本发明属于天然产物制备领域。
背景技术：
猴头菇（Hericium erinaceus），又叫猴头菌、刺猬菌、花菜菌或山伏菌等，包括猴头菌、小刺猴头菌、假猴头菌和珊瑚状猴头菌4种，多生长于深山密林中许多阔叶处的腐木和立木的受伤处，广泛分布于东亚地区。猴头菇早在《本草纲目》中就有记载：猴头菇性平，味甘，有“利五脏，助消化”之功能，在传统中药应用上由来已久，并被人们称之为与“熊掌、海参、鱼翅”齐名的四大名菜之一，素有“素中荤”之称。猴头菇作为药食兼用真菌，具有丰富的营养价值和药用价值，能够用于辅助治疗胃溃疡、消化不良、胃炎、肿瘤等疾病。
猴头菇富含多糖、多肽和维生素等成分，其中猴头菇多糖是主要的活性物质之一。现代医学和药理学研究表明，猴头菇多糖具有保护消化系统、抗肿瘤及提高免疫力、抗氧化、延缓衰老、降血糖及降血脂、抗病毒及抑菌等生理功能。
猴头菇多糖可以从猴头菇子实体、菌丝体和发酵液中提取得到，其中作为天然自然资源的猴头菇子实体被广泛用于猴头菇多糖的提取。猴头菇多糖的提取方法包括溶剂（水、酸、碱等）提取法、物理压力（微波、超声波）提取法、生物（纤维素酶、果胶酶）提取法及多种方法复合提取的方法。其中，热水浸提是最常用的提取方法，具有成本低，操作简便，有利于保证多糖原有属性的特点，但提取得率并不高，很大程度上造成原料的浪费。因此对经热水浸提后的猴头菇残渣进行再次利用非常有必要。本发明首先采用热水浸提的方法制备猴头菇水提水溶性精制多糖，所得滤渣进一步经碱法制备猴头菇碱提水溶性精制多糖。所得猴头菇水提水溶性精制多糖采用乙醇分级沉淀的方法进行纯化，得到不同性质的猴头菇水溶性纯化多糖组分。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法。
本发明通过以下技术方案实现的。
本发明所述的一种猴头菇中不同性质多糖综合制备及纯化方法，具体步骤如下。
（1）以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍质量的乙醇（乙醇质量分数为95%~100%）浸泡24 h，4层纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇粉末备用。
（2）将步骤（1）中的猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量/体积（g/mL）比为1:15~1:30，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，得到滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，得到滤液，合并两次提取所得滤液，得到滤液和滤渣分别做以下处理。
A．滤液用于猴头菇水提水溶性精制多糖的制备，并对猴头菇水提水溶性精制多糖进行纯化：
①所得滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温20~25 ℃，静置12 h以上，转速4800 r/min离心15 min，收集沉淀。
②在步骤①中的沉淀中依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质；脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖。
③在步骤②中的猴头菇水提水溶性精制多糖中加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15~1:30，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。
④在步骤③中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。
⑤在步骤④中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。
⑥在步骤⑤中的上清液缓慢中加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。
⑦在步骤⑥中的上清液中缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。
⑧将步骤③、④、⑤、⑥和⑦离心分离所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可分别得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分。
B．滤渣用于猴头菇碱提水溶性精制多糖的制备：
①向所得滤渣中加入（0.1M~0.5M）NaOH/0.01M NaBH4溶液，重量/体积（g/mL）比为1:10~1:30，4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心15 min，收集沉淀。
②在步骤①中的沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质；脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇碱提水溶性精制多糖。
本发明步骤（1）中用于浸泡猴头菇粉末的乙醇质量分数优选95%。
本发明所述的Sevag法脱除蛋白质所用Sevag试剂（正丁醇：氯仿=1:4）与多糖溶液的体积比为1:3。
本发明对综合制备得到的猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖进行了基本理化性质（得率，化学成分分析，单糖组成，表观黏度）的测定，并测定了猴头菇水提水溶性精制多糖不同性质的水溶性纯化多糖组分的得率、中性糖含量、分子量分布及均一性检测：
（1）猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖得率测定：将冻干后的猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖称重，以原料质量计算其得率：
a) 猴头菇水提水溶性精制多糖得率/%=（猴头菇水提水溶性精制多糖质量/原料质量）×100%。
b) 猴头菇碱提水溶性精制多糖得率/%=（猴头菇碱提水溶性精制多糖质量/原料质量）×100%。
（2）猴头菇水提水溶性精制多糖乙醇分级不同性质水溶性纯化多糖组分得率测定：将冻干后的纯化多糖组分称重，基于猴头菇水提水溶性精制多糖质量计算其得率：
纯化多糖组分得率/%=（纯化多糖组分质量/猴头菇水提水溶性精制多糖质量）×100%。
（3）猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖基本理化性质分析：采用苯酚-硫酸法测定其中性糖含量，采用硫酸-咔唑法测定其糖醛酸含量，采用考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量；单糖组成测定采用离子色谱仪器手段进行，表观黏度采用AERS-G2流变仪进行测定。
（4）猴头菇水提水溶性精制多糖经乙醇分级得到的纯化多糖组分，中性糖含量用苯酚-硫酸法测定，分子量分布及均一性检测采用高效分子排阻色谱（HPSEC）。
本发明的优点在于：多糖综合提取得率高；水提水溶性精制多糖经过简单有效的乙醇分级沉淀，获得糖含量和均一性较为良好的高纯度组分；碱提水溶性精制多糖黏度较高。
具体实施方式
本发明将通过以下实施例作进一步说明。
实施例1。
以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍的乙醇（乙醇质量分数为95%）浸泡24 h，纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇干粉备用。猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量/体积（g/mL）比为1:15，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min得到滤液，合并两次提取所得滤液，分别收集滤液和滤渣。滤液用于猴头菇水提水溶性精制多糖的制备。滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h。透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性精制多糖加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，收集沉淀；收集以上经乙醇分级所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分。滤渣用于猴头菇碱提水溶性精制多糖的制备。向滤渣加入0.1M NaOH/0.01M NaBH4，重量/体积（g/mL）比为1:30，4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇碱提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖得率分别为4.07%和1.25%；中性糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量分别为66.00%、4.14%、7.70%和55.97%、6.96%、7.31%；猴头菇水提水溶性精制多糖主要由岩藻糖、半乳糖和葡萄糖组成，而猴头菇碱提水溶性精制多糖主要由葡萄糖组成；在0.01~1000 s-1剪切速率范围内，质量分数为0.5%的猴头菇水提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度0.06 Pa.s，而质量分数为0.5%的猴头菇碱提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度0.20 Pa.s。猴头菇水提水溶性精制多糖经乙醇沉淀得到的10%，50%，60%，70%和80%分级多糖组分得率分别为20.60%，29.90%，29.40%，16.70%，8.60%；中性糖含量分别为61.08%，73.42%，72.28%，65.69%，75.55%；经HPSEC检测表明50%，60%，70%和80%乙醇分级组分均一性较好。
实施例2。
以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍的乙醇（乙醇质量分数为95%）浸泡24 h，纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇干粉备用。猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量/体积（g/mL）比为1:15，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min得到滤液，合并两次提取所得滤液，分别收集滤液和滤渣。滤液用于猴头菇水提水溶性精制多糖的制备。滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h。透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性精制多糖加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，收集沉淀；收集以上经乙醇分级所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分。滤渣用于猴头菇碱提水溶性精制多糖的制备。向滤渣加入0.5 M NaOH/0.01M NaBH4，重量/体积比为1:10（g/mL），4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇碱提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖得率分别为4.07%和3.78%；中性糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量分别为66.00%、7.70%、4.14%和92.97%、7.72%、2.16%；猴头菇水提水溶性精制多糖主要由岩藻糖、半乳糖和葡萄糖组成，而猴头菇碱提水溶性精制多糖主要由葡萄糖组成；在0.01~1000 s-1剪切速率范围内，质量分数为0.5%的猴头菇水提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度0.06 Pa.s，质量分数为0.5%的猴头菇碱提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度32.57 Pa.s。猴头菇水提水溶性精制多糖经乙醇沉淀得到的10%，50%，60%，70%和80%分级多糖组分得率分别为20.60%，29.90%，29.40%，16.70%，8.60%；中性糖含量分别为61.08%，73.42%，72.28%，65.69%，75.55%；经HPSEC检测表明50%，60%，70%和80%乙醇分级纯化多糖组均一性较好。
实施例3。
以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍的乙醇（乙醇质量分数为95%）浸泡24 h，纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇干粉备用。猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量/体积（g/mL）比为1:30，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min得到滤液，合并两次提取所得滤液，分别收集滤液和滤渣。滤液用于猴头菇水提水溶性精制多糖的制备。滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h。透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性精制多糖加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，收集沉淀；收集以上经乙醇分级所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分。滤渣用于猴头菇碱提水溶性精制多糖的制备。向滤渣加入0.1M NaOH/0.01M NaBH4，重量/体积（g/mL）比为1:30，4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提碱溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖得率分别为3.92%和0.80%；中性糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量分别为69.68%、7.53%、2.18%和58.17%、7.03%、5.75%；猴头菇水溶性精制多糖主要由岩藻糖、半乳糖和葡萄糖组成，而猴头菇碱提水溶性精制多糖主要由葡萄糖组成；在0.01~1000 s-1剪切速率范围内，质量分数为0.5%的猴头菇水提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度0.05 Pa.s，质量分数为0.5%的猴头菇碱提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度为0.30 Pa.s。猴头菇水提水溶性精制多糖经乙醇沉淀得到的10%，50%，60%，70%和80%分级多糖组分得率分别为23.20%，30.40%，28.70%，19.50%，10.60%；中性糖含量分别为78.81%，77.89%，77.04%，69.40%，70.32%；经HPSEC检测表明50%，60%，70%和80%乙醇分级纯化多糖组均一性较好。
实施例4。
以干燥猴头菇子实体为原料，经粉碎机粉碎得到粉末；向猴头菇粉末中加入15倍的乙醇（乙醇质量分数为95%）浸泡24 h，纱布过滤，收集沉淀、挥干乙醇，所得猴头菇干粉备用。猴头菇粉末与蒸馏水混合，重量体积（g/mL）比为1:30，沸水浴提取2 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min得到滤液，合并两次提取所得滤液，分别收集滤液和滤渣。滤液用于猴头菇水提水溶性精制多糖的制备。滤液经减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于65 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h。透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇水提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性精制多糖加入蒸馏水溶解，重量/体积（g/mL）比为1:15，缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到10%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到50%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到60%，于4℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液。上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到70%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，分别收集沉淀和上清液；上清液缓慢加入无水乙醇直至体系中乙醇质量分数达到80%，于4~25℃静置12 h，将上述醇沉体系10000 r/min离心分离20 min，收集沉淀；收集以上经乙醇分级所得沉淀分别加水复溶，再经减压浓缩、冷冻干燥后可得不同性质猴头菇水溶性纯化多糖组分。滤渣用于猴头菇碱提水溶性精制多糖的制备。向滤渣加入0.5 M NaOH/0.01M NaBH4，重量/体积（g/mL）比为1:10，4 ℃中提取12 h，将提取液依次用纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，分别收集滤液和滤渣；滤渣再次提取，提取液再次经纱布过滤、4800 r/min离心分离15 min，收集滤液；合并两次提取所得滤液，减压浓缩至原体积1/10~1/5，往浓缩液中缓慢加入质量分数为95%的乙醇，直至体系中乙醇质量分数为80%，室温（20~25 ℃）静置12 h以上，4800 r/min离心分离15 min收集沉淀。沉淀依次添加无水乙醇、丙酮和无水乙醚，浸泡洗涤，所得样品再加入蒸馏水于70 ℃复溶，采用Sevag法除去蛋白质。脱除蛋白质的多糖溶液减压浓缩，将浓缩液进行透析（透析袋相对截留分子量为3500 Da），依次用流动自来水透析24 h、蒸馏水透析36 h；透析结束后，将透析液浓缩、冷冻干燥，得到猴头菇碱提水溶性精制多糖。猴头菇水提水溶性和碱提水溶性精制多糖得率分别为3.92%和1.05%；中性糖含量、糖醛酸含量和蛋白质含量分别为69.68%、7.53%、2.18%和63.28%、8.66%、8.38%；猴头菇水提水溶性精制多糖主要由岩藻糖、半乳糖和葡萄糖组成，而猴头菇碱提水溶性精制多糖主要由葡萄糖组成；在0.01~1000 s-1剪切速率范围内，质量分数为0.5%的猴头菇水提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度0.05 Pa.s，质量分数为0.5%的猴头菇碱提水溶性精制多糖在剪切速率为0.01 s-1时达到最大表观黏度为9.40 Pa.s。猴头菇水提水溶性精制多糖经乙醇沉淀得到的10%，50%，60%，70%和80%分级多糖组分得率分别为23.20%，30.40%，28.70%，19.50%，10.60%；中性糖含量分别为78.81%，77.89%，77.04%，69.40%，70.32%；经HPSEC检测表明50%，60%，70%和80%乙醇分级纯化多糖组均一性较好。