一种全血DNA提取试剂盒及提取方法与流程

文档序号:12697108阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,包括裂解液、纳米磁珠、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液。

2.如权利要求1所述的一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,所述裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸三钠、Tween 20,所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,洗涤液A包括异硫氰酸胍、Tris-HCL和无水乙醇,所述洗涤液B包括Tris-HCL、NaCL和无水乙醇,所述洗脱液包括Tris-HCL、EDTA二钠。

3.如权利要求1-2所述的一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,所述裂解液pH值为4.0-7.0,包含浓度3-5mM的异硫氰酸胍、浓度1-5M的碘化锂、浓度50-200mM的柠檬酸三钠和1%-5%Tween 20。

4.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe3O4,直径为200-2000nm,浓度为50-200mg/ml。

5.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,所述洗涤液A包含浓度1-4mM的异硫氰酸胍、pH 7.0-9.0浓度10-50mM的Tris-HCL和20%-50%的无水乙醇。

6.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,所述洗涤液B包含pH 7.0-9.0浓度1-5mM的Tris-HCL、浓度10-50mM NaCL和50%-80%的无水乙醇。

7.如权利要求3所述的一种全血DNA提取试剂盒,其特征在于,所述洗脱液包含pH为7.0-9.0浓度5-20mM的Tris-HCL和pH 8.0-9.0浓度0.5-3mM的EDTA二钠。

8.一种全血DNA提取试剂盒的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤S1:取50-200ul新鲜全血样本于1.5ml离心管中,使用无菌移液枪头向该离心管中加入100-500ul裂解液和50-200mg/ml的纳米磁珠10-30ul,震荡混匀1min,室温静置10min;

步骤S2:将步骤S1中的离心管置于磁力架上30s,待纳米磁珠完全吸至管壁之后,使用无菌移液枪头吸弃上清溶液;

步骤S3:使用无菌移液枪头向步骤S2离心管中加入500-800ul洗涤液A,将该离心管震荡混匀1min,置于磁力架上30s,待纳米磁珠完全吸至管壁之后,使用无菌移液枪头吸弃上清溶液;

步骤S4:使用无菌移液枪头向步骤S3离心管中加入500-800ul洗涤液B,将该离心管震荡混匀1min,置于磁力架上30s,待纳米磁珠完全吸至管壁之后,使用无菌移液枪头吸弃上清溶液,室温开盖干燥10-20min直至管内无液体残留;

步骤S5:使用无菌移液枪头向步骤S4离心管中加入100-300ul洗脱液,65℃水浴5-10min;

步骤S6:将步骤S5离心管震荡混匀1min,置于磁力架上30s,待纳米磁珠完全吸至管壁之后,使用无菌移液枪头吸取上清至新的离心管,即获得基因组DNA。

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