bs, 2H), 4.28 (dd, 1H), 4.07 (dd, 1H), 3.90 (t, 2H), 3.54 (dd, 2H), 2.18 (m, 4H), 1.59 (m, 4H), 1.16 (m, 51H), 0.76 (m, 6H)。正性ES TOF-MS [M+H]+的计算值917.6132; 实测值917.6162。
实施例5: 4-氨基-1-[2-(1,2-二-O-六癸基-sn-甘油-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉, 化合物(Ic)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=0, R2=R3=n-C15H31
通过使二-O-六癸基甘油IIIc与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以97%收率制备磷酸三酯IXc。按照实施例2中所述的步骤将IXc氧化和去保护，以 71%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Ic。
1H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 8.23 (bs, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.18 (bs, 1H), 6.96 (bs, 1H), 4.70 (bs, 2H), 4.60 (bs, 2H), 3.95 (t, 2H), 3.50 (mm, 7H), 4.04 (t, 2H), 3.03 (bs, 2H), 1.94 (m 2H), 1.56 (m, 6H), 1.26(m, 52H), 1.06 (t, 3H), 0.88 (t, 6H)。正性ES TOF-MS [M+H]+的计算值885.6598。实测值885.8304。
实施例6: 4-氨基-1-[2-(1,2-二-O-月硅酰基-sn-甘油-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉, 化合物(Id)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=0, R2=R3=n-C11H23CO
通过使二-O-月硅酰基甘油IIId与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以79%收率制备磷酸三酯IXd。按照实施例2中所述的步骤将IXd氧化和去保护，以77%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Id。
1H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 8.09 (bs, 1H), 7.30 (t, 1H), 7.09 (bs, 1H), 6.81 (bs, 1H), 5.12-5.17 (m, 1H), 4.22-4.76 (m, 4H), 4.31 (dd, 1H), 4.11 (dd, 1H), 3.93 (t, 2H、1H), 2.93 (bs, 2H), 2.20 (dd, 4H), 1.84 (m, 2H), 1.42-1.49 (m, 6H), 1.15 (m, 34H), 0.96 (t, 3H), 0.78 (t, 6H)。负性ES TOF-MS [M-H]-计算值 801.4931; 实测值801.4741。
实施例7: 4-氨基-1-[2-(1,2-二-O-肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉, 化合物(Ie)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=0, R2=R3=n-C13H27CO
通过使二-O-肉豆蔻酰基甘油IIIe与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以62%收率制备磷酸三酯IXe。按照实施例2中所述的步骤将IXe氧化和去保护，以89%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Ie。
1H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 8.17 (bs, 1H), 7.39 (bs, 1H), 7.17 (bs, 1H), 6.91 (bs, 1H), 5.24 (m, 1H), 4.80 (bs, 2H), 4.60 (bs, 2H), 4.41 (dd, 1H), 4.19 (dd, 1H), 4.03 (t, 2H), 2.99 (bs, 2H), 2.30 (m, 4H), 1.94 (bs, 2H), 1.57 (m, 6H), 1.25 (m, 40H), 1.05 (t, 3H), 0.88 (m, 6H)。正性ES TOF-MS [M+H]+的计算值857.5558; 实测值857.5565。
实施例8: 4-氨基-1-[2-(1,2-二-O-油酰基-sn-甘油-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉, 化合物(If)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=0, R2=R3 =(CH2)7CH=CH(CH2)7CH3
通过使二-O-油酰基甘油IIIf与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以92%收率制备磷酸三酯IXf。按照实施例2中所述的步骤将IXf氧化和去保护，以75%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉If。
1H NMR (400 MHz, CDCl3/CD3OD) δ8.18 (bs, 1H), 7.39 (bs, 1H), 7.18 (bs, 1H), 6.92 (bs, 1H), 5.33 (m, 4H), 5.25 (m, 1H), 4.80 (bs, 2H), 4.60 (bs, 2H), 4.41 (dd, J = 3.2, 12.0 Hz, 1H), 4.19 (dd, J = 6.4, 12.0 Hz, 1H), 4.03 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.01 (bs, 2H), 2.30 (m, 4H), 1.98 (m, 4H), 1.57 (m, 6H), 1.27 (m, 40H), 1.05 (t, J = 7.2, 3H), 0.88 (m, 6H); 负性ES TOF-MS [M-H]-的计算值 965.6497，实测值965.6498。
实施例9: 4-氨基-1-[2-O-(乙基胆固醇-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4.5-c]喹啉, 化合物(Ig)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=1
通过使乙基胆固醇IVa与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以99%收率制备磷酸三酯IX”a。按照实施例2中所述的步骤将IX”a氧化和去保护，以44%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Ig。
1H NMR (400 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 10.17 (bs, 1H), 9.90 (bs, 0.5H), 8.40 (bs,0.5H), 8.08 (d, 1H), 7.45 (bs, 1H), 7.29 (t, 1H), 7.02 (t, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.11 (bs, 1H), 5.30 (bs, 2H), 4.95-4.40 (m, 4H), 4.02 (d, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.3-2.8 (m, 3H), 2.36 (d, 1H), 2.18 (t, 1H), 2.0-1.8 (m, 8H), 1.4-0.8 (m, 39H), 0.68 (s, 3H)。正性ES TOF-MS [M+H]+的计算值 777.5084; 实测值777.6999。
实施例10: 4-氨基-1-[2-O-(丁基胆固醇-3-磷酸（phospho）)乙基]-2-正丁基-1H-咪唑并[4.5-c]喹啉, 化合物(Ih)的合成
R1=n-Bu, Z=(CH2)2, n=1
通过使丁基胆固醇IVb与V反应，随后加入咪唑并喹啉VIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以96%收率制备磷酸三酯IX”b。按照实施例2中所述的步骤将IX”b氧化和去保护，以56%收率得到磷酸脂化的咪唑并喹啉Ih。
1H NMR (400 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 8.01 (bs, 1H), 7.31 (bs , 1H), 7.04 (bs, 1H), 6.88 (bs, 1H), 5.32 (m, 2H), 4.82 (bs, 2H), 4.53 (bs, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.48 (m, 2H), 3.2-2.8 (m, 2H), 2.32 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.62-2.10 (m, 11H), 0.97-1.60 (2m, 9H), 0.86-0.95 (m, 9H), 0.68 (s, 3H); 负性ES TOF-MS [M-H]-的计算值 803.5240，实测值803.5923。
实施例11: 6-氨基-2-丁氧基-9-[N-(2-(1,2-二-O-棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酰氨基)乙基)-4-哌啶基甲基]-8-羟基嘌呤, 化合物( IIa)的合成
R=n-丁氧基, d=l, X=CH, Y=N, m=2, n=0, R2=R3=n-C15H31CO
通过使二-O-棕榈酰基甘油IIIa与V反应，随后加入氧代腺嘌呤 VIIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以33%收率制备磷酸三酯IX*a。按照实施例2中所述的步骤将IX*a氧化和去保护，以56%收率得到磷酸脂化的氧代腺嘌呤IIa。
'H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 5.17 (bs, IH), 4.32 (dd, IH), 4.20-4.09 (m, 5H), 3.98 (br t, 2H), 3.69 (br d, 3H), 3.23 (br s, I H), 1.86 (br s, 4H), 1.69 (m, 2H), 1.53 (br s, 4H), 1.42 (dd, 2H), 1.20 (m, 48H), 0.91 (t, 3H), 0.83 (t, 6H)。负性ES TOF-MS [M-H]-的计算值 993.6768; 实测值993.6782。
实施例12: 6-氨基-2-丁氧基-9-[N-(2-(1,2-二-O-油酰基-sn-甘油-3-磷酰氨基)乙基)-4-哌啶基甲基]-8-羟基嘌呤, 化合物(IIb)的合成
R=n-丁氧基, d=l, X=CH, Y=N, m=2, n=0, R2=R3 =(CH2)7CH=CH(CH2)7CH3
通过使二-O-油酰基甘油IIIf与V反应，随后加入氧代腺嘌呤 VIIIa和咪唑三氟甲磺酸盐（如实施例1中所述），以58%收率制备磷酸三酯IX*b。按照实施例2中所述的步骤将IX*b氧化和去保护，以73%收率得到磷酸脂化的氧代腺嘌呤IIb。
'H NMR (CDC13/CD3OD, 400 MHz): δ 5.3 (m, 4H), 5.23 (m, 1H), 4.37 (dd, 1H), 4.20 (m, 5H), 4.04 (t, 2H), 3.70 (m, 4H), 3.27 (bs, 2H), 2.74 (m, 2H), 2.30 (m, 5H), 2.00 (m, 12H), 1.75 (m, 2H), 1.60 (bs, 4H), 1.48(m, 2H), 1.30 (m, 40H), 0.97 (t, 3H), 0.88 (t, 3H)。负性ES TOF-MS [M-H]-的计算值 1045.7082; 实测值1045.2163。